꼬리 정맥 주사: 마우스 모델에서 전이성 연구를 위한 암세포 투여 방법

표지된 유방암 세포가 들어 있는 페트리 접시에 트립신을 첨가하여 표면에서 분리하는 것으로 시작합니다. 트립신의 작용을 멈추기 위해 혈청이 함유된 배지를 첨가합니다. 세포 현탁액을 원뿔형 튜브로 옮기고 펠릿 세포로 원심분리합니다.

상등액을 버리고 세포를 인산염 완충 식염수에 재현탁시킵니다. 세포 대사를 늦추기 위해 튜브를 얼음 위에 올려 놓습니다. 필요한 양의 세포를 포함하는 이 세포 현탁액을 Luer lock 주사기에 넣고 바늘을 고정합니다.

쥐를 꼬리가 바깥쪽인 설치류 구속기에 넣습니다. 꼬리를 따뜻한 물에 담궈 정맥을 확장시킵니다. 측면에는 두 개의 정맥이 있고 꼬리의 배쪽 쪽에는 동맥이 있습니다. 꼬리를 알코올로 닦고 바늘을 삽입하고 세포 현탁액을 주입합니다.

일단 혈류에 들어가면 주입된 암세포는 폐와 같은 장기로 침입하여 증식합니다. 천천히 바늘을 제거하고 주입 부위에 멸균 거즈를 사용하여 압력을 가해 출혈을 멈춥니다. 마우스를 케이지로 되돌리고 완전히 회복되도록 합니다. 다음 프로토콜에서는 유방암 전이 및 집락화를 정량화하기 위해 표지된 전이성 암 세포를 마우스 모델에 주입하는 방법을 보여줍니다.

배지를 흡인하고 1X PBS로 세포판을 헹굽니다. 15cm 플레이트당 5ml의 트립신으로 세포를 2-5분 동안 트립신화하고 모든 세포를 원뿔형 튜브로 옮깁니다. 조직 배양 접시에서 남은 세포를 트립신을 담금질하기에 충분한 완전한 성장 배지로 세척합니다. 동일한 원추형 튜브에 세척제를 추가하십시오. 자동화된 셀 카운터를 사용하여 셀 수를 계산하여 총 셀 수를 확인합니다.

다음으로, 세포를 122배 G로 3분간 원심분리하고 상층액을 흡인합니다. 원하는 농도로 1X PBS에 세포를 재현탁합니다. 여기서, 25,000개의 세포가 100마이크로리터의 PBS에 각 마우스에 주입되므로 재현탁된 세포는 밀리리터당 250,000개의 세포가 됩니다. 주입할 때까지 세포 현탁액을 얼음 위에 보관하십시오.

동물 시설의 후드 속에서 작업하면서 튜브를 뒤집거나 1ml 주사기를 사용하여 세포가 균일하게 재현 유탁되도록 하여 부드럽지만 철저히 혼합합니다. 이제 1ml 루어 잠금 주사기에 셀 서스펜션을 장착하고 과도한 기포를 배출합니다. 베벨이 위로 향하게 하여 주사기에 1/2인치, 30게이지 바늘을 놓고 기포를 배출합니다.

마우스를 설치류 구속기에 부드럽게 놓습니다. 측면 꼬리 정맥은 보이고 확장되어야 합니다. 그렇지 않은 경우 꼬리 바닥을 부드럽게 꼬집고 꼬리를 따뜻한 수돗물에 담궈 정맥을 확장시킵니다. 알코올 물티슈를 사용하여 꼬리를 청소하십시오. 그런 다음 바늘을 꼬리 정맥에 삽입하고 비스듬한 면이 위로 향하게 한 다음 100마이크로리터의 세포 현탁액을 주입합니다. 바늘이 정맥에 제대로 삽입되면 앞뒤로 약간 쉽게 미끄러져야 하며 플런저를 밀 때 저항이 없어야 합니다.

성공적인 주사는 또한 주사 후 몇 초 동안 정맥의 파란색이 흰색으로 변하는 플러시를 초래해야 합니다. 천천히 바늘을 제거하고 멸균 거즈를 사용하여 주입 부위에 압력을 가하여 출혈을 멈춥니다. 마우스를 케이지로 되돌리고 15분 동안 모니터링하여 완전히 회복되도록 합니다.