Name: E16 랫 태아의 Utero의 심실 주입 및 Electroporation에 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 19 min 4 s
Description: 배우세요 E16 랫 태아의 자궁내 심실 주입 및 전기천공 기술을 통해 유전자 조작을 수행하는 방법을. 이 기술은 발달 신경과학 연구에서 유전자 기능을 연구하는 데 필수적인 도구입니다.

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e16 랫 태아의 utero의 심실 주입 및 electroporation에

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E16 Rat Embryos

- utero에서 배아 쥐의 네크로 텍스의 인 - 생체내 주입과 electroporation은 측면 뇌실의 벽면 라이닝 개인 progenitors의 조작을위한 강력한 도구를 제공합니다. 이 기술은 현재 널리 이상 - 표현이나 유전자를 쓰러뜨린 및 세포 증식, 이주 및 분화에 미치는 영향을 관찰하여 corticogenesis에 관련된 프로세스를 연구하는 데 사용됩니다. 전통적인 녹아웃 전략에 비해에서 - utero의 electroporation은 특정 시간적 창 동안 세포의 인구를 조작하는 빠른 방법을 제공합니다. 이 비디오 프로토콜에서는, 우리는 수술에 대한 쥐 준비 laporatomy 통해 자궁 뿔이 노출, 개발 배아의 측면 심실로 DNA를 주입, 측면 벽을 라이닝 progenitors로 DNA를 electroporating하고, 동물을 돌보는을위한 실험 방법을 설명 후 수술. 우리 연구실이 동영상과 같이 그러나 그것이 가장 일반적으로 E16에서 수행, E15 - E21 쥐에서 수술이 프로토콜을 사용합니다.

E16 랫 태아의 Utero의 심실 주입 및 Electroporation에

쥐 배아 신피질의 자궁 내 생체 내 주입 및 전기천공법은 개별 전구세포를 조작할 수 있는 강력한 도구를 제공하며...

안녕하세요, 저는 William Ti입니다. Arnold Creek Stein Lab에서 나왔습니다. 오늘은 저와 동료들이 E 16 쥐 배아의 자궁 내 주입 방법을 보여드리겠습니다. 안녕하세요, 제 이름은 Laura Elias입니다.오늘은 오늘 진행할 뇌실 내 주입과 전기천공법을 위한 미세주입 피펫 준비 및 피펫 로딩 방법을 보여드리겠습니다. 또한 E 16 쥐 배아에서 뇌실 내 주입과 전기천공법을 수행하는 방법도 보여드리겠습니다. 쥐는 유전자 조작을 쉽게 수행할 수 없는 시스템이기 때문에, 쥐의 자궁 내 주입 및 전기천공법이 특히 유용합니다.이 절차에는 여러 가지 수술 도구가 사용됩니다. 큐렛(curette), 두 쌍의 어딘 포셉(addin forceps)(하나는 톱니 모양이고, 다른 하나는 끝부분에 작은 치형이 있는 것), 그리고 지혈집게(hemostats) 한 쌍을 사용합니다.이것은 가위이며, 이어서 두 개의 스테이플러를 사용합니다. 이것은 쥐(rat)에게 사용하는 더 큰 크기의 스테이플러입니다. 이것은 생쥐(mice)에게 사용하는 더 작은 크기의 스테이플러로, 7호 스테이플을 사용하며, 다른 하나는 9호 스테이플을 사용하며 두 제품 모두 스프링 방식입니다.수술을 돕기 위해 사용하는 도구 중 일부로, 저희는 더블 헤드가 장착된 단순한 광섬유 광원을 사용합니다. 체온 유지를 위해 따뜻한 가열수가 순환되는 가열 패드를 사용합니다. 작업 표면에는 BTX 사의 전기천공 시스템을 사용합니다.배아의 크기에 따라 사용할 수 있도록 몇 가지 다른 크기의 패들을 준비했습니다. 파란색 면이 양극(+) 측입니다. 이제 주입용 피펫의 끝을 비스듬하게 깎는 베벨링 작업을 진행하겠습니다.이는 매우 중요한데, 피펫의 입구가 DNA를 로딩할 수 있을 만큼 충분히 커야 하면서도, 주입 시 배아에 손상을 주지 않도록 매우 날카로워야 하기 때문입니다. 주입 과정에서 배아가 손상되면 사망률이 훨씬 높아지게 되며, 이는 바람직하지 않은 결과입니다.이 과정은 본 수술에서 매우 중요한 단계입니다. 먼저, 회전하고 있는 베벨링 스톤(beveling stone) 위에 물을 약간 뿌려줍니다. 그런 다음, 여기 있는 스틱을 하나 사용하겠습니다.방금 뽑아낸 피펫을 테이프를 이용해 이 스틱에 고정하겠습니다. 그리고 마이크로 매니퓰레이터 중 하나를 사용하여 피펫을 베벨 부분에 고정하고 베벨링이 가능하도록 하겠습니다. 이를 배치한 후, 현미경을 사용하여 피펫의

in-utero-intraventricular-injection-electroporation-e16-rat

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

E15 마우스 태아의 Utero의 심실 주입 및 Electroporation에

utero의 electroporation에서 생체내에의 연결 전구 세포를 transfecting위한 가치있는 방법입니다. 전극과 electroporation의 발달 timepoint의 위치에 따라, 피질 세포의 특정 하위 집합을 타겟팅할 수 있습니다. 타겟 세포는 다음 생체내 또는 유전 변경의 효과에 대한 체외에서 분석할 수 있습니다.

utero에서 Electroporation은 두피 뉴런의 하위 집합의 유전자 기능을 학습에 대한 기본의 연결을 문화 뒤에

utero의 electroporation에서 개발 중추 신경계 (CNS)에서 공간과 temporally 제어 방식으로 신속한 유전자 전달 수 있습니다. 여기서 우리는 telencephalon, diencephalon 및 망막을 포함한 여러 배아 CNS의 도메인으로 표현 구조를 제공하는 데 사용할 수있는 utero의 electroporation 프로토콜에 매우 적응을 설명합니다.

사용하여 여러 개의 CNS 준주로 효율적인 유전자 전달 Utero에서 Electroporation

Midgestation 마우스 태아의 아래쪽 사방 정계 립의 시험 관내 Electroporation에

체세포 줄기 세포의 확장을 제어하는​​ 것은 자신의 연구와 치료에 사용 hampering 결정하는 주요 요인입니다. 여기 시간적 마우스 뇌에서 생성 된 뉴런의 수를 증가하는 데 사용할 수있는 개발 및 성인기 동안 신경 줄기 세포 확장을 제어 할 수있는 시스템을 설명합니다.

의 배아와 성인 신경 줄기 세포의 확장<em&gt; 자궁에</em&gt; Electroporation 또는 바이러스 성 Stereotaxic 주입

렌티바이러스 벡터 기반의 쥐 수정 배아 형질도입

이 비디오는 자궁 내 전기천공법을 사용하여 쥐 배아의 소뇌 신경 세포에 플라스미드 DNA를 전달하는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 정상적인 뇌 발달에서 유전자의 생체 내 기능과 종양 진행 중 뉴런 세포의 유전자 발현 변화를 이해하는 데 유용합니다.

자궁 전기천공법 기반 유전자 전달: 쥐 배아의 배아 소뇌 세포에 플라스미드 DNA를 주입하는 기술

유전자는 성인 동물의 행동이나 신경 병리학의 최신 연구에 신경 연결의 빠르고 목표 수정을 가능하게하기 위해, E16의 자궁 일렉트로 (IUE)의를 통해 피질 또는 쥐의 해마의 개발 과정에서 조작 할 수 있습니다. IUE 성공의 제어를위한 생체 영상의 출생은 공동 형질 루시 페라 제를 활성화 생물 발광에 의해 수행된다.

몸에 붙이기 형질 전환 쥐의 발생에 의해<em&gt; 자궁 내</em&gt; 일렉트로 및<em&gt; 생체 내</em&gt; 생물 발광 상영

이 프로토콜은 자궁 내 전기천공법을 통해 C57BL/6 중추신경계의 다른 영역을 구체적으로 transfection하는 방법을 자세히 설명합니다. 이 프로토콜에는 피질, 해마, 시상, 시상하부, 외측 중격 핵 및 선조체로 발달하는 영역의 형질주입에 대한 자세한 지침이 포함되어 있습니다.

코어 텍스, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, 횡 중격 Nucleus-과 줄무늬 별<em&gt; 자궁 내</em&gt; C57BL / 6 마​​우스에서 Electroporation에

뇌 결 heterotopia (PNH) 성인에서 대뇌 피 질의 개발 (MCD)의 기형의 가장 일반적인 형태는 그러나 그것의 유전으로 가장 산발적 인 경우 알 수 없는 남아 있다. 우리는 최근 MCDs에 대 한 비 발한 후보자 유전자를 식별 하 고 직접 그들의 원인이 역할 비보를 확인 하는 전략을 개발 했습니다.

배열 CGH, 전체 exome 시퀀싱과 설치류에 Utero에서 Electroporation 뇌 기형에 대 한 원인 유전자를 식별 하는 새로운 전략

배우세요 E16 랫 태아의 자궁내 심실 주입 및 전기천공 기술을 통해 유전자 조작을 수행하는 방법을. 이 기술은 발달 신경과학 연구에서 유전자 기능을 연구하는 데 필수적인 도구입니다.

E16 랫 태아의 Utero의 심실 주입 및 Electroporation에

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