Name: 유도 및 만성 - 원래대로 돌아가는 실험 면역 Encephalomyelitis 임상 채점 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00.000+00:00
Duration: 26 min 48 s
Description: 배우세요 DA 쥐에서 만성-재발 실험성 자가면역 뇌척수염(EAE)을 유도하고 임상 채점하는 방법을. 이 다발성 경화증 동물 모델은 상행성 무기력 마비와 인간 질환과 유사한 조직학적 특징을 보입니다.

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만성 - 원래대로 돌아가는 EAE의 유도 및 모니터링 유제는 보충 완료 인드의 도움이되는 추가 수용액에서 항원의 1:1 혼합물이다. 그것은 도움이되는가 아닌 다른 방법으로 라운드에 항원을 추가하는 것이 매우 중요합니다! 결정과 유제를 주입하면 폐기물의 많은있다. 항상 1.5 또는 2 배에게 필요한 것 이상을 준비. autoclaved 박격포, 유봉, 유리 주사기, 그리고 다리를 사용하십시오. 모든 플라스틱은 멸균되어야합니다. 준비는 정기적으로 실험실 벤치에서 할 수 있습니다. 1. 보충 도움이되는의 준비 Mycobacterium 결핵 (Difco 카탈로그 # 231141)와 절구에 장소 30 MG 나가는거야. 세균을 깨는 피하기 위해 너무 열심히 누르지 않고 얇은 가루로합니다. 프로 인드의 도움이되는 H37Ra (Difco 카탈로그 # 231131)와 혼합을 완료 10 ML을 추가합니다. 이 보충 도움이되는 지금은 4 MG / ML Mycobacterium의 결핵이 포함되어 있습니다. 튜브로 전송합니다. 2. 척수의 homogenate의 준비 -80에서 냉동 DA 쥐 (연령 / 성별 무관) 및 저장 ° C.에서 척추 코드를 수집 보충 도움이되는과 : 1시 1분를 (볼륨 무게) 혼합 충분해야 냉동 척추 코드를 달다. 면도날로 가능한 벌금으로 척추 코드를 말하다, 제 1에서 사용되는 박격포로 전송하고, 유봉와 붙여넣기를합니다. 3. 유제의 준비 <ol><li> 장소는 튜브에 프로 인드의 도움이되는을 완료 보충. 고속으로 소용돌이. vortexing 동안 드롭하여 척수 homogenate 드롭을 추가합니다. 5 분 더 척수의 homogenate의 모든 추가, 소용돌이. 혼합물은 밝은 분홍색으로 설정해야합니다. </li><li> 5 ML 유리 주사기에 감광 유제를 넣고 (피셔 카탈로그 # 14-825 - 17L) 18G 다리를 사용하여 다른 5 ML 유리 주사기에 연결합니다. 그것이 (5-10 분) 하드된다 때까지 다른 주사기에서 유제를 보내드립니다. 유제 5 개 이상 ML이 준비되면, 몇 가지 5 ML의 주사기는 큰 주사기를 사용하지 마십시오 사용합니다. </li><li> 유제는 3 주 동안 4 ° C에서 주사기에 저장할 수 있습니다. 나는 그것이 분해되지 있는지 확인하기 위해 사전에 적어도 12 시간 준비하는 것이 좋습니다. 그것은 두께 2 단계에서 별도의 안 유지됩니다. 색상은 노란색이나 베이지색이 빛을 하룻밤 변경됩니다. </li></ol> 4. 쥐를 예방 접종 <ol><li> 몇 분 동안 주사기에 감광 유제를 혼용하여 주사에 사용되는 주사기로 전송할 수 있습니다. 단기 마취 23G 바늘 3 ML Luer - 잠금 주사기를 사용하여 꼬리의 아주 기본에 subcutaneously 200 μl를 주입. </li><li> 수신자가 7~9주 오래된 여성 DA의 쥐입니다. 우리는 할런 - 스프 라그 돌리에서 우리 쥐를 얻을. </li><li> 쥐 두 번 매일 매일 관찰하고 무게가 있어야합니다. 임상 증상은 7-15일 유제의 주입 후 예상된다. </li></ol> 임상 채점 : 0 : 없음 질환 0.5 : 말초 미약 꼬리 1 : 미약 꼬리 2 : 가벼운 paraparesis, 운동 실조증 3 : 중간 paraparesis, 수시로 쥐 여행 3.5 : 한 뒷다리가 마비되어 다른 이동 4 : 전체 뒷다리 사지 마비 5 : 완전한 뒷다리 사지 마비 및 실금 6 : 죽어가는, 어려움 호흡은 먹지도 않고 마시지도 않습니다. 즉시 안락사.

CB와 KGC는 Airmid 주식 회사에 대한 공동 설립자 및 컨설턴트 아르

이 프로토콜에 대한 몇 가지 중요한 고려 사항이 있습니다. DA의 쥐의 유전자들은로부터 구입하는 종족에 따라 약간 다를 수 있습니다. 이러한 차이는 유도를 EAE하는 쥐의 자화율를 증가 또는 감소됩니다. 당신의 쥐가 EAE에 더 민감한 경우가 아닌 보완 완료 인드의 도움이되는 또는 불완전한 프로 인드의 도움이되는을 사용하여 예방 접종의 강도를 줄이는 것이 좋습니다. 당신은 또한 유제를 준비하기 전에 주입 유제의 양을 감소하거나 생리와 척수의 homogenate를 diluting 고려할 수 있습니다. 당신의 쥐들이 유제가 주택 시설의 청결을 확인 immunizing 전체 강도를 사용 EAE의 임상 증상을 개발하지 않으면. 기생충 (예 : pinworm 등)에 감염된 쥐 EAE를 개발하지 않습니다. 이 필터 - 정상과 autoclaved 새장에 청소기 조건 아래 동물 주택, 그리고 그들에게 산성 물 광고 libitum (산성 물을 준비에 대한 프로토콜이 첨부되어 있습니다)를주는 것이 좋습니다. 유제는 물 - 인 - 오일되어야합니다 있도록 ...

<table><tbody><tr><td>Complete Freund&amp;rsquo;s Adjuvant</td><td>시약</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF 311-360-5</td><td>Difco 제조</td></tr><tr><td>Mycobacterium tuberculosis H37Ra</td><td>시약</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF3114-33-8</td><td>Difco 제조</td></tr><tr><td>DA 랫</td><td>동물</td><td>Harlan Laboratories</td><td></td><td>암컷, 7-9주령</td></tr><tr><td>유리 주사기 - 5 ml</td><td>도구</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-823-10 B</td><td></td></tr><tr><td>금속 브릿지 - 18G</td><td>도구</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-825-17L</td><td></td></tr><tr><td>Luer Lok 플라스틱 주사기 - 3 ml</td><td>도구</td><td>BD Biosciences</td><td>309585</td><td></td></tr><tr><td>바늘 - 20G 1 1/2</td><td>도구</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-5C</td><td></td></tr></tbody></table>

유도 및 만성 - 원래대로 돌아가는 실험 면역 encephalomyelitis 임상 채점

Induction and Clinical Scoring of Chronic-Relapsing Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

다중 경화증 (MS)는 일반적으로 젊은 성인에 영향을 미치는 중추 신경계 (CNS)의 만성 염증성 질환입니다. 이것은 두뇌 및 척수에 전파 영역에서 demyelination과 glial 무섭게이 특징입니다. 이러한 병변은 신경 전도를 변경하고 CNS (예 : paraparesis, 마비, 실명, 실금)에 demyelinated plaques의 위치와 다릅니다 해제 신경 적자를 유발. 실험 면역 encephalomyelitis (EAE)은 MS의 모델입니다. EAE 먼저 토끼 척수 코드에서 성장 바이러스를 사용하여, 광견병 예방 접종 기간 동안 인간의 실수로 유도했다. inactivated 바이러스에 주입 척수의 잔류물은 CNS 질환을 유도. 이러한 관찰 다음, EAE의 첫 번째 모델은 하천에 의해 homogenate 및 1935 년에 Schwenther CNS와 함께 예방 접종을하지 않은 인간 영장류에서 설명했습니다. EAE 이후 인류의 다양한 생성되었고 종 / 변형에 따라 그리고 항원이 사용 immunizing 다른 과정을 따를 수 있습니다. 동일한 항원은 실험용 돼지의 만성 질병을 유도하면서 예를 들어, 도움이되는와 유제에서 기본적인 myelin 단백질과 루이스 쥐나 immunizing 것은 EAE의 급성 모델을 유도. EAE 모델 여기에 설명된 내용은 전체 프로 인드의 도움이되는에있는 유제의 DA 랫 척수에 대한 검찰의 쥐가 immunizing에 의해 유도됩니다. 쥐들이 7~14일 사후 예방 접종 이내 오름차순 이완된 마비를 개발할 수 있습니다. 임상 증상은 몇 주 동안 원래대로 돌아가는 - remitting 과정을 따르십시오. 병리학은 CNS와 demyelination의 plaques 큰 면역 infiltrates를 보여줍니다. EAE과 동물 돌보기위한 특별 고려 사항은 비디오의 끝부분에 설명되어 있습니다.

DA 쥐에서 만성 - 원래대로 돌아가는 실험 면역 encephalomyelitis :이 비디오는 여러 경화증의 동물 모델의 유도 및 임상 채점을 보여줍니다. 전체 쥐의 척수하고 완전한 프로 인드의 도움이되는가 포함된 유제와 immunizing 쥐가 유도된 질병은, 인간의 질병을 닮은 임상 징후를 보여줍니다.

유도 및 만성 - 원래대로 돌아가는 실험 면역 Encephalomyelitis 임상 채점

다발성 경화증(MS)은 주로 젊은 성인에게 영향을 미치는 중추신경계(CNS)의 만성 염증성 질환입니다. 이는 ...으로 특징지어집니다.

저는 Christine Beaton입니다. 저는 캘리포니아 대학교 어바인 캠퍼스(University of California at Irvine) 생리학 및 생물물리학과 George Chen 교수 연구실의 보조 연구원입니다. 앞으로 며칠 동안 제가 보여드릴 내용은 DA 랫(rat)에서 실험적 자가면역 뇌척수염을 뜻하는 만성 재발성 EAE(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis)를 유도하고 모니터링하는 방법입니다.이것은 다발성 경화증의 동물 모델이며, 더 정확히는 다발성 경화증을 위한 동물 모델 중 하나입니다. 이 모델은 동물의 상행성 이완성 마비와 인간의 질환과 유사한 조직학적 특성을 특징으로 합니다. 따라서 이 과정은 며칠이 소요될 예정입니다.첫째 날에는 완전한 트랜스-어쥬반트(complete trans adjuvant)를 사용하여 나이브 붉은 척수 균질액으로 제닉 에멀젼을 준비하는 방법을 보여드리겠습니다. 둘째 날에는 쥐에게 UCAE를 면역화하는 방법을 보여드린 후, 동물들에게서 첫 번째 임상 증상이 나타날 때까지 7일에서 15일 정도 기다릴 것입니다. 그 시점에 서로 다른 동물의 EAE 진행 단계별 차이를 보여드리겠습니다. 먼저 에멀젼 준비에 필요한 모든 시약과 재료를 소개해 드리겠습니다.제가 사용하는 것은 완전 프런트 보조제 H 37 ra입니다. 여기에는 이미 mycobacterium tuberculosis가 포함되어 있지만, 건조된 mycobacterium tuberculosis IH 37 ra를 추가하여 4 mg/mL로 보충하겠습니다. 이 건조 박테리아를 준비하려면 유발에 넣고 갈아서 고운 가루로 만들어야 합니다. 작업이 완료되면 해당 박테리아를 보조제에 첨가하겠습니다.이제 보조제가 준비되었습니다. 다음 단계는 항원을 준비하는 것입니다. -80°C에서 냉동 보관된 쥐의 척수를 꺼내겠습니다. 척수가 완전히 냉동된 상태를 유지할 수 있도록 드라이아이스 위에 놓인 칭량 접시에 올린 뒤, 하나씩 꺼내어 단순 면도날을 사용하여 칭량 접시에 척수를 잘게 다집니다.이제 보충제가 첨가된 면역증강제를 볼텍스 믹서에 올리겠습니다. 볼텍싱을 하는 동안 척수를 면역증강제에 조금씩 추가하겠습니다. 척수가 면역증강제에 모두 혼합되면, 볼텍스 믹서로 5분 더 혼합합니다. 그 후 준비된 침지액을 5 mL 유리 주사기에 옮겨 담습니다.두 개의 5 mL 유리 주사기를 16 G 브릿지로 연결하고, 해

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 비디오에서는 실험자가 면역 질환 encephalomyelitis와 쥐의 중추 신경계에서 mononuclear 세포를 분리하는 방법을 보여줍니다.

EAE와 쥐의 중추 신경계에서 Mononuclear 세포의 분리

이 비디오는 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질과 불활성화된 결핵균의 조합을 주입하여 마우스 모델에서 실험적 자가면역 뇌척수염을 유도하는 방법을 보여줍니다. 이 모델을 통해 연구원들은 질병 메커니즘을 연구하고 치료 개입을 테스트할 수 있습니다.

마우스 모델에서 실험적 자가면역 뇌척수염 유도

이 비디오에서는 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE)을 사용하여 다발성 경화증의 마우스 모델을 구축합니다. 마우스에 뉴런 펩타이드와 보조제가 포함된 에멀젼을 주입하여 자가반응성 T세포를 활성화하는 면역 반응을 유발합니다. 그 다음에는 백일해 독소(PTX)를 주입하여 혈액뇌장벽 투과성을 높여 자가반응성 T세포가 뇌에 침투할 수 있도록 합니다. 이 침투는 궁극적으로 수초성 손상을 초래하는 신호 폭포를 시작하여 다발성 경화증의 탈수초성 상태를 모방합니다.

이 원고는 다양한 질병 단계에서 각각 유세포 분석 및 정량적 PCR을 사용하여 림프절, 비장, 혈액 및 척수의 면역 세포 분포 및 mRNA 사이토카인 수치를 평가하는 방법과 함께 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE) 모델의 유도 및 채점 방법을 설명합니다.

다양한 조직에서 면역 세포의 질병에 의존하는 유통의 마우스 및 평가에 실험자가 면역 뇌척수염의 유도

여기, 선물이 vivo에서 실험적인 자기 면역 뇌 중 혈관 단위의 장애를 조사 하는 프로토콜. 우리는 특별히 명과 limitans에서 혈액-뇌 장벽 침투성 및 백혈구 마이그레이션에 관련 된 gelatinase 활동을 확인 하는 방법 주소.

Vivo에서 실험적인 자기 면역 뇌 중 Neurovascular 단위의 내 피와 폐해 장벽의 장애 시각화

이 원고는 마우스에서 활성 실험자가 면역 뇌척수염(EAE)을 유도하는 프로토콜을 제시한다. 중추신경계(CNS)에서 침투된 림프구의 분리 및 특성화 방법도 림프구가 CNS 자가면역 질환의 발병에 어떻게 관여하는지 보여주기 위해 제시된다.

실험적인 자가면역 뇌척수염 중 중추신경계에서 림프구 침투의 흐름 세포 분석

본 프로토콜은 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질을 사용하는 마우스 모델에서 실험적 자가면역 뇌척수염의 유도 및 임상 스코어링 시스템을 사용하여 질환 과정을 모니터링하는 것을 설명한다. 실험적 자가면역 뇌척수염 관련 증상은 마우스 대퇴골 마이크로 컴퓨터 단층 촬영 분석 및 오픈 필드 테스트를 사용하여 분석되어 질병 과정을 종합적으로 평가합니다.

실험적 자가면역 뇌척수염의 유도 및 다양한 평가 지표

실험적 자가면역 뇌척수염(EAE)은 다발성 경화증의 동물 모델 역할을 합니다. 이 기사에서는 EAE에서 척수 염증, 탈수초화 및 축삭 손상을 채점하는 접근 방식을 설명합니다. 또한, 생쥐 혈청에서 용해성 신경 필라멘트 광 수준을 정량화하는 방법이 제시되어 살아있는 생쥐의 축삭 손상 평가를 용이하게 합니다.

실험적 자가면역 뇌척수염에서 중추신경계 염증, 탈수초화 및 축삭 손상 채점

실험적 자가면역 뇌척수염은 다발성 경화증에서 가장 널리 사용되는 쥐 모델 중 하나입니다. 현재 프로토콜에서는 남녀 모두의 C57BL/6J 마우스에 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질 펩타이드를 면역하여 주로 꼬리와 팔다리의 상행 마비를 초래합니다. 여기서는 EAE 유도 및 평가 프로토콜에 대해 논의합니다.

두 성별의 다발성 경화증 모델링: MOG35-55-유도 실험적 자가면역 뇌척수염

실험적 자가면역 뇌척수염(EAE)은 다발성 경화증(MS)의 동물 모델로, 인간 질병과 강력한 체액성 자가면역 반응을 공유합니다. 여기에서는 EAE 면역 마우스의 혈청에서 자가항체를 정량화하기 위한 간단하고 유연한 ELISA 프로토콜을 보고합니다.

Quantification of Autoreactive Antibodies in Mice on Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (실험적 자가면역 뇌척수염 시 마우스의 자가반응성 항체 정량화)

배우세요 DA 쥐에서 만성-재발 실험성 자가면역 뇌척수염(EAE)을 유도하고 임상 채점하는 방법을. 이 다발성 경화증 동물 모델은 상행성 무기력 마비와 인간 질환과 유사한 조직학적 특징을 보입니다.

유도 및 만성 - 원래대로 돌아가는 실험 면역 Encephalomyelitis 임상 채점

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