Name: 쥐에서 Active 지연 유형 과민성 (DTH)의 유도 및 모니터링 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 26 s
Description: 배우세요 Lewis 쥐에서 KLH 항원과 Freund's 보조제를 이용한 지연 유형 과민성(DTH) 유도 및 면역 반응 모니터링 방법. 이 기법은 T 림프구 매개 염증 연구에 활용됩니다.

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1. 유제의 준비 <ol><li> ovalbumin는 파상풍 toxoid, 수용액의 열쇠 림펫 hemocyanin ....)은 프로 인드의 도움이되는를 완료하는 데 추가 : 유제는 항원의 1:1 혼합물 (DTH는 다양한 항원을 유도 할 수있다. 그것은 도움이되는가 아닌 다른 방법으로 라운드에 항원을 추가하는 것이 매우 중요합니다! </li><li> 결정과 유제를 주입하면 폐기물이 많이있다, 그래서 항상 당신이 필요로했던 것보다 1.5 또는 2 회 이상 준비합니다. </li><li> 2 MG / ML 솔루션을 준비하는 호수에서 항원을 디졸브. 당신이 집계를 풀어 싶지 않아으로 필터링하지 않음! </li><li> 고속에서 관과 소용돌이에 프로 인드의 도움이되는 H37Ra (Difco, 카탈로그 # 231131)을 넣어 완성. vortexing 동안 드롭하여 항원 드롭을 추가합니다. 5 분 더 항원의 모든 추가, 소용돌이. 혼합물은 흰색으로 바뀝니다해야합니다. </li><li> 유리 주사기에 감광 유제를 넣고 (피셔 카탈로그 # 14-825 - 17L) 18G 다리를 사용하여 다른 유리 주사기에 연결합니다. 그것이 (5-10 분) 하드된다 때까지 다른 주사기에서 유제를 보내드립니다. 이 5 ML 주사기를 사용하는 것이 좋습니다. 유제 5 개 이상 ML이 필요한 경우 5 ML 주사기 여러 세트를 사용합니다. </li><li> 유제는 3 주 동안 4 ° C에서 주사기에 저장할 수 있습니다. </li></ol> 2. 쥐를 예방 접종 <ol><li> 몇 분 동안 주사기에 감광 유제를 혼용하여 주사에 사용되는 주사기로 전송할 수 있습니다. 23G 바늘과 Luer - 록 팁 3 ML의 주사기를 사용하여 꼬리의 기지에서 1-2 사이트에 subcutaneously 200 ML을 주사. </li></ol> 3. 뒤에 항원과 도전 <ol><li> 이레 예방 접종 후, 쥐의 백업 2 장소를 면도하고 다른 장소에서 한 자리하고 생리 (또는없는 항원)에 1 MG / ML 항원 솔루션의 intradermally 20 ML을 주입. 당신이 염증 반응을 강화 집계를 느슨한 수 있으므로, 항원 솔루션을 필터링하지 마십시오. </li><li> 쥐나는 움직임을 피하기 위해 anesthesized해야합니다. intradermally 27G ½ 바늘 1 ML의 주사기를 사용하여 솔루션을 주사. 주사 바늘 사이를 변경합니다. 참고 : 도전 대신 더 정확한 측정을 위해 다시의 귀를 날개로 이루어 질 수 있습니다. 에서 동영상을 참조 <a href="/index/Details.stp?ID=325">https://www.jove.com/index/Details.stp?ID=325</a> </li></ol> 4. DTH 측정 <ol><li> 주사 사이트는 빨개과 염증의 신호로 붓기 시작합니다. 통치자 또는 더 나은 아직, 캘리퍼스를 사용하여 염증이 지역의 직경을 측정합니다. 최대 붓기 24 72 시간 사이에 발생한다. </li></ol>

<ol>
	<li>Beeton, C., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+and+monitoring+of+adoptive+delayed-type+hypersensitivity+in+rats.">Induction and monitoring of adoptive delayed-type hypersensitivity in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 8, (2007).</li></ol>

저자 Airmid 주식 회사에 대한 공동 설립자 및 컨설턴트 아르

DTH 반응보다 정확한 측정을 위해 우리는 귀의 날개에있는 항원과 쥐 도전하는 것이 좋습니다. 반응은 다음 관련 항원 - 도전 귀가하거나, 생리 혼자 또는없는 항원과 도전 귀 사이에 붓기 귀에 차이로 측정할 수 있습니다. 귀에에 도전 데모는 1로 표시됩니다.

무균 솔루션 시약과 주사기를 사용하십시오. 유리 주사기와 18G 다리는 autoclaved 수 있습니다. 처음으로 시약을 취급하기 전에 재료 데이터 시트를 읽고 적절한 보호 장비를 착용하십시오.

쥐에서 active 지연 유형 과민성 (dth)의 유도 및 모니터링

Induction and Monitoring of Active Delayed Type Hypersensitivity (DTH) in Rats

지연 유형 과민성 (DTH)은 면역 시스템이 준비하는되어있는 대한 항원의 주사의 사이트를 침투 CCR7 - 효과기 기억 T의 lymphocytes로 인한 염증 반응이다. 염증 반응은 antigenic 도전의 사이트의 빨갛게과 팽창이 특징입니다. 그것은 면역 억제제의 생체내 효능에 결정하는 편리한 모델입니다. 피부 DTH는 항원에 특정한 T의 lymphocytes의 입양 전송 또는 항원, 그리고 주어진 피부 영역에서 염증 반응을 유발하는 항원과 이후의 intradermal 도전과 적극적인 예방 접종을 통해 유도된 수 있습니다. DTH 반응은 예를 들어 ovalbumin, 투베르쿨린,​​ 파상풍 toxoid, 또​​는 열쇠 림펫 hemocyanin (KLH)에 대한 다양한 항원을 유도하실 수 있습니다. 여기 루이스 쥐에서 활약 DTH 반응을 유도하는 방법을 보여줍니다. 우리가 먼저 프로 인드의 도움이되는을 완료에 KLH,이자 우리의 항원의 물 - 인 - 오일 에멀젼을 준비하고 쥐에 subcutaneously이 유제를 주입합니다. 이것은 KLH로 이동 메모리 T 세포를 개발하는 면역 체계를 주요 것입니다. 세븐 일 후 우리는 반대편에, 한쪽과 ovalbumin,없는 항원과 KLH와 함께 뒷면에 intradermally 쥐에 도전합니다. 염증 반응이 16~72시간 나중에 볼 수 있으며 빨간색과 부풀어 지역은 DTH 심각의 표시로 측정됩니다.

지연 유형 과민성 (DTH)는 CCR7 - 효과기 기억 T의 lymphocytes로 인한 염증 반응이다. 여기 루이스 쥐에 적극적으로 DTH를 유발하고 염증 반응을 모니터링하는 방법을 보여줍니다.

쥐에서 Active 지연 유형 과민성 (DTH)의 유도 및 모니터링

지연형 과민반응(DTH)은 ...의 주입 부위로 침투하는 CCR7- 작동 기억 T 림프구에 의해 매개되는 염증 반응입니다.

안녕하세요, 저는 Christine Beaton입니다. 저는 UCI 생리학 및 생물물리학과의 George Chandy 연구실에서 근무하고 있습니다. 오늘은 쥐에서 활성 DTH를 유도하는 방법을 보여드리겠습니다.이를 위해 항원인 KLH와 프레온(Freund) 보조제를 사용하여 에멀젼을 준비하겠습니다. 그다음 이 에멀젼을 루이스 쥐(Lewis Rats)의 꼬리 기저부에 주입하겠습니다. 이렇게 하면 쥐에게 KLH에 대한 면역 반응이 유도됩니다. 일주일 후, 쥐에게 KLH를 다시 투여하여 챌린지를 수행하고, 부종의 정도를 측정하여 지연형 과민 반응(DTH reaction)을 측정하겠습니다.그곳이 유발 부위이며, 저희는 실험실에서 DTH와 같은 염증 반응에 대한 PO 채널 차단제의 효과를 확인하기 위해 이를 사용하고 있습니다. 여기 에멀젼을 만드는 데 사용할 불완전 프라이젠트 보조제(incomplete Freund's adjuvant)가 있습니다. 완전 프라이젠트 보조제(complete Freund's adjuvant)를 사용할 수도 있습니다.오늘 항원으로 사용할 KLH입니다. 여기 2 mg/mL 농도의 PBS 용액이 준비되어 있습니다. 이 5 mL 주사기를 사용하여 불완전 트랜스 보조제(incomplete trans adjuvant)를 취해 15 mL 튜브로 옮기겠습니다. 그다음 튜브를 볼텍스 믹서(vortex) 위에 올리고, 볼텍싱을 하면서 항원을 보조제에 한 방울씩 첨가하겠습니다.그런 다음 5분 동안 더 볼텍싱합니다. 작업이 완료되면, 혼합물을 5 mL 유리 시린지에 채웁니다. 보조제(adjuvant)가 플라스틱을 부식시키는 경향이 있으므로 반드시 유리 시린지를 사용해야 합니다. 또한, 에멀젼을 제조하는 데에는 5 mL 시린지가 가장 적합하다는 것을 확인했습니다.더 작거나 크면 적절하지 않습니다. 혼합물이 담긴 시린지를 준비한 후, 금속 브리지를 사용하여 이 유리 시린지를 다른 5 mL 유리 시린지와 연결하겠습니다. 그런 다음 시린지에 압력을 가해 혼합물이 한 시린지에서 다른 시린지로 최대한 빠르게 이동하게 하며, 에멀전이 매우 단단해질 때까지 이 과정을 반복하면 주입 준비가 완료됩니다.이제 보조제를 2.5 mL 넣겠습니다. 보조제를 더 쉽게 추출하기 위해 공기를 주입한 후, 모든 보조제를 튜브에 넣습니다. 이제 보조제 2.5 mL를 취해 넣고 볼텍스 믹서로 섞어주겠습니다.면역증강제(adjuvant)를 2.5 µL

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

지연 유형 과민성 (DTH)는 CCR7 - 효과기 기억 T (TEM) lymphocytes로 인한 염증 반응이다. 여기서 우리는, 항원 특정 TEM 세포를 활성화 루이스 쥐에서 입양 DTH를 유발하고 염증 반응을 모니터링하는 방법을 보여줍니다.

고양이의 입양 지연 유형 과민성의 유도 및 모니터링

여기서 우리는 쥐의 귀에 지연 유형 과민성 (DTH) 반응의 진행 상황을 유도하고 기록하는 방법을 보여줍니다. 이것은 이펙터 / 메모리 T 세포 응답의 2 광자 이미징을위한 쥐의 귀 조직의 준비 시범옵니다.

입양 DTH의 유도 후 귀에 영상 효과기 메모리 T 세포

이 동영상은 어떻게 조직 병리학하여 심각도를 평가하기 위해 SJL 마우스 및 면역 hypophysitis를 유도하는 방법을 보여줍니다.

SJL 마우스의 실험적 면역 Hypophysitis의 유도

우리는 잠재적으로 이식 거부의 높은 위험없이 이식 후 면역 억제제의 철수를 결정하는 데 사용할 수있는 유용한 진단 분석을 설명합니다. 분석은 지연 형 과민 반응의 원리를 사용하여받는 사람이 탑재 된 두 기증자 특정 이펙터 및 규제 면역 반응의 정확한 평가를 제공합니다.

항원 특정 규제 트랜스 생체 지연 형 과민 분석

비만 세포와 호염기구의 활성화를 특징으로 알레르기 반응은, IgE 항체의 가교 및 염증 매개 물질의 방출에 의해 구동된다. 알레르기 반응의 정량적 인 평가는 알레르겐 공격 후 혈관 투과성의 변화를 모니터하는 에반스 블루 염료를 사용함으로써 달성 될 수있다.

마우스에 현지 아나필락시스 측정

여기 우리는 수동 조직의 알레르기 (PSA) 및 적외선 온도계를 사용 하 여 음식 알레르기 마우스 모델에서 몸 온도 차이 정확 하 게 측정 하는 새로운 방법을 제시. 이 절차는 이전 PSA 결과에 정확 하 게 중복 되었습니다.

수동 체계 알레르기 및 식품 알레르기 평가 하는 동안 적외선 온도계를 사용 하 여 마우스 신체 온도 측정

우리는이 질병에서 볼 수있는 성별 차이를 포함하여 약물 유발 자가면역 간염의 발병 기전을 연구하는 데 활용할 수있는 BALB / c 마우스의 생체 내 예방 접종, 번역 형 간염 모델을 설명합니다. 우리는이 모델이 생체 내 및 시험관 내 실험 기술을 사용하여 재현 가능한 분석을 시연하는 방법을 설명 할 것입니다.

병원성 메커니즘 연구를위한 BALB / c 마우스에서 약물 유도,자가 면역 간염의 유도

접촉 과민증 (CHS)은 알레르기 성 접촉 피부염 (ACD)의 뮤린 실험 모델입니다. CHS는 가슴과 복부의 면도 된 피부를 페인팅하여 반응성 합텐으로 감작을 기반으로하며, 희석 된 합텐으로 후속 귀 피부 챌린지를 통해 다양한 방법으로 평가되는 붓기 반응을 일으 킵니다.

알레르기 성 접촉 피부염의 뮤린 모델로서의 접촉 과민증

이 연구는 표피(EC) 면역을 통해 생쥐의 면역 반응을 조절하는 피부의 역할을 보여줍니다. 단백질 항원을 사용한 EC 면역은 병원체 관련 분자 패턴과 결합할 때 접촉 과민증 또는 피부 유도 억제에서 면역 반응을 억제할 수 있습니다. EC 면역은 면역 요법에 대한 효과적이고 주사 바늘이 없는 접근 방식으로서 가능성을 보여줍니다.

표피 유도 면역조절의 쥐 모델(Murine Model of Epicutanely-Induced Immunomodulation)

telomerase의 촉매 subunit을 분리하기 위해 노력 TERT은 구조적 연구를위한 충분한 수량에 10 년 이상 제한된 성공을 만나왔다. 여기, 우리는 재조합 Tribolium castaneum TERT의 절연 (대한 방법을...

활성 T.의 체외의 Reconstitution에서 castaneum의 Telomerase

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쥐에서 Active 지연 유형 과민성 (DTH)의 유도 및 모니터링

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