Name: 대기압에서 질량 분석법에 의해 단일 세포의 직접 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-09-04T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 19 s
Description: 배우세요 대기압 질량 분석법을 이용한 단일 세포의 직접 분석 방법을. 레이저 소거 전기분무 이온화(LAESI) 기술로 식물 및 동물 세포의 대사물질과 지질을 실시간 분석하여 세포 기능 연구에 활용합니다.

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저자는 다음과 같은 기관에서 재정 지원을 인정하고, 국립 과학 재단 (부여 0719232), 에너지 부 (부여 DEFG02 - 01ER15129), WM 켁 재단 (부여 041904), 그리고 조지 워싱턴 대학 리서치 향상 기금. 저자는 아낌없이 마크 E. 리브스와 조지 워싱턴의 호안 A. 호프만에 의해 섬유 에칭에 관한 프로토콜에 대한 초기 논의에 대한 적외선 광섬유 시스템 (실버 스프링, MD)뿐만 아니라 제공한 GeO2 기반의 광학 섬유에 대한 감사 대학. 저자는 또한 프로토콜 찍고하는 동안 그녀의 도움 제시카 A. Stolee 감사하고 싶습니다.

1. 광학 부품 <ol><li> 레이저 박리 전기 분무 이온화 (LAESI) 질량 분석계 (MS)에 대한 레이저 박리는 2.94 μm의 파장에서 5 NS 레이저 펄스에 의해 생산됩니다. ND에 의해 주도 조정할 수 광 파라메 트릭 발진기 : YAG 레이저 (Opolette 100, Opotek 주식 회사, 칼스 배드, CA)는이 연구에서 절제에 사용됩니다. 반복 속도는 5 Hz에서 100 사이의 선택됩니다. 이것은 직접적인 노출시 눈 또는 피부에 심각한 영구적인 손상을 일으킬 수있다는 것을 클래스 IV 레이저입니다. 레이저 빔의 확산 반사는 피부 또는 눈에 유해한 수 있습니다. 보호를위한 적절한 레이저 고글을 착용. </li><li> 게르마늄 이산화 기반의 유리로 만든 광섬유는 적외선 섬유 시스템즈 (실버 스프링, MD)에서 얻은 것입니다. 이 Hytrel 있으며 섬유에 코팅이 끝나는에서 그들을 제거하기 위해 다음 지침을 따르십 polyimide 경우. 열 1 - 메틸 - 2 - pyrrolidinone 130-150 ° C로 퓸 후드 인치 섬유가 약 1 분 또는 코팅이 부드럽게 시작까지 보지이 액체에 스트립하려는 종료 딥. 메탄올 또는 잠시 이소프로판올로 부드럽게 코팅 찍어 및 보푸라기가없는 냅킨으로 남아있는 코팅을 닦아. 코팅을 제거 후, ​​클리브 점수 부드럽게 그들을 욕하는게하여 사파 블레이드 (KITCO 광섬유 광학, 버지니아 비치, VA)과 섬유질이 모두 끝납니다. </li><li> 1퍼센트 (V / V) 질산의 산성 (시약 등급) 솔루션, 섬유 팁의 화학적 에칭 한쪽 끝을 원하는 선명도를 얻을 수 있습니다. 수직 최초의 연락 후 300-500 μm의 깊이에 산성 용액에 섬유를 선택한 끝을 담가. 에칭의 약 15 분 후에 팁 그러다가 자연 산성 표면에서 분리합니다. 곡률 ~ 15 μm의 범위와 날카롭게 섬유 팁이 발생합니다. 모든 산성 찌꺼기를 제거하는 탈이온수와 린스. </li><li> micromanipulator에 섬유 (MN - 151, Narishige, 도쿄, 일본)의 에칭 종료를 탑재하고 효율적인 에너지 증착을위한 세포 표면의 근접을 (~ 20 μm의) 가까이에 그것을 가지고. </li><li> 맨 섬유 척 (BFC300, 시스키유 공사 그란츠 패스, OR)에 의해 광섬유의 비 에칭 끝을 잡고. 광학 정렬 들어, 섬유 척은 다섯 축 번역사 (BFT - 5 시스키유 공사 보조금 패스, OR)에 장착됩니다. 레이저 에너지는 (0.5-1 MJ)의 비 에칭 엔드에 평철의 칼슘 플루오르 또는 반사 코팅 ZnSe 렌즈 (적외선 광학 제품, 파밍데일, NY)의 광선을 집중하여 섬유에 결합됩니다. 보호 골드 미러 (PF10 - 03 - M01, Thorlabs, 뉴턴, NJ) 초점 렌즈에 중반 IR 레이저 광선을 조종하는 데 사용됩니다. </li></ol> 2. 전기 분무 설정 <ol><li> 전도성 perfluoroelastomer의 물미, 피팅, 튜브 슬리브, 바늘 포트 (각각 예를 들어, U - 435, M215, F - 331Nx, F - 242x, 9013, IDEX 건강 &amp; 사이언스와 금속 노조 : 전기 분무 시스템은 다음과 같은 구성 요소를 사용하여 건설 수 있습니다 오크 하버, WA)뿐만 아니라 융합 실리카 튜브 (예 : CT360 - 100 - 50-5, 뉴 목적 주식 회사, 워번, MA). 권장 에미터는 스테인레스 스틸로 만들어진 및 50 μm의 아이디 (예 : MT320 - 50 - 5 - 5, 새로운 목표 주식 회사, 워번, MA)와 테이퍼 팁 가지고있다. </li><li> 전기 분무에 대한 0.1 % 초산 (V / V)와 50 % 메탄올 용액을 준비합니다. 솔루션을 사용하여 주사기 펌프 (하버드 장치, 홀리스튼, MA)에 의해 200-300 NL / 분 속도로 펌핑이다, 예를 들어, 500 μl 주사기 (81222, 해밀턴 회사, 리노, 네바다). </li><li> 지속적으로 전기 분무를 생성하기 위해 규제 전원 공급 장치 (PS350, 스탠포드 연구 시스템 병원, 서니 베일, CA)에 의해 금속 노조에 2800과 3000 V 사이에 높은 전압을 적용합니다. 모든 전기 연결이 안전하고 적절하게 접지 차폐와 차폐된 있는지 확인합니다. 노출된 높은 전압 직접 접촉 감전이 발생할 수 있습니다. </li></ol> 3. 샘플 처리 <ol><li> 적절한 소스에서 살아있는 조직이나 세포 샘플을 확보하고 그들과 같이 분석하기 전에 권장 유지. 이 예제에 대한 알리움 cepa 구근은 지역 상점에서 구입했다. 수술 메스에 의해 길이 방향 전구 컷. 규모의 몇 cm 세그먼트는 스트립에 sectioned되었습니다. 안쪽 표피 조직의 손상 monolayer가 해제 벗겨 있습니다. </li><li> 표피의 젖은 표면은 미리 청소 유리 현미경 슬라이드에 조직을 마운트하는 데 사용됩니다. 위치에 대한 3 축 번역 무대에 탑재된 범용 플레이트 홀더 (FP01, Thorlabs 주식 회사, 뉴턴, NJ)의 슬라이드를 잡아. 즉시 세포 저하를 방지하기 위해 시료를 장착 후 질량 스펙트럼을 취득. </li></ol> 4. 시각화 시스템 <ol><li> 두 장거리 현미경은 분석을 위해 세포를 선택하고 날카롭게 섬유 팁 및 세포 표면 사이의 거리를 유지하는 데 사용됩니다. 후자는 표면에서 측정된 15 ° -30 각도에 따라 마운트됩니다. 이 시스템은 알 이루어져5 배 무한대로 긴 사연이 거리 비디오 현미경 (7x 정밀 줌 광학, 에드먼드 광학, 배링턴, NJ) CCD 카메라 (말린 F131, 관련 비전 기술을 갖춘 객관적인 렌즈를 (배 M 계획 APO, Mitutoyo (주), 가나가와, 일본) 수정 , 모니터링 및 이미지 캡처를위한 Stadtroda, 독일). </li><li> 두 번째 비디오 현미경은 상단의 세포를 시각화하기 위해 시료 표면에 직각으로 장착됩니다. 이 시스템은 절제와 분석을 위해 선택한 셀 위에 광섬유 팁을 정렬 시각적인 피드백을 제공합니다. 그것은 10X 무한 장착되어 7x 정밀 줌 광학 (에드먼드 광학, 배링턴, NJ),로 구성되어 긴 작동 거리의 객관적인 렌즈 (10X M 계획 APO, Mitutoyo (주), 가나가와, 일본)와 CCD 카메라를 수정. </li></ol> 5. 질량 스펙트럼의 취득 <ol><li> 레이저, 전기 분무 및 질량 분석기, 예를 들어, quadrupole 시간의 비행 시스템 (Q - TOF 프리미어, 워터스, 밀퍼드, MA)를 켭니다. 절제 명소 및 전기 분무의 서로 상대적인 방출 및 최대 이온 농도를 달성하기 위해 질량 분석계의 구멍의 위치를​​ 조정하여 LAESI 이온 소스의 지오메 트리를 최적화합니다. </li><li> 최상위보기 시각화 시스템을 사용하여 분석에 관심있는 셀을 선택합니다. 선택 후, 직접 광섬유의 끝에 날카롭게 아래 선택한 셀을 가져 샘플 무대를 이동합니다. 사이드보기 현미경을 사용하면 ~ 20 μm의에 대한 팁 - 투 - 셀 표면 거리를 다시 조정. </li><li> 에칭 섬유 팁 통해 선택한 셀 발사 레이저 펄스. 세포 벽 및 미립자 물질의 형태로 세포질의 방출의 천공이 결과를. 전기 분무에 의해 postionization 후 생산 이온은 질량 분석계 및 질량 스펙트럼에 의해 저장됩니다이 기록됩니다. </li><li> 데이터 수집 후, 레이저, 전기 분무 및 대기 모드에서 질량 분석계를 넣어하거나 전원을 끕니다. ablated A. 유지 가벼운 현미경으로 관찰하기 위해 선택 cepa 조직 샘플. </li></ol> 6. 대표 결과 세포 벽 및 LAESI 질량 스펙트럼의 컬렉션의 파열에 단세포 결과의 성공적인 절제. 실패한 실험은 보통없이 절제 및 / 또는 없음 대량 스펙트럼 결과. 데모를 위해, 우리는 A.의 단일 내장 표피 세포의 LAESI - MS 분석에서 결과를 제시 cepa 전구. 그림 2A는 세포의 샘플링 후 대표적인 광학 현미경 이미지를 보여줍니다. 세포 벽이 천공하고 천공의 범위는 이웃 세포와 경계에 의해 제한됩니다. 인접한 세포가 손상 될 것 같습니다. 그림 2B는 세포에서 생산되는 대표 LAESI 질량 스펙트럼을 보여줍니다. 이온의 다양한는 A.에서 감지 cepa 세포들이 정확하게 대중을 기반으로, 동위 원소 분포 패턴, 그리고 경우에, 탠덤 질량 스펙트럼, 그들은 미정 내생 metabolites에 할당됩니다. 하나의 세포에서 발견 이온은 여러 세포의 기존 LAESI - MS하여 동일한 조직의 분석에서 관찰된 것과 비슷 13. <img src="/files/ftp_upload/2144/2144fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. LAESI - MS에 의해 단일 세포 분석 개략도. 중간 IR 레이저 펄스는 광섬유로 결합하여 유리 슬라이드에 배치 샘플로 전달됩니다. 날카롭게 섬유 팁는 대상 세포에 빛을 초점을 맞추고 있으며 예금 에너지 셀을 없어지는. 생산 절제 플륨 (빨간색 점)는 샘플 특정 이온의 생산의 결과 방울이 뭉쳤다 전기 분무 플륨 (검은 점) (녹색 점들)와 병합됩니다. 이러한 이온 분석 및 질량 분석기 (MS)에 의해 감지됩니다. 두 장거리 비디오 현미경, 현미경 1 현미경 2, 섬유 팁 및 세포 표면 사이의 거리를 모니터링하고 분석을위한 세포, 각각을 선택하기 위해 이용됩니다. <img src="/files/ftp_upload/2144/2144fig2a.jpg" alt="그림 2a" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2A"> A.의 단일 표피 세포에 그림 2A가. 절제 표시 cepa 전구. 인접한 세포가 보이는 피해를 전시하지 않고 이후 개별적으로 분석할 수 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/2144/2144fig2b.jpg" alt="그림 2b" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2B"> 단일 A.의 절제에 해당하는 그림 2B. 질량 스펙트럼 cepa 표피 세포는 기본 및 보조 metabolites의 존재를 보여줍니다.

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</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

세포 세포질과 세포 벽이나 막의 인장 강도의 수분 함량은 LAESI - MS 분석하는 동안 단일 세포의 박리를 관할하는 중요한 요소가됩니다. 레이저 fluence은 서로 다른 세포 유형의 절제 임계값에 도달하기 위해 조정되어야합니다. 전달 레이저 fluence은 레이저 펄스의 에너지와 섬유 팁 및 세포 표면 사이의 거리에 따라 달라집니다. 단일 세포 분석을하는 동안 주변 세포의 섭동을 최소화하는 것이 중요합니다. 절제 임계값에 레이저 에너지를 유지하면 인접 세포에 대한 분석의 효과를 제한합니다. 잠재적인 응용 프로그램 중 하나는 MS의 화학 이미징을위한 자연 체적 픽셀 (voxels)로 단일 세포를 사용하고 있습니다. 인공 자주 직사각형 격자에 대한 데이터를 수집에 비해 한 번에 조직 세포 하나의 화학 화상은 세포 사이의 생화 학적 상호 작용의 공간적 조직을 유지하기 위해 더 많은 가능성이 높습니다.

<table><tbody><tr><td>아세트산</td><td>Fluka</td><td>45727</td><td></td></tr><tr><td>메탄올</td><td>Fluka</td><td>65548</td><td></td></tr><tr><td>1-methyl-2-pyrrolidinon</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M79603</td><td></td></tr><tr><td>물</td><td>Fluka</td><td>39259</td><td></td></tr></tbody></table>

대기압에서 질량 분석법에 의해 단일 ​​세포의 직접 분석

Direct Analysis of Single Cells by Mass Spectrometry at Atmospheric Pressure

단일 세포에서 biochemicals 분석 심지어 같은 세포 유형들이 생리적 조건 및 환경과 상호 작용에 따라 이기종 생화 학적 메이크업을 전시 세포 대사, 세포주기, 적응, 질병 상태 등을 이해하는 것이 중요합니다. 단일 세포의 biomolecules의 분석에 사용되는 질량 분석계 (MS)의 종래의 방법은 광범위한 샘플 준비에 의존하고 있습니다. 그들의 자연 환경과 다양한 샘플 처리에서 세포를 제거하면 세포 조성의 변화가 발생할 수 있습니다. 대기 이온화 방법은 자신의 모국어 환경에서 광범위한 샘플 준비없이 시료의 분석을 가능하게합니다. 1 2.94 μm의 파장에서 생물 학적 물질의 중간 적외선 (중간 IR) 레이저 절제에 따라 기술이 물이 갑자기 여기를 활용되는 단계 결과 폭발. 이러한 레이저 박리 전기 분무 이온화 (LAESI)과 대기압 적외선 매트릭스를 이용한 레이저 탈착 이온화 (AP IR - 든)와 같은 중간 IR 레이저 방사에 기반이 대기 이온화 기술을 성공적으로 직접 분석 물을 수있는 능력을 증명하고있다 대기압에서 풍부한 조직 및 biofluids. LAESI 대부분 이온을 생산하기 위해 고도로 청구 전기 분무의 방울로 샘플 coalesces에서 중성 미립자 물질로 구성되어 중반 IR 레이저 박리 플륨에서 3-11. 최근, 단일 세포의 중간 IR 절제가 새겨져 광섬유를 통해 중반 IR 방사를 제공함으로써 수행되었다. 이 절제에서 생성된 깃털은 LAESI - MS에 의해 하나의 세포에있는 다양한 metabolites의 분석을 가능하게 전기 분무에 의해 postionized되었습니다. 12이 문서는 LAESI - MS를 사용하여 단일 세포 분석을위한 상세한 프로토콜을 설명합니다. 제출 비디오 알리움 cepa 전구의 피부에서 단일 표피 세포의 분석을 보여줍니다. 시스템의 개략도는 그림 1에 표시됩니다. 세포에서 단일 세포 절제와 LAESI 질량 스펙트럼의 대표 예는 그림 2에 제공됩니다.

단일 세포 분석 레이저 박리 전기 분무 이온화 (LAESI) 질량 분광법에 대한 세포 샘플을 날카롭게 광섬유를 사용하여 대기압에서 식물과 동물 세포의 대량 분석법에 의해 수행됩니다.

단일 세포 내 생화학 물질 분석은 세포 대사, 세포 주기, 적응, 질병 상태 등을 이해하는 데 중요합니다. 동일한 세포라 하더라도...

다음 실험의 전반적인 목표는 단일 살아있는 세포의 내용을 방출하고, 방출된 생체 분자를 이온화하여 대기압 상태의 질량 분석기로 분석하는 것입니다. 이는 원거리 현미경을 통해 단일 세포를 선택하고, 끝을 날카롭게 가공한 광섬유를 통해 전달되는 2.94 $\mu\text{m}$ 파장의 레이저 펄스로 선택된 세포를 어블레이션(ablation)함으로써 달성됩니다. 단일 세포의 어블레이션은 중성 입자 물질로 이루어진 미세한 플룸(plume)을 형성하며, 이 어블레이션 플룸을 이온화하게 됩니다.이는 전기 분무에 의해 포착됩니다. 분무에서 발생한 전하 띤 액적들은 세포에서 유래된 어블레이션 플룸의 입자들과 응집됩니다. 그 결과 생성된 액적들에는 세포 유래 분자들이 포함되며, 이로부터 관련 이온들이 생성됩니다.단일 세포의 질량 분석 스펙트럼 결과가 도출되었습니다. 이 스펙트럼에는 세포의 대사체 및 지질과 관련된 수많은 피크가 포함되어 있습니다. 안녕하세요, 저는 조지 워싱턴 대학교 화학과 Verese 연구실의 Bin Drester 박사입니다.오늘은 대기압 질량 분석법을 이용한 단일 살아있는 세포의 직접 분석 절차를 보여드리겠습니다. 저희 연구실에서는 단일 식물 및 동물 세포의 대사체와 지질을 연구하기 위해 이 절차를 사용합니다. 그럼 시작하겠습니다.레이저 절제-전기분무 이온화 질량분석법(laser ablation electro spray ionization mass spectrometry) 또는 LAESI-MS는 2.94 µm 파장의 5 ns 레이저 펄스에 의해 수행됩니다. 본 연구의 절제 공정에는 네오디뮴 YAG 레이저로 구동되는 가변 파장 광파라메트릭 발진기(tunable optical parametric oscillator)가 사용되었습니다.먼저 식각된 광섬유 끝단을 마이크로 조작기에 장착하고 이를 세포 표면에 가깝게 가져옵니다. 효율적인 에너지 전달을 위해, 식각되지 않은 광섬유 끝단은 광학 정렬용 베어 파이버 척(bare fiber chuck)으로 고정합니다. 파이버 척은 5축 이동대에 장착되어 있습니다.평볼록 칼슘 플루오라이드 렌즈 또는 무반사 코팅된 아연 셀레나이드 렌즈를 사용하여 빔을 에칭되지 않은 끝단에 집중시킴으로써 레이저 에너지를 광섬유에 결합합니다. 보호 처리된 금 거울을 사용하여 중적외선 레이저 빔을 집속 렌즈로 유도하십시오. 날카롭게 가공된 광섬유 팁과 세포 표면 사이의 거리를 유지하기 위해, 표면으로부터 측정된 15~30도 각도로 설치된 장거리 비디오 현미경을 사용합니다. 이 시스템은 또한 모니터링 및 이미지 캡처를 위해 CCD 카메라가 장착된 5배 무한 보정 대물렌즈로 구성됩니다.두 번째 비디오 현미경이 샘플 표면에 수직으로 설치되어 세포를 상단에서 시각화하고 분석할 세포를 선택하는 데 사용됩니다. 이 시스템은 절제 및 분석을 위해 선택된 세포 위로 파이버 팁을 정렬할 수 있도록 시각적 피드백을 제공합니다. 이 시스템은 10배 무한 보정 장작동 거리 대물렌즈와 7배 정밀 줌 광학 피터 및 CCD 카메라로 구성되어 있습니다.전기 분무 시스템은 전도성 perfluoro elastomer 페룰 피팅, 튜빙, 슬리브 니들 포트, 그리고 FU 실리카 튜빙이 포함된 금속 유니온을 사용하여 구성되었습니다. 권장되는 이미터는 스테인리스 스틸 재질이며 50 µm 직경의 테이퍼 팁을 가지고 있습니다. 전기 분무를 위해 0.1% acetic acid가 포함된 50% methanol 용액을 준비하십시오. 시린지 펌프를 사용하여 용액을 분당 200 to 300 nL의 속도로 펌핑하십시오.500 µL 시린지를 사용하여, 조절된 전원 공급 장치를 통해 금속 유니온에 2,803,000 V 사이의 고전압을 인가합니다. 안정적인 전기 분무를 생성하려면 모든 전기 연결이 확실하고 차폐재로 보호되었으며 적절히 접지되었는지 확인하십시오. 노출된 고전압에 직접 접촉하면 전기 충격을 받을 수 있습니다. 적절한 소스로부터 생체 조직 또는 세포 샘플을 확보하고, 분석 전까지 권장 사항에 따라 보관하십시오.본 시연에 사용된 allium seper 구근은 지역 상점에서 구입하였습니다. allium seper 구근 시료를 준비하기 위해, 외과용 메스로 구근을 세로 방향으로 절단하여 양파 구근의 인편에서 약 2cm² 크기의 조각을 절취합니다. 그 다음, 내표피 조직의 온전한 단층을 벗겨냅니다. 표피의 젖은 표면을 이용하여 세척된 유리 현미경 슬라이드 위에 조직을 고정합니다.위치 조정을 위해 3축 이동 스테이지에 장착된 범용 플레이트 홀더로 슬라이드를 고정합니다. 세포 분해를 방지하기 위해 샘플을 장착한 직후 질량 분석 스펙트럼을 획득하십시오. 먼저 레이저, 전기 분무 장치 및 질량 분석기를 켭니다.어블레이션 지점과 전기 분무 이미터의 위치를 서로에 대해, 그리고 질량 분석기의 오리피스에 대해 조정하여 레이저 이온원의 기하학적 구조를 최적화하십시오. 최대 이온 강도를 얻으려면 상단 뷰 시각화 시스템을 사용하여 분석하고자 하는 세포를 선택하십시오. 선택 후, 샘플 스테이지를 이동시켜 선택한 세포가 광섬유의 날카로운 팁 바로 아래에 오도록 배치하십시오.측면 뷰 현미경을 사용하여 팁과 세포 표면 사이의 거리를 약 20 microns로 재조정합니다. 에칭된 섬유 팁을 통해 선택한 세포에 레이저 펄스를 조사하여 정확한 위치를 잡습니다. 이를 통해 세포벽에 천공이 생기며 세포질이 입자 형태로 방출됩니다.전기 분무에 의한 이온화 후, 생성된 이온은 질량 분석계에 의해 수집되며 질량 스펙트럼이 기록됩니다. 데이터 수집이 완료되면 레이저, 전기 분무 장치 및 질량 분석계를 대기 모드로 전환하거나 전원을 끕니다. 광학 현미경으로 선택적 관찰을 하기 위해 절제된 allium cper 조직 샘플을 보관하십시오. 단일 세포의 절제가 성공적으로 이루어지면 세포벽이 파열되고 명확한 질량 스펙트럼이 수집됩니다.다음은 대표적인 광학 현미경 이미지와 함께 allium SEPA 구근의 단일 내포 표피 세포에 대한 lazy MS 분석 결과입니다. 세포 샘플링 후 세포벽에 구멍이 뚫리며, 이러한 천공의 범위는 인접 세포와의 경계에 의해 제한됩니다. 인접한 세포들은 손상되지 않은 상태로 보입니다.세포에서 생성된 대표적인 레이저 질량 분석 스펙트럼이 여기에 제시되어 있습니다. 세포당 Allium sea로부터 매우 다양한 이온들이 검출되었으며, 정확한 질량, 동위원소 분포 패턴 및 탠덤 질량 분석 스펙트럼을 바탕으로 이온들을 내인성 대사물질로 세심하게 할당하였습니다. 단일 세포에서 검출된 이온들은 여러 세포를 대상으로 한 기존의 레이저 MS를 통해 동일 조직을 분석했을 때 관찰된 이온들과 유사했습니다.지금까지 대기압 질량 분석법을 이용해 단일 살아있는 세포를 분석하는 방법을 살펴보았습니다. 이 절차를 수행할 때는 4등급 적외선 레이저에 우발적으로 노출되는 것을 방지하기 위해 반드시 보호 안경을 착용해야 한다는 점을 기억하십시오. 이것으로 모든 과정을 마칩니다.시청해 주셔서 감사하며, 귀하의 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

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레이저 박리 전기 분무 이온화 (LAESI)는 질량 분광법에 대한 대기 압력 이온 소스입니다. 이미징 모드에서 중간 적외선 레이저 프로브 조직 섹션 또는 biofilm에 걸쳐 분자의 배포판. 이 기술은 원래 실험 조건 하에서 수행 다양한 bioanalytical 연구에 대한 새로운 접근법을 제공합니다.

LAESI 질량 분석법에 의해 생물 학적 조직 및 Biofilms의 대기 압력 분자 이미징

여기에서는 MS 분석을 위한 소형 다기능 장치인 단일 프로브를 사용하여 조직의 주변 질량 분석 이미징(MSI)과 현장 라이브 단일 세포 MS(SCMS) 분석을 모두 수행하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

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실시간 고해상도 질량 분석 다변량 통계 분석을 직접 분석에 의해 식물 재료의 종을 식별하는 방법이 제공된다.

실시간 고해상도 질량 분석에 직접 분석을 사용하여 식물 소재의 신속한 높은 처리량 종 확인

우리는 빠른 시내 현장 샘플링의 높은 정밀도와 최소한의 침공에 신진 대사 활동의 스냅샷의 화학 특성을 촉진 하기 위하여 모 세관 기반 마이크로-샘플링를 사용 하 여 개별 셀의 작은 부분을 사용할 수 있는 단계를 설명 배아를 사용자 단일 셀 모 세관 전기 이동 법 질량 분석 플랫폼을 사용 하 여 라이브.

단일 셀 대사체학 라이브 개구리 (Xenopus laevis) 배아에 대 한 현미경 모 세관 전기 이동 법 질량 분석

통합 셀 조작 플랫폼은 주변 조건하에서 개별 현탁액 셀의 온라인 분석을 위한 단일 프로브 질량 분석 설정과 함께 사용하기 위해 개발되었습니다.

단일 현탁액 세포에서 약물 및 대사 산물의 질량 분석 분석을 위한 단일 프로브와 결합된 통합 셀 조작 플랫폼

이 프로토콜은 단일 세포 분해능을 달성할 수 있는 통합 된 라만 분광법 질량 분석법 (MS) 플랫폼을 제공합니다. 라만 분광법은 약물에 대한 세포 반응을 연구하는 데 사용할 수 있으며 MS는 약물 섭취 및 신진 대사의 표적 및 정량 분석에 사용될 수 있습니다.

단일 세포 약물 섭취, 신진 대사 및 효과를 연구하기 위한 통합 라만 분광법 및 질량 분광법 플랫폼

이 프로토콜에서는 수동 및 자동 피펫팅 옵션과 함께 상용 시약 및 장비를 사용하여 질량분석 법을 통해 단일 세포 단백질체학 분석을 위해 포유류 세포를 준비하는 방법을 설명합니다.

동결열 용해 및 등압 담체를 사용한 질량분석법 분석을 위한 단일 세포 단백질체학 준비

이 프로토콜은 휘발성 염 용액 세척, 급속 액체 질소 담금질, 동결 건조 및 -8°C 저장을 결합하여 단일 세포 질량 분석법(SCMS)을 위한 세포 대사 산물을 보존하는 것을 목표로 합니다. 이는 액체 질소 담금질이 대사 산물 프로필을 유지하는 데 필수적이며, 대사 변화를 방지하기 위해 장기간 냉장 보관을 최소화해야 함을 보여줍니다.

단일 세포 질량 분석법 대사체학 연구를 위한 시료 전처리: 결합된 세포 세척, 담금질, 건조 및 보관

이 프로토콜은 탈착 전기분무 이온화와 Orbitrap 질량분석기를 결합하여 고공간 해상도 대사체 분석을 위한 OVCAR-8 세포의 단일 세포 질량분석법 영상을 설명합니다.

오비트랩 질량분석기와 결합된 해착 전기분무 이온화를 이용한 단세포 질량분석법 영상

이 비디오는 매트릭스를 이용한 레이저 탈착 이온화 질량 분석법 (든 - MS)에 의해 펩티드와 단백질 분석을위한 울트라 얇은 매트릭스 / analyte 레이어의 준비를 보여줍니다.

든 샘플 준비 : 울트라 씬 레이어 방법

배우세요 대기압 질량 분석법을 이용한 단일 세포의 직접 분석 방법을. 레이저 소거 전기분무 이온화(LAESI) 기술로 식물 및 동물 세포의 대사물질과 지질을 실시간 분석하여 세포 기능 연구에 활용합니다.

대기압에서 질량 분석법에 의해 단일 ​​세포의 직접 분석

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