Name: 내부 핵심 현미경에 의해 골격근의 생체내 미세 순환 측정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-05-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 31 s
Description: 학습하세요 생체내 현미경법을 이용한 골격근 미세순환 측정 방법을. 적혈구 유속, 속도, 혈장 흐름 등 다중 혈류 매개변수를 정량적으로 분석하여 생리학적 자극에 따른 미세혈관 변화를 상세히 관찰할 수 있습니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

우리는 근육의 생체내 관찰에 그의 조언 JW Lichtman 감사합니다.

RBC 막 염색법 <ol><li> 마우스 붉은 혈액 세포 heparinization과 같은 마우스 변형에서 수정되었습니다. </li><li> 마우스 RBC는 PKH26 염료 (; 레드 형광 세포 링커 키트, 시그마, 미국 567분​​의 551 NM)와 스테인드되었습니다. </li><li> RBC는 PBS로 씻어하고 실온에서 5 분 PKH26 염료의 2μM 솔루션 incubated되었습니다. 반응은 플라즈마를 추가 (열 65 ° C 사전에서 1 시간 동안 inactivated)과 1 분 incubated에 의해 중지되었습니다. </li><li> 스테인드 RBC는 PBS로 5 번 씻어했다. </li></ol> 마우스 준비 <ol><li> 3 ~ 6 달이 넘은 남성 C57BL/10 생쥐는이 연구에 사용되었다. 우리 pentobarbital의 intraperitoneal 주입 (50mg/kgBW)에 의해 anesthetized 마우스. </li><li> 생쥐는 다음 20 게이지 폴리에틸렌 튜브로 intubated 기계적 환기, 그리고 37 기까지했다 ° 열전대 센서와 피드백 온도 컨트롤러 시스템에 연결된 Kapton 시트 히터에 C. </li><li> 목 복부 측면을 면도했다. 좌우 sternomastoid 근육이 노출되었습니다. 근육은 스테인레스 스틸 홀더 지원 및 살균 크렙스 링어 솔루션 superfused되었습니다. </li></ol> 주사 <ol><li> 스테인드 RBCs는 37 크렙스 링어에 희석 ° C에서 예열했다. 스테인드 RBC (혈소판 12 %)의 50ul는 성기 정맥에서 마우스에 주입했다. </li></ol> 골격 근육의 생체내 미세 전망대에서 우리는 수정 1 제프 W. Lichtman의 방법을 따라 : <ol><li> 동물은 니콘 이클립스 - 800 현미경의 손으로 만들어진 철 무대 위에 가열 패드에 배치했다. 물 수영 객관 렌즈는 라이브 에피 형광 관찰하기 위해 이용되었다. 우리는 머큐리 램프의 형광 불빛 아래에서 혈관의 PKH26 스테인드 RBC 흐르는 내부를 관찰했다. 우리가 그들의 RBCs 흐름 방향과 구조에 의해 기본 arterioles, 보조 arterioles, 모세 혈관과 정맥을 확인. </li><li> 강화 SIT 카메라 (하마 마츠 Photonics, C240​​0, 일본)와 비디오 프레임 그래버는 실시간 비디오 속도 (초당 30 프레임)에서 낮은 강도의 신호를 캡처하기 위해 설치되었다. 이미지가 비디오 파일로 DVD에 기록되었다. </li></ol> 근육 자극 <ol><li> 전기 펄스는 주변 신경 자극기 (Innervator 252, 피셔 &amp; 페이켈 건강, 뉴질랜드)을 사용하여 생성하고, 코팅 스테인레스 프로브를 통해 근육의 표면에 전달했다. 마이너스 프로브 끝을 근육의 근위 부분에 배치되었고 플러스 끝을 근육의 말초 부분에 배치되었습니다. 파상풍 stimulations은 5 초 동안 50Hz의 속도로 제공되었습니다. 전기 자극은 접촉 영역의 주변에 직접 myofiber 손상을 일으키지 않았다. </li></ol> RBC 플럭스 분석 <ol><li> 기록 DVD 비디오 이미지는 프레임 그래버 소프트웨어 (비디오 사반트, 미국)를 통해 비디오 사반트 이미지 파일을 전송했다. 비디오 이미지는 각각의 스테인드 RBC을 시각화하기 위해 조정 속도가 검토되었다. RBC 플럭스은 분당 초점을 기본 arteriole 날아 RBC를 계산하여 측정되었다. </li></ol>

<ol><li>Lichtman, J. W., Magrassi, L., Purves, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+neuromuscular+junctions+over+periods+of+several+months+in+living+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Visualization of neuromuscular junctions over periods of several months in living mice.</a> J Neurosci. 7, 1215-1222 (1987).</li>
</ol>

동물 실험에 관한 모든 절차는 매사 추세츠 종합 병원의 연구 애니멀 케어에있는 분과의 검토와 승인되었습니다.

중요 techinical 포인트는 다음과 같다 : (1) 관찰을위한 생리 동물의 상태 (perfusative 솔루션, 체온의 환기, 산도), 스테인드 RBC (2) 사출 볼륨, 그리고 (3) 조건의 유지 보수 (최적 렌즈 선택, 형광 강도). 향후 응용 프로그램은 다음과 같습니다 pharmacophysiological 및 / 또는 분자 생물 학적 개입과 (A) 조합, arterio / arteriolo - 경화증과 neovascularization의 (B) 장기 관찰.

<table><tbody><tr><td>PKH26 염료</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>551/567 nm; 적색 형광 세포 링커 키트</td></tr><tr><td>C57BL/10 마우스</td><td>동물</td><td></td><td></td><td>3~6개월령 수컷</td></tr><tr><td>펜토바르비탈</td><td></td><td></td><td></td><td>마취제, 50mg/kgBW, i.p.</td></tr></tbody></table>

내부 핵심 현미경에 의해 골격근의 생체내 미세 순환 측정

In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy

배경 : 규제 요인 및 생체내의 엑기스에 대한 자세한 생리가 남아있어 완전히 이미지가 발명했다 다양한 modalities 후 명확히하지 않습니다. 혈액 흐름의 많은 매크로 매개 변수는 유속, 혈액 흐름 속도와 적혈구 세포 (RBC)의 변화를 반영하는 동안 흐름은 현미경 관찰에 선형 관계를 보유하지 않습니다. RBC 속도와 RBC 플럭스, RBC 자속 및 플라즈마 흐름 볼륨 사이에, 그리고 현미경 관찰, 사용 microcirculatory 규정에 자세한 연구의 요구에 대해 과학적 근거에 주변 조직의 흐름을 규제의 공간 및 시간적 이질의 차이가보고있다 intravital 현미경. 방법 : 우리는 마우스 sternomastoid 근육의 생체내 미세 관찰의 제프 Lichtman의 방법을 수정했습니다. 마우스가 anesthetized 있으며, 환기, 그리고 현미경 관찰을위한 PKH26L - 찬란 분류 RBCs 주사. 결과 및 결론 : 찬란 분류 RBCs가 감지하고 넓은 분야 현미경으로 잘 구분할 수 있습니다. 근육 수축은 RBC 유동적 전기 자극을 유발 증가 evoked. RBC의 속도와 모세관 밀도 등 다른 매개 변수의 부량이 가능했다. 마우스는 잘 수술, 스테인드 RBCs의 주입, 현미경 관찰, 전기 자극을 용납. 아무도 근육이나 혈관 손상은 우리의 방법은 상대적으로 덜 침습 장기 관찰에 적합 것을 제안, 관찰되지 않았습니다.

엑기스의 관찰을위한 새로운 다양한 방법을 제시합니다. 이것은 장기 관찰에 적합 간주하고, pharmacophysiological 또는 분자 생물 학적 중재와 함께입니다.

배경: 다양한 방식의 ...이 이루어졌음에도 불구하고, 생체 내 미세순환의 조절 인자와 세부 생리학적 기전은 여전히 충분히 규명되지 않은 상태로 남아 있습니다.

안녕하세요, 저는 하버드 의과대학 및 매사추세츠 종합병원(Massachusetts General Hospital)의 연구원으로 근무하고 있는 Aki입니다. 이번 비디오 저널에서는 생체 내(in vivo) 현미경의 새로운 방법을 소개해 드리겠습니다. 이 기술을 통해 미세 분비물 내의 정량적 혈류량을 측정할 수 있습니다.본 실험의 목적은 생체 내 미세 분비의 연속적인 측정 시스템을 구축하는 것입니다. 우리는 기존의 혈류 초음파나 산소 분압 측정과 같은 생체 내 이온 측정 방식과 달리, 현미경 하에서 살아있는 동물의 근육 내 모세혈관 및 전방 단계의 혈류를 시각화하도록 이 프로젝트를 설계했습니다. 이를 통해 적혈구 플럭스 또는 혈류 속도, 혈장 흐름과 같은 혈류의 다중 파라미터 측정이 가능해질 것입니다. 이러한 파라미터들을 측정함으로써 미세 순환의 변화를 더욱 상세하게 밝혀낼 수 있습니다.그 후, 생체 근육 조직에서 생리적 자극에 따른 혈류 변화를 검출하기 위해 본 방법을 적용합니다. 본 방법은 기존의 생체 내 현미경 검사보다 더 간단하고 침습성이 낮아 근육에 직접 접근할 수 있으며, 마우스 근육에 전기 생리적 자극을 가하여 근육 수축에 따른 혈류의 세부적인 반응을 기술할 수 있습니다. 전신 마취는 소듐 펜토바르비탈로 유도되었습니다.제모 크림을 사용하여 목의 털을 제거합니다. 기관 내 튜브를 삽입합니다. 목 내부에서 기계적 환기기에 연결합니다.흉골유돌근을 노출시킵니다. 흉골유돌근 덩어리를 온도 제어 패드 위에 올려둡니다. 마우스에서 혈액을 채취하고, 적혈구를 PBS로 세척한 후 PKH 26과 함께 둡니다. 실온에서 5분 동안 배양하고, 열불활성화 혈장으로 염료를 소광시킨 뒤 적혈구를 PBS로 세척합니다.염색된 적혈구를 동일한 계통의 다른 마우스에 정맥 주사했습니다. 프로브를 전기 펄스 발생기에 연결하고, 프로브를 근육 위에 배치한 후 현미경 스테이지 위에 올립니다. 현미경의 형광 광원 아래에서 이미지를 관찰하고 기록합니다. 관찰 결과, 펄스 발생기에 의해 정상적인 생리학적 수축이 유도되었습니다.일관된 데이터를 얻기 위해 본 실험에서 주의해야 할 몇 가지 중요한 기술적 사항은 다음과 같습니다. 첫 번째로, 동물의 정상적인 생리적 상태를 유지하기 위해 마우스를 기계적 환기기에 연결하여 1회 호흡량 60 µL, 호흡수 60회로 설정함으로써 혈액 가스 매개변수를 일관된 생리적 상태로 유지하였습니다. 동물의 체온은 가열 패드

in-vivo-micro-circulation-measurement-skeletal-muscle-intra-vital

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

pial 엑기스의 시간적 및 공간적 hemodynamic 및 염증성 이벤트를 따라 Intravital 현미경.

휴일 두개골 윈도우를 사용하여 마우스 뇌 엑기스의 Intravital 현미경

내피 내피 / glycocalyx 표면 층은 이상적인 intravital 현미경을 사용하여 공부하고 있습니다. Intravital 현미경은 기술적 같은 폐 등 움직이는 장기에 도전하고 있습니다. 우리는 동시 brightfield 및 형광 현미경은 자유롭게 - 이동에 내피 표면 층의 두께를 추정하는 데 사용할 수 있습니다 방법을...

마우스 폐 내피 표면 층의 생체 측정

이 논문에서는 동적 조영 증강 형광 videomicroscopy를 사용하여 생체 내에서 종양의 미세 혈관을 분석하는 방법을 제시한다. 두 정량적 파라미터를 획득 하였다 : 기능성 종양 혈관을 반영 모세관 밀도 및 내피 벽 leakiness 반사 인덱스 누설.

형광 공 초점 Videomicroscopy를 사용하여 종양 혈관의 생체 내 이미징

마우스 M.의 cremaster 미소 순환의 intravital 현미경은 독특하고 주변 골수 줄기 세포 이동의 분석을위한 생체 모델에서 잘 표준화을 제공합니다.

주변 줄기 세포 이주의 분석을위한 마우스 Cremaster 근육에있는 미세 혈관의의 intravital 현미경

이 기사는 이미지 획득 및 분석을 위한 특정 방법론과 함께 생체 내 현미경 이미징을 사용하여 마우스 간 혈관 구조의 개별 혈관 내 혈류 속도를 동적으로 측정하고 정량화하는 자세한 방법에 대해 보고합니다.

다음 간 생체 내에 현미경 이미징<em&gt; 슈만 편모충</em&gt; 감염 : 간 혈류의 평가

이 방법은 실험적으로 유도된 심근 허혈이 있는 마우스에서 요오드화 조영제를 사용하여 심장 형태, 기능, 관류, 대사 및 생존력을 평가하기 위해 Quantum Micro-Computed Tomography(MicroCT)를 사용하는 방법을 설명합니다. 이 기술은 인간 심장 질환의 다양한 동물 모델의 비파괴 고처리량 종단 생체 내 이미징에 적용할 수 있습니다.

심근 구조, 기능의 생체 양적 평가에서 관류 및 생존 능력은 심장 마이크로 컴퓨터 단층 촬영을 사용하여

인슐린 유도 혈관 근육 관류를 조절 하 고 증가 microvascular 표면적 (microvascular 모집) 용 질 exchange에 사용할 수 있는 혈액과 조직 interstitium 사이. 결합된 intravital 현미경 검사 법 및 대비 향상 된 초음파 동시에 큰 배와는 미세 혈관에서 인슐린의 활동을 평가 하 여 vivo에서.

Intravital 현미경 검사 법 및 대비 향상 된 초음파 마우스 Hindlimb의 인슐린 유도 된 혈관과 근육 관류 결합

Videomicroscopy 시스템은 고립 된 지방 조직 arterioles 생리 및 약리 자극에 대 한 응답에서의 기능 속성을 검사 하는 데 사용 됩니다. 이 기술은 비만 인 간에 있는 다른 지방 조직 도메인에 microvascular 고기 검사를 사용할 수 있습니다.

인간 지방 조직 Microvascular 함수 Videomicroscopy를 사용 하 여 평가

여기, 우리는 근처-적외선 분광학을 사용 하 여 단일 병원 또는 실험실 방문에 반응성 충 혈, 혈관 커플링 및 골격 근육 산화 능력을 평가 하는 간단한, 비-침략 적 접근 방식을 설명 합니다.

골격 근육 혈관 결합, 산화 용량 및 Microvascular 함수 '원스톱 쇼핑' 근처-적외선 분광학

본 프로토콜은 마취된 돼지에서 일반적인 비골 신경의 전기 자극을 통해 얻어진 생체내 토크 데이터의 평가 및 해석에 대한 간결한 실험 세부사항을 기술한다.

생체 내 돼지의 Hindlimb Dorsiflexor 등각 토크 측정

생체 내 형광 현미경 검사는 백혈구 - 내피 상호 작용 및 모세관 관류를 실시간으로 연구하는 데 활용 될 수 있습니다. 이 프로토콜은 진공-안정화된 폐 영상화 시스템을 사용하여 폐 미세순환에서 이러한 파라미터를 영상화하고 정량화하는 방법을 기술한다.

진공 안정화 이미징 시스템을 이용한 실험적 급성 폐 손상에서의 폐 미세순환의 생체내 광역 형광 현미경 검사

학습하세요 생체내 현미경법을 이용한 골격근 미세순환 측정 방법을. 적혈구 유속, 속도, 혈장 흐름 등 다중 혈류 매개변수를 정량적으로 분석하여 생리학적 자극에 따른 미세혈관 변화를 상세히 관찰할 수 있습니다.

내부 핵심 현미경에 의해 골격근의 생체내 미세 순환 측정

더 많은 동영상 탐색