Name: 모니터링 살충제 저항 Bioassays (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-30T16:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: 학습하세요 살충제 저항성 바이오어세이 방법을 통해 곤충의 살충제 감수성을 평가하고 저항성 수준을 LC50 값 비교로 정량화하는 기술입니다. 이 방법은 해충 관리 전략 개선에 필수적입니다.

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우리는 자금 조사이 간행물에 관한위한 커튼 법인 국가 지원 프로그램 # 08 - 317MO, USDA / CSREES SR - IPM 부여 2009-34103-20018와 랜디스 국제 감사드립니다.

<ol><li>Yu, S. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aYu%2C+SJ+%22The+Toxicology+and+Biochemistry+of+Insecticides%22">The Toxicology and Biochemistry of Insecticides</a>. , CRC Press Taylor & Francis Group. Boca Raton, Fl. (2008).</li>
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<li>Sivasupramaniam, S., Johnson, S., Watson, T. F., Osman, A. A., Jassim, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((glass-vial+technique+for+monitoring+tolerance+of+Bemisia+argentifolii+%28Homoptera%3A+Aleyrodidae%29+to+selected+insecticides+in+Arizona%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Econ.+Entomol%22%5BJournal%5D)">glass-vial technique for monitoring tolerance of Bemisia argentifolii (Homoptera: Aleyrodidae) to selected insecticides in Arizona.</a> J. Econ. Entomol. 90, 66-74 (1997).</li>
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<li>Willrich, M. M., Leonard, B. R., Cook, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+and+field+evaluations+of+insecticide+toxicity+to+stink+bugs+%28Heteroptera+Pentatomidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cotton+Sci%22%5BJournal%5D)">Laboratory and field evaluations of insecticide toxicity to stink bugs (Heteroptera Pentatomidae).</a> J. Cotton Sci. 7, 156-163 (2003).</li>
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<li>Nielsen, A. L., Shearer, P. W., Hamilton, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+of+insecticides+to+Halyomorpha+halys+%28Hemiptera%3A+Pentatomidae%29+using+glass-vial+bioassays%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Econ.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Toxicity of insecticides to Halyomorpha halys (Hemiptera: Pentatomidae) using glass-vial bioassays.</a> J. Econ. Entomol. 101, 1439-1442 (2008).</li>
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<li>Snoddgrass, G. L., Scott, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+discriminating-dose+bioassay+for+detecting+pyrethroid+resistance+in+tarnished+plant+bug+%28+Heteroptera%3A+Miridae%29+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Southwest.+Entomol%22%5BJournal%5D)">A discriminating-dose bioassay for detecting pyrethroid resistance in tarnished plant bug ( Heteroptera: Miridae) populations.</a> Southwest. Entomol. 24, 301-307 (1999).</li>
<li>Lopez, J. D. Jr, Hoffman, W. C., Latheef, M. A., Fritz, B. K., Martin, D. E., Lan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+vial+bioassay+of+insecticidal+toxicity+against+cotton+fleahopper%2C+Pseudatomoscelis+seriatus+%28Hemiptera%3A+Miridae%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pest.+Sci.%22%5BJournal%5D)">Adult vial bioassay of insecticidal toxicity against cotton fleahopper, Pseudatomoscelis seriatus (Hemiptera: Miridae).</a> J. Pest. Sci.. 33, 261-265 (2008).</li>
<li>Lopez, J. D. Jr, Hoffman, W. C., Latheef, M. A., Fritz, B. K., Martin, D. E., Lan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+toxicity+of+selected+insecticides+against+thrips+on+cotton+in+laboratory+bioassays%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cotton+Sci%22%5BJournal%5D)">Evaluation of toxicity of selected insecticides against thrips on cotton in laboratory bioassays.</a> J. Cotton Sci. 12, 188-194 (2008).</li>
<li>Smith, T. P., Hammond, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+susceptibility+of+sweetpotato+weevil+%28Coleoptera%3A+Brentidae%29+to+selected+insecticides%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Econ.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Comparative susceptibility of sweetpotato weevil (Coleoptera: Brentidae) to selected insecticides.</a> J. Econ. Entomol. 99, 2024-2029 (2006).</li>
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<li>Bayoun, I. M., Plapp, F. W. J. r, Gilstrap, F. E., Michels, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+of+selected+insecticides+to+Diuraphis+noxia+%28Homoptera%3A+Aphidiae%29+and+its+natural+enemies%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Econ.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Toxicity of selected insecticides to Diuraphis noxia (Homoptera: Aphidiae) and its natural enemies.</a> J. Econ. Entomol. 88, 1177-1185 (1995).</li>
<li>Smith, T. R., Cave, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pesticide+susceptibility+of+Cybocephalus+nipponoicus+and+Rhyzobius+Iophanthae+%28Coleoptera+Cybocephalidae%2C+Coccinellidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Fla.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Pesticide susceptibility of Cybocephalus nipponoicus and Rhyzobius Iophanthae (Coleoptera Cybocephalidae, Coccinellidae).</a> Fla. Entomol. 89, 502-507 (2006).</li>
<li>Sukontason, K., Olson, J. K., Hartberg, W. K., Duhrkopf, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organophosphate+and+pyrethroid+susceptibilities+of+Culex+salinarius+adults+from+Texas+and+New+Jersey%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am.+Mosquito+Contr%22%5BJournal%5D)">Organophosphate and pyrethroid susceptibilities of Culex salinarius adults from Texas and New Jersey.</a> J Am. Mosquito Contr. 14, 477-480 (1998).</li>
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<li>Temple, J. H., Pommireddy, P. L., Cook, D. R., Maçon, P., Leonard, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arthopod+management%3A+Susceptibility+of+selected+lepidopteran+to+pests+Rynaxypyr%2C+a+novel+insecticide%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cotton+Sci%22%5BJournal%5D)">Arthopod management: Susceptibility of selected lepidopteran to pests Rynaxypyr, a novel insecticide.</a> J. Cotton Sci. 13, 23-31 (2009).</li>
<li>Plapp, F. W., Vinson, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+toxicities+of+some+insecticides+to+the+tobacco+budworm+and+its+ichneumonid+parasite%2C+Campoletis+sonorensis%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Comparative toxicities of some insecticides to the tobacco budworm and its ichneumonid parasite, Campoletis sonorensis.</a> Environ. Entomol. 6, 381-384 (1977).</li>
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<li>Snodgrass, G. L., Scott, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonal+changes+in+pyrethroid+resistance+in+tarnished+plant+bug+%28Heteroptera%3A+Miridae%29+populations+during+a+three+year+period+in+the+delta+area+of+Arkansas%2C+Louisiana+and+Mississippi%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Econ.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Seasonal changes in pyrethroid resistance in tarnished plant bug (Heteroptera: Miridae) populations during a three year period in the delta area of Arkansas, Louisiana and Mississippi.</a> J. Econ. Entomol. 93, 441-446 (2000).</li>
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</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

LC 50 값은 대상 인구 (S)의 자화율 기준으로 설정하는 데 사용할 수 있습니다. 이 데이터의 가치는 미래의 모니터링 조사 또는 이동이 대상 인구의 자화율을 결정하기 위해 이전에 결정된 LC 50 거기에 현재의 결과를 비교의 바로 목적하실 수 있습니다. 실제 LC 50 값이 95 % 신뢰 간격을 검토하여 인구 사이에 비교할 수 있으며, 위턱과 아래턱에 한계가 중복하지 않으면, 그때 그것은 인구가 자화율과 어떤 상황에 큰 변화를 경험이있을 것입니다 것은 저항의 표시이다 33. LC 50 S는 살충제 esusceptibilitye 28 계절 변화를 검사하거나, 종 또는 살충제 AI S. 간의 응답을 비교하는 데 사용할 수 있습니다 상당한 작업은 또한 남성과 여성 10 성인 사이 미숙한 단계, 10,34 사이의 반응을 비교하는 이러한 데이터를 사용하고 있습니다. 때로는 자신감 간격 계산 수있게 다양한되거나하지 않습니다. 어깨 자신감을 간격을 얻으려면 더 곤충 및 / 또는 그 이상 농도로 bioassay를 실시하고 있습니다.

<table><tbody><tr><td>50-100 ml 유리 비커</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>마개가 있는 부피 플라스크 (pyrethroids와 같이 빛에 민감한 살충제의 경우 갈색 플라스크 사용 가능)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>라이너가 없는 뚜껑이 포함된 20ml 유리 신틸레이션 바이알</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>바이알 색상 코팅 방법 (페인트 또는 마커)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acetone</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>상용 핫도그 롤러 (가열 소자 연결 해제됨)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>세척병 2개 (하나는 액체를 빠르게 주입할 수 있도록 입구가 크게 개조된 것, 다른 하나는 액체를 천천히 주입할 수 있도록 스파우트 입구가 작은 것)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>소형 웨잉 보트 (모든 플라스틱 재질이 Acetone에 내성이 있는지 확인)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>0.001g 이상의 판독 가능 정밀도를 가진 저울 사용 가능 환경</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Parafilm M</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>리피터 피펫</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>적절한 팁</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>부피 플라스크에 맞는 유리 피펫</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>후드 (Acetone 냄새 제거용)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>살충제 용액 및 바이알 보관 장소 [냉장고(용액), 화학 물질에 따라 암실 또는 냉동고(바이알)]</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

모니터링 살충제 저항 bioassays

Bioassays for Monitoring Insecticide Resistance

살충제 높은 항복 생산 농업의 중요한 부분이기 때문에 살충제로 해충 저항은 증가 문제입니다. 몇 가지 제품이 특정 작물 시스템 내의 각 해충에 대해 표시하는 경우, 화학 제어 옵션이 제한됩니다. 따라서, 동일한 제품 (들)은 반복적으로 사용되며 지속적인 선택 압력은 대상 해충에 배치됩니다. 강한 인구의 개발과 관련된 금융 및 환경 비용을 모두가 있습니다. 살충제 저항의 비용은 미국에서 매년 약 1,500,000,000달러로 추산되었습니다. 본 논문은 현재 arthropod (특히 곤충) 저항의 발전을 위해 인구를 모니터링하는 데 사용되는 프로토콜을 설명합니다. 성인 병에 시험은 살충제에 문의하는 독성을 측정하는 데 사용되는이 테스트의 수정은 식물 침투성 살충제에 사용됩니다. 이러한 bioassays에서는 곤충은 기술 등급 살충제 및 특정 게시물 - 노출 간격으로 기록 반응 (사망률)에 노출되어 있습니다. 사망률 데이터는 대상 인구와 일련의 신뢰 한계 (CL의) 데이터 다양성의 추정 등의 50 % (LC 50)에 사망을 제공하는 치명적인 농도의 견적을 생성하는 선량 probit 분석 로그를 받게됩니다. 이러한 데이터는 살충제 - 취약 인구의 범위에 대해 수집하는 경우, LC 50 미래의 모니터링을 위해 기본 데이터로 사용할 수 있습니다. 인구가 제품에 노출된 후, 그 결과는 동일한 방법론을 사용하여 이전에 결정 LC 50 비교할 수 있습니다.

이 원고는 살충제 자화율을 조사하고 arthropod 해충에 연락을 저항하고 체계적 살충제를 감지하는 데 사용되는 기술을 보여주고 설명합니다.

모니터링 살충제 저항 Bioassays

살충제는 고수율 생산 농업의 필수적인 부분이기 때문에, 살충제에 대한 해충의 저항성은 점점 더 심각한 문제가 되고 있습니다. 일부 제품이...

다음 실험의 전반적인 목표는 곤충이 살충제에 대해 저항성을 발달시켰는지 판단하는 것입니다. 이는 1987년 plaid AL이 기술한 바와 같이 접촉성 살충제의 경우 기술 등급 살충제를 아세톤에 용해하거나, 2008년 snores Etol이 기술한 바와 같이 침투성 살충제의 경우 꿀물 용액을 사용하여 테스트할 농도를 제조함으로써 수행됩니다.두 번째 단계로, 0.5 milliliters의 아세톤 살충제 용액을 20 milliliter 유리 절연 바이알에 넣고 가열 장치가 꺼진 상용 핫도그 롤러에서 바이알을 회전시키거나, 0.5 milliliters의 꿀물 살충제 용액을 바이알 내부에 배치된 플로랄 폼 조각 위에 넣습니다. 다음으로, 생물학적 분석(bioassay)을 수행하기 위해 성충 바이알 테스트용 곤충을 수집합니다. 이 분석에서는 프로빗 분석(probate analysis)을 통해 도출된 LC50을 기존의 LC50과 비교하여 해당 곤충이 살충제에 대한 저항성을 획득했는지 여부를 확인하는 살충제 저항성 결과를 모니터링합니다. 안녕하세요, 제 이름은 Audra Miller입니다.저는 미주리주 포티지빌에 위치한 미주리 대학교 농업, 식품 및 천연자원 대학 델타 연구 센터 소속입니다. 저는 Kelly Kindle 박사의 곤충학 실험실에서 실험을 진행할 예정입니다. 이번 영상에서는 살충제 저항성 발생 여부를 확인하는 검출 절차를 보여드리겠습니다.이제 시작하겠습니다. 안전 고글, 마스크, 장갑 등의 적절한 안전 예방 조치를 반드시 준수해야 합니다. 살충제를 다룰 때는 테스트 중인 특정 살충제에 대해 권장되는 개인 보호 장구를 확인하기 위해 물질안전보건자료(MSDS)를 참조하십시오.스톡 용액을 만들기 위해, 순도를 고려하여 기술 등급 살충제를 측정합니다. 후드 내의 보트(boat)를 사용하여 부피 플라스크에 아세톤을 일부 채웁니다. 살충제를 첨가하고, 보트에 남은 잔여물을 아세톤으로 헹구어 플라스크에 넣습니다.부피 플라스크의 표선까지 아세톤을 채운 후, 여러 번 뒤집어 섞어 줍니다. 필요에 따라 연속 희석을 수행하고, 페인트나 마커를 사용하여 농도별로 바이알에 색상 코드를 표시합니다. 제조할 바이알 수의 약 절반 부피만큼 작은 비커에 덜어내고, 용액을 사용하지 않을 때는 증발을 최소화하기 위해 덮개를 덮어 둡니다.리피터 피펫을 사용하여 바이알에 0.5 milliliters를 분주합니다. 바이알 내부를 공업용 살충제로 코팅하기 위해 아세톤만 포함된 대조군부터 시작하여 저농도에서 고농도 순으로 작업합니다. 전원을 끈 상업용 핫도그 롤러 위에 바이알을 올립니다.모든 아세톤이 증발할 때까지 바이알을 회전시킵니다. 각 바이알을 개별적으로 확인하여 완전히 건조되었는지 확인합니다. 페로몬 트랩, 스위프 네트 또는 기타 대량 포획 수단을 사용하여 테스트할 곤충을 수집합니다.곤충에게 8~24시간 동안 먹이와 수분을 공급합니다. 테스트당 10~25마리의 곤충을 사용하여, 바이오어세이에 사용할 건강하고 활동적인 표본을 선택합니다. 농도. 곤충들이 한 번에 하나의 농도에만 노출되는 것이 아니라, 전체 농도 범위에 노출될 수 있도록 바이알에 넣습니다.적절한 배양 시간이 지난 후, 등 쪽으로 놓았을 때 스스로 몸을 일으킬 수 있는 능력이나 가볍게 자극을 주었을 때의 협응 운동과 같은 기준을 바탕으로 폐사 여부를 평가합니다. 곤충이 몸을 일으키려 하지만 다시 쓰러진다면 협응 운동이 없는 것이므로, 해당 곤충은 폐사한 것으로 평가해야 합니다. 살아있는 개체와 죽은 개체의 수를 기록하고 모든 농도에 대한 생존율(%)을 계산합니다.10% 꿀물 용액에 기술 등급 살충제를 용해하여 바이알을 준비합니다. 부피 기준 10% 꿀물 용액을 만들기 위해 꿀의 무게를 측정하여 부피 플라스크로 옮긴 후, 꿀물 용액에 기술 등급 살충제를 첨가하고 약포지를 헹굽니다. 아세톤 대신 꿀물을 사용하여 연속 희석 과정을 반복합니다. 플로럴 폼을 조각내어 바이알 내부에 배치합니다.플로럴 폼 위에 용액 0.5 mL를 분사하고 뚜껑 대신 면 솜으로 곤충을 밀폐합니다. 접촉성 살충제와 동일한 방식으로 생물학적 분석을 수행하며, 대조군의 폐사율을 기준으로 보정합니다. Abbott의 식에 따라 집단의 50%를 사멸시키는 데 필요한 치사 농도와 95% 신뢰 구간을 결정합니다.이는 SAS Proc probate 또는 Polo Plus와 같은 소프트웨어 프로그램을 사용하여 수행할 수 있으며, 예를 들어 이 SAS 샘플 프로그램에서 dose는 바이오어세이에 사용된 농도를 나타냅니다. N은 주어진 농도에서 테스트된 개체 수이고 response는 폐사한 개체 수입니다. 확률 0.5를 찾으면 이것이 LC$_{50}$이며, 신뢰 구간은 0.1891에서 0.3273 $\mu\text{g/vial}$입니다. 테스트한 곤충에 대한 기초 데이터가 있거나 알려진 감수성 집단으로부터 얻은 LC$_{50}$ 값이 있는 경우, 새로운 LC$_{50}$를 기초 데이터 또는 감수성 집단의 LC$_{50}$와 비교할 수 있습니다.기초 LC₅₀가 바이알당 0.1487 µg이고 신뢰 구간이 바이알당 0.1167~0.1793 µg이었다면, 신뢰 구간이 겹치지 않으므로 저항성에 유의미한 변화가 있었다고 결론지을 수 있습니다. 하지만 기초 LC₅₀가 바이알당 0.1487 µg이었더라도 신뢰 구간이 바이알당 0.0958~0.1983 µg이었다면, 신뢰 구간이 겹치기 때문에 저항성의 유의미한 증가는 없는 것으로 봅니다. 이 실험은 살충제 저항성이 살충제 실패의 원인인지 여부를 판단하는 데 활용될 수 있으나, 살충제를 다룰 때는 항상 적절한 보호 장구를 사용해야 함을 기억하십시오.시청해 주셔서 감사합니다. 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

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살충제의 평가는 종종 성인 곤충보다는 미성숙 단계에 대해 목표로하고 있습니다. 여기, 우리는 첫 번째 nymphal 침대 버그 단계에 대한 비교와 함께 침대 버그 계란에 대한 살충제를 평가하기위한 프로토콜을 제시한다. 이러한 프로토콜은 비 성인의 삶의 단계에서 살충제의 효능을 평가하기 위해 다른 곤충에 따라 조정 될 수있다.

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여기, 우리 제시 집 플라이 carboxylesterase 단백질에서 생체 외에서 잠재 중재 곤충 세포 표현 시스템으로 생산 하 고 나중 기능 metabolizing permethrin에 그들의 역할을, 특성화를 프로토콜 pyrethroid 부여 셀 기반 MTT 분석 결과 및 체 외에서 대사 연구를 실시 하 여 저항.

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불쾌와 질병 벡터 곤충을 대상으로 하는 공중 보건 살충제의 효능 다른 생태 영역에 걸쳐 균일 하지 않습니다. 여기 선물이 농약 효능에 대 한 센 티 넬으로 조임 벡터 곤충을 사용 하 여 여러 환경에서 농약의 표준 평가 지 원하는 전자 지도 파생 하는 기술의 시스템.

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모기 및 초파리에 대한 살충제 독성을 정량화하기위한 국소 응용 생물 검정

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학습하세요 살충제 저항성 바이오어세이 방법을 통해 곤충의 살충제 감수성을 평가하고 저항성 수준을 LC50 값 비교로 정량화하는 기술입니다. 이 방법은 해충 관리 전략 개선에 필수적입니다.

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