Name: 사이 Synergism을 맡은 이후로 발광 생물 이미징을 사용하여 연쇄상 구균 pneumoniae와 인플루엔자 바이러스 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-14T11:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 47 s
Description: 배우세요 생체 발광 이미징을 사용하여 유아 마우스에서 Streptococcus pneumoniae와 인플루엔자 바이러스의 공감염 시너지 효과를 추적하는 방법을. 이 기술은 동일한 동물에서 감염 진행을 실시간으로 모니터링할 수 있습니다.

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저자는 기술 데이빗 브릴즈 (버밍엄, AL, 미국의 앨라배마 대학)에서 조언을 인정하고 싶습니다. 우리는 설명된 실험에 대한 유용한 제안 및 토론 동물 복지에 관한과 윤리 및 간섭 기준 및 인간 끝 지점의 개발을위한 이베트 첸, 멜버른 대학의 동물 복지 담당관, 그리고 데이비드 테일러, 동물 시설 관리자를, 감사하고 싶습니다 이 원고 인치 Odilia Wijburg과 패트 릭 읽기가 NHMRC RD 라이트 원정대에 의해 지원됩니다, 커스티 단기은 GSK 대학원 지원 교부금 및 퍼지 장학금으로 지원됩니다.

<ol><li>Brundage, J. F., Shanks, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deaths+from+bacterial+pneumonia+during+1918-19+influenza+pandemic%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Deaths from bacterial pneumonia during 1918-19 influenza pandemic.</a> Emerg Infect Dis. 14, 1193-1199 (2008).</li>
<li>Petersdorf, R. G., Fusco, J. J., Harter, D. H., Albrink, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+infections+complicating+Asian+influenza%5BTitle%5D)+AND+%22AMA+Arch+Intern+Med%22%5BJournal%5D)">Pulmonary infections complicating Asian influenza.</a> AMA Arch Intern Med. 103, 262-272 (1959).</li>
<li>Diavatopoulos, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+A+virus+facilitates+Streptococcus+pneumoniae+transmission+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Faseb+J%22%5BJournal%5D)">Influenza A virus facilitates Streptococcus pneumoniae transmission and disease.</a> Faseb J. , (2010).</li>
<li>Orihuela, C. J., Gao, G., Francis, K. P., Yu, J., Tuomanen, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+contributions+of+pneumococcal+virulence+factors+to+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific contributions of pneumococcal virulence factors to pathogenesis.</a> J Infect Dis. 190, 1661-1669 (2004).</li>
<li>Kadurugamuwa, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+monitoring+of+pneumococcal+meningitis+and+evaluation+of+treatment+efficacy+in+an+experimental+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Noninvasive monitoring of pneumococcal meningitis and evaluation of treatment efficacy in an experimental mouse model.</a> Mol Imaging. 4, 137-142 (2005).</li>
<li>Smith, M. W., Schmidt, J. E., Rehg, J. E., Orihuela, C. J., McCullers, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+pro-+and+anti-inflammatory+molecules+in+a+mouse+model+of+pneumococcal+pneumonia+after+influenza%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Induction of pro- and anti-inflammatory molecules in a mouse model of pneumococcal pneumonia after influenza.</a> Comp Med. 57, 82-89 (2007).</li>
<li>Owen, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nasal-associated+lymphoid+tissue+and+olfactory+epithelium+as+portals+of+entry+for+Burkholderia+pseudomallei+in+murine+melioidosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Nasal-associated lymphoid tissue and olfactory epithelium as portals of entry for Burkholderia pseudomallei in murine melioidosis.</a> J Infect Dis. 199, 1761-1770 (2009).</li>
<li>Luker, G. D., Leib, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Luciferase+real-time+bioluminescence+imaging+for+the+study+of+viral+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Luciferase real-time bioluminescence imaging for the study of viral pathogenesis.</a> Methods Mol Biol. 292, 285-296 (2005).</li>
<li>Hutchens, M., Luker, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+bioluminescence+imaging+to+the+study+of+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Applications of bioluminescence imaging to the study of infectious diseases.</a> Cell Microbiol. 9, 2315-2322 (2007).</li>
</ol>

이 비디오 문서의 생산은 칼리퍼 생명 과학에 의해 후원되었다.

생체내에서 IVIS 시스템과 이미징은 미생물의 pathogenesis 4, 6-9의 실시간 시각화을 허용하는 독특한 방법이다. 여기, 우리는 S. 사이 synergism을 이해하기 위해이 기술의 응용 프로그램을 표시 유아 마우스의 pneumoniae 및 독감 바이러스. 이 기법의 비침습 특성으로 인해, 우리는 시간이 지남에 따라 각각의 마우스에 감염의 진행을 모니터 할 수있다. 이것은 우리가 공동 보관되어 유아 마우스 세 사이 폐렴 전송의 속도론을 문서에 사용할 수 있습니다. 이 기법의 비침습 자연 실험마다 적은 동물을 사용하는 연구자 수 있으며 따라서 동물의 사용량을 줄일 수 있습니다. 그것은 몸 속에 감염의 이전에 알려지지 않은 사이트로 감염의 보급을 시각화뿐만 아니라 쉽게 해부 (예 : 중간 귀)에 의해 샘플링되지 사이트 IVIS 기계를 사용하는 것도 가능합니다. 이미징 실험을 시작하기 전에, 우리는 발광 생물 EF3030 변형의 식민지 수준은 조직 homogenates에 가능한 개수를 열거하여 부모 EF3030 변형의 식민지 수준을 비교할 수 있다고 밝혔다. 또한, 우리는 먼저 독감 바이러스에 감염이의 nasopharynx의 발광 생물 EF3030 증가 하중 결과 상위 EF3030 변형 (결과가 표시되지 않음)와 시연으로 동물을 식민지 확인. IVIS 기술이 작동하기 쉬운 데이터를 이해하기 쉽게 재현할 생성하지만, 실험은 신중하게 기술의 감도와 유틸리티가 극대화되도록 설계해야합니다. 예를 들어, IVIS 카메라의 감도는 우리의 경험에서, 폐에서 발생하는 발광 생물 신호에 대한 검출 한계를 증가 조직 8의 깊이와 불투명도에 영향을받습니다. 또한, 어두운 모피와 색소 피부가 많은 8 (사나이 답게 마우스에 비해) 10 배 등에 의해 빛의 전송을 줄여줍니다. 이 방법을 개발하는 동안, 우리는 5~14일 된 C57BL / 6 마우스와 함께 사용하기 위해이 프로토콜을 최적화하고 이후 IVIS가 발광 생물 S. 함께 이십일 된 C57BL / 6 마우스의 식민지를 감지하는 데 사용할 수있는 것을 보여준 pneumoniae EF3030. 이러한 실험은 누드 또는 BALB / C 마우스에서 수행하는 경우 그러나, 신호 검출이 증가 수 있습니다. 그럼에도 불구하고, IVIS 카메라는 새로운 접근 방식, 모니터 특징 궁극적으로 독감 바이러스 감염 다음과 폐렴 구균 질환의 생체내 개발에 이해를 나타냅니다.

사이 synergism을 맡은 이후로 발광 생물 이미징을 사용하여 연쇄상 구균 pneumoniae</em유아 마우스에서>와 인플루엔자 바이러스

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

세계적으로 약 50 만명 죽인 1,918 인플루엔자 바이러스 유행 기간 동안 사망자의 대부분은 인플루엔자 바이러스에 혼자와 감염의 결과되지 않았습니다. 대신, 대부분의 개인은 predominately 박테리아 연쇄상 구균 pneumoniae (pneumococcus)에 의한, 보조 세균 감염에 굴복 할 생각입니다. 독감 바이러스와 pneumococcus로 인한 감염 사이의 시너지 관계는 이후 (1, 2 검토)뿐만 아니라 바이러스의 계절 동안 발생으로 1957 아시아 독감 바이러스 유행성 동안 관찰되었습니다. 여기, 우리는 동시에 독감 바이러스와 S.의 결과로 증가 병적 상태에 관여 수있는 메커니즘 (들)을 조사하는 데 사용하는 프로토콜을 설명 pneumoniae 감염. 우리는 안정을 유아 murine 모델을 개발하고 reproducibly S. 함께 식민지 마우스의 독감 바이러스 감염의 효과를 입증했습니다 pneumoniae. 이 프로토콜을 사용하여, 우리는 생체내 이미징 3 사용 공동 위치해, 신생아 생쥐 간의 폐렴 전송의 반응 속도론에 처음으로 통찰력을 제공합니다.

독감 바이러스에 동시 감염 asymptomatic 동안 침투 폐렴 구균 질환의 유도에 연루 요인 중 하나입니다<em&gt; 연쇄상 구균 pneumoniae</em&gt; 운송. 여기이 두 호흡기 병원균 사이 synergism을 조사하기 위해 유아 마우스를 사용하여 혼합 감염 방법을 설명합니다.

사이 Synergism을 맡은 이후로 발광 생물 이미징을 사용하여 연쇄상 구균 pneumoniae</em유아 마우스에서>와 인플루엔자 바이러스

전 세계적으로 약 5,000만 명의 사망자를 낸 1918년 인플루엔자 바이러스 팬데믹 당시, 사망자의 대부분은 ...의 결과가 아니었습니다.

using-bioluminescent-imaging-to-investigate-synergism-between

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

생활 동물 세균성 감염의 bioluminescence 이미징을위한 방법은 설명되어 있습니다. 병원균은 살아있는 동물에 감염 광학 온 몸이 이미징을 허용 루시페라제 표현을 수정합니다. 동물 모델은 루시페라제 표현 병원균에 감염과 질병의 발생 과정은 bioluminescence 이미징에 의해 실시간으로 시각하실 수 있습니다.

마우스의 이미지 세균 감염에 루시페라제를 사용하여

출처: de Vries, C. R. 외, 만성 Pseudomonas aeruginosa 상처 감염의 지연 접종 모델. J. Vis. 경험 (2020).이 영상은 생체 마우스 모델에서 박테리아 감염 진행을 모니터링하는 생물발광 영상 기법을 시연합니다. luxABCDE 리포터 시스템으로 설계된 병원성 박테리아는 감염 부위에서 빛을 방출하여 대사적으로 활발한 박테리아를 시각화할 수 있게 합니다. 쥐를 시간에 따라 영상화함으로써 연구자들은 비침습적으로 감염 역학을 추적하고 생물발광 신호 강도를 정량화할 수 있습니다.

쥐 박테리아 감염의 생물발광 영상

출처: Seman, B. G. 외 그람 음성 세균성 패혈증의 신생아 영상 모델. J. Vis. 경험 (2020)이 영상은 캡슐화된 생물발광 박테리아를 이용한 신생아 마우스 모델을 시연하여 전신 감염을 연구합니다. 신생아 새끼들은 고용량 또는 저용량 박테리아 현탁액을 주사한 후 산후 관리를 위해 어미에게 돌려보냅니다. 캡슐화된 박테리아는 조기 면역 검출을 피하고 전신적으로 퍼지며, 발광 영상을 통해 시간이 지남에 따라 시각화됩니다. 이 모델은 신생아 쥐에서 감염 진행을 비침습적으로 추적할 수 있게 합니다.

캡슐화된 생물발광 박테리아를 이용한 신생아 쥐 감염 모델링

출처: Valentine, M. E. 외, Pseudomonas aeruginosa 에서 인프레임 유전자 결실 돌연변이 생성과 감염 단순 마우스 모델에서의 병원성 감감 검사. J. Vis. Exp. (2020)이 영상은 생체 쥐 모델에서 박테리아 감염을 모니터링하기 위해 생물발광 기반 영상 기법을 시연합니다. 순차적 생물발광 및 X선 영상은 숙주 전역에 퍼진 감염을 실시간으로 시각화하고 해부학적 위치를 파악할 수 있게 합니다.

생물발광을 이용한 쥐 모델에서 박테리아 감염의 실시간 영상

출처: Lenhard, A. 외. 바이러스 공동 감염 시 폐 렴 구균이 집착자에서 병원체로 전환되는 마우스 모델은 연령에 따른 악화된 질병을 재현합니다. J. Vis. 경험 (2022)이 영상은 인플루엔자 바이러스가 폐 렴구 균을 정착자에서 병원체로 전환시키는 쥐 공동 감염 모델을 보여줍니다. 박테리아 정착, 바이러스 감염, 질병 진행에 관련된 단계를 개괄합니다.

바이러스 공동 감염 후 폐렴구 균 의 병원성 전이를 연구하기 위한 마우스 모델

이 비디오는 재조합 루시페라아제와 형광 단백질 발현 바이리포터 인플루엔자 A 바이러스를 사용하여 마우스 모델에서 바이러스 감염을 추적하는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 생체 내 및 생체 외 연구를 모두 가능하게 하여 연구자가 바이러스 역학 및 중재의 효과에 대한 통찰력을 얻을 수 있도록 합니다.

바이러스 감염을 추적하기 위한 Luciferase-Fluorescent Reporter 인플루엔자 바이러스

폐렴 구균은 중증 지역 사회 획득 폐렴과 전 세계적으로 2 백만 이상의 죽음에 책임을 일으키는 주요 병원균이다. 적합성 또는 병독성에서 내포 세균성 요인의 영향은 생물 발광 박테리아를 이용한 급성 마우스 폐렴이나 균​​혈증 모델에서 실시간으로 모니터링 할 수있다.

생물 발광 박테리아를 사용하여 실시간으로 급성 폐렴 마우스 모델에서 폐렴 구균 독성 요인의 영향에 따라

이 연구에서는 선물이 인플루엔자 바이러스 감염 후 murine tracheal 점 막에서 2 광자 intravital 이미징 및 세포 상호 작용 분석을 수행 하는 프로토콜. 이 프로토콜은 호흡기 감염 시 면역 세포 역학을 공부 하는 연구자와 관련이 있을 것입니다.

영상 셀 상호 작용 Tracheal 점 막에서 2 광자 Intravital 현미경 검사 법을 사용 하 여 인플루엔자 바이러스 감염 중

인플루엔자 A 바이러스 (IAV)는 연간 전염병과 간헐적 인 전염병을 일으키는 전염성 호흡기 병원체입니다. 여기서, 우리는 새로운 재조합 루시퍼라제 및 형광 발현 바이 리포터 IAV(BIRFLU)를 사용하여 생체 내에서 바이러스 감염을 추적하는 프로토콜을 기술한다. 이 접근법은 연구원에게 생체 내에서 IAV를 연구할 수 있는 훌륭한 도구를 제공합니다.

루시퍼라제-형광 리포터 인플루엔자 바이러스 감염 의 실시간 이미징 및 정량화

생체 발광 대장균 O1:K1:H7을 가진 신생아 마우스의 감염은 중요한 폐 염증 및 폐 병리를 가진 패혈증 감염을 초래합니다. 여기서는 전신 세균성 부담, 염증 성 프로파일링 및 폐 조직 병리학의 열거와 병행하여 세로 내 인트라비셔널 이미징을 사용하여 신생아 패혈증을 모델링하고 추가로 연구하는 절차를 설명합니다.

그람 음성 세균 패혈증의 신생아 화상 진찰 모형

이 논문은 바이러스 감염 동안 폐렴구균이 무증상 집락 상태에서 질병을 유발하는 병원체로 전환하기 위한 새로운 마우스 모델을 설명합니다. 이 모델은 질병 진행의 여러 단계 동안 다양한 숙주에서 다미생물 및 숙주-병원체 상호작용을 연구하는 데 쉽게 적용할 수 있습니다.

바이러스 동시 감염 시 콜로니자에서 병원체로 Streptococcus pneumoniae 의 전환을 위한 마우스 모델은 연령 악화 질병을 요약합니다.

배우세요 생체 발광 이미징을 사용하여 유아 마우스에서 Streptococcus pneumoniae와 인플루엔자 바이러스의 공감염 시너지 효과를 추적하는 방법을. 이 기술은 동일한 동물에서 감염 진행을 실시간으로 모니터링할 수 있습니다.

사이 Synergism을 맡은 이후로 발광 생물 이미징을 사용하여 연쇄상 구균 pneumoniae와 인플루엔자 바이러스

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