유도 및 만성 - 원래대로 돌아가는 실험 면역 Encephalomyelitis 임상 채점

저는 Christine Beaton입니다. 저는 캘리포니아 대학교 어바인 캠퍼스(University of California at Irvine) 생리학 및 생물물리학과 George Chen 교수 연구실의 보조 연구원입니다. 앞으로 며칠 동안 제가 보여드릴 내용은 DA 랫(rat)에서 실험적 자가면역 뇌척수염을 뜻하는 만성 재발성 EAE(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis)를 유도하고 모니터링하는 방법입니다.

이것은 다발성 경화증의 동물 모델이며, 더 정확히는 다발성 경화증을 위한 동물 모델 중 하나입니다. 이 모델은 동물의 상행성 이완성 마비와 인간의 질환과 유사한 조직학적 특성을 특징으로 합니다. 따라서 이 과정은 며칠이 소요될 예정입니다.

첫째 날에는 완전한 트랜스-어쥬반트(complete trans adjuvant)를 사용하여 나이브 붉은 척수 균질액으로 제닉 에멀젼을 준비하는 방법을 보여드리겠습니다. 둘째 날에는 쥐에게 UCAE를 면역화하는 방법을 보여드린 후, 동물들에게서 첫 번째 임상 증상이 나타날 때까지 7일에서 15일 정도 기다릴 것입니다. 그 시점에 서로 다른 동물의 EAE 진행 단계별 차이를 보여드리겠습니다. 먼저 에멀젼 준비에 필요한 모든 시약과 재료를 소개해 드리겠습니다.

제가 사용하는 것은 완전 프런트 보조제 H 37 ra입니다. 여기에는 이미 mycobacterium tuberculosis가 포함되어 있지만, 건조된 mycobacterium tuberculosis IH 37 ra를 추가하여 4 mg/mL로 보충하겠습니다. 이 건조 박테리아를 준비하려면 유발에 넣고 갈아서 고운 가루로 만들어야 합니다. 작업이 완료되면 해당 박테리아를 보조제에 첨가하겠습니다.

이제 보조제가 준비되었습니다. 다음 단계는 항원을 준비하는 것입니다. -80°C에서 냉동 보관된 쥐의 척수를 꺼내겠습니다. 척수가 완전히 냉동된 상태를 유지할 수 있도록 드라이아이스 위에 놓인 칭량 접시에 올린 뒤, 하나씩 꺼내어 단순 면도날을 사용하여 칭량 접시에 척수를 잘게 다집니다.

이제 보충제가 첨가된 면역증강제를 볼텍스 믹서에 올리겠습니다. 볼텍싱을 하는 동안 척수를 면역증강제에 조금씩 추가하겠습니다. 척수가 면역증강제에 모두 혼합되면, 볼텍스 믹서로 5분 더 혼합합니다. 그 후 준비된 침지액을 5 mL 유리 주사기에 옮겨 담습니다.

두 개의 5 mL 유리 주사기를 16 G 브릿지로 연결하고, 해당 브릿지에서 가능한 한 빠르게 에멀젼을 한 주사기에서 다른 주사기로 밀어 넣겠습니다. 몇 분 후 에멀젼이 더 단단해지기 시작하면 더 작은 브릿지로 교체하겠습니다. 이것은 18 G 브릿지로, 에멀젼을 더욱 단단하게 만들어 줄 것입니다. 이 브릿지를 연결한 상태로 주사기를 알루미늄 호일로 감싸 냉장고에 하룻밤 동안 보관하겠습니다.

따라서 칭량지에 30 mg의 결핵균(microbe tuberculosis)을 달았습니다. 이를 막자사발로 옮긴 후, 유발을 사용하여 박테리아 응집체를 고운 가루 형태로 분쇄하였습니다.

하지만 박테리아가 파쇄되지 않도록 유발로 너무 세게 누르지 않아야 합니다. 실험 시작 단계에서 응집된 상태의 박테리아는 황백색을 띱니다. 아주 고운 분말 형태로 만들면 최종적으로 흰색 분말이 되는데 이것이 목표이지만, 박테리아를 파괴할 정도로 너무 강하게 압력을 가해서는 안 됩니다.

그 작업을 마친 후, 10 mL의 complete trans adjuvant 앰플을 사용하여 모든 박테리아가 현탁 상태인지 확인했습니다. 이 샘플을 개봉하여 분산된 mycobacterium tuberculosis 위에 10 mL의 complete trans adjuvant 전체를 모르타(morta)에 부었습니다. 이제 보충된 complete trans adjuvant를 50 mL 튜브로 옮기겠습니다.

이제 보충제가 첨가된 완전한 전접착제(complete trans adjuvant)를 튜브에 옮겨 담겠습니다. 당연히 박테리아는 액체 바닥에 가라앉아 있으므로, 최대한 많은 양을 튜브로 옮기도록 하겠습니다. 하지만 막자사발에 일부가 남더라도 큰 문제는 되지 않는데, 이는 척수 에멀젼을 준비할 때 이 막자사발을 세척하지 않고 그대로 다시 사용할 것이기 때문입니다.

여기 척수 조직이 있습니다. 이 조직들은 -80°C에서 냉동 보관되었습니다. 보충제가 첨가된 adjuvant 10 mL에 추가하기 위해 척수 조직 10 g을 측정하였습니다.

이제 이 척수들을 최대한 냉동 상태로 유지하면서, 면도날을 사용하여 칭량 접시 위에서 아주 잘게 다질 것입니다. 척수를 아주 잘게 다지기 위해서는 두 개의 면도날과 칭량 접시가 필요합니다. 우선 척수 하나를 칭량 접시에 넣고 자르기 시작하는데, 이때 손으로 위를 덮어줍니다. 냉동 상태이기 때문에 조각들이 튀어 오를 수 있으므로 먼저 큰 덩어리들을 잡아주어야 하며, 척수가 매우 빠르게 해동되면서 면도날 측면에 달라붙기 시작할 것입니다.

따라서 다른 면도날을 사용하여 이를 떼어낸 후, 가능한 한 빠르고 세밀하게 다집니다. 녹아버리면 절단하기가 훨씬 더 어려워지므로 녹을 시간을 주지 않기 위해서입니다. 척수를 완전히, 그리고 매우 세밀하게 다지는 것이 매우 중요합니다. 더 세밀하게 다질수록 침지액이 더 균질해지며, 이에 따라 더 많은 쥐가 더 균질한 질병 상태로 감염되기 때문입니다. 그러므로 모든 척수를 매우 세밀하게 잘 다지는 것이 매우 중요합니다.

이제 10g의 척수 전체를 다 사용할 때까지 동일한 방식으로 각각의 척수를 계속해서 잘게 다질 것입니다. 그런 다음, 보조제를 추가한 후 막자사발에 남아 있는 모든 mycobacterium tuberculosis를 확실히 수집하기 위해 척수를 막자사발 안에서 가볍게 섞어주겠습니다. 다음으로는 보조제를 볼텍스 믹서에 올려놓겠습니다.

그리고 가능한 한 빠르게 계속해서 볼텍싱하면서, 척수 뇌수(mean spinal cord)를 이 보조제(adjuvant)에 조금씩 추가하겠습니다. 이제 볼텍스 위에 보충된 보조제가 있으며, 척수 뇌수를 조금씩 추가하기 시작합니다. 항원을 보조제에 매우 천천히 추가하는 이유는 오일 속의 물(water in oil) 형태의 에멀션을 만들기 위해서입니다.

따라서 보조제는 대부분 미네랄 오일이며, 항원은 동일한 용액입니다. 우리가 해야 할 일은 항원을 오일에 매우 천천히 섞어, 항원을 추가할 때마다 오일이 항원을 완전히 코팅하게 하는 것입니다. 만약 항원을 한 번에 다 넣는다면, 항원이 완전히 코팅되지 않을 것입니다.

이제 모든 척수 평균물을 볼텍스 위 보조제에 추가하였으며, 모든 성분이 완전히 혼합되도록 튜브를 볼텍스에 고정하여 5분 더 회전시켰습니다. 이때 튜브 뚜껑으로 손실되는 양이 너무 많지 않도록 가능한 최대 속도로 볼텍스 속도를 조절합니다. 5분간의 볼텍싱이 끝났으므로, 볼텍스를 멈추고 혼합물을 유리 주사기로 옮기겠습니다.

이제 주사기를 완전히 조립했습니다. 이를 더 큰 직경의 브릿지에 연결했고, 브릿지의 반대편에는 주사기 배럴만 연결했습니다. 이제 해당 주사기에 에멀션을 추가하겠습니다. 자, 이제.

이제 모든 액체를 아래쪽 주사기로 옮기겠습니다. 위쪽 주사기를 분리하고 위쪽 부분을 조립 완료한 뒤, 아래쪽 주사기나 브릿지에 기포가 없는지 확인합니다. 이제 다시 연결하겠습니다. 이렇게 하면 브릿지를 통해 두 주사기가 모두 연결된 상태가 됩니다.

하나는 완전히 채워져 있고, 다른 하나는 비어 있습니다. 이제 한쪽 주사기의 플런저를 다른 쪽으로 최대한 빠르게 앞뒤로 밀어낼 것입니다. 이제 대구경 브릿지를 18 G 브릿지의 소구경으로 교체하겠습니다.

더 작은 브리지를 사용하면 에멀젼이 훨씬 더 두꺼워집니다. 따라서 브리지를 교체하려면, 모든 에멀젼을 하나의 시린지에 넣습니다. 빈 시린지를 제거하고, 브리지에서 손실되는 내용물이 없도록 확인한 후, 브리지를 제거하고 새 브리지를 장착하며, 모든 기포를 제거한 다음 다른 시린지를 다시 연결합니다.

이제 에멀전의 점도가 높아져 통과하기가 훨씬 어려워졌으므로, 매우 취약한 이 브리지가 끊어지지 않도록 주의하며 절차를 반복합니다. 튜브에 에멀전이 남아 있는 한 다른 주사기 세트를 사용하여 이 과정을 반복합니다. 따라서 모든 에멀전을 사용할 때까지 필요한 만큼의 주사기를 사용합니다.

이제 에멀션을 10회에서 15회 정도 여러 번 혼합했는데, 이는 배치마다 다를 수 있습니다. 현재 제형이 매우 되직해져서 섞기 힘든 상태입니다. 몇 번 더 혼합하겠습니다. 아니면 여기까지만 하겠습니다.

현재 완전히 고정되었으므로 그대로 두겠습니다. 그렇지 않으면 시린지나 브릿지가 파손될 위험이 있습니다. 따라서 액체가 통과하지 않을 때, 특히 매우 초기에 그런 현상이 발생한다면 브릿지가 막혔을 가능성이 있습니다.

하지만 이 시점에서 최소 10회에서 15회 정도 혼합했으므로, 에멀젼이 준비되었다는 것을 의미합니다. 점도가 매우 높으므로 그대로 두어야 합니다. 이제 알루미늄 호일로 감싸서 하룻밤 동안 냉장고에 보관하겠습니다.

어제 적색 척수를 이용해 에멀젼을 준비한 뒤 냉장고에 하룻밤 동안 보관하였습니다. 오늘은 이를 꺼내어 쥐의 꼬리 기저부에 한 마리당 200 µL씩 주입할 예정입니다. 하지만 주입하기 전에 에멀젼의 상태가 양호한지 반드시 확인해야 합니다.

따라서 여전히 고체 상태여야 하며, 상태가 양호한 고체 형태를 유지하고 있습니다. 여기서 보이는 균열은 이것이 두 개의 상으로 분리되지 않고 하나의 양호한 고체 상태임을 알려주는데, 상 분리가 일어났다면 좋지 않은 상태였을 것입니다. 따라서 이 에멀젼은 사용하기에 적합합니다.

따라서 각 사육장에 200 µL의 에멀젼을 투여할 것입니다. 주입을 위해 3 mL 시린지를 사용하는데, 반드시 루어 락(lu lock) 팁 시린지를 사용해야 합니다. 슬립 팁 시린지를 사용할 경우, 에멀젼의 점도가 너무 높아 주입 중에 바늘이 빠져나올 수 있기 때문입니다.

따라서 항상 루어 락(lu lock) 타입의 주사기를 사용하십시오. 바늘의 경우 가능한 가장 얇은 바늘을 사용하려 하지만, 이 정도로 점도가 높은 에멀전의 경우에는 20게이지 바늘을 사용해야 합니다. 꼬리 기부에 매우 정밀하게 주입해야 하므로, 쥐를 몇 분 동안 마취시킨 후 쥐가 깊게 잠든 틈을 타 표시를 해줍니다.

우리는 귀 펀칭(ear punch)을 사용하며, 각 랫드는 펀칭 패턴을 통해 식별됩니다. 이제 랫드에게 주입할 준비가 되었으며, 각 랫드의 꼬리 기저부에 에멀젼 200 µL를 주입하는 동시에 귀에 표시를 할 것입니다. 주입 시 강하게 눌러야 하는 경우가 많아 주입이 매우 어려울 때가 있고, 랫드에게 필요한 양보다 더 많이 주입되는 것을 방지하기 위해 한 번에 한 마리분씩만 주사기에 에멀젼을 준비합니다.

따라서 한 번에 하나의 hu에 대해서만 시린지를 채웁니다. 시린지를 채우기 위해, 에멀션이 들어 있는 유리 시린지에 연결된 브리지에 플라스틱 주사 시린지를 연결합니다. 플라스틱 시린지에 약 300 µL의 에멀션을 넣습니다.

그 다음 바늘을 연결하고 바늘 내부의 공기를 밀어내어, 바늘 속의 50 µL 데드 스페이스(lost space)로 인해 시료가 손실되지 않도록 합니다. 정확히 200 µL가 들어있는지 확인한 후, 쥐의 꼬리 기저부에 주입합니다. 모든 심장에 주입을 마쳤으므로, 이제 매일 상태를 모니터링하겠습니다.

따라서 매일 아침 체중을 측정하고, 하루에 두 번씩 EAE의 임상 증상을 확인하겠습니다. 증상이 나타날 때 보여드리겠지만, 초기 증상은 꼬리 이완이며, 주사 후 약 7~8일경에 첫 번째 쥐들에게서 이러한 증상이 나타날 것으로 예상합니다. 대부분의 쥐는 10~12일경에 발병하며, 가장 늦게 발병하는 쥐들은 15~17일경에 발병할 것입니다.

척수 유제(spinal cord emulsion)로 심장을 면역화한 지 13일째가 되었으며, 이제 동물들의 임상 점수를 확인하기 위해 모니터링을 진행하겠습니다. 그 전에 저희가 동물들을 어떻게 사육하는지 소개해 드리겠습니다. 자가면역 질환의 특성상 동물 체내에 존재하는 모든 병원균은 자가면역 반응을 감소시키게 됩니다.

따라서 이를 최대한 방지하기 위해, 저희는 쥐를 특정 조건에서 사육합니다. 쥐들은 여과된 공기가 공급되고 양압 상태가 유지되는 이 큐비클 내에 수용되며, 동물들은 각각 오토클레이브 멸균 처리된 케이지에 들어갑니다. 즉, 쥐를 넣기 전에 케이지 내의 모든 구성 요소를 반드시 오토클레이브로 멸균합니다.

케이지 상단에는 필터가 장착되어 있습니다. 먹이는 표준 설치류 사료를 사용하며, 이는 I-originated 제품입니다.

또한 쥐에게 산성수를 제공합니다. 표준 프로토콜에 따라 일반 음용수에 염산을 첨가하며, 장내 미생물 총을 최소 수준으로 유지하기 위해 산성수를 사용함으로써 자가면역 반응의 저해 위험을 줄입니다. 이제 쥐의 임상 점수 측정을 시작할 준비가 되었습니다.

점수는 임상 증상이 없는 0점부터, 동물을 희생시켜야 하는 위중한 상태인 6점까지 범위가 지정됩니다. 이제 이 모델에서 발견할 수 있는 각 임상 점수의 예시를 단계별로 보여드리겠습니다. 현재 쥐에게 UCAE를 면역시킨 후 13일째 되는 날입니다.

그리고 해당 케이지에는 아직 병에 걸리지 않은 쥐 두 마리가 있습니다. 따라서 이들은 어떠한 임상 증상도 전혀 보이지 않습니다. 즉, 두 마리의 쥐 모두 여전히 건강한 상태입니다.

동물들이 주변을 뛰어다니고 있으며, 보시는 바와 같이 움직일 때 꼬리를 깔짚에서 들어 올립니다. 때로는 꼬리를 말리기도 하지만, 대부분의 경우 깔짚 위에서 꼬리를 들어 올리려고 시도합니다. 또한 기회가 주어진다면 케이지 밖으로 기어 나오기도 하는데, 이는 네 다리를 모두 완전히 제어할 수 있으며 필요 시 일어설 수 있음을 의미합니다.

EA의 첫 번째 임상 징후는 꼬리 마비입니다. 따라서 쥐를 들어 올려 손가락으로 꼬리를 누르면, 쥐는 꼬리 끝으로 붙잡으려는 경향을 보입니다. 방금 보신 것처럼, 이 쥐는 꼬리 마비 증상이 없으며, 다른 쪽에서도 동일하게 확인할 수 있습니다.

꼬리가 손가락을 잡는데, 이는 해당 쥐들의 꼬리 반응이 완전히 정상임을 의미합니다. 이들은 임상 점수가 0점으로, 실제로 증상이 전혀 없습니다. 여기 임상 점수가 0.5점인 쥐가 있습니다.

따라서 케이지 안에서 관찰하면, 쥐는 주변을 뛰어다니고 케이지 벽을 타고 올라가는 등 완전히 정상적으로 행동합니다. 하지만 꼬리 끝부분은 절대 베딩에서 떨어지지 않습니다. 이 쥐는 꼬리에 부분적인 마비가 있을 수 있습니다. 그래서 제가 쥐를 잡아 동일한 테스트를 실시했는데, 꼬리에 어느 정도 긴장도는 남아 있었으나 끝부분이 제 손가락을 완전히 감싸지 못했습니다.

따라서 이 쥐는 부분적인 꼬리 마비를 의미하는 1.5점으로 채점하겠습니다. 임상 점수 1점은 완전한 꼬리 이완이 특징으로, 꼬리의 어느 부분에도 긴장도가 없지만 쥐가 여전히 뒷다리를 사용할 수 있는 상태입니다. 보시는 바와 같이, 이 쥐는 케이지 벽면에 기대어 서 있으며, 이는 뒷다리가 정상적으로 작동하고 있음을 보여줍니다.

하지만 쥐를 들어 올려 꼬리 부분을 확인해 보면, 꼬리에 긴장도가 전혀 없습니다. 또 다른 테스트 방법은 RU가 케이지 바닥에 있을 때 꼬리를 들어 올리는 것인데, 점수가 1점인 RU의 경우 꼬리가 천천히 내려오거나 지면에 닿지 않을 수도 있습니다. 반면, (정상 쥐의 경우) 꼬리를 들어 올리면 즉시 바닥으로 떨어집니다.

여기 이 RU는 네 가지 사지를 모두 움직일 수 있지만, 뒷다리가 너무 약해 스스로 일어설 수 없습니다. 따라서 이 RU의 임상 점수는 2점으로 분류하겠습니다. 점수 1점과 2점의 주요 차이점은 1점의 경우 꼬리만 처진 상태라는 점입니다.

뒷다리는 완전히 기능하며, 점수가 3점인 경우 쥐는 옆으로 쓰러지게 됩니다. 2점은 중간 단계로, 쥐가 뒷다리를 사용할 수는 있지만 정상적인 쥐보다 훨씬 약한 상태입니다. 따라서 이 쥐는 EAE의 특이한 특징을 보이고 있습니다.

일반적으로 EAE는 상행성 이완성 마비의 특성을 보이지만, 이번 경우와 같이 매우 드문 일부 사례에서는 쥐의 뒷다리가 마비되기 전에 앞다리 마비가 먼저 나타납니다. 현재 이 쥐가 바로 그러한 경우입니다. 관찰해 보면, 쥐가 앞다리를 사용하는 데 어려움을 겪어 케이지 벽면을 타고 올라가지 못하기 때문에 머리 부분이 몸의 나머지 부분보다 낮게 위치해 있습니다.

그리고 뒷다리는 정상적으로 작동하고 있지만, 앞다리로는 밀어낼 수 없습니다. 따라서 이 쥐의 점수는 2점으로 책정하며, 이는 경미한 마비(paralysis)에 해당합니다. 다만 보통 이 RU에서는 뒷다리에서 이러한 증상이 나타나는데, 여기서는 네 다리 모두에서 나타나고 있습니다. 따라서 이 RU는 이전의 것들보다 훨씬 더 심각한 표현형을 보입니다.

임상 점수는 3점입니다. 이제 보여드리겠지만, 앞다리는 완전히 정상적으로 기능하고 있으나 두 뒷다리에는 중등도의 마비 증상이 나타나고 있습니다. 따라서 RU가 이동할 때 두 뒷다리를 사용할 수는 있지만, RU가 옆으로 쓰러지며 다리를 완전히 제어하지 못하는 상태입니다.

이 포자들은 EE가 없을 때보다 훨씬 더 약해지고 있습니다. 그리고 이 단계에서는 더 이상 꼬리가 처지는 현상을 걱정하지 않는데, 왜냐하면 일정 시간이 지나면 많은 쥐들의 꼬리가 매우 뻣뻣해지기 시작하기 때문입니다. 이 개체는 여전히 꼬리가 매우 처져 있지만, 때로는 근긴장 이상(dystonia)이 관찰될 수 있습니다. 즉, 꼬리가 조절되지 않는 방식으로 움직이기 시작합니다.

따라서 이 단계에서는 꼬리를 더 이상 관찰하지 않고, 사지의 기능만을 확인합니다. 뒷다리를 살펴보면 한쪽은 움직이지만 다른 한쪽은 완전히 마비되어 쥐의 전진 이동에 전혀 도움이 되지 않으므로, 이 경우 점수를 3.5점으로 책정합니다. 즉, 이는 한쪽 뒷다리의 완전 마비로 간주되어 3.5점을 부여합니다.

이 RU는 임상 점수가 4점이며, 이는 완전한 후지 마비를 의미하며 뒷다리를 전혀 움직일 수 없는 상태가 특징입니다. 이 케이지에 있는 쥐는 임상 점수가 5점으로, 이는 완전한 후지 마비와 더불어 실금이 동반된 상태에 해당합니다. 보시는 바와 같이 이 동물은 실금 상태이며, 실금이 없는 다른 동물들에게서는 보이지 않는 해당 부위의 완전한 체중 지지 상태를 확인할 수 있습니다.

HUS 점수가 3점 이상인 경우에는 쥐가 확실하게 물을 마실 수 있도록 긴 흡입 튜브가 달린 급수병을 제공합니다. 또한 케이지 바닥에 먹이를 놓아주고 젤 팩도 제공합니다. 이러한 조치에도 불구하고, 하루에 두 번 쥐를 꺼내어 상태를 모니터링할 때마다 낮 동안 충분한 물을 섭취하지 못했을 경우를 대비해 항상 물을 제공합니다.

여기 임상 점수가 4점인 쥐가 있습니다. 이 단계의 동물들은 음식 섭취를 위해 어느 정도의 도움이 필요합니다. 그래서 저는 사료를 적셔 줌으로써 동물들이 훨씬 더 쉽게 씹어 먹을 수 있도록 합니다.

지난 2주 동안 저는 DA 래트에서 만성 재발성 EAE를 유도하고 모니터링하는 방법을 보여드렸습니다. 첫 번째 단계에서는 척수 침전물을 준비하는 방법과 이를 래트의 꼬리 기저부에 주사하는 방법을 설명드렸습니다. 그리고 오늘은 질병의 단계별 수준에 따라 해당 래트들을 점수화하는 방법을 보여드렸습니다.

물론 이것은 만성 재발 모델이므로, 쥐의 점수가 변동될 것으로 예상합니다. 질환은 며칠 후 관해 상태에 들어갔다가 시간이 지나면서 다시 재발하게 됩니다. 일부 쥐는 더 만성적인 질환 단계로 진입하게 될 것입니다.

이는 동물마다 다를 수 있습니다. 이제 영상을 마치기 전에, 이러한 모델에서 약물을 테스트할 때 한 가지 강조하고 싶은 점이 있습니다. 매우 중요한 점은 동물을 최대한 무작위로 배정하는 것입니다.

매우 중요하게 알아두어야 할 점은 동물이 병에 빨리 걸릴수록 질병의 증상이 더 심각하다는 것입니다. 따라서 대조군 동물을 모두 첫날에 배치하고, 처리군 동물을 그다음 며칠에 걸쳐 배치해서는 안 됩니다. 저희가 사용하는 방법은 동물이 발병하여 치료를 시작하려는 당일에 해당 동물들을 두 개의 서로 다른 그룹에 무작위로 배치하는 것입니다.

예를 들어, 대조군 하나와 처리군 하나가 있는 경우, 첫 번째 심장은 대조군에, 두 번째 심장은 처리군에 배치하며, 모든 동물이 각자의 그룹에 배치될 때까지 이 과정을 반복합니다. 하지만 이러한 무작위 배정은 프로토콜의 가능한 가장 이른 단계에서 이루어지도록 합니다. 이 영상이 여러분께 도움이 되었기를 바라며, D rats에서 만성 재발성 EAE를 유도하고 모니터링하실 수 있기를 바랍니다.

여러분의 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.