Name: 기계 자극에 라이브 세포 응답 통합 광학과 원자 힘 현미경에 의해 연구 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-04T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 20 s
Description: 배우세요 기계 자극에 대한 라이브 세포 반응을 원자 힘 현미경과 광학 현미경을 통합하여 연구하는 방법입니다. GFP 융합 단백질을 발현하는 세포를 사용하여 실시간으로 세포골격 재구성을 관찰할 수 있습니다.

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플라스미드 Vinculin - GFP는 마이클 데이비슨, 플로리다 주립 대학, 탤러해시, 플로리다의 선물 케네스 야마다, 플라스미드 국립 보건 연구소, 치과와 Craniofacial 연구의 국립 연구소, 베데스다, 메릴랜드, 그리고 굴지 - mRFP에서 선물했다. 이 작품은 NSF 경력 보너스 # 0747334 및 AHA - 국립 SDG # 0835205N Andreea Trache에 의해 지원되었다.

1. 통합 현미경 시스템의 개요 이러한 연구에 사용되는 현미경 시스템은 상세 1에서 설명되었습니다. 간단히, TIRF 첨부 (올림푸스, 센터 밸리, PA)와 거꾸로 올림푸스 IX - 81 현미경과 결합 CSU - 22 요코 스캔 헤드 (요코 전기 병원, 일본). Bioscope SZ 원자 힘 현미경 (Veeco 인스 트루먼 트의 병원, 산타 바바라, CA)는 광학 거꾸로 현미경 위에 탑재하고, 전체 시스템은 연구 등급 광학 테이블의 상단 (뉴 포트, 어빈, CA)에 위치합니다. 회전 디스크 스캐너, 외부 필터 휠과 EMCCD 카메라 (로퍼 과학 - Photometrics, 투싼,​​ AZ)에서 구성된 공촛점 어셈블리가 rigidly 진동 감쇠에 필요한 실리콘 패드에 위치 알루미늄베이스 플레이트와 연결됩니다. 공촛점 스캐너 AFM 측정하는 동안 현미경에서 decoupled 수 treaded 칼라와 플랜지를 통해 현미경으로 연결하는 회전 디스크 스캐너로부터 진동 AFM 측정에 영향을 미치지 않습니다 그러한. 아르곤 - 크립톤 레이저 (스펙트럼 물리학, Mountain View, CA)를 각각 TIRF 및 공촛점 이미징 모드 모두 여기 소스로 사용하고 TIRF 첨부 파일 또는 스캔 머리에 레이저를 전달이 광학 섬유에 또는 결합 수 있습니다 . 두 컴퓨터가 시스템을 제어 : Slidebook 소프트웨어는 광학 이미징을 제어하고 Nanoscope 소프트웨어는 AFM을 제어합니다. 2. 세포 배양 라이브 세포가 특정 단백질에 대한 타겟으로 GFP를 구성 표현은 24 시간 전에 기계적 자극 실험에 유리 바닥 세포 배양 접시에 배치해야합니다. 실험 당일 페놀 레드 무료 매체와 세포 배양 매체를 교체하십시오. 세포 배양 접시는 자기 칼라와 AFM 무대에 장착할 수 있습니다. 3. AFM 팁 준비 및 현미경 설정 2 마이크론과 함께 사용자 정의 AFM 팁 유리 구슬이 DPBS있는 5 번 세탁 후 아비딘 (1 MG / ML)로 5 분 incubated, DPBS 다섯번로 다시 씻어, 다음 1 MG / ML biotinilated 5 분 incubated 것입니다 biotinilated fibronectin. 팁은 끝 2에서 다섯 번 이상 씻어 AFM 스캐너에 탑재하고 보호 실리콘 스커트는 보유자 주위에 배치됩니다 것입니다. 보기의 필드의 중앙에 AFM 팁 정렬에 비디오를 볼 수 있도록 현미경을 설정합니다. 캔틸레버의 가장 끝에있는 레이저 광선을 배치하여 광학 레버를 정렬하고 단일 세포 이미징에 대한 적절한 높은 배율 목표로 목적을 변경합니다. 팁의 상수 봄 실험을 시작하기 전에 결정되어야한다. 이 매개 변수는 Nanoscope 소프트웨어에서 사용 가능한 열 조정 방법을 사용하여 측정됩니다. 개화 이미징 수 있도록 EMCCD 카메라로 비디오 카메라에서 전환합니다. 그런 다음, 셀을 선택하고 특정 세포와 접촉 AFM 팁 가져. 세포 표면과 접촉의 AFM 지점에 양식에 강한 초점 접착에 필요한 20 분 대기 시간 후, 기계적 자극 절차가 시작됩니다. 4. 라이브 세포의 기계 자극 3-4 TIRF 영상은 초점 adhesions를 시각화하고 quantifying을위한 최고의 방법되며, 방적 디스크 공촛점 이미징 5 세포 체내 굴지의 cytoskeleton을 시각화에 사용됩니다. AFM 6 유체 아래의 연락처 모드 이미징에 사용됩니다. 세포의 TIRF 또는 공촛점 이미지가 기계적 자극 절차를 시작하기 전에 취득됩니다. 기계적 자극이 일정 기간 (1-1.5 시간) 동안 매 3-5 분 이산 단계로 상향 이동됩니다 기능화 AFM 프로브에 의해 유발됩니다. 세포 반응 - 반응은 높이 이미지, 1 초 단위 시간을 나타내는 이미지의 각 라인의 시리즈로 Nanoscope 소프트웨어에 지속적으로 기록됩니다. AFM 데이터를 수집하는 동안 작업자는 항상 AFM 팁의 Z 위치는 다음 당기에 대한 적절한 타이밍을 결정하기 위해 모니터링합니다. 각각의 기계적 자극 후 지속 AFM 데이터를 획득하면서 Slidebook 소프트웨어의 세포의 TIRF 또는 공촛점 이미지를 얻을 수 있습니다. 광학 이미지는 굴지의 cytoskeleton과 초점 adhesions의 개편을 보여 영화를 만들 오프라인 처리할 수 있습니다. 또한, 각 이미지는 셀 영역, 특정 단백질 영역을 결정하고, 일반적인 세​​포 형태를 분석하기 위해 양적 처리할 수 있습니다. AFM 팁은 세포와 AFM 팁 감도에서 철회되는 실험의 끝에 Nanoscope 소프트웨어에서 측정됩니다. 실험은 매우 소음 민감합니다! 전 동안 감동 아무 말도 또는 현미경periment은 피해야한다. AFM 측정에서 소음을 최소화하기 위해, 회전 디스크 공촛점는 현미경에서 드 결합해야합니다. 세포 표면과 AFM 팁 사이에 강한 초점 접착력을 형성하는 대기 시간은 사용되는 세포 유형과 끝에 매트릭스 코팅에 따라 달라질 수 있습니다. 5. 대표 결과 <img src="/files/ftp_upload/2072/2072fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 굴지 - mRFP 및 vinculin - GFP와 transfected 같은 혈관 평활근 세포 (VSMC)가로 몇 군데되었습니다 혀끝의 세포 표면에 (A) AFM, (B) 기저 세포 표면에 TIRF하며, (C) 스피닝 디스크 공촛점 현미경 세포 체내. 공촛점 이미지가 3 차원 스택의 최대 투사로 표시됩니다. AFM과 TIRF 또는 방적 디스크 공촛점 이미지 사이 좋은 중복은 (D)와 (E), 각각에 표시됩니다. 이미지 크기는 64 X 50 미크론이다. <img src="/files/ftp_upload/2072/2072fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 굴지 - mRFP와 transfected VSMC는 기계 AFM에 의해 자극과 회전 디스크 공촛점 현미경으로 몇 군데했다 화살표 그 굴지의 섬유를 나타냅니다. (A) 진하게 / 중합, (B) depolymerize / 사라, 또는 (c) 때문에 함께 번들 굴지의 구조 조정합니다. 화이트 점선 라인은 세포 위에 AFM 팁을 나타냅니다. 이미지 크기 91 X 91 미크론.

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관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

Cytoskeleton 70-10과 초점 adhesions가 11-16, 조립 분산 및 세포가 마이 그 레이션 또는 기계적 강제로 17 답변으로 넘겨 역동적인 구조입니다. 그들은 세포 성장, 생존, 그리고 유전자 발현을 조절에 중요​​한 기능을합니다. 그들의 구체적인 유통 및 역학을 아는 것은 세포가 모체와 자신 사이의 의사 소통 방법에 대한 이해를 제공합니다. 이 새로운 현미경 시스템은 자기편 살 세포의 분자 역동적인 연구 광범 광범위하게 적용됩니다. 통합 현미경은 빠른 하위 세포 변화의 양적 모니터링을 가능하게하고 기계적인 강제에 대한 응답으로 세포 리모델링의 기본 과정을 이해하기위한 중요한 새로운 도구를 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>AFM 팁</td><td>Novascan Technologies, Inc.</td><td></td><td>2 micron 보로실리케이트 비드, 0.01N/m, 비오틴 표면</td></tr><tr><td>avidin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9275</td><td>DPBS 내 1mg/mL</td></tr><tr><td>Fibronectin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4759</td><td>1 mg/mL</td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Invitrogen</td><td>21600-051</td><td></td></tr><tr><td>평활근 세포용 Amaxa transfection kit</td><td>Lonza Inc.</td><td>VPI-1004</td><td></td></tr><tr><td>Mattek 유리 바닥 디쉬</td><td>MatTek Corp.</td><td>P60G-1.5-30-F</td><td>유리 바닥 커버슬립 no. 1.5가 포함된 멸균 60mm Falcon 디쉬</td></tr></tbody></table>

기계 자극에 라이브 세포 응답 통합 광학과 원자 힘 현미경에 의해 연구

Live Cell Response to Mechanical Stimulation Studied by Integrated Optical and Atomic Force Microscopy

살아있는 세포가 기계적 힘을 감지하는 메커니즘을 이해하기 위해서는, 높은 공간과 시간적 해상도를 가진 하위 세포 수준에서 세포의 행동을 조사할 수있는 그들이 반응하고 환경에 적응하는 방법, 새로운 기술하는 것은 개발되었습니다. 따라서, 원자 힘 현미경 (AFM)은 총 내부 반사 형광 (TIRF) 현미경과 고속 회전하는 디스크 (FSD) 공촛점 현미경과 통합되었습니다. 통합 시스템은 실시간으로 기계 자극에 세포 반응의 직접적인 광학 이미징을 허용, 모든 자기편 라이브 세포에서 분자 역동적인 연구 광범 광범위하게 적용됩니다. 굴지의 필라멘트와 초점 adhesions의 중요한 다시 정리하기는 인해 세포 체내 세포 구조로 변화를 유도하는 혀끝의 세포 표면에서 로컬 기계 자극을 표시했다. 이러한 혁신 기술은 기계적 강제에 대한 응답으로 사는 셀 구조 조정과 역학을 이해하는 새로운 정보를 제공합니다. 상세한 프로토콜과 대리인 데이터는 기계적 자극에 표시 라이브 셀 응답이 제공되는 설정합니다.

본 논문은 문화에 살고있는 세포의 기계적 자극에 대한 통합 원자의 운영 독자 강제 광학 이미징 현미경을 지시하는 것을 목표로하고있다. 단계별 프로토콜이 제공됩니다. 기계적 자극에 살고 세포 응답을 보여주는 대표적인 데이터 집합이 제공됩니다.

살아있는 세포가 기계적 힘을 감지하는 메커니즘과 이에 반응하여 환경에 적응하는 방식을 이해하기 위해, ...할 수 있는 새로운 기술이

기계적 자극에 대한 세포의 실시간 반응 연구는 우선 GFP 융합 단백질을 발현하는 세포를 유리 바닥 배양 접시에서 24시간 동안 배양함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계는 AFM 팁을 비오틴화된 피브로넥틴으로 코팅하는 것입니다. 그런 다음, 기능화된 AFM 팁을 세포 표면에 접촉시켜 AFM 팁 주변에 강력한 국소 접착이 형성되도록 하며, 이를 통해 피브로넥틴이 코팅된 팁과 세포 사이의 매트릭스-인테그린-액틴 연결을 통해 액틴 세포골격을 직접 조작할 수 있게 합니다.마지막 단계는 AFM 팁을 제어된 상향 이동시켜 살아있는 세포를 기계적으로 자극함으로써, 강한 초점 접착(focal adhesion)을 파괴하지 않고 세포 접촉 지점에 수직력을 가하는 것입니다. 결과적으로, 실시간 형광 광학 이미징으로 기록된 바와 같이, 세포는 기질에 대한 부착을 강화하고 액틴 세포골격 재구성을 유도함으로써 기계적 자극에 반응하는 것으로 나타났습니다. 안녕하세요, 저는 Texas A&amp;M Health Science Center 시스템 생물학 및 중개 의학과의 조교수 Andrea Trake입니다.안녕하세요, 저는 Texas A&amp;M Health Science Center 시스템 생물학 및 중개 의학과의 박사후 연구원 Sum Lim입니다. 오늘은 기계적 자극에 따른 세포의 적응적 리모델링을 연구하는 절차를 보여드리겠습니다.본 연구실에서는 살아있는 혈관 평활근 세포의 실시간 세포골격 재구성(cytoskeletal remodeling)을 조사하기 위해 이 절차를 사용합니다. 이제 시작하겠습니다. 이러한 연구를 위해 CSU 22 Yokogawa 스캐닝 헤드가 결합된 전반사 형광(total internal reflection fluorescence, TIRF) 장치가 장착된 Olympus IX 81 도립 현미경이 사용됩니다.Bio scope SZ 원자간력 현미경이 도립 광학 현미경 상단에 장착되어 있습니다. 전체 시스템은 연구용 광학 테이블 위에 설치되었으며, 이에 대한 상세한 내용은 이전에 설명된 바 있습니다. 이 통합 현미경은 두 대의 quant EM 전자 증배 전하 결합 소자 또는 E-M-C-C-D 카메라를 사용합니다.하나는 터프 이미징(turf imaging)용이고, 다른 하나는 공초점 이미징(confocal imaging)용입니다. 스피닝 디스크 스캐너, 외부 필터 휠, 그리고 E-M-C-C-D 카메라로 구성된 공초점 어셈블리는 진동 감쇠에 필요한 실리콘 패드 위에 놓인 알루미늄 베이스 플레이트에 장착되어 있습니다. 공초점 어셈블리 전체는 나사형 칼라가 있는 플랜지를 통해 현미경과 연결됩니다.따라서 원자 힘 현미경(AFM) 또는 FM 측정 중에 어셈블리를 현미경에서 분리하여 회전 디스크 스캐너로 인한 진동을 방지할 수 있습니다. 아르곤 크립톤 레이저가 turf 및 공초점 이미징 모드 모두의 여기원으로 사용됩니다. 레이저는 두 개의 광섬유 중 하나에 연결될 수 있으며, 이 광섬유는 레이저를 turf 부착물 또는 공초점 스캐닝 헤드로 전달합니다.두 대의 컴퓨터가 시스템을 제어합니다. 한 대는 광학 이미징을 제어하는 slide book 소프트웨어를 사용하며, 다른 한 대는 AFM을 제어하는 nano scope 소프트웨어를 사용합니다. 기계적 자극 실험 24시간 전에, 특정 단백질을 표적으로 하는 GFP 컨스트럭트를 발현하는 살아있는 세포를 유리 바닥 세포 배양 접시에 분주합니다. 실험 당일에는 세포 배양 배지를 phenol red free 배지로 교체합니다.a FM 실험은 노이즈에 매우 민감하므로, 노이즈를 최소화하기 위해 실험 중에 말을 하거나 광학 테이블 또는 현미경을 만지는 것을 피하십시오. a FM 측정 시에는 스피닝 디스크 공초점 현미경을 현미경에서 분리하십시오. 실험은 마그네틱 칼라를 사용하여 세포 배양 접시를 마그네틱 현미경 스테이지에 고정하고 a FM 스테이지 위에 장착하는 것으로 시작합니다.A FM 프로브의 V자형 캔틸레버에는 2 µm 크기의 비오틴화 유리 비드가 맞춤 제작되어 있습니다. 캔틸레버는 현미경을 통해 쉽게 관찰할 수 있습니다. 비드는 캔틸레버의 맨 끝부분에 접착되어 있으며, 이 위치에 코팅 용액을 한 방울씩 떨어뜨려 도포해야 합니다.실험을 위한 FM 프로브를 준비하려면, 먼저 팁을 유리 홀더에 장착한 다음 유리 홀더를 테이블 마운트에 올려 팁을 코팅합니다. 팁 끝부분에 10 µL의 인산염 완충 식염수 또는 DPBS를 조심스럽게 떨어뜨려 팁을 세척한 후, 킴와이프로 팁을 건조시킵니다. 1 mg/mL 농도의 DPBS로 세척한 후 이 과정을 5회 반복합니다.용액 내의 Avid. 팁 끝에 한 방울씩 떨어뜨립니다. Avid 코팅 후 팁을 5분 동안 배양합니다.팁을 DPBS로 5회 더 세척합니다. 그다음 1 mg/mL 농도의 용액을 팁에 한 방울씩 떨어뜨리고 5분 동안 배양하여, avadon에 비오틴화된 피브로넥틴(biotinylated fibronectin)을 교차 결합시킵니다.마지막으로, 팁 끝에 마지막 한 방울이 남도록 DPBS로 팁을 다시 다섯 번 세척하십시오. 팁 준비가 완료되면, 팁을 AFM 스캐너에 장착하십시오. AFM 팁을 장착한 후, 홀더 주변에 보호용 실리콘 스커트를 배치하십시오.그런 다음 비디오 관찰을 위해 현미경을 설정합니다. 이어서 FM 팁을 시야의 중심에 맞춥니다. 레이저 빔을 캔틸레버의 맨 끝부분에 위치시켜 광학 레버를 설정합니다.그런 다음, 단일 세포 이미징에 적합한 고배율 대물렌즈로 교체하십시오. 이어서 기계적 자극을 가할 세포를 시야 내로 이동시키고, AFM 팁이 세포 표면에 접촉할 위치를 선택하십시오. 마지막으로, AFM 팁을 내려 해당 세포에 접촉시키십시오.팁을 세포에 접촉시킨 후, 약 20분 동안 기다립니다. 이를 통해 세포 표면의 FM 접촉 지점에 강력한 국소 접착(focal adhesion)이 형성되도록 합니다. 대기 시간이 지난 후, 기계적 자극 실험을 준비하기 위한 기계적 자극 절차를 시작할 수 있습니다.형광 세포 이미징을 위해 비디오 카메라에서 E-M-C-C-D 카메라로 전환하십시오. 그런 다음 휴지 상태인 세포의 초기 이미지를 획득하십시오. 세포 전체의 액틴 세포골격을 시각화하기 위해 스피닝 디스크 및 공초점 현미경을 사용하십시오.반대로, 세포를 자극하기 위해 turf를 사용하여 국소 접착물을 시각화하십시오. 캔틸레버를 사용하여 3~5분마다 불연속적인 단계로 정밀하게 제어된 상향 이동을 가합니다. A FM 데이터를 수집하는 동안, 연산자는 Z piso 위치의 전압을 지속적으로 모니터링하여 수직 폴의 적절한 타이밍을 결정하는 것이 중요합니다.Slide Book 소프트웨어를 사용하여 각 수직 견인 후 세포의 공초점 또는 turf 이미지를 FM 데이터 획득과 동시에 기록하십시오. 자극 실험이 완료되면 AFM 팁을 세포에서 제거하십시오. Actin MRFP와 vcul이 형질전환된 혈관 평활근 세포입니다.FM을 사용하여 정단 세포 표면의 GFP를 촬영하였습니다. 동일한 세포의 기저 세포 표면은 turf를 사용하여 촬영하였습니다. 여기 두 이미지를 중첩시킨 모습입니다.동일한 세포의 이미지 또한 스피닝 디스크 공초점 현미경을 사용하여 세포 전체 영역에서 획득하였으며, 이를 3D 스택의 최대 투영 영상으로 나타내었습니다. A FM 이미지와 스피닝 디스크 공초점 이미지 사이의 우수한 중첩 양상을 확인할 수 있습니다. actin MRFP가 형질전환된 혈관 평활근 세포를 A FM으로 기계적 자극을 주었으며, 스피닝 디스크 공초점 현미경으로 이미지를 촬영하였습니다.이러한 오차들은 FM 자극 시 현저한 재구성이 일어나는 액틴 섬유(actin fibers)를 나타냅니다. 기계적 자극으로 인해 일부 액틴 섬유는 중합되고 다른 섬유들은 탈중합되며, 또 다른 액틴 섬유들은 서로 묶입니다. 이러한 액틴 재구성으로 인해, EFM을 사용하여 살아있는 세포 배양물을 기계적으로 자극하는 동시에 광학 이미징 방법을 통해 세포질(CY) 재배열을 기록하는 방법을 보여드렸습니다.이 절차를 수행할 때 FM 실험은 노이즈에 매우 민감하다는 점을 기억하는 것이 중요합니다. 이것으로 마치겠습니다. 시청해 주셔서 감사드리며, 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

세포 단일 층의 기계적 자극에 의​​한 칼슘 웨이브 전파 : 소 각막 내피 세포의 예

이 논문은 원자 힘 현미경 (AFM)을 사용하여 microindentation을 통해 살아있는 세포의 기계적 특성을 특성화 할 수있는 프로토콜을 보여줍니다.

원자 힘 현미경을 사용하여 살아있는 세포의 기계적 특성을 측정

살아있는 세포의 기계적 변형률에 대한 실시간 반응을 측정할 수 있도록 맞춤형 모터 구동 기계식 액추에이터를 사용하여 새로운 이미징 프로토콜이 개발되었습니다. 기계생물학과 관련된 이 시스템은 컨포칼 또는 원자력 현미경으로 거의 실시간 이미징을 허용하면서 최대 20%까지 균주를 적용할 수 있습니다.

기계 스트레치 동안 라이브 세포 이미징

여기는 심각한 기계적인 자극에 세포질 응답을 평가 하기 위한 방법에 설명 합니다. 현미경 기반 분석 결과에서 우리 전단 흐름 간략 한 자극에 따라 붙일 표시 된 바이오 센서의 지역화를 검사 합니다. 우리는 또한 화학적 심각한 기계적인 자극에 응답에 대 한 관심의 다양 한 단백질의 활성화를 테스트합니다.

Dictyostelium discoideum 응답 심각한 기계적인 자극의 평가

Mechanobiology 연구에 대 한 새로운 도구 어떻게 기계적 스트레스를 이해 하는 데 필요한 생화학 경로 활성화 하 고 elicits 생물학 응답. 여기, 우리 세포 응답의 고해상도 이미지를 수 있도록 미세 트랩으로 움직이지 동물의 선택적 기계적 자극에 대 한 새로운 방법을 전시.

기계적 자극 및 높은 해상도 C. 선 충 의 이미징에 대 한 마이크로 장치를 사용 하 여

이전에 설계 된 장치를 사용 하 여 부착 세포에 기계적 변형을 적용 하는이 백서는 새롭게 디자인 된 하 층 구조와 100 배 오일 침 지 대물 렌즈를 사용 하 여 변형 된 셀의 고해상도 단일 셀 이미징을 위한 맞춤형 장치를 설명 합니다.

일축 인장 스트레인 하에서 살아있는 세포의 핵 역학에 대 한 고해상도 이미징

우리는 면역학적 연구를 위한 단 하나 T 세포 및 비드 입자를 가진 원자력 현미경 (AFM) 캔틸레버를 기능화하는 프로토콜을 제시합니다. AFM에 의해 단일 쌍 T 세포 수지상 세포 결합을 조사하고 형광 이미징을 통해 AFM에 의해 단일 고체 입자에 대한 대식세포의 실시간 세포 반응을 모니터링하는 절차가 도시된다.

단일 T 세포또는 면역 학적 단세포 힘 분광학을 위한 단입자를 가진 원자력 현미경 캔틸레버의 기능화

기계적 힘은 세포 이동을 제어하는 데 중요합니다. 이 프로토콜은 유리 마이크로파이펫 및 마이크로매니퓰레이터를 사용하여 변형될 수 있는 탄성 하이드로겔의 사용을 입증하여 세포 구조 및 이동의 변화를 유도하기 위해 국소 강성 구배를 가진 세포를 자극한다.

세포 운동 및 관련 신호 이벤트의 기계적 제어를 평가하기위한 단일 세포 Durotaxis 분석

여기에 제시된 Conpokal 기술의 프로토콜은 공초점 및 원자력 현미경 검사를 단일 계측기 플랫폼으로 결합합니다. Conpokal은 살아있는 생물학 견본의 동시 공초점 화상 진찰 및 기계적인 특성에 가까운 동일 세포, 동일 지구를 제공합니다.

라이브 셀에서 동시 레이저 스캐닝 공초점 및 원자력 현미경 검사(Conpokal) 근처

여기서, 우리는 광학 트랩에 의한 직접 힘 측정을 통해 3차원 감금에서 격리된 배아 제브라피쉬 세포의 세포내 기계적 특성을 조사하는 프로토콜을 제시한다.

광학 핀셋을 사용하여 감금된 세포 전 역학의 직접 힘 측정

이 글은 브릴루앵 미세 분광법을 이용한 3D 매트릭스 내 살아있는 구형체의 기계적 특성 규격 프로토콜을 설명합니다. 이 전광학 방법은 미시적 해상도와 정량적 기계적 특성을 가진 구형 시각화를 가능하게 합니다. 이 접근법은 기계적 표현형 분석에 영향을 미칩니다; 예를 들어, 3D 미세환경 내에서 종양 구상체의 병리학적 상태를 결정하는 일이 있습니다.

브릴루앵 분광법을 이용한 구체의 기계적 매핑

배우세요 기계 자극에 대한 라이브 세포 반응을 원자 힘 현미경과 광학 현미경을 통합하여 연구하는 방법입니다. GFP 융합 단백질을 발현하는 세포를 사용하여 실시간으로 세포골격 재구성을 관찰할 수 있습니다.

기계 자극에 라이브 세포 응답 통합 광학과 원자 힘 현미경에 의해 연구

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