Name: E15 마우스 태아의 Utero의 심실 주입 및 Electroporation에 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 26 min 17 s
Description: 배우세요 E15 마우스 태아의 자궁내 심실 주입 및 전기천공 기법을 이용한 유전자 조작 방법을. 이 기술은 발달 신경과학 연구에서 플라스미드 DNA를 뇌 조직에 효과적으로 도입하여 세포 운명과 기능을 연구하는 데 활용됩니다.

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e15 마우스 태아의 utero의 심실 주입 및 electroporation에

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E15 Mouse Embryos

- utero에서 인 - 생체내 배아 마우스 네크로 텍스의 주입과 electroporation은 측면 뇌실의 벽면 라이닝 개인 progenitors의 조작을위한 강력한 도구를 제공합니다. 이 기술은 현재 널리 이상 - 표현이나 유전자를 쓰러뜨린 및 세포 증식, 이주 및 분화에 미치는 영향을 관찰하여 corticogenesis에 관련된 프로세스를 연구하는 데 사용됩니다. 전통적인 녹아웃 전략에 비해에서 - utero의 electroporation은 특정 시간적 창 동안 세포의 인구를 조작하는 빠른 방법을 제공합니다. 이 비디오 프로토콜에서는, 수술 쥐를을 준비 laporatomy 통해 자궁 뿔이 노출, 개발 배아의 측면 심실로 DNA를 주입, 측면 벽을 라이닝 progenitors로 DNA를 electroporating, 동물 수술을 돌보는을위한 실험 방법을 설명합니다 . 이 동영상과 같이 저희 연구실은 E13 - E16 생쥐에서 수술이 프로토콜을 사용하지만, 그것은 가장 일반적으로, E15에서 수행됩니다.

E15 마우스 태아의 Utero의 심실 주입 및 Electroporation에

배아 생쥐 신피질의 자궁 내 생체 내 주입 및 전기천공법은 개별 전구세포를 조작하기 위한 강력한 도구를 제공하며...

안녕하세요, Krete Lab의 William Tis입니다. 오늘은 저와 동료들이 E 15 마우스 배아의 자궁 내 주사법을 보여드리겠습니다. 안녕하세요, 제 이름은 Laura Elias입니다.오늘은 뇌실 내 주입 및 전기천공법을 위해 미세주입 피펫을 준비하고 적재하는 방법을 보여드리겠습니다. 제 이름은 David Castaneda이며, 오늘은 생쥐 배아의 in vivo in utero 주입 과정을 돕겠습니다. 우리는 발달 중인 생쥐 배아의 외측 뇌실에 플라스미드 DNA를 주입할 것입니다.우리는 배아의 CE 피질을 표적으로 하여, 추후 발달 과정에서 뉴런이 될 글리아 세포에서 서로 다른 분자들이 발현되도록 합니다. 이러한 자궁 내 주사를 수행할 때 사용해야 할 몇 가지 중요한 도구들이 있으며, 지금부터 보여드리겠습니다. 우리는 프리어(freer)와 몇 개의 애딘 핀셋(addin forceps)을 사용합니다.하나는 톱니 모양의 한 쌍이고, 다른 하나는 끝부분에 작은 이빨이 있는 한 쌍입니다. 지혈鉗(hemostats) 한 쌍을 사용합니다. 이것은 가위입니다.그런 다음 이 두 종류의 스테이플러를 사용합니다. 큰 것은 쥐(rats)에게 사용하며, 작은 것은 생쥐(mice)에게 사용합니다.7번 스테이플을 사용하며, 여기서는 9번 스테이플을 사용하고 있으며 이는 단순히 스프링 하중 방식입니다. 수술을 돕기 위해 여기에서 사용하는 장비 중 일부로는, 더블 헤드가 장착된 단순한 광섬유 광원을 사용합니다. 온도를 유지하기 위해 따뜻한 물이 순환되는 가열 패드를 사용합니다.작업대에는 BTX 사의 전기천공 시스템을 사용합니다. 배아의 크기에 따라 선택하여 사용할 수 있도록 몇 가지 다른 크기의 패들을 구비하고 있습니다. 파란색 면이 양극(+)입니다.마우스의 경우 isoflurane 기화기를 사용합니다. 이를 통해 모체와 배아의 생존율이 높아지는 것을 확인하였습니다. 또한, 이를 통해 동물을 매우 빠르고 통제된 방식으로 의식 상태에서 넣고 뺄 수 있습니다.따라서 저희는 이 방법이 매우 유용하다는 것을 알게 되었습니다. 이제 주입용 피펫의 끝을 비스듬하게 깎아(bevel) 보겠습니다. 이는 DNA를 로딩할 수 있을 만큼 피펫의 개구부를 충분히 크게 만드는 동시에, 주입 시 배아에 손상을 주지 않도록 매우 날카롭게 만들기 위해 매우 중요합니다.또한 주입 시 배아에 손상을 입히면 치사율이 훨씬 높아지게 됩니다. 이는 바람직하지 않은 결과

in-utero-intraventricular-injection-electroporation-e15-mouse

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

E16 랫 태아의 Utero의 심실 주입 및 Electroporation에

마우스에 utero 서바이벌 수술 개발하는 동안 유전자 발현의 분자 조작 수 있습니다. 여기 우리는 배아 하루 마우스 뇌 (E) 9.5에 r​​etroviral 벡터의 주사를 안내 고주파 초음파 이미징의 사용을 설명합니다.

마우스 Forebrain에 초음파 유도 Microinjection Utero에서 E9.5에서

utero의 electroporation에서 개발 중추 신경계 (CNS)에서 공간과 temporally 제어 방식으로 신속한 유전자 전달 수 있습니다. 여기서 우리는 telencephalon, diencephalon 및 망막을 포함한 여러 배아 CNS의 도메인으로 표현 구조를 제공하는 데 사용할 수있는 utero의 electroporation 프로토콜에 매우 적응을 설명합니다.

사용하여 여러 개의 CNS 준주로 효율적인 유전자 전달 Utero에서 Electroporation

개발 뇌 마우스로 유전자 전송 방법은 고유한 수술 방법과 전극의 특별한 모양을 사용하여 설명합니다. 이 독특한 기술은 두뇌 개발을 공부에 많은 도움이됩니다 neuroscientists temporally과 공간 플라스미드 DNA의 transfection 수 있습니다.

마우스 Utero에 Electroporation : 통제 Spatiotemporal 진 Transfection

체세포 줄기 세포의 확장을 제어하는​​ 것은 자신의 연구와 치료에 사용 hampering 결정하는 주요 요인입니다. 여기 시간적 마우스 뇌에서 생성 된 뉴런의 수를 증가하는 데 사용할 수있는 개발 및 성인기 동안 신경 줄기 세포 확장을 제어 할 수있는 시스템을 설명합니다.

의 배아와 성인 신경 줄기 세포의 확장<em&gt; 자궁에</em&gt; Electroporation 또는 바이러스 성 Stereotaxic 주입

이 비디오는 자궁 내 전기천공법을 사용하여 쥐 배아의 소뇌 신경 세포에 플라스미드 DNA를 전달하는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 정상적인 뇌 발달에서 유전자의 생체 내 기능과 종양 진행 중 뉴런 세포의 유전자 발현 변화를 이해하는 데 유용합니다.

자궁 전기천공법 기반 유전자 전달: 쥐 배아의 배아 소뇌 세포에 플라스미드 DNA를 주입하는 기술

시상 하부의 기능 및 의료 중요성에도...

마우스의 유전자 조작을 통해 시상 하부 개발<em&gt; 자궁 내</em&gt; 일렉트로

이 프로토콜은 자궁 내 전기천공법을 통해 C57BL/6 중추신경계의 다른 영역을 구체적으로 transfection하는 방법을 자세히 설명합니다. 이 프로토콜에는 피질, 해마, 시상, 시상하부, 외측 중격 핵 및 선조체로 발달하는 영역의 형질주입에 대한 자세한 지침이 포함되어 있습니다.

코어 텍스, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, 횡 중격 Nucleus-과 줄무늬 별<em&gt; 자궁 내</em&gt; C57BL / 6 마​​우스에서 Electroporation에

자궁 전기기화의 이중은 공간적으로 그리고 일시적으로 분리되는 세포 집단을 표적으로 할 수 있습니다. 이 기술은 정상 조건에서 형광 단백질을 사용하여 그 세포 인구 사이 상호 작용을 구상하는 데 유용하지만 기능적 실험 후 관심의 유전자를 어지니로 조정합니다.

자궁에서 두 배의 자궁 전기화는 시간적으로 그리고 공간적으로 분리된 세포 인구를 표적으로 합니다

이 프로토콜에서는 E7.5의 마우스 양수에 렌티 바이러스를 주입하여 생존 또는 배아 발달에 미치는 해로운 영향을 최소화하면서 전체 신경판을 균일하게 형질 도입하는 방법을 설명합니다.

배아 일 7.5에서 자궁 내 나노 주사 (NEPTUNE)에 의한 뮤린 신경 판 표적화

배우세요 E15 마우스 태아의 자궁내 심실 주입 및 전기천공 기법을 이용한 유전자 조작 방법을. 이 기술은 발달 신경과학 연구에서 플라스미드 DNA를 뇌 조직에 효과적으로 도입하여 세포 운명과 기능을 연구하는 데 활용됩니다.

E15 마우스 태아의 Utero의 심실 주입 및 Electroporation에

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