Name: HIV / AIDS의 종합 및 비용 효과적인 실험실 감시 : 아프리카 역할 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-31T17:00:00.000+00:00
Duration: 23 min 56 s
Description: 학습하세요 남아프리카공화국에서 유세포분석을 활용한 HIV/AIDS 환자 모니터링 방법을. CD4 및 CD45 검사와 바이러스량 측정을 통합하여 자원이 제한된 환경에서도 정확한 진단과 항레트로바이러스 치료 지원이 가능합니다.

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\ \ www.nhls.ac.za 및 http://www.plgcd4 : 특별 감사는 HIV 관련 흐름을 진단 서비스의 국가 조직에 남아 프리카 공화국의 국민 건강 연구소 서비스 (NHLS) (HTTP에 의한 아르 . NET). 기능 연구 Haematology과 분자 의약, Witwatersrand 대학의학과에서 실시되었습니다 (요하네스 버그, 남아 프리카, 부서 책임자, 교수 웬디 스티븐스 지원). 저자는 상업 회사 또는 자금 지원 기관이 발행물에 대한 교부금 지원을받은이 없습니다. 표현 의견은 반드시 Witwatersrand 또는 남아 프리카 NHLS 대학의 기관의 의견을 반영하지 않고 저자의 사람입니다.

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<li>Donnell, D., Kiarie, J., Thomas, K., Baeten, J., Lingappa, J., Cohen, C., Celum, C. ART and risk of heterosexual HIV-1 transmission in HIV-1 serodiscordant African couples: A Multinational Prospective Study. 17th Conference on Retroviruses and Opportunistic Infections, , (2010).</li>
<li>Montaner, J., Wood, E., Kerr, T., Yip, B., Lima, V., Shannon, K., Harrigan, R., Hogg, R. Association of Expanded HAART Coverage with a Decrease in New HIV Diagnoses, Particularly among Injection Drug Users in British Columbia, Canada. 17th Conference on Retroviruses and Opportunistic Infections, , (2010).</li>
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<li>Lawrie, D., Coetzee, L. M., Glencross, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+continuous+quality+control+incorporating+sample-to+sample+assessment+of+optical+alignment%2C+fluorescence+sensitivity+and+volumetric+operation+fo+flow+cytometers%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">A model for continuous quality control incorporating sample-to sample assessment of optical alignment, fluorescence sensitivity and volumetric operation fo flow cytometers.</a> Cytometry B Clin Cytom. 78, 201-208 (2010).</li>
<li>Loken, M. R., Brosnan, J. M., Bach, B. A., Ault, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+optimal+lymphocyte+gates+for+immunophenotyping+by+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry%22%5BJournal%5D)">Establishing optimal lymphocyte gates for immunophenotyping by flow cytometry.</a> Cytometry. 11, 453-459 (1990).</li>
<li>Glencross, D., Scott, L. E., Jani, I. V., Barnett, D., Janossy, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD45-assisted+PanLeucogating+for+accurate%2C+cost-effective+dual-platform+CD4%2B+T-cell+enumeration%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry%22%5BJournal%5D)">CD45-assisted PanLeucogating for accurate, cost-effective dual-platform CD4+ T-cell enumeration.</a> Cytometry. 50, 69-77 (2002).</li>
<li>Glencross, D. K., Janossy, G., Coetzee, L. M., Lawrie, D., Aggett, H. M., Scott, L. E., Sanne, I., McIntyre, J. A., Stevens, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+affordable+PanLeucogated+CD4%2B+testing+with+proactive+internal+and+external+quality+assessment%3A+in+support+of+the+South+African+national+comprehensive+care%2C+treatment+and+management+programme+for+HIV+and+AIDS%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">Large-scale affordable PanLeucogated CD4+ testing with proactive internal and external quality assessment: in support of the South African national comprehensive care, treatment and management programme for HIV and AIDS.</a> Cytometry B Clin Cytom. 74, Suppl 1. S40-S51 (2008).</li>
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<li>Liu, Z., Cumberland, W. G., Hultin, L. E., Prince, H. E., Detels, R., Giorgi, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+CD38+antigen+expression+on+CD8%2B+T+cells+is+a+stronger+marker+for+the+risk+of+chronic+HIV+disease+progression+to+AIDS+and+death+in+the+Multicenter+AIDS+Cohort+Study+than+CD4%2B+cell+count%5BTitle%5D)+AND+%22J+Acquir+Immune+Defic+Syndr+Hum+Retrovirol%22%5BJournal%5D)">Elevated CD38 antigen expression on CD8+ T cells is a stronger marker for the risk of chronic HIV disease progression to AIDS and death in the Multicenter AIDS Cohort Study than CD4+ cell count.</a> J Acquir Immune Defic Syndr Hum Retrovirol. 16, 83-92 (1997).</li>
<li>Glencross, D. K., Janossy, G., Coetzee, L. M., Lawrie, D., Scott, L. E., Sanne, I., McIntyre, J. A., Stevens, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD8%2FCD38+activation+yields+important+clinical+information+of+effective+antiretroviral+therapy%3A+findings+from+the+first+year+of+the+CIPRA-SA+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">CD8/CD38 activation yields important clinical information of effective antiretroviral therapy: findings from the first year of the CIPRA-SA cohort.</a> Cytometry B Clin Cytom. 74, Suppl 1. S131-S140 (2008).</li>
<li>Coetzee, L. M., Tay, S. S., Lawrie, D., Janossy, G., Glencross, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+research+tool+to+routine+test%3A+CD38+monitoring+in+HIV+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">From research tool to routine test: CD38 monitoring in HIV patients.</a> Cytometry B Clin Cytom. 76, 375-384 (2009).</li>
<li>Larsen, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fragile+environments+of+inexpensive+CD4%2B+T-cell+enumeration+in+the+least+developed+countries%3A+strategies+for+accessible+support%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">The fragile environments of inexpensive CD4+ T-cell enumeration in the least developed countries: strategies for accessible support.</a> Cytometry B Clin Cytom. 74, Suppl 1. S107-S116 (2008).</li>
<li>Glencross, D. K., Coetzee, L. M., Lawrie, D., Sanne, I., McIntyre, J. A., Janossy, G., Stevens, W. Longitudinal monitoring of CD38 activation can obviate costly viral load testing in 60% of patients on ART. 11th IUSTI World Congress, , (2009).</li>
<li>Bergeron, M., Lustyik, G., Phaneuf, S., Ding, T., Nicholson, J. K., Janossy, G., Shapiro, H., Barnett, D., Mandy, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stability+of+currently+used+cytometers+facilitates+the+identification+of+pipetting+errors+and+their+volumetric+operation%3A+%22time%22+can+tell+all%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">Stability of currently used cytometers facilitates the identification of pipetting errors and their volumetric operation: "time" can tell all.</a> Cytometry B Clin Cytom. 52, 37-39 (2003).</li>
<li>Coulter, B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCoulter%2C+B+%22Flow+Cytometer+Alignment+Verification+Package+insert+of+Flow-CheckTM+Fluorospheres.+Volume+PN+4276179-LA%22">Flow Cytometer Alignment Verification Package insert of Flow-CheckTM Fluorospheres. Volume PN 4276179-LA</a>. , Beckman Coulter USA. Galway. (2008).</li>
<li>Coulter, B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCoulter%2C+B+%22Flow-SetTM+Fluorospheres+%28Flow+Cytometer+Standardization+Fluorospheres%29.+Package+insert+of+Flow-SetTM+Fluorospheres.+Volume+PN+6607007%22">Flow-SetTM Fluorospheres (Flow Cytometer Standardization Fluorospheres). Package insert of Flow-SetTM Fluorospheres. Volume PN 6607007</a>. , Beckman Coulter USA. Galway. (2007).</li>
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</ol>

CD4 방법에 대한 국제 특허 권리는 여기에 설명된 남아 프리카 NHLS에 의해 현재 BCI, 마이애미, FL, 미국 라이센스하에 실시하고 있습니다.

최근에는 자선 중심과 보조금 - 할당된 프로그램은 높은 HIV 부담으로 지구의 자원을 제한된 영역에서 일부 우수한 임상 관행의 설립을 도왔있다. ART 프로그램은 사망률을 감소에 성공하고 지금은 높은 CD4에서 시작되고있는 것은 2,3로 계산됩니다. 이러한 새로운 조치 HIV 감염 4,5의 확산을 감소 것이라는 징후는 HIV - 특정 백신의 부족에도 불구하고, 이미있다. 우리의 영상 우리는 문서에서 예술에 환자를 모니터링 할 때, 이러한 기술은 더 초점을보다 비용 효율적인 서부 연구소 (목록 1) 수행 루틴 연습에서 관찰보다 될 수 있습니다. 이러한 아프리카 주도의 접근 방식은 잘 ART 취급 HIV 감염, 만성 질병을지고있을 때 한 번에 실험실 서비스의 업그레이 드를 지원하기 위해 필수적인 수 있습니다. 예술의 이러한 모니터링 카운팅 정확한 CD4 및 바이러스 부하 관련 기술보다 더 까다로운 작업이 단순히 ART 16 시작에 대한 결정을 지원하기 위해 임의의 그룹으로 환자를 삽입하기위한 CD4 카운트를 수행할 수 있어야합니다. 이러한 진단의 도움으로, 즉 CD8/CD38 테스트를 사용하면, 그것은 예술 16,19에있는 환자의&gt; 60 %의 VL 관련 모니터링 비용을 줄일 수 있습니다. 이 약을 복용에 VL 리바운드 및 / 또는 환자 준수의 부족의 조기 징후를 데리러 가능성이 높습니다 CD4 개수 37, CD8/CD38 시험 16,17이고, 아니라는 것을 강조하는 것도 중요하다. 조정 비용 효율적인 중앙 서비스의 필수 요소는 작업의 기술 및 의료 측면을 잘 알고있는 전문가 및 학술 고문으로 지원하는 대규모 국가 또는 지역 네트워크의 가용성이다. 이것은 작은 센터에 대한 격려, 교육 및 품질 평가를 제공하고 이들도 &#39;포인트 오브 케어&#39;서비스를 포함할 수 있습니다 남아 프리카 NHLS 네트워크의 활동과 CD4 - PLG.net 교육 제도 33, 36에 의해 증명됩니다. 중요한 것은, 중앙 및 포인트의 케어 연구소의 작업 보완하고 있습니다. 이전에 비용 효율적인 대규모 서비스의 운영뿐만 아니라 말초 연구소 33,38위한 기본 / 고급 교육을 제공의 이중 역할을 가지고 있지만, 후자를받을 수 있습니다 HIV + 환자를 모집하여 예술의 확산을 확인하는 기여 시골 진료소를 포함하여 큰 기지에서 ART. 포인트 - 오브 - 간호 진단 훨씬 더 비쌀 수 있습니다 자동으로 정확하게 38를 보장하지 않기 때문에 몇 가지주의가 필요합니다. 이것은 두 계층 시스템을 유지하고 두 팔을 줄어들 수 있도록하지 않고 두 계층 간의 협력을 촉진하는 것이 현명한 것입니다. 결론적으로, 전염성 질병의 임상 관리의 진단 모니터링 분야에 필요한 비용 절감이 크게 향상된 품질 13,39과 함께 저렴하고 더 나은 조정 현대 기술을 사용하여 APT 서비스를 통해 얻을 수 있습니다. 잘 조직된 국가 (및 지역) 진단 서비스 조항이 더 신중 사전없이는 다양한 국가에서 수입한 그대로 거의 모든 보조금 지원이 즉시 비용 및 / 또는 해보지 않은 방법에 낭비 때 시나리오를 피함으로써 6-8를 지원해야합니다 emptive 건설 감시. 마찬가지로, 지역 의사와 의료 인력의 전체 참여와 임상 치료 실험의 더 유연한 설계는 불필요하게 잦은 및 / 또는 실험실 테스트 3 야심찬 이상의 감소로 연결되어야합니다. 이 정책은 예술에 대한 환자의 조정 임상 / 실험실 평가에 사용할 수있는 정확한 진단 결과를 풀러 활용에 더 많은 기회를 줄 것입니다. 이러한 스마트 진단은 기존의 익숙한 흐름 cytometric 플랫폼 40를 사용하여 결핵의 영역과 leukaemias의 자원 빈곤 국가 8 개척 수 있습니다.

hiv / aids의 종합 및 비용 효과적인 실험실 감시 : 아프리카 역할 모델

Comprehensive &amp; Cost Effective Laboratory Monitoring of HIV/AIDS: an African Role Model

경제 대규모 진단 테스트 사우스 - 아프리카 역할 모델을 대표하는 - 우리는 APT 실험실 서비스에 의해 방지 retroviral 치료 (ART)을 지원에 대한 비디오를 제시한다. 저소득 국가에서 저렴 예술 HIV seropositive 환자의 생존을 위해 전망을 변화했지만 예술의 실험실 감시 및 어떤 비용이 필요가 있는지 의심 없습​​니다 - 상황에 때 병리 서비스의 전반적인 품질이 아직도 매우 낮은 수 있습니다. 적절한 대답은 더 나은 조정과 서양 국가에서 볼 수보다 엄격한 내부 품질 평가와 함께 경제적으로 소리가 서비스를 구축하는 것입니다. Witwatersrand 대학교, 요하네스 버그, 남아 프리카 공화국에서 국민 건강 연구소 서비스 (NHLS - SA)의 위치에 사진이 비디오는, 원래의 2 색 CD4 - CD45 PanLeucoGating 전략 (PLG)를 확장 이러한 조정 계획을 제공합니다. 따라서 비디오 프레 젠 테이션의 여섯 모듈은 하나의 튜브에 haematological 면역 및 바이러스학 관련 테스트를 결합하는 4 색 흐름 cytometric 분석의 단순를 공개. 이 비디오 모듈은 다음과 같습니다 (I) 설정 악기, (ii) 본 샘플 준비가, (3) 절대 계산하고 구슬 카운트 속도하여 각 샘플에 대한 모니터링의 품질을 테스트, 백혈구에 대한 (IV) heamatological CD45 테스트 계산하고 차이, (V) CD4 카운트 및 CD8의 (VI) 활성화 + CD38 표시에 의해 측정된 T 세포, 바이러스 부하와 관련된 매개 변수입니다. 잠재적인 비용 절감 뛰어난 있습니다. 이 협정 NHLS - SA 네트워크 내의 다른 실험실로 기술의 전달도 서양 실험실에 적용되는보다 엄격한 품질 관리와 함께 하루&gt; 800-1000 테스트를 수행 가능성에 대한 주요 예입니다합니다. 전문 어드바이저 실험실 관리자와 현대 의료 기술을 도입에 대한 결정의 의무를 수행 정책 입안자 자주 위치에 워크로드의 큰 부담으로 큰 지역 연구소에서 수행과 같은 최신 기술 세부 정보를 볼 수 없습니다. 따라서이 동영상이 새로운 발전의 세부 사항을 보여줍니다.

HIV / 에이즈 치료에 방지 retroviral 요법은 대규모 남아 프리카에서 모니터합니다. 유동세포계측법는 혈액학 (CD45), 면역학 (CD4) 및 바이러스 부하 링크 CD38 분석을위한 결합입니다. NHLS - SA 실험실, 요하네스 버그에 기록이 현대적인 방법은 자원 제한 진단을위한 역할 모델 역할을, 강한 지역 내부 품질 관리와 비용 효율적인 수 있습니다.

HIV / AIDS의 종합 및 비용 효과적인 실험실 감시 : 아프리카 역할 모델

적절한 실험실 서비스를 통해 항레트로바이러스 치료(ART)를 지원하는 방법에 관한 영상을 제시합니다. 이는 경제적인...을 위한 남아프리카 공화국의 역할 모델을 보여줍니다.

이 분석에 사용되는 단클론 항체는 CD4로 지칭됩니다. 이는 T 림프구를 관찰하기 위한 기본 시약입니다. 이는 HIV에 의해 점진적으로 파괴되는 혈액 내 CD4 양성 림프구의 수를 측정하기 위한 것입니다.따라서 CD4 세포의 수는 환자의 면역 결핍 정도와 관련이 있습니다. 또 다른 시약인 CD45는 모든 백혈구 수를 세는 데 사용되며, 이는 일상적인 분석에서도 유용한 검사입니다. 소위 활성화 마커에 대한 추가 검사를 통해 비용이 매우 높을 수 있는 바이러스 수치 분석 비용을 절감할 수 있습니다.본 연구들은 남아프리카 공화국 요하네스버그의 위트워터스 랜드 대학교(Witwatersrand University)에서 Deborah Glen Cross 교수와 Wendy Stevens 교수의 지도 하에 수행되었습니다. 본 영상의 목적은 두 가지입니다. 첫 번째 파트에서는 잘 갖춰진 실험실에서 CD4, CD45 및 바이러스 부하(viral load) 관련 분석을 어떻게 수행하는지 살펴보겠습니다.이는 6개의 모듈로 구성되어 있습니다. 이러한 기술적 단계들은 이후 남아프리카 공화국 전역의 70개 실험실에서 시행됩니다. 두 번째 부분에서는 매일 수천 건의 검사를 수행하는 대형 중앙 실험실과 환자의 진료 지점에 더 가까운 주변부 실험실 간의 관계에 대해 논의합니다.여기에서의 논의는 더 많은 HIV 감염 환자들이 항레트로바이러스 약물 치료를 받을 수 있도록 지원하는 방법에 초점을 맞추고 있습니다. 제 이름은 Neil Ney이며, 저는 비서로 근무하고 있습니다.저는 유세포 분석 기술자입니다. 남아프리카 공화국 요하네스버그에 있는 General General Hospital에서 근무하고 있습니다. 이것이 유세포 분석 주기입니다.여기서는 유세포 분석기를 사용합니다. Beckman 사의 배기 장치를 설치하였습니다. 기본적으로 라이브러리는 폐액 처리 리듬에 따라 작동합니다.세포 수 측정 및 유세포 분석기 점검과 같이 매일 수행하는 작업들이 있습니다. 결과 아카이브 작업처럼 매주 수행하는 일들이 있으며, 유지 보수와 같이 매달 수행하는 작업들도 있습니다.세척 사이클이 완료되면 장비를 초기화합니다. 실행(run) 버튼을 누릅니다. 랜드 스트립(land strip) 2개와 블레이드 튜브(blade tube) 2개를 실행하거나, 원액 튜브 2개와 증류수 튜브 2개를 실행할 수 있습니다.모든 세척 과정이 완료되면, 가장 먼저 레이저 정렬 상태를 확인하고 전압이 일정하게 유지되는지 모니터링하기 위해 플로어 체크(floor check)를 수행합니다. 아침에 플로어 체크를 수행하여 실패한 경우, 다시 시도해야 합니다. 계속해서 문제가 발생한다면, 메인 FA emissions에 연락하여 장비를 점검받아야 합니다.레이저 정렬이나 전압에 문제가 있을 수 있기 때문입니다. 저희는 매일 아침 일반 및 고농도 면역 분석 시험을 수행합니다. 이러한 시험은 최소 8시간 교대 근무 시간 내에 수행될 수 있습니다.이제 high immuno cho를 실행하겠습니다. 세포 수가 범위 내에 있는지 확인하겠습니다. 제 이름은 Denise Dory입니다.저는 요하네스버그 병원 내 도시 실험실의 관리자이며, 국가적인 역할 또한 수행하고 있습니다. 저는 저희 실험실뿐만 아니라 남아프리카 공화국 국가 전체 수준에서 CD4 수치 측정의 정확성과 재현성을 보장하기 위한 품질 보증 절차를 수립하는 일에 참여해 왔습니다.CD4 샘플 4개를 준비하는 방법은 매우 간단합니다. 서로 다른 색상의 두 가지 단일클론 항체인 CD4와 CD45를 사용합니다. 이 항체들은 보통 두 항체가 모두 포함된 하나의 갈색 병에 미리 혼합되어 제공됩니다.먼저, 깨끗한 튜브 바닥에 CD 45 CD four 항체 10 µL를 준비합니다. 다음 단계는 혈액을 첨가하는 것입니다. 본 방법에서는 혈액 100 µL를 사용합니다.정확하게 준비되어야 합니다. 그 다음으로 혈액과 항체를 함께 혼합합니다. 이 준비 과정의 마지막 단계는 응집 제제를 첨가하는 것입니다.보시는 바와 같이, 용혈(LY) 시약을 첨가하면 혈액이 불투명한 붉은색 용액에서 튜브 너머가 실제로 보일 정도의 용혈된 용액으로 변합니다. 이는 수동으로 수행할 수 있는 매우 간단한 방법이지만, 대부분의 실험실처럼 대량의 검체를 처리하는 경우에는 이와 같이 파이펫팅 과정을 대신 수행해 주는 자동화 시스템을 사용하게 됩니다. 하지만 비드 카운트(bead count)를 이용한다면 반드시 자동화 시스템을 통해 준비할 필요는 없습니다. 왜냐하면 우리가 첨가한 비드(bead)를 통해 검체가 올바르게 처리되었는지 확인할 수 있기 때문입니다.이 샘플을 분석기에 넣기 전 마지막 단계는 이와 같은 튜브 기반으로 제공되는 비드 100 µL를 첨가하는 것입니다. 그러면 샘플을 유세포 분석기에 로드할 준비가 완료됩니다. 제 이름은 sit MoFA이며, 이 유세포 분석 실험실의 품질 보증 담당관입니다. 저는 유세포 분석을 매우 좋아합니다.저희는 매우 훌륭한 장비인 epics excels를 보유하고 있으며, 이 장비들은 실제로 매우 안정적입니다. 저희는 장비의 안정성을 확인하기 위해 비드(beads)를 추가합니다. 그렇다면 유량 및 카운트율(flow count rate)은 어떻게 모니터링할까요?낮은 계수율은 전적으로 팀의 역량에 달려 있습니다. 최근에는 기기와 시료의 자동 준비 과정을 도입하기 시작했지만, 유량 계수율의 모니터링은 여전히 유효한 QC 관리 항목입니다. 당사의 유량 계수 결과는 유량 계수율이 얼마나 완벽한지를 보여주는 직선 형태로 나타나며, 이는 여전히 유효합니다.여전히 일부 이상치가 존재하며, 이러한 이상치는 피펫팅 오류로 인해 발생할 수 있습니다. 하지만 피펫팅 오류의 가능성을 배제한다면, 기기가 정상적으로 작동하고 있는지 확인해야 하며, 이후 엔지니어를 불러 기기를 수리하여 계속 사용할 수 있도록 조치해야 합니다. 이분은 Beckman Ter의 Zo ly 씨이며, 저희 기술 담당자입니다.문제가 발생할 때마다 방문하며, 또한 샘플들이 기기를 통해 분석되기 때문에 6개월마다 유지보수를 위해 방문합니다. QA 담당자로서 저의 임무는 유량 측정률을 모니터링하는 이 화면을 항상 확인하는 것입니다. 따라서 이상치가 발생하면 즉시 대응합니다.이상치가 있다는 것을 확인할 수 있습니다. 현재 작업량이 매우 많기 때문에 실제로 5대의 기기가 가동 중이며, 여기 두 개는 획득된 샘플이 아님을 보여줍니다. 이는 각 캐러셀의 마지막에 수행하는 과정일 뿐이지만, 여전히 일부 이상치가 관찰됩니다.예를 들어, Epic Excel 4 장비의 이 부분을 보겠습니다. 이 부분은 반드시 결과가 캐러셀 전체로 전송되기 전에 즉시 수리되어야 하며, 리셋 후에는 표준화(standardization) 전에 즉시 구동되어야 합니다. 요약하자면, 우리 장비들이 최적으로 작동하고 있음을 확인했습니다.이후에 이어질 CD4 수치의 정확성을 보장하기 위해 비드 계수의 재현성을 확인하였습니다. 기기의 레이저 정렬 상태를 점검하였으며, 두 단계의 대조군을 실행하여 계수의 정확도를 확인하였습니다. 이 샘플에는 내용물이 없으며, CD4와 CD45가 포함되어 있습니다. 저희 분석에서 CD45가 왜 그렇게 중요한지 설명해 드리겠습니다.CD 45은 샘플 내의 모든 백혈구를 표지하는 세포 마커입니다. 이는 CD 45를 사용하여 결정한 백혈구 수와 전혈 분석기(full blood count analyzer)를 통해 얻은 백혈구 수를 비교할 수 있게 해주므로 본 과정에서 중요합니다. 여기 예시를 보시면, 이는 LH seven 50 Beckman Coter 분석기의 전혈 분석 결과 출력물이며, 전체 백혈구를 염색하는 CD 45를 이용한 유세포 분석기(flow cytometer) 측정 결과 백혈구 수가 7.1임을 확인할 수 있습니다.우리는 7.175라는 매우 유사한 CD 가중치 세포 수를 얻었습니다. 우리는 가중치 세포 원뿔의 차이가 5% 미만인 값을 허용 범위로 간주합니다. CD 45를 포함함으로써 얻는 또 다른 추가적인 장점은 백혈구에 대한 CD 45의 차등 염색입니다. 유세포 분석기에서 우리는 측방 산란광(side scatter), 전방 산란광(forward scatter) 및 CD 45의 세 가지 지표를 사용할 수 있습니다.여기 이 히스토그램을 보시면, 림프구가 명확하게 정의되어 있습니다. 이들은 CD 45 염색이 가장 강하게 나타나는 경향이 있으며, 복잡성이 가장 낮아 가장 단순한 세포이자 CD 45 발현이 가장 높습니다. 다음 세포군은 단구입니다.단핵구는 CD 45 발현이 약간 더 낮지만, 림프구보다 더 복잡한 양상을 보입니다. 그다음 주요 세포군으로, 정상 샘플에서 가장 큰 비중을 차지하는 세포군은 과립구입니다. 이 세포군들이 말초 혈액에서 가장 흔하게 관찰되는 혈구들입니다.유세포 분석기에서 CD 45 염색을 사용하는 것의 장점은 첫째, CD4 카운트, 절대 백혈구 수 카운트 및 자동 분획 카운트를 유세포 분석기로 수행할 수 있다는 점입니다. CD 45 염색을 통해 더 오랜 기간 동안 분획 카운트를 수행할 수 있습니다.CD 45 발현을 이용하는 경우 최대 48시간까지 수행할 수 있습니다. 이 방법으로 진행한 분획 계산(differential counts)은 다른 방법들에 비해 객관성이 떨어집니다.예를 들어, 수동 차등 계수의 표준 방법(gold standard)을 통해 백혈병 세포군을 식별할 수 있으며, 이는 현재 화면에 표시된 범백혈구 표지자 CD의 기초가 됩니다. 백혈구의 CD 45 발현이라는 장점은 지금까지 혈액학 실험실에서 충분히 활용되지 않았습니다. 현재 백혈구 차등 계수를 얻기 위해 서로 다른 기술을 사용하는 다양한 전혈 분석기들이 사용되고 있습니다.유세포 분석기에서 CD 45를 사용하는 것은 서로 다른 혈액 분석기 간의 감별 계수를 표준화하는 매우 효율적인 방법이 될 것입니다. 이는 모든 다른 혈액 분석기들이 비교 대상로 삼을 수 있는 단일한 방법이 되기 때문입니다. 안녕하세요, 저는 Linda Sier 박사입니다.저는 CD4 및 CD8 검사를 모두 포함하는 HIV 연구에 적극적으로 참여하고 있습니다. T 림프구는 CD4 양성 세포와 CD8 양성 세포로 나눌 수 있으며, CD4 양성 세포는 치료 중인 환자의 HIV 상태를 모니터링하는 데 사용됩니다. 그러나 CD4의 문제점은 림프구에만 배타적으로 발현되는 것이 아니라 다른 세포에서도 CD4가 발현된다는 점입니다.PLG 프로토콜에서는 단핵구와 림프구를 효과적으로 구별하는 세 가지 서로 다른 측면을 살펴봅니다. 첫째, 복잡성(complexity) 또는 과립성(granularity)을 이용하는데, 복잡성을 확인하면 림프구와 단핵구를 해당 목적으로 분리할 수 있음을 알 수 있습니다. 또한 CD 45 C를 사용하여 림프구 집단과 단핵구 집단을 구별할 수 있습니다.CD4 발현은 림프구에서 강하게 나타나며, 단핵구에서는 복잡도(complexity)와 함께 분석했을 때 중간 수준으로 나타납니다. CD4 강양성 림프구와 CD4 약양성 단핵구를 구분하는 것은 매우 쉬우며, 림프구와 단핵구가 관찰되는 정상 환자 샘플의 예시를 보여드리겠습니다. 이 환자의 CD4 수치는 700 이상이었습니다. CD4 수치가 53인 환자의 경우를 살펴보면, CD4 수치가 낮음에도 불구하고 양성 림프구와 CD4 양성 단핵구 사이의 구분이 여전히 매우 뚜렷함을 확인할 수 있습니다.PLG 방법을 사용하여 하루에 많은 횟수의 분석을 수행할 수 있습니다. 현재 저희 실험실에서는 하루에 약 1,000개의 샘플을 분석하고 있으며, 이는 주당 5,000개의 샘플에 해당합니다. 저희가 2주 동안 수행하는 작업량은 일반적인 1년 치 작업량과 거의 맞먹습니다.남아프리카 공화국 내의 런던 병원에는 70개의 NNRS 실험실이 있으며, 이 실험실들은 1년 동안 약 198만 건의 CD4 검사를 수행합니다. 안녕하세요, 저는 Kni입니다. 지금은 휴식 시간입니다만, 휴식이 끝난 후 CD38과 바이러스 수치(viral load)에 대해 설명해 드리겠습니다.기본적으로 유세포 분석기가 세포 수를 측정할 수 있다는 점은 모두 알고 계시겠지만, 세포 표면에 있는 표면 분자의 수도 측정할 수 있습니다. 이는 형광 강도를 측정함으로써 수행됩니다. 앞서 언급한 표준 조건 하에서, PLG 방법으로 알려진 CD4 및 CD45를 사용합니다.우리는 두 가지 검사를 하나의 튜브에 넣어 한 단계 더 나아가고자 합니다. 이를 CD 4 45 PLG 검사법이라고 합니다. 우리는 이것을 활성화 마커 또는 다른 바이러스 부하 관련 파라미터인 CD 38에 대한 2색 검사와 결합할 것입니다.미국 연구진은 4색 면역형광법을 사용하며, CD4, CD45, CD8 및 CD3를 이용합니다. 반면 저희는 CD4, CD45, CD8을 사용하고, CD3 대신 CD38을 사용합니다.먼저, 환자의 기초 CD 38 수치를 측정하는 것이 중요하다는 점에 유의해야 합니다. 기초 CD 38 수치는 해당 환자에 대한 대조군 역할을 하며, 이는 바이러스 수치가 높은 시점인 치료 시작 전, 즉 환자가 높은 바이러스 수치와 낮은 CD 4 수치로 내원했을 때 측정하게 됩니다.또한 CD 38 수치가 증가하는 CD 38 blips에도 주의를 기울여야 합니다. 여기 이 환자의 사례를 보면 CD 38 MFI가 갑자기 증가한 것을 확인할 수 있으며, 동시에 바이러스 부하(viral load) 또한 이에 상응하여 증가했음을 볼 수 있습니다. 혹시 환자가 당시에 약물을 복용하지 않았을 가능성이 있을까요?이 시점에서 환자가 수치가 정상으로 돌아왔기 때문에 치료를 중단했을 가능성이 있습니다. 그렇다면 왜 이 테스트 결과에 만족하는 것일까요? 우선, 이 방법은 두 가지 테스트 방법을 하나의 튜브에서 결합했다는 점에 의의가 있습니다.둘째로, 이 방법은 CD 45 백혈구 수, CD4 수뿐만 아니라 활성화 마커까지 제공하므로 비용 효율적입니다. 현재 저희 실험실에 있는 장비들을 그대로 사용할 수 있어 새로운 장비를 도입할 필요가 없으며, 직원들이 샘플 준비 및 게이팅(gating) 방법을 쉽게 익힐 수 있습니다. 또한 현재는 환자가 CD4 수 측정을 위해 방문할 때마다 바이러스 부하 검사도 함께 수행되고 있으나, 이 방법을 통해 바이러스 부하 검사 비용 또한 절감될 것입니다.하지만 CD 38을 모니터링하고 38 MFI의 증가가 확인될 때에만 환자 샘플을 바이러스 부하 검사에 보낼 수 있습니다. PLG를 사용하는 남아공 국가 프로그램인 NHLE CD four 프로그램의 성능과 관련하여, 저희는 실험실을 많이 지원하고 있습니다. 따라서 모든 표준화된 절차와 원격 실험실로 분산된 모든 품질 관리를 조정하는 중앙 시설을 운영하고 있습니다.이들은 시스템을 운용하며 중앙 실험실의 지원을 통해 아프리카 지역의 외부 정도 관리(EQA) 결과 보고를 수행합니다. 또한 추가적이고 지속적인 교육 이니셔티브와 지원 서비스가 제공됩니다. 결과적으로 우리 프로그램 그룹은 다른 국가 프로그램들보다 훨씬 더 우수한 성과를 내고 있으며, 개별 실험실 내뿐만 아니라 실험실 간 정밀도에서도 50% 이상의 유의미한 차이를 보입니다.따라서 이는 예를 들어 버클리 연구소의 CD4와 더반 연구소의 CD4가 당사의 표준화된 표면을 사용할 때 매우 유사하게 나타날 것임을 의미합니다. 이러한 개념을 적용하여 이를 현장 진단(point of care)으로 분산화하는 것입니다. 둘째, 이는 하나의 조정 단위를 통해 현장 진단이 용이해질 것임을 의미합니다.이 헌신적인 연구자들이 보여준 이러한 노력들이 단순히 이러한 결과를 낼 수 있는 구형 유세포 분석기 한 대의 성과가 아니라 개념적인 진보라는 점은 자명합니다. 동일한 개념을 Ton Dickinson 기기나 Partec 기기, 또는 Accur나 다른 회사에서 제작한 기기 등 다른 장비에도 적용할 수 있습니다. 실제로 인도와 같은 다른 국가들의 최근 개발 동향은 그들이 동일한 기술을 활용하여 자체적인 유세포 분석 산업을 시작해야 함을 보여주고 있습니다.여기서 유일하게 중요한 문제는 예외적인 협조였습니다. CD4 수치만이 유일한 목표라고 생각하는 분들이 계신다면 그것은 오해입니다. 왜냐하면 여기서 우리는 백혈구 수, 절대 수치, 백혈구 분획 수치를 다루었기 때문입니다. 우리는 CD4뿐만 아니라 활성화 마커도 함께 다루었으며, 이로 인해 해당 분석법은 그에 상응하는 바이러스 부하 분석법보다 비용이 저렴해졌습니다.그럼에도 불구하고, 이는 이러한 활성화 마커와 바이러스 수치 간의 경쟁이 아니라, 바이러스 수치 분석 비용을 절감할 수 있는 상호 보완적인 방식의 구성입니다. 이러한 분석법들은 과학적으로 검증된 조사 방법이며, 임상의는 환자의 치료 순응도가 의심되거나, 약물 효능에 의문이 있을 때, 또는 환자에게 내성이 생기기 시작하여 치료법을 변경해야 할 때 이러한 분석을 고려해야 합니다. 핵심적인 결론은 이제 우수한 품질 관리가 이루어지고 있다는 점이며, 이는 마지막 지점으로 이어집니다. 즉, 유세포 분석과 품질 관리를 제공하고 주변부 실험실을 평가할 수 있는 우수한 중앙 실험실을 갖추는 것이 훨씬 더 효율적이며, 이를 통해 주변부 실험실들이 더 많은 환자를 항레트로바이러스 치료 체계로 유입시키는 것이 가능해질 것입니다.따라서, 우리는 여기서 아프리카 토양으로부터 비롯된 새로운 발전을 목격하고 있습니다. 경청해 주셔서 대단히 감사합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

플라즈마 및 시퀀싱에서 HIV - 1 RNA 수준을 Quantifying하면 단일 HIV - 1 검출 한계 (50-75 사본 / ML) 아래 바이러스성로드와 개인의 genomes가 어렵습니다. 여기 우리는 안정적으로 0.3 복사 / ML에 HIV - 1 RNA를 측정하고 매우 낮은 바이러스성로드와 샘플에서 단일 게놈 시퀀싱에 의해 바이러스 genomes를 증폭하는 방법을 실시간 PCR 분석을 사용하여 플라즈마 바이러스 RNA를 추출하고 계량하는 방법에 대해 설명합니다.

표준 임상 Assays에 의해 탐지의 한도 이하 바이러스성로드와 HIV 감염된 개인의 확장 및 HIV - 1 RNA를 Quantifying

CD4 열거 방법, α-테스트는 신속하고 정확한 CD4 카운트를 제공하기 위해 전체 타액을 사용하는 설명되어 있습니다. α-테스트 비용 동전과 같은 단클론 항체, 계측, 냉동, 샘플 운송뿐만 아니라 수집 및 혈액의 처리와 같은 기술 교육, 값비싼 시약의 필요성을 없애줍니다.

α-테스트 : 전체 타액을 사용하여 빠른 셀 프리 CD4의 열거

항 레트로 바이러스 치료 (ART)를 실패한 HIV-1에 감염된 개인에 대한 약제 내성 검사는 미래의 치료법을 안내하고 치료 결과를 향상시킬 수 있습니다. 높은 HIV의 유행하지만 자원 제한 설정에서 최적화 개인과 집단의 건강 결과는 궁극적으로 저렴하고 접근 약제 내성 유전자형과 해석 방법이 필요합니다.

자원 제한 설정에 대한 경제적 인 HIV-1 약제 내성 모니터링 방법

여기에서 우리는 세포 독성을 설명하고 화합물의 신속하고 정확한 검사를 허용 한 라운드 감염의 분석은 세포 독성 (CC 50)을 결정하고, WT 및 약물 HIV-1 저항에 대한 IC 50 값.

HIV 역전사 및 인테그라 제 억제제의 빠른 검사

HIV-1 발병기전은 바이러스 특성과 숙주 유전적 요인에 의해 정의됩니다. 여기에서는 gag 유전자 염기서열 변이가 바이러스의 체외 복제 능력에 미치는 영향을 평가하기 위해 재현 가능한 측정을 할 수 있는 강력한 방법을 설명합니다.

제한 효소 기반의 복제 방법을 평가하기 위해<em&gt; 시험관</em&gt; HIV-1 서브 타입 C 개그 - MJ4 키메라 바이러스의 복제 능력

Provided는 열 순환기 또는 현미경 및 스테이지 히터를 사용하여 DNA 샘플의 초기 농도를 정량화하기 위한 실시간 재조합효소 중합효소 증폭 분석을 개발하기 위한 프로토콜입니다. 또한 내부 양성 대조군의 개발도 설명되어 있습니다. 원시 실시간 형광 데이터를 처리하기 위한 스크립트가 제공됩니다.

내부 양성 대조군과 양적 재조합 효소 중합 효소 증폭 분석 개발

인간 동시 감염은 체외에서 복제하기 어렵습니다. 그러나 인간 말라리아 기생충은 HIV에 자연적으로 감염된 갓 분리된 인간 말초 혈액 단핵 세포와 마찬가지로 체외에서 쉽게 배양할 수 있습니다. 이는 HIV 동시 감염의 맥락에서 말라리아 기생충에 대한 조기 면역 반응을 연구하기 위한 훌륭한 모델을 제공합니다.

<em&gt; 체외</em&gt; HIV 공동 감염의 맥락에서 말라리아에 면역 반응을 측정하기위한 모델

전체 길이 개별 proviral 시퀀싱 (뒤집기) 증폭 및 단일 전체 길이 (손상 및 결함) HIV-1 proviruses 근처의 시퀀싱에 대 한 효율적이 고 높은 처리량 방법 제공 하 고 그들의 잠재력의 결정에 대 한 허용 복제-역량입니다. 튀기기 잠재 HIV-1 저수지 시퀀싱 하도록 분석 하는 이전 실험의 한계를 극복 한다.

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여기서, 우리는 나노 유체 장치에 있는 급성 사건 및 생산적인 HIV-1 감염을 위해 단 하나 세포가 감시되는 프로토콜을 제시합니다. 이미징 데이터는 바이러스 호스트 수용체 상호 작용 및 신호 경로 역학을 정의합니다. 이것은 나노 유체 고처리량 종방향 단세포 배양 및 이미징을 위한 첫번째 방법이다 운동및 분자 상호 작용을 연구하기 위하여.

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치아 표면에 형성 Biofilms는 매우 복잡하고 그들의 아키텍처를 조절 상수 타고난 및 외인성 환경 문제, 생리 및 transcriptome에 노출되어 있습니다. 우리는 조성, 구조 조직 및 biofilm 연구의 다른 분야에 적용할 수 있습니다 경구 biofilms의 유전자 발현을 검사하는 도구 상자를 개발했습니다.

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학습하세요 남아프리카공화국에서 유세포분석을 활용한 HIV/AIDS 환자 모니터링 방법을. CD4 및 CD45 검사와 바이러스량 측정을 통합하여 자원이 제한된 환경에서도 정확한 진단과 항레트로바이러스 치료 지원이 가능합니다.

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