Name: 셀없는 매체 Wolbachia을 유지 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 33 s
Description: 학습하세요 Anopheles gambiae 세포주에서 Wolbachia pipientis를 정제하고 세포 없는 배지에서 내공생균을 배양하는 방법을. 유기체 분리 및 생존율 분석 기술을 익혀 벡터 생물학 연구에 활용하세요.

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셀없는 매체 wolbachia을 유지

Maintaining Wolbachia in Cell-free Medium

이 비디오 프로토콜, 절차로 시연 아르 (1), 교양 모기 세포의 Wolbachia의 symbionts을 정화 (2) 정화 Wolbachia의 생존을 확인하는 형광 분석을 사용하고 (3) 세포없는 배지에서 지금 세포외 Wolbachia을 유지 . 정화 Wolbachia는 세포 단계에서 살아 남아 있지만 진핵 세포로 다시 주사까지 복제하지 않습니다. 이러한 방식으로 정화 세포 Wolbachia는 실온에서 적어도 일주일 가능한 유지, 그리고 아마도 더 이상합니다. 정화 Wolbachia는 마이크로 사출, DNA 추출 및 기타 응용 프로그램에 적합합니다.

이 동영상은 세포가없는 배지에서 endosymbiont를 아노 펠 레스 gambiae 세포 라인에서 Wolbachia pipientis을 정화하고 culturing하는 방법을 설명합니다. 세균의 생존에 대한 분석이 증명됩니다.

셀없는 매체 Wolbachia을 유지

본 비디오 프로토콜에서는 (1) 배양된 모기 세포로부터 Wolbachia 공생균을 정제하고, (2) 형광 분석법을 사용하여 ... 하는 절차를 시연합니다.

제 이름은 Courtney Ston입니다. 저는 Johns Hopkins Bloomberg School of Public Health의 Jason Rascon 박사님 연구실에서 근무하고 있습니다. 오늘은 배양된 곤충 세포로부터 박테리아를 정제하는 방법을 알아보겠습니다.이는 매우 간단한 절차입니다. 먼저 세포를 수확한 다음, 유리 구슬 용해법(glass bead lysis)을 사용하여 진핵질 숙주 세포막을 물리적으로 파쇄합니다. 그 후 차등 원심분리를 통해 박테리아를 숙주 세포 잔해로부터 분리합니다.그런 다음 일련의 여과 단계를 통해 숙주 세포 입자를 추가로 제거하여, 최종적으로 정제된 박테리아 펠렛만 남게 합니다. 이는 실제로 주요 요구 사항 중 하나입니다. 이것은 세포 배양 후드이며, 세포 배양은 오염되기 매우 쉽기 때문에 모든 것을 멸균 상태로 유지하는 데 사용됩니다.또한 세포 배양 배지와 세포가 필요하며, 세포는 플라스틱 플라스크에서 배양합니다. 3mm 비드 비드, 50ml 원심분리 튜브가 필요하며, 박테리아를 펠릿화하기 위해 약 18,000 G의 고속 원심분리가 가능하면서도 숙주 세포를 펠릿화하기 위해 약 3,000 G 또는 2,500 G로 설정 가능한 원심분리기가 필요합니다. 먼저 배양된 세포부터 시작하겠습니다.세포가 배양되었죠? 이것들은 T 75 플라스크입니다. 여기에는 15 mL의 배양 배지와 우리 자신의 샘플이 들어 있습니다.가장 먼저 세포층을 분리하여 50 ml 원심분리관에 수집하는 것부터 시작하겠습니다. 세포층 위아래로 가볍게 긁어내면 모든 세포가 배지로 밀려 나옵니다. 세포가 배지에 섞이면, 이를 피펫으로 옮겨 50 ml conical 튜브에 넣습니다.이제 두 개의 세포 현탁액에 3 mm 유리 비즈를 추가하겠습니다. 이 비즈들은 고압 멸균 처리되었으며 실제로 재사용이 가능합니다. 세척 후 표백제에 담가 두었다가 다시 사용하기 전에 고압 멸균하여 사용할 수 있습니다.유리 B 병의 입구가 원심분리 튜브의 입구에 닿지 않도록 주의하며 부어줍니다. 각 원심분리 튜브에 5 mL 표시선까지 유리 비즈를 넣습니다. 그다음으로, 현탁액 속으로 박테리아를 방출하기 위해 eary 세포를 물리적으로 파쇄합니다.따라서 볼텍스 믹서를 사용하여, 가장 높은 강도로 설정한 뒤 5분 동안 볼텍싱합니다. 이제 3 mm 유리 비즈와 함께 세포를 5분 동안 볼텍싱하고, 깨끗한 피펫을 사용하여 상층액을 깨끗하고 멸균된 50 m

maintaining-wolbachia-in-cell-free-medium

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

Drosophila에서 Wolbachia 세균 감염

우리가 사용하는 프로토콜을...

의 정량 및 자동화된 고속 처리량 게놈 전체의 RNAi 화면 C. elegans</em

에서 세포 외액의 Vampiric 절연<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

이 동영상은 in vitro에서 배아 예쁜꼬마선충 세포를 분리하고 불임 배양하는 방법을 소개합니다.

효소 분해 및 수동 해리: 세포 배양을 위해 예쁜꼬마선충 배아를 준비하는 방법

C. elegans의는 일반적으로 고체 한천 플레이트에 성장 또는 액체 문화에서 E. 씨앗을 품고있다 대장균. 독성 및 영양 연구를 혼동에서 세균의 부산물을 방지하기 위해, 우리는 다운 스트림 응용 프로그램의 범위에 대한 웜의 수가 증가하고 동기화, 무균 액체 배지, CeHR을 이용했다.

배양 예쁜 꼬마 선충 미세 폭격에 의한 무균 액체 미디어 및 형질 전환 웜의 생성에

Aedes aegypti 모기 Wolbachia 감염 arboviruses의 전송을 억제 하는 자연적인 인구에 발표 되는. 우리 실험실 적응 및 선택 최소화 하기 위해 예방 조치를 복용 실험 및 필드 릴리스, 후면 Ae aegypti Wolbachia 감염 실험실에서 하는 방법을 설명 합니다.

Aedes aegypti 모기 감염 Wolbachia 유지

이 프로토콜에는 vivo에서 바이러스 감염 초파리 melanogaster 나노 주입 방법 기본적인 기법을 사용 하 여 바이러스-호스트 상호 작용을 분석 하에 설정 하는 방법을 설명 합니다.

바이러스 성 감염 및 초파리 Melanogaster 상호 작용 호스트-바이러스의 분석의 설립

네 가지 방법이 세포 내 Wolbachia를 검출하기 위해 사용되었는데, 이는 서로를 보완하고 항생제를 사용하여 네이티브 울바키아 감염의 Aa23 및 Aa23-T가 완치된 Aedes albopictus 유래 Aa23 및 Aa23-T의 Wolbachia 감염의 검출 정확도를 향상시켰다.

Aedes albopictus 세포주에서 Wolbachia 균주 wAlbB 검출

여기에 제시된 것은 미세 가공된 멀티웰 장치의 고체 배지에서 분리된 개별 선충을 배양하기 위한 최적화된 프로토콜입니다. 이 접근 방식을 통해 활동, 신체 크기 및 모양, 움직임 기하학 및 생존을 포함하여 노화 및 건강과 관련된 다양한 표현형에 대해 개별 동물을 평생 동안 모니터링할 수 있습니다.

Multi-well 장치의 고체 배지에서 분리된 Caenorhabditis elegans의 장기 배양 및 모니터링Long-term culture and monitoring of isolated Caenorhabditis elegans on Solid Media in Multi-well devices

여기에서 우리는 평생 생리학적 매개변수 추적 및 형광 정량화를 위해 고체 배지에서 분리된 개별 선충을 배양하는 프로토콜을 제시합니다. 이 배양 시스템에는 동물이 도망가는 것을 방지하기 위해 단일 벌레 우물 주위에 팔미트산 장벽이 포함되어 있어 병원성 박테리아 및 화학적 스트레스 요인을 포함한 혐오적인 개입을 사용할 수 있습니다.

Longitudinal Fluorescence Monitoring and Averseive Interventions를 위한 고체 배지에서 개별 Caenorhabditis elegans 의 장기 배양

세포주는 숙주 세포 외부에서 배양할 수 없는 세포 내 유기체에 대한 연구에 유용합니다. Wolbachia에 감염된 계통은 많은 발견을 가능하게 했지만 이러한 계통 내의 이질성으로 인해 다양한 실험 결과가 나올 수 있습니다. Wolbachia에 감염된 JW18 세포에서 단일 세포 클론 및 연속 배양을 생성하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

Wolbachia에 감염된 Drosophila melanogaster JW18 세포주에서 단클론 배양 생성

학습하세요 Anopheles gambiae 세포주에서 Wolbachia pipientis를 정제하고 세포 없는 배지에서 내공생균을 배양하는 방법을. 유기체 분리 및 생존율 분석 기술을 익혀 벡터 생물학 연구에 활용하세요.

셀없는 매체 Wolbachia을 유지

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