Name: 마약, 바이러스성 벡터, 또는 세포 이식 전달 Microinjections 깊은 뇌 구조의 타겟팅 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-01T16:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: 배우세요 50μm 내경 유리 모세관 바늘을 제작하여 뇌 심부 구조에 정밀 마이크로인젝션을 수행하는 방법을. 이 기술은 약물, 바이러스 벡터 또는 세포 이식물을 전달하며 뇌 손상을 최소화하고 수동 확산을 줄여줍니다.

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OG - P는 CONACyT S 그랜트 (CB - 2008-101476)과 FRABA (10분의 686)에 의해 지원되었다. AQ - H는 건강의 국립 연구소, 하워드 휴즈 의학 연구소의 로버트 우드 존슨 재단과 메릴랜드 줄기 세포 재단에 의해 지원.

<ol><li> 마우스 수술 전에 유리 바늘 만들기 : <ol class="lalpha"><li> micropipette의 풀러의 모세관 유리 튜브를 넣어. </li><li> 지역화된 영역의 유리 튜브를 부드럽게하는 유리 튜브의 가운데를 열. </li><li> 지역화된 영역의 유리 튜브의 직경의 감소를 일으킬 수있는 충분한 초기 거리하여 세로 축을 따라 유리관을 스트레치. </li><li> 그것이 휴식 때까지 유리 튜브를 스트레칭 유지. 이런 방식으로 두 개의 동일한 하나의 배럴의 바늘은 얻을 수 있습니다. </li></ol></li><li> microforge에 유리 바늘을 넣어. 30 ° 각도만큼 베벨 팁을하는 것입니다. </li><li> 각각의 바늘이 정확한 내경을 가지고있는 현미경으로 확인합니다. 친수성 약물의 대부분 30-50 μm의 내경은 (그림 1) 이상적인 제품입니다. </li><li> 유리 바늘의 넓은 끝에서 광유로 바늘을 입력합니다. 그걸로 모세관 튜브의 길이의 ~ 50 %에 도달할 때까지 미네랄 오일 (MSDS, 고양이. M7700) 모세관 현상에 의해 입력하자. 입어 높은 진공 바늘의 넓은 끝을 밀봉하는 플런저 주변 그리스 (다우 코닝, 고양이. 05054 - AB). </li><li> 바늘의 넓은 말까지 플런저를 넣고 기름의 작은 방울이 유리 바늘 끝을 들락날락 때까지 부드럽게 미네랄 오일을 밀어. </li><li> microinjector의 소유자에 유리 바늘을 고정합니다. </li><li> 2.5 % Avertin (2,2,2 - tribromoethanol + tert - 아밀 알코올, 1시 1분 W / V)와 마우스를 마취. Dosis g intraperitoneal 당 25 30μL. </li><li> 37 동물의 체온을 유지하는 stereotactic 장치 ° C.에 히터 패드를 넣어 </li><li> 장소 및 귀 바, 치아 홀더를 사용하여 stereotactic 장치에서 마우스 머리를 확보. </li><li> 두 번째 시간을 70 % 에탄올과 0.1 % Chlorhexidine 글루 콘 산 다음에 0.1 % Chlorhexidine 글루 콘 산 솔루션으로 마우스 머리를 청소하십시오. </li><li> Lamba 스컬 라인에 마우스 귀를에서 수술 블레이드 # 15 피부를 절개. </li><li> 그것을 건조하고 수술 현장에서 피부를 잡아 면봉 스왑으로 두개골을 폴란드어. </li><li> Bregma의 봉합의 정점에서 시점에 유리 바늘의 팁을 사용하십시오. 여기 주입기 (좌표 "제로")의 초기 위치를 설정해야합니다. </li><li> "X"와 두개골을 통해 stereotactic 장치의 "Y"축을 이동하여 몰락하는 지점을 설정합니다. </li><li> 선택한 좌표에 매우 조심스럽게 구멍을 드릴. Microdrills 및 기타 금속 도구는 이전에 다음 ID 250에 소독을했다 ° 마른 유리 구슬 살균기와 함께 60 초 동안 C (콜 팔머, 고양이. 번호 EW - 10779-00). </li><li> 좋은 포셉 조심스럽게 뼈의 가장 깊은 층을 제거하고 duramatter 막을 (당신이 밖으로 누출 일부 대뇌 척수를 볼 수 있습니다) 휴식과 함께. </li><li> 그 바늘이 뚫고 구멍 갈 수 확인합니다. </li><li> 당신은 parafilm의 작은 조각에 주사하고 데려가고 싶다는 약물의 피펫 1 μl. </li><li> 두개골에 parafilm 놔. </li><li> 당신은 액체가 유리 바늘로 올라간다는 것을 현미경으로 확인하면서, microinjector 휠을 회전하여 약물을 빨아. </li><li> parafilm를 제거하고 제로 좌표를 다시 설정합니다. </li><li> 유리 바늘 끝이 부드럽게 뇌의 표면을 만지 제로에서 "Z"좌표를 설정할 때까지 홀더 아래, 선택한 좌표에 바늘을 이동합니다. </li><li> 선택 깊이에서 뇌 실질에 유리 바늘을 소개합니다. </li><li> 천천히 ~ 1 NL / 초의 속도로 약물을 주사. </li><li> 원하는 볼륨이 분사되면, 2 분 실질에 마약 확산하자. 그런 다음 부드럽게 천천히 바늘을 제거하는 진행합니다. </li><li> 접착제는 수술 상처와 stereotactic 장치에서 동물을 제거하고 마취 복구를 위해 깨끗한 침대를 포함하는 미리 예열 케이지에 동물을 넣어. </li><li> 이후 수술 진통제를 제공하기 위해 모든 동물은 24 H. 5 MG / kg 피하 Ketorolac 매 12 시간을 받았습니다 </li></ol> 대표 결과 : 이 프로토콜을 따라하면, 매우 정확하게 주사는 취득과 매우 좁은 바늘 트랙 뇌 손상을 최소화합니다. 이 방법의 대표적인 결과로, 우리는 흰 물질의 책자 1-4 demyelination를 생산 코퍼스의 callosum에 lysophosphatidyl 콜린 (lysolecithin)을 주입했다. 유리 바늘에 의해 생산되는 뇌 손상을 최소화하기 위해, 우리는 코퍼스의 callosum에 lysolecithin의 20 NL을 주입, 200 NL만큼 필요한 경우에는 높은 볼륨이 동일한 방법으로 주입 수 있습니다. Demyelination은 흰색 물질 책자 (그림 2)에서 myelin 기본 단백질 표현의 부재에 의해 감지됩니다. <img src="/files/ftp_upload/2082/2082fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 50 μm의 직경 유리 바늘. 이 짧은 거려 사이의 거리규모에 50 μm의 길이를 나타냅니다. <img src="/files/ftp_upload/2082/2082fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 코퍼스의 callosum 그림 2. Lysolecithin 분사. Demyelination은 myelin 기본 단백질 표현 (점선 영역) 없음으로 표시됩니다. 유리 바늘 트랙트 (화살표)의 작은 크기를합니다. 바 = 100 μm의

<ol><li>Menn, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origin+of+oligodendrocytes+in+the+subventricular+zone+of+the+adult+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Origin of oligodendrocytes in the subventricular zone of the adult brain.</a> J Neurosci. 26, 7907-7918 (2006).</li>
<li>Gonzalez-Perez, O., Romero-Rodriguez, R., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidermal+Growth+Factor+Induces+the+Progeny+of+Subventricular+Zone+Type+B+Cells+to+Migrate+and+Differentiate+into+Oligodendrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Epidermal Growth Factor Induces the Progeny of Subventricular Zone Type B Cells to Migrate and Differentiate into Oligodendrocytes.</a> Stem Cells. 27, 2032-2043 (2009).</li>
<li>Hall, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Some+aspects+of+remyelination+after+demyelination+produced+by+the+intraneural+injection+of+lysophosphatidyl+choline%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Some aspects of remyelination after demyelination produced by the intraneural injection of lysophosphatidyl choline.</a> J Cell Sci. 13, 461-477 (1973).</li>
<li>Webster, G. R., Thompson, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Observations+on+the+presence+of+lysolecithin+in+nervous+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Observations on the presence of lysolecithin in nervous tissues.</a> Biochim Biophys Acta. 63, 38-45 (1962).</li>
<li>Doetsch, F., Caille, I., Lim, D. A., García-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subventricular+Zone+Astrocytes+Are+Neural+Stem+Cells+in+the+Adult+mammalian+Brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Subventricular Zone Astrocytes Are Neural Stem Cells in the Adult mammalian Brain.</a> Cell. 97, 1-20 (1999).</li>
<li>Doetsch, F., Petreanu, L., Caille, I., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EGF+converts+transit-amplifying+neurogenic+precursors+in+the+adult+brain+into+multipotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">EGF converts transit-amplifying neurogenic precursors in the adult brain into multipotent stem cells.</a> Neuron. 36, 1021-1034 (2002).</li>
<li>Baraban, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+seizures+by+transplantation+of+cortical+GABAergic+interneuron+precursors+into+Kv1.1+mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Reduction of seizures by transplantation of cortical GABAergic interneuron precursors into Kv1.1 mutant mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 15472-15477 (2009).</li>
<li>Richardson, R. M., Barbaro, N. M., Alvarez-Buylla, A., Baraban, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developing+cell+transplantation+for+temporal+lobe+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurg+Focus%22%5BJournal%5D)">Developing cell transplantation for temporal lobe epilepsy.</a> Neurosurg Focus. 24, E17-E17 (2008).</li>
<li>Alvarez-Dolado, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+inhibition+modified+by+embryonic+neural+precursors+grafted+into+the+postnatal+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Cortical inhibition modified by embryonic neural precursors grafted into the postnatal brain.</a> J Neurosci. 26, 7380-7389 (2006).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

방법은 두뇌에 매우 정확한 장소에 약물이나 바이러스 벡터의 대부분을 제공하는 매우 유용합니다이 비디오에서 보여주었다. 이 기술의 주요 장점 중 일부는 표적 지점, 주사의 정확성 및 뇌 병변 및 요로 손상 1, 2, 5, 6의 작은 크기의 신뢰성입니다. 일단 기술이 mistargeting의 범위 표준화되어 있어야 50 μm의 또는 2, 1 이하. 세포 이식은 또한 더 넓은, 100-150 μm의 7-9, 바늘을 사용하여 수행할 수 있습니다. 따라서 효율적인 세포 전달은 세포 이식에 의해 유도된 매우 구체적인 병변 최소화 피해로 입금하실 수 있습니다. 이 기법 세 중요한 단계가 있습니다 : <ol><li> 우리는 항상 드릴링 전에 선택한 좌표를 라벨에 인슐린 바늘로 부드럽게 머리를 긁적하는 것이 좋습니다. </li><li> 빠르게 뇌의 표면을 침투하는 빠른 움직임으로 유리 바늘을 소개합니다. </li><li> 최적의 깊이에 도달하면 마약이 자유롭게 두뇌에 확산하기 ...

<table><tbody><tr><td>모세관 유리관</td><td>Wiretrol I</td><td>5-000-1001</td><td></td></tr><tr><td>마이크로피펫 풀러</td><td>Kopf Instruments</td><td>Model 730</td><td></td></tr><tr><td>마이크로포지</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>Model 48000</td><td></td></tr><tr><td>미네랄 오일</td><td>MSDS</td><td>M7700</td><td></td></tr><tr><td>고진공 그리스</td><td>Dow Corning</td><td>05054-AB</td><td></td></tr><tr><td>마취제: 2.5% Avertin</td><td></td><td></td><td>2,2,2-tribrom&amp;#8211;thanol + tert-amyl alcohol, 1:1 w/v</td></tr><tr><td>가열 패드</td><td>Mastex</td><td>Model 900</td><td></td></tr><tr><td>정위 고정 장치</td><td>Kopf Instruments</td><td>Model Kopf-900</td><td></td></tr><tr><td>수술용 메스 날 # 15</td><td>Medi-Cut</td><td></td><td></td></tr><tr><td>마이크로 드릴</td><td>Ideal Micro Drill</td><td>67-1000</td><td></td></tr><tr><td>정밀 핀셋</td><td>Fine Science Tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1-&amp;mu;L 마이크로피펫</td><td>Rainin</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Parafilm M.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>수술용 현미경</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td>Contraves 시스템 탑재 Vasiorkop</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 인젝터</td><td>Narishige International</td><td>Model MO-10</td><td></td></tr></tbody></table>

마약, 바이러스성 벡터, 또는 세포 이식 전달 microinjections 깊은 뇌 구조의 타겟팅

Targeting of Deep Brain Structures with Microinjections for Delivery of Drugs, Viral Vectors, or Cell Transplants

뇌 실질에 Microinjections 마약, 바이러스성 벡터 또는 세포 이식을 전달하는 것이 중요 절차입니다. 주사 바늘는 궤도 도중에 생성되는 뇌 병변뿐만 아니라 두뇌가 작은뿐만 아니라 때로는 여러 개의 주사가 필요합니다 특히 마우스 두뇌의 주요 관심사입니다. 우리는 여기서 크게 뇌 손상을 감소하고 쥐 두뇌에 정확한 타겟팅을 수있는 50 μm의 루멘과 유리 모세관 바늘을 생산하는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 작은 볼륨의 전달 (20-100 NL에서)는, 출혈 위험을 줄일 수 있도록하고, 뇌 실질 조직에 약물의 수동적 확산을 최소화합니다. 모세관 유리 튜브의 다른 크기를 사용하거나 바늘 루멘을 변경하여, 물질과 세포의 여러 종류의 주입 수 있습니다. 유리 모세관과 Microinjections는 분사 기술과 소형 설치류에 최소한의 피해 타겟팅 깊은 두뇌에 상당한 개선을 나타냅니다.

이 문서에서는, 우리는 50 μm의 루멘과 유리 모세관 바늘을하는 방법을 보여줍니다. 이 기술은 크게, 뇌 손상을 감소 약물의 수동적 확산을 최소화하고 쥐 두뇌에 정확한 타겟팅을 수 있습니다.

마약, 바이러스성 벡터, 또는 세포 이식 전달 Microinjections 깊은 뇌 구조의 타겟팅

뇌 실질 내 미세주입은 약물, 바이러스 벡터 또는 세포 이식물을 전달하는 데 중요한 절차입니다. ...의 뇌 병변은

본 실험 절차의 전반적인 목적은 약물, 바이러스 벡터 또는 세포 이식을 위해 뇌 심부 구조에 매우 정밀한 미세 주입을 수행하는 것입니다. 이를 위해 먼저 루멘 크기가 50 µm인 유리 모세관 바늘을 제작합니다. 절차의 두 번째 단계는 모세관 현상을 통해 바늘의 50%를 미네랄 오일로 채우고, 튜브의 가장 넓은 끝단으로 플런저를 삽입하는 것입니다.절차의 세 번째 단계는 주입하려는 물질이나 세포 현탁액을 바늘에 채우는 것입니다. 절차의 마지막 단계는 바늘 끝을 삽입하여 뇌 심부 구조에 매우 낮은 유속으로 물질을 주입하는 것입니다. 궁극적으로, 유리 모세관을 이용한 미세 주입을 통해 뇌의 매우 정밀한 표적에 물질을 주입한 결과를 얻을 수 있습니다.안녕하세요, 저는 멕시코 콜리마 대학교 심리학과 신경과학 연구소의 Oscar Gonzalez입니다. 오늘은 유리 모세관을 사용하여 마우스 뇌에 약물을 전달하는 미세주입 절차를 보여드리겠습니다. 저희는 성체 신경줄기세포를 연구하기 위해 연구실에서 이 절차를 사용하고 있습니다.그럼 시작하겠습니다. 루멘 크기가 50 µm인 유리 모세관 바늘을 사용하여 뇌에 미세 주입을 수행하면 뇌 손상을 현저히 줄이고, 약물의 수동 확산을 최소화하며, 설치류 뇌의 정밀한 타겟팅이 가능합니다. 미세 주입을 수행하기 전, 먼저 유리 바늘을 제작해야 합니다.먼저 마이크로 피펫 풀러(micro pipette puller)의 고저항 전극에 모세관 유리관을 배치합니다. 다음으로 마이크로 피펫 풀러의 전극을 켭니다. 유리관의 중간 부분을 가열하여 국소적으로 연화시키기 위해, 유리관을 길이 방향으로 3~5 mm 정도 초기 거리만큼 늘려 해당 국소 부위의 유리관 직경이 감소하도록 합니다.유리관이 부러질 때까지 계속해서 늘려줍니다. 이 단계들을 반복하여 동일한 단일 배럴 바늘 두 개를 제작합니다. 이제 유리 바늘을 마이크로 포지(micro forge)에 넣습니다.팁을 비스듬하게 깎으려면 30도 각도면 충분합니다. 마지막으로, 바늘들을 현미경 아래에 두고 두 바늘 모두 내경이 정확한지 확인하십시오. 대부분의 친수성 약물의 경우, 제작된 바늘의 내경이 30 to 50 micrometer일 때 이상적입니다.미세 주입에 이를 어떻게 사용하는지 살펴보겠습니다. 우선, 제작된 바늘의 가장 넓은 끝부분부터 미네랄 오일을 채웁니다. 미네랄 오일이 모세관 현상에 의해 모세관 튜브 길이의 약 50%까지 도달하도록 둡니다.니들의 가장 넓은 끝부분에 고진공 그리스를 바르고 플런저를 삽입합니다. 유리 니들의 팁 끝으로 미네랄 오일이 한 방울 조금 나올 때까지 조심스럽게 밀어냅니다. 이제 마이크로 인젝터의 홀더에 니들을 고정하고 주사를 위해 동물을 준비합니다.먼저, 동물의 체온을 유지하기 위해 정위 고정 동물 홀더에 가열 패드를 배치합니다. 37 °C에서 마취된 마우스의 머리 털을 깎은 후, 정위 고정 장치에 배치하고 고정합니다. 이어바와 치아 홀더를 사용하여 고정한 상태에서, 수술용 칼로 양쪽 귀에서 람다(Lambda) 두개골 선까지 피부를 절개합니다.면봉으로 두개골을 닦아 건조시키고 수술 부위에서 피부를 젖혀 밖으로 뺍니다. 다음으로, 유리 바늘의 끝을 bgma suture의 정점에 맞추고 그 지점을 초기 주입 위치로 설정합니다. 이제 정위 고정 장치의 x축과 Y축을 두개골 위로 이동시켜 천공할 두개골 지점을 설정합니다.연구용 마이크로 드릴을 사용하여 미세 핀셋으로 선택한 좌표에 조심스럽게 구멍을 뚫습니다. 뼈의 가장 깊은 층을 조심스럽게 제거하고 경막(dura mater)을 파쇄합니다. 그러면 뇌척수액이 일부 누출되는 것을 볼 수 있습니다.바늘이 드릴로 뚫은 구멍을 통과할 수 있는지 확인하기 위해, 정위 고정 장치의 Z축을 사용하여 유리 바늘을 천천히 내립니다. 이제 주입할 약물 1 µL를 피펫으로 취해 작은 파라필름 조각 위에 올립니다. 이 파라필름을 두개골 위에 배치합니다.마이크로 인젝터 휠을 돌려 약물을 흡입하면서, 현미경을 통해 액체가 유리 니들 안으로 올라가는지 확인하십시오. 파라필름을 제거하고 제로 좌표를 재설정합니다. 이제 니들을 선택한 좌표로 이동시키고, 유리 니들의 끝이 뇌 표면에 살짝 닿을 때까지 홀더를 내린 후 Z.Coordinate를 0으로 설정하십시오.원하는 깊이까지 유리 바늘을 뇌 실질에 삽입합니다. 약물을 초당 약 1 nL의 속도로 천천히 주입합니다. 원하는 부피만큼 주입이 완료되면, 약물이 실질 내로 확산될 수 있도록 2분 동안 대기한 후 바늘을 부드럽고 천천히 제거합니다.마지막으로 수술 부위를 접착제로 봉합하고 동물을 정위 고정 장치에서 분리합니다. 마취 회복을 위해 동물을 미리 데워둔 케이지에 넣습니다. 이제 미세주입 결과를 보여드리겠습니다.유리 바늘에 의한 뇌 손상을 최소화하기 위해, 백질 경로의 탈수초화를 유도하는 Lysophosphatidylcholine 또는 lyin을 뇌량(corpus callosum)에 주입하였습니다. lyin은 20 liters만 주입되었습니다. 탈수초화는 백질 경로에서 myelin basic protein 발현의 소실로 나타나며, 매우 정밀한 주입이 이루어졌으며 매우 가는 바늘 경로를 통해 뇌 손상을 최소화하였습니다.지금까지 뇌 심부 구조에 미세 주입을 수행하기 위한 유리 바늘 제작 방법을 살펴보았습니다. 이 절차를 수행할 때는 수술실에서 바로 사용할 수 있도록 모든 장비와 재료를 미리 준비하는 것이 중요합니다. 이것으로 모든 설명을 마치겠습니다.시청해 주셔서 감사합니다. 귀하의 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

손상 3 - D 뇌 회로의 타겟팅 바이러스성을위한 확장 가능한 유체 인젝터 배열

출처: Poland, R. et al. 동기 부여된 행동의 분자 기질을 연구하기 위한 설치류 뇌 미세 주사. J. Vis. 경험. (2015년)이 비디오에서는 주사기와 마이크로인젝터 튜브로 구성된 물로 채워진 미세 주입 설정이 정확한 약물 전달을 위해 사용됩니다. 사전 이식된 가이드 캐뉼라가 있는 쥐는 표적 뇌 미세 주사를 받아 조직 손상을 최소화하면서 깨어 있는 동물에게 치료제를 정확하게 투여할 수 있습니다.

깨어 있는 설치류 뇌에 치료제의 미세 주입 기반 전달

최근 유기형 뇌 절편 제제의 개선으로 인해 생명 공학 응용 분야에 대한 이용이 가능해졌습니다. 유기형 절편(organotypic slice)은 기능적 시냅스 연결을 포함하여 생체 내 생물학의 국소적 구조적 특성을 유지합니다. 여기에서는 이러한 슬라이스를 라벨링하고 유전적으로 조작하기 위한 위치 선택적 생물학적 전달 방법을 제시합니다.

위치 선택성과 유전자는 수정 된 유전자 총을 사용의 Organotypic 뇌 조각에 타겟팅

뇌심부자극술(DBS) 수술의 치료 효과의 기저에 있는 메커니즘에 대한 조사가 필요합니다. 본 원고에 제시된 방법은 DBS 수술 후 신경발생을 촉진할 수 있는 후보 유전자의 유전자 발현 프로파일을 분석하여 DBS에 의해 유발되는 세포 이벤트를 조사하는 실험적 접근 방식을 설명합니다.

전방 시상 핵의 깊은 뇌 자극 후 쥐 해마의 유전자 발현 변화 분석

MicroRNAs는 뇌에서 중요한 역할을 하며 신경 퇴행을 모델링하기 위한 잠재적인 표적입니다. 그러나 miRNA의 길이가 짧고 뇌 조직에 접근하기 어렵기 때문에 miRNA 수치를 교란하는 것은 어렵습니다. 이 비디오는 마우스에서 뉴로펩타이드를 사용하여 antagomir 설계 및 뇌 특이적 전달 방법을 제시합니다.

miRNA의 뇌의 특정 최저 대한 정위 주입하는 간단한 대안

본 프로토콜은 내부 경동맥을 통해 뇌로 물질을 직접 효과적으로 전달하는 마우스 미세 수술 주입 기술을 설명합니다.

중추 신경계에 대상 물질 전달을위한 마우스 미세 주입 기술를 통해 내부 경동맥

이 프로젝트의 목표는 거의 실시간으로 깊은 두뇌 자극의 효과 시뮬레이션 하 고 어떻게 이러한 장치에 영향을 미칠 뇌의 신경 활동으로 의미 있는 피드백을 제공 하는 대화형, 환자 관련 모델링 파이프라인을 개발 하는 것입니다.

대화형, 환자 전용 모델을 사용 하 여 깊은 두뇌 자극 치료를 위한 신경 섬유 책자를 대상으로

이 프로토콜은 생체 뇌 슬라이스에서 광유전학 자극을 사용하여 먼 뇌 영역에서 장거리 입력의 세포 유형 특정 기능적 연결을 식별하는 일련의 방법을 설명합니다.

마우스 뇌 슬라이스에 장거리 입력의 광유전학 자극을 위한 Vivo intracerebral 입체 전착성 주사

이 프로토콜은 집속 초음파 혈액 뇌 장벽(BBB) 개방, 결과 유전자 발현 평가 및 조직학적 검사를 통한 화학 유전 수용체의 신경 조절 활성 측정을 통해 유전자 전달에 필요한 단계를 설명합니다.

뇌 구조를 표적으로 삼고 화학 유전 학적 신경 조절을 평가하기위한 집중 초음파 유도 혈액 뇌 장벽 개방

영장류 대뇌 오가노이드의 전기천공법은 영장류(병리)생리학적 신피질 발달에 가까운 모델 시스템에서 다양한 전구체 유형과 뉴런에 일시적인 유전자 변형을 도입하는 정확하고 효율적인 접근 방식을 제공합니다. 이를 통해 신경 발달 및 진화 과정을 연구 할 수 있으며 질병 모델링에도 적용 할 수 있습니다.

유전자 변형을 위한 영장류 대뇌 오가노이드의 표적 미세주입 및 전기천공

배우세요 50μm 내경 유리 모세관 바늘을 제작하여 뇌 심부 구조에 정밀 마이크로인젝션을 수행하는 방법을. 이 기술은 약물, 바이러스 벡터 또는 세포 이식물을 전달하며 뇌 손상을 최소화하고 수동 확산을 줄여줍니다.

마약, 바이러스성 벡터, 또는 세포 이식 전달 Microinjections 깊은 뇌 구조의 타겟팅

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