Name: 쥐에서 유선의 형태론과 유방암 위험의 변화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-16T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 36 s
Description: 학습하세요 쥐 유선 절제 및 홀마운트 제작 방법을 통해 유선 형태를 분석하고 유방암 위험을 예측하는 기술을 습득하세요. 이 프로토콜은 발육기 영양 노출이 암 발생에 미치는 영향을 연구하는 데 활용됩니다.

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NCI (U54 CA00100970), NCI (1 R03 CA150040 - 01), ACS (116602 - PF - 09 - 018-01 - 척수)

1. 복부 유선의 제거 및 전체 마운트 준비 <ol><li> IACUC 지침에 따라 동물을 안락사. 표면 보드에 바늘, 또는 테이프 다리의 다리로부터 뒷면에있는 동물을 핀, 그리고 에탄올 (EtOH)와 젖은 피부를 닦아냅니다. 피부 포셉와 약간을 들어 날카로운 가위가 목쪽으로 한 쌍의 # 5 젖꼭지 컷 사이에 시작하는 피부에 정중선 절개를 함께. 뒷다리쪽으로 정중선에서 거꾸로 Y 자 절개를합니다. 흉부 내유 분비가 수집하는 것도있다면, # 2 유두 앞 다리를 향해 쌍 사이의 정중선에서 또한 Y 자 절개를합니다. </li><li> 피부가 복부 # 4 유선을 폭로하기 위해 거꾸로 Y 절개의 한쪽에 가위로 오픈 절개하다, 내유 분비는 피부에 붙어있다. 완전히 선을 노출, 표면 보드에 바늘로 피부를 핀. 한 번에 하나의 측면과 선 (腺)을 작동합니다. </li><li> 가까운 유두로 근위 지역에서 시작과 동물의 척추쪽으로 선 (腺)의 말초 끝 부분 작업, 날카로운 가위 및 / 또는 메스를 사용 중 피부에서 무료로 유선을 해부하다. (이것은 특히 기존의 밀고로, 몇 분 정도 걸릴 수 있습니다.) </li><li> 즉시 적절하게 레이블이 붙은 유리 슬라이드 (적절한 영구 마커 펜 및 / 또는 '다이아몬드 펜'을 사용)로 분리 선 (腺)을 전파하고, 원래의 크기와 현장의 모양 신중하게 대응하는 선 (腺)을 전파. 유리 슬라이드는 선보다 더해야합니다. 슬라이드에 선 (腺)을 확산하면, 그것은 선 (腺)이 슬라이드에 막대기 있도록 잠시 동안 테이블에 앉아 보자,하지만 건조하게하지 않습니다. </li><li> Carnoy의 정착액 (75 % 빙초산, 25 % 에탄올을 절대 EtOH =)가 들어있는 병에 덮개를 씌우고, 그것이 2 일 이상 연기 후드의 실내 온도 (RT)에 고정하자. 슬라이드도 시간이 긴 기간 동안 정착액에 남아있을 수 있습니다. </li><li> RT에서 1 시간 동안 70 % EtOH에서 슬라이드를 씻으십시오. </li><li> RT 30 분 증류수로 씻어. </li><li> 슬라이드의 뒷면을 살펴 보길), (당신은 림프절이 통해 스테인드 것을 볼 때까지 이일 이상) *를 얼룩 카르민 알룸에 얼룩. </li><li> EtOH의 증가 시리즈, 각 1 시간에 세척 : 70 % -&gt; 95% -&gt; 100 %. 절대 EtOH의 마지막 세척 후 크실렌의 분비를 넣어. 최소한 2 일 RT에서 퓸 후드에 앉아 보자. 이 마지막 단계는 내유 지방 패드의 유선의 의미 delipidation의 삭제, 그리고 투명성에 후속 증가합니다. fattier 선은 더 이상 비운 시간이 필요입니다. </li><li> 같은 Permount로 설치 미디어를 사용하여 커버 - 전표로 마운트합니다. 스테레오 현미경으로 관찰하기 전에 (몇 일) 잘 슬라이드가 건조 보자. * 카르민 알룸는 얼룩이 : 플레이스 1g 카민 (시그마 C1022) 20 분 500 ML 증류수와 끓여서 2.5 g 알루미늄 칼륨 황산 (시그마 A7167). 물 500 ML에 마지막으로 볼륨을 조정합니다. 필터 및 냉동. 솔루션은 몇 달 동안 사용할 수 있습니다. 색상이 약한되면 폐기하십시오. </li></ol> 2. 유선 전체 마운트 형태론 분석 유선의 평생 마운츠 형태는 다음과 같은 엔드 - 포인트와 유방암 위험과 상관 결과에 따라 분석됩니다. <ol><li> 유선 쿨러 21 전체 마운트 (미리 pubertal 나이) : <ul><li> 상피 성장 : <ul><li> 유두에서 상피 나무의 끝 부분 (mm)로 거리는 통치자를 사용하여 측정 </li></ul></li><li> 악성 변화 가능성 : <ul><li> TEBs 수 (터미널 최종 꽃봉오리), 가벼운 현미경시켰다. TEBs는 내유 상피 나무의 말초 끝에있는 큰 주먹코 구조 아르 </li></ul></li><li> 차별 : <ul><li> AB1 (폐포 버드) 점수 (0-5). 폐포 꽃봉오리는 상피를 통해 확산됩니다. </li><li> AB2 점수 (0-5) </li></ul></li></ul> 홀스의 탑재는 가벼운 현미경 점수입니다. AB1 AB2과에서 점수 값은 최종 차별화 점수에 대한 추가됩니다. </li><li> 유선은 전체 장착 쿨러 50 (사후 pubertal 세)에서 수집된 : <ul><li> 상피 성장 : <ul><li> 림프절에서 상피 트리의 끝을 (mm)로 거리는 통치자를 사용하여 측정. </li><li> 상피 나무의 끝에서 지방 패드의 끝에 거리는 통치자를 사용하여 측정. </li></ul></li><li> 악성 변화 가능성 : <ul><li> 가벼운 현미경으로 계산 TEBs 수, </li></ul></li><li> 차별 : <ul><li> AB1 점수 (0-5) </li><li> AB2 점수 (0-5) </li><li> Lobules 점수 (0-5) </li></ul></li></ul> 홀스의 탑재는 가벼운 현미경 점수입니다. 차별은 두 가지 방법으로 평가됩니다. 첫째, AB1, AB2 및 lobules에서 점수 값은 최종 차별화 점수에 대한 추가됩니다. 또한, lobules 점수와 AB1 + AB2 점수 사이의 비율이 계산됩니다. ABS가 lobules로 구분하고, lobules와 ABS의 높은 비율, 더 차별화된 선 (腺)입니다. </li></ol> 3. 촉진과 고양이와 유선의 형태론에 상관 관계에 내유 종양 측정 <ol><li> 이 절차를 시작하려면 머리 뒤쪽 집게손가락과 반대 겨드랑이에서 엄지와 둘째 손가락으로, 다시 위로 손바닥으로 몸 전체를 쥐고하여 쥐를 잡아. 그것은 사후에 누워되도록 밀고 돌려, 및 내유 종양을 탐지하는 만져보다, 만져서 알 수있는 종양은 "혹"같은 느낌한다. </li><li> 다음 너비, 길이, 그리고 종양의 높이를 측정하는 캘리퍼스를 사용합니다. 타원체 공식 볼륨에게 = 1/6πabc, 'A'= 폭, 'B'= 길이, 그리고 'C'= 높이.를 사용하여 종양 볼륨을 계산 </li><li> 수동으로 주 단위로 노트북에있는 종양의 위치와 크기를 기록합니다. 이 데이터는 나중에 스프레드 시트로 전송됩니다. </li></ol> 4. 대표 결과 내유 지방 패드와 wholemount하기 위해 처리주의 절개는 유선의 발달 상태를 평가하실 수 있습니다. 각 단계가 올바르게 완료되면 전체 내유 상피 나무는 지방 패드 내에 명확하게 볼 수 있으며, 이것은 TEBs 및 폐포 꽃봉오리와 lobules의 밀도의 계산의 수를 쉽게 결정 수 있습니다. 준비 wholemounts에 잘못하면는 전체 지방 패드, 불충 분한 고정, 그리고 불충 분한 삭제를 해부하다하는 실패를 포함할 수 있습니다. 유선의 형태의 평가는 내유 종양 (TEBs), 상피 구조 (폐포의 꽃봉오리와 lobules)의 분화 정도, 그리고 성장의 측정 (ductal 신장)에 상승을 줄 수 구조의 현재의 수에 대한 정보를 제공합니다. 터미널 엔드에 TEBs을 구분하는 것이 중요하고, 후자는 마찬가지로 TEBs하는 상피의 말초 끝에있는,하지만 그들은 TEBs보다 작은 있으며, 악성 종양을 일으키다 아닙니다. 터미널 종료 또한 상피 트리 내에서 볼 수 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/2260/2260fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1 :. 잘 준비 유선의 전체 탑재 대표 결과는 선 (腺)의 모든 구성 요소를 제대로 해부되어 있고 카르민 얼룩이 최적입니다. <img src="/files/ftp_upload/2260/2260fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2 :. 제대로 준비 유선의 전체 탑재 대표 결과 글랜드가 제대로 (선의 말초 부분이 누락)를 해부했습니다 제대로 뻗어되지 않았습니다 및 delipidation가 완전히 발생하지 않았습니다.

<ol><li>Rasmussen, S. B., Young, L. J. T., Smith, G. H. Preparing mammary gland whole mounts form mice. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRasmussen%2C+SB+%22Methods+in+Mammary+Gland+Biology+and+Breast+Cancer+Research%22">Methods in Mammary Gland Biology and Breast Cancer Research</a>. Ip, M. M., Asch, B. B. , Kluwer Academic / Plenum Publishers. New York. 75-85 (2000).</li>
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</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

유선 형태학의 최종 지점과 상피 나무의 성장을 평가 일찍 삶 식단 조작, 또는 utero 또는 prepubertal 호르몬 환경에서 변경 기타 조작은 나중에 유방암 위험을 수정 여부를 예측하는 데 사용될 수 있습니다. 인간의 유방암이 쥐에 TEBs와 비슷한 내유 구조 (터미널 ductal 소엽 단위, TDLUs)에서 시작되기 때문에,이 기법은 유방암 위험에 영향을 조기 삶의 노출의 가능성을 결정하는 데 사용할 수 있습니다. 또한, 여성의 높은 mammographic 밀도는 4-6 배로 유방암의 위험을 증가 시키며, 내유 상피 나무의 성장 평가가 mammographic 밀도이 밀도를 감소 요인을 결정하는 요인을 식별하는 데 사용할 수 있습니다. 이 정보를 얻으려면 유선이 완전히 해부를 제대로 모든 구성 요소가 현미경 시각 수 있도록 유리 슬라이드에 뻗어 있어야합니다. 또한, 적절한 카르민 얼룩과 크실렌의 delipidation은 유방암 위험 평가에 적합 전체 마운트를 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>빙초산</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>AX0073-9</td><td>Carnoy&amp;rsquo;s 고정액</td></tr><tr><td>절대 에탄올</td><td>The Waner-Graham Co.</td><td>64-17-5</td><td>Carnoy&amp;rsquo;s 고정액</td></tr><tr><td>카민</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1022</td><td>카민 용액</td></tr><tr><td>황산알루미늄칼륨</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7167</td><td>카민 용액</td></tr></tbody></table>

쥐에서 유선의 형태론과 유방암 위험의 변화

Changes in Mammary Gland Morphology and Breast Cancer Risk in Rats

utero 및 pubertal 기간에 동안식이 / 호르몬 요인에 노출은 유선은 광범위한 모델링 및 다시 모델링을 거쳐 때 발암 물질 유발 내유 종양을 느끼기 쉬운 상태를 변경되는 유방암 쇼의 쥐 모델에서 연구. 비슷한 연구 결과는 인간에서 설명되었습니다 : 예를 들면, 높은 birthweight 유방암을 개발하고 이후 리스크 증가, 그리고 어린 시절 동안 간장의식이 섭취가 유방암 위험을 감소시킵니다. 그것은 이러한 태아와 출생 후의식이 수정이 차례로 나중에 유방암 위험을 수정할 것을 유선으로 영구 형태학의 변화를 유도 생각이다. 이러한 형태학의 변경 가능성이 같은 DNA의 methylation의 변화, histones하고 유전자 전사에 영향을 miRNA 표현으로 epigenetic 수정을 반영합니다. 이 문서에서는 유선의 형태에 변화가 쥐의 유방암 위험을 예측할 수있는 방법에 대해 설명합니다. 우리 프로토콜은 특별히 해부하다하고 제거 쥐의 복부 유선과 방법을 유선 전체 마운트를 준비하는 방법에 대해 설명합니다. 또한 세 엔드 포인트 (터미널 최종 꽃봉오리의 번호, 상피 연신율과 차별화)과 유방암을 개발의 위험을 예측하기 위해 데이터를 사용에 따라 유선의 형태를 분석하는 방법에 대해 설명합니다.

우리 프로토콜은 쥐 복부 유선을 해부하다 방법과 유선 전체 마운트를 준비하는 방법에 대해 설명합니다. 또한 세 최종 포인트 (터미널 최종 꽃봉오리의 번호, 상피 연신율과 차별화)을 사용하여 유선의 형태를 분석하고식이 수정에 노출된 쥐의 유방암 위험을 예측하는 이러한 결과를 사용하는 방법에 대해 설명합니다<em&gt; utero에</em&gt; 또는 prepuberty 중.

유방샘이 발달하는 태아기 및 사춘기 동안의 식단 및 호르몬 요인 노출이 유방암 설치류 모델 연구에서 나타내는 결과는...

이 실험 절차의 전반적인 목적은 유선관 홀 마운트를 박리 및 준비하고, 그 형태를 분석하여 유방암 위험을 예측하는 방법을 보여주는 것입니다. 이를 위해 먼저 쥐의 복부 유선을 박리한 다음, 박리된 유선에서 유선관 홀 마운트를 준비합니다. 다음 단계로 유선을 분석합니다.홀 마운트(hole mounts)를 통해 가시화된 형태학적 구조입니다. 절차의 마지막 단계는 쥐를 촉진하여 유선 종양을 검출하고, 종양의 부피를 mm 단위로 측정하는 것입니다. 캘리퍼를 사용하여, 최종적으로 유선의 구조를 확인하고 현미경 하에서 그 수를 세거나 점수를 매김으로써 유선 형태의 변화를 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다.이 방법은 발달 과정 중의 식이 또는 환경적 노출이 어떻게 유선 분화에 영향을 미치고, 이것이 추후 생애의 유방암 위험으로 이어지는지와 같은 초기 생애 노출 및 유방암 분야의 핵심 질문들에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 시사점은 유방암 예방 영역까지 확장됩니다. 예를 들어, 발달 단계에서의 환경적 및 식이 노출을 연구하고 유선의 변화를 관찰함으로써, 이러한 변화가 유방암 위험의 증가 또는 감소와 관련이 있는지 확인할 수 있습니다.종양 촉진 절차의 시연은 동물 공유 자원 관리자이자 동물 기술자인 Idli Cruz가 맡았습니다. 유선 제거 절차를 시작하려면, 먼저 안락사시킨 동물의 다리 부분을 바늘로 고정하여 표면 보드 위에 등을 대고 눕힙니다. 그런 다음 피부를 에탄올로 닦아냅니다.포셉으로 피부를 약간 들어 올린 후 날카로운 가위로 절개합니다. 5번 유두 쌍 사이에서 시작하여 목 방향으로 피부의 정중선 절개를 수행합니다. 그런 다음, 정중선에서 뒷다리 방향으로 역Y자형 절개를 합니다.역 Y자 절개선의 한쪽 피부를 가위로 절개하여 피부에 부착된 복부 4번 기억샘(memory gland)을 노출시킵니다. 바늘을 사용하여 피부를 표면 보드에 고정함으로써 샘을 완전히 노출시킵니다. 다음으로, 날카로운 가위를 사용하여 기억샘을 피부로부터 분리하여 절제합니다.유두에 가까운 근위부부터 시작하여, 동물의 척추 방향인 샘의 원위부 끝을 향해 진행합니다. 기억샘(memory gland)이 분리되면, 즉시 유리 슬라이드 위에 펼쳐 전체 마운트(whole mount) 표본을 준비합니다. 유리 슬라이드는 샘보다 커야 하며 적절하게 라벨링 되어 있어야 합니다. 유성 마커 또는 다이아몬드 펜을 사용하여, C 두(C two)에서의 원래 크기와 모양에 맞게 샘을 조심스럽게 펼칩니다.슬라이드 위에 샘을 펼친 후, 샘이 슬라이드에 밀착될 수 있도록 테이블 위에 약 30분 동안 그대로 둡니다. 이때 샘이 마르지 않도록 주의하십시오. 다음으로, 슬라이드를 카노아 고정액(Carnoy's fixative)이 담긴 병에 넣고, 흄 후드 내 실온에서 최소 2일 또는 그 이상 보관합니다. 이후 슬라이드를 70% ethanol로 실온에서 1시간 동안 세척합니다.슬라이드를 증류수로 30분 동안 실온에서 헹굽니다. 다음으로, Carmine alum 염색액으로 선 조직을 2일 이상 염색합니다. 슬라이드 뒷면을 확인했을 때 림프절이 완전히 염색되었다면 염색이 완료된 것입니다.슬라이드를 농도가 점차 증가하는 일련의 에탄올 용액으로 각각 1시간 동안 세척합니다. 70% ethanol로 시작하여, 이어서 95% ethanol, 마지막으로 100% ethanol 순으로 진행합니다. 형태학적 분석에 적합한 기술적 수준의 유선 전체 마운트를 얻으려면, 전체 유선의 박리(dissection)와 유선 지방층의 지질 제거(lipid liquidation)라는 두 단계가 필수적입니다.지질을 제거하고 투명도를 높이기 위해 샘을 자일렌에 넣습니다. 이 투명화 과정은 샘의 크기와 지방 함량에 따라 2일 또는 그 이상 소요됩니다. 절대 에탄올로 마지막 세척을 마친 후, 슬라이드를 자일렌에 넣습니다.샘을 실온의 xylene에 최소 2일 동안 그대로 둡니다. 조직의 투명화가 완료되면 커버슬립으로 슬라이드를 봉입합니다. Permount와 같은 봉입제를 사용하여 흄 후드 내에서 슬라이드를 수일간 건조시킨 후 실체 현미경으로 관찰하며, 기억샘 구멍 마운트의 형태는 상피 연장, 말단 싹의 수, 그리고 분화라는 세 가지 종말점을 기준으로 분석합니다.그 후 결과값을 유선암 위험도와 상관 분석합니다. 먼저 상피 연장 정도를 확인하기 위해 사춘기 이전 연령의 유선 조직 홀 마운트 분석법을 시연하겠습니다. 자를 사용하여 유두에서 상피 트리 끝까지의 거리를 mm 단위로 측정하십시오.종말단봉오리(terminal end buds, TEBs)의 개수를 측정하는 두 번째 종점은 악성 변형의 가능성을 반영합니다. 광학 현미경 하에서 유선 상피 나무의 원위단에만 위치하며 가장 큰 구상 구조인 TEB의 개수를 측정하며, 이는 분화를 나타내는 세 번째 종점입니다. 또한 광학 현미경을 통해 전체 마운트 표본을 검사합니다.분화도는 상피 전체에 퍼져 있는 폐포아(alveolar buds)의 점수를 매겨 측정합니다. AB 1 및 AB 2로 지정된 두 가지 폐포아 유형은 각각 선 조직 내의 풍부함에 따라 0점에서 5점까지의 점수를 부여받습니다. 이후 AB 1과 AB 2의 점수 값을 합산하여 최종 분화 점수를 산출합니다.사춘기 이후 H memory gland home mount의 형태학적 분석은 사춘기 이전 H memory gland home mount의 분석과 유사하며, 다음과 같은 차이점이 있습니다. 상피 신장을 조사하려면, 먼저 자를 사용하여 림프절부터 상피 나무의 끝까지의 거리를 mm 단위로 측정하십시오. 둘째, 상피 나무의 끝에서 지방 패드의 끝까지의 거리를 측정하십시오.분화 분석을 위해 밀리미터 단위로도 측정합니다. 사춘기 이후의 H 유선 전체 조직 표본에서, 폐포아 외에 소엽을 광학 현미경으로 0에서 5까지의 척도로 점수를 매깁니다. 이 점수는 유선 내 소엽의 풍부함을 나타냅니다.분화는 두 가지 방식으로 평가합니다. 첫째, AB 1, AB 2 및 LOE의 점수를 합산하여 최종 분화 점수를 산출합니다. 둘째, AB 1과 AB 2 점수의 합계에 대한 LOE 점수의 비율을 계산합니다.ABS는 두 개의 LOE를 분화시키므로, 더 분화된 샘일수록 abs 대비 LOE의 비율이 더 높습니다. 이 절차를 시작하려면, 손바닥으로 등의 전체 몸통을 잡고 검지는 머리 뒤에, 엄지와 중지는 반대편 겨드랑이 아래에 두어 쥐를 고정합니다. 쥐를 뒤집어 등 부분이 위로 오게 한 다음, 촉진하여 기억 종양(memory tumors)이 있는지 확인합니다. 촉진되는 종양은 덩어리처럼 느껴져야 합니다.다음으로, 캘리퍼스를 사용하여 종양의 너비, 길이 및 높이를 측정합니다. 타원체 공식을 사용하여 종양 부피를 계산합니다. 부피는 1/6 π ABC이며, 여기서 A는 너비, B는 길이, C는 높이를 나타냅니다.매주 노트북에 종양의 위치와 크기를 수동으로 기록하십시오. 이 데이터는 나중에 해부 및 적절한 처리 과정을 거친 후 스프레드시트로 옮겨질 것입니다. 메모리 샘 구멍 마운트의 모든 구성 요소는 이 예시와 같이 명확하게 보여야 합니다.반대로, 이것은 잘못 준비된 유선 홀 마운트(hole mount)의 예시입니다. 원위부(distal portion)가 소실되어 유선이 적절하게 박리되지 않았습니다. 또한, 유선이 제대로 신전되지 않았으며 층판 분리(dilapidation)가 일어나지 않았습니다.전체 모습입니다. 여기 기억샘 형태의 변화가 유방암 위험을 어떻게 예측할 수 있는지 보여주는 대표적인 결과가 있습니다. 발암물질인 DMBA에 노출된 쥐에서 말단 N芽(terminal N buds) 또는 TBS의 수를 측정했을 때, 처리군은 대조군에 비해 21일 차에 더 많은 수의 TBS를 나타냈습니다.이러한 유선 조직 형태의 변화는 대조군에 비해 처치군 쥐에서 기억 종양의 비율이 더 높게 나타난 것과 관련이 있었습니다. 이 그래프에 나타난 바와 같습니다. 이 절차를 수행할 때는 유선 구조를 명확하게 관찰할 수 있도록 유선 전체를 절제하고 모든 지질을 제거하는 것이 중요하다는 점을 기억하십시오.이 영상을 시청하고 나면, 유선 전체 조직 마운트(mammary whole mount)를 해부 및 준비하는 방법과 그 형태학적 분석을 통해 유방암 위험을 예측하는 방법을 충분히 이해하게 될 것입니다.

changes-in-mammary-gland-morphology-and-breast-cancer-risk-in-rats

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 문서 DeOme 킬로바이트 개발한 절차를...

내유 상피 이식 절차

이 방법은 생쥐에서 유선 개발 및 기능을 해부하다하고 평가하는 방법에 대해 설명합니다. 우유 방출은 옥시토신 기반 myoepithelial 세포 수축 분석을 사용하여 평가하는 동안 Excised 내유 분비가 전체 마운트를 사용하여 개발의 정도에 대한 평가입니다.

마우스 모델에서 유선 개발 및 기능 평가

이 문서에서 설명하는 간접 면역 형광 프로토콜 탐지 및 마우스 유방 동맥에서 단백질의 현지화 할 수 있습니다. 완전한 방법은 유선 샘플을 제조 형광 현미경에 의해 이미지, 조직 절편을 면역 조직 화학 법을 수행하고, 이미지를 재구성하기 위해 주어진다.

마우스 유선의 냉동 섹션에 간접 면역 형광

문맥 주사를 통해 유선종양 세포를 쥐 간으로 전달하는 수술이 개발되었습니다. 이 모델을 사용하면 간의 종양 세포 유출, 파종, 생존 및 전이성 성장을 포함하여 완전히 면역이 있는 숙주에서 간 전이의 후기 단계를 조사할 수 있습니다.

포탈 정맥 주입 모델 간 전이 유방암의 공부를

설치류의 유선 선생 발달은 일반적으로 기술적 평가를 사용하거나 기본적인 신체적 속성을 측정하여 평가되었습니다. 분지 밀도는 객관적으로 정량화하기 어려운 유방 발달의 지표입니다. 이 프로토콜은 유선의 분기 특성의 정량 평가를위한 신뢰할 수있는 방법을 설명합니다.

Sholl 분석법을 이용한 유방 내 유선 마운트의 분지 밀도 정량화

우리는 성공적으로 슬라이드를 전체 마운트로 고정시킨 유방 조직을 조직 병리학 적 평가를 위해 성공적으로 제거, 가공, 절단 및 착색하는 방법을 개발했습니다. 이 방법은 생식 및 발달 테스트 지침 연구에서 유선 전체 마운트의 수집 및 평가를 촉진 할 수 있습니다.

병변 식별을위한 유선 절개 전체 장착

여기, 우리는 전체, 그대로 마우스의 격리에 대 한 프로토콜 세포 외 기질 (ECM) 식과 ductal 형태를 조사 하는 유 방 땀 샘을 제시. 마우스 #4 복 부 동맥은 8 10 주 오래 된 여성 미 쥐, 중립 버퍼링 된 포 르 말린에 고정, 단면화 및 immunohistochemistry ECM 단백질에 대 한 사용 하 여 스테인드에서 추출 되었다.

세포 외 기질 식 및 선 형태 분석을 그대로, 전체 마우스 유 방 땀 샘의 절연

이 프로토콜의 목표는 마우스 유방 땀샘으로 Cre 발현 아데노바이러스의 자궁 내 주입에 기초한 새로운 유방암 모델링 접근을 기술하는 것입니다. 이 접근은 세포 모형 및 기관 특정 조작을 시간적으로 통제한 방식으로 oncogenic 사건을 둘 다 허용합니다.

마우스 유방 동맥에 Cre 발현 아데노 바이러스의 경막 주사를 통해 유방암 모델링

본 문서는 수용자 동물의 중간 절단 된 흰색 지방 패드로 기증자 쥐 유방 상피 세포를 이식하는 이식 방법을 설명합니다. 이 방법은 유방 상피 발달에 호스트 및/또는 기증자 효력을 검토하기 위하여 이용될 수 있고 사전 정리를 위한 필요를 제거하여, 이 기술의 유용성을 확장합니다.

쥐 유방 상피 세포 이식에 갑피 흰 지방 패드

환자 유래 제노이식(PDX) 모델과 이식 가능한 유전자 조작 마우스 모델은 인체 질환을 충실히 재구성하고 기본 및 번역 형 유방암 연구를 위한 선호 모델입니다. 여기서, 종양 생물학을 연구하고 약물 반응을 평가하기 위해 유방 지방 패드로 유방 종양 단편을 정형전으로 이식하는 방법이 설명된다.

유방암을 위한 전임상 모형으로 유방 종양의 정형소 이식

유방암의 영상 유도 예방 치료를 위해 쥐 유방 유관 나무에 화학적 절제 용액을 전달하는 절차가 설명됩니다. 유방 상피 세포는 유두 개구부에 직접 캐뉼레이션과 70 % 에탄올 기반 절제 용액의 덕트 내 주입을 통해 최소한의 부수적 인 조직 손상으로 표적화 될 수 있습니다.

쥐 모델에서 유방암 예방을 위한 관내 에탄올 기반 절제 치료의 X선 시각화

학습하세요 쥐 유선 절제 및 홀마운트 제작 방법을 통해 유선 형태를 분석하고 유방암 위험을 예측하는 기술을 습득하세요. 이 프로토콜은 발육기 영양 노출이 암 발생에 미치는 영향을 연구하는 데 활용됩니다.

쥐에서 유선의 형태론과 유방암 위험의 변화

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