암컷 마우스 모델에서 유방 종양 진행의 생물발광 이미징

루시페라아제 발현 유방 종양 세포를 주사한 암컷 마우스로 시작합니다.

종양 세포는 주사 부위에서 증식하여 원발성 종양으로 발전합니다.

마우스를 마취하기 위해 마취제 흐름이 있는 이미징 챔버에 마우스를 놓습니다.

그런 다음 루시페라아제의 기질인 루시페린을 마취한 마우스에 주입합니다.

루시페린은 순환하여 종양 세포로 들어가 루시페라아제와 반응하여 생물발광을 방출합니다.

이미징 시스템을 사용하여 마우스의 생물 발광 신호를 캡처합니다.

시간이 지남에 따라 종양은 원발 부위에서 진행되어 폐로 전이됩니다.

일정한 간격으로 마우스 이미지를 획득하고 관심 영역을 정의합니다.

생물발광 강도를 기반으로 두 부위 모두에 대한 종양 성장 동역학을 구성합니다.

시간이 지남에 따라 원발성 종양 부위에서 신호가 꾸준히 증가하면 지속적인 종양 증식을 나타냅니다.

그러나 이후 시점에서 폐 생물발광의 급격한 증가는 종양 세포 전이를 시사합니다.

시작하려면 보충된 Dulbecco's Modified Eagle 배지 또는 DMEM에서 4T1 세포주를 유지합니다. 이산화탄소 5%를 함유한 가습 분위기에서 섭씨 37도에서 세포를 배양합니다.

4T1 세포주에 Luc2 유전자를 형질감염시켜 구성적으로 생성되는 생물발광 효소인 루시페라아제를 발현합니다. 세포를 배양하여 마우스 주사를 준비합니다.

Balb-C 암컷 마우스를 마취하고 준비한 후 5분 후, 1밀리리터 인슐린 주사기를 사용하여 루시페라아제 발현 4T1 세포 5배의 10배를 왼쪽 등쪽에 피하 주입합니다. 주사 후 4주 동안 동물을 수용하십시오.

이미징을 위해 마취된 마우스를 생물발광 이미징 장비의 지정된 영역 내에서 등쪽으로 누운 자세로 놓습니다. 밀리리터당 15밀리그램의 농도로 100마이크로리터의 D-루시페린 용액을 마우스에 복강 내 주사합니다.

이미징 매개변수를 조정하려면 여기 없이 방출 필터를 열고, 비닝을 8로, F-스톱을 2로, 시야 유형을 D로 설정합니다. 각 이미징 종점에서 각 동물에 대해 20분에 걸쳐 20개의 생물 발광 이미지를 캡처하여 이미지가 60초 신호 통합을 나타내도록 합니다.

장비의 소프트웨어를 사용하여 원발성 종양과 폐 전이 신호를 구별하기 위해 특정 관심 영역을 정의합니다. 주사 부위와 전이가 발생하는 흉부 부위에서 생물발광 신호를 식별합니다. 생물발광 신호 강도를 기반으로 종양 진행을 계산합니다.

매주 수집된 이미지를 사용하여 원발성 종양 및 전이 부위 모두에서 시간 경과에 따른 신호 강도 변화를 나타내는 성장 동역학 프로필을 구성합니다. 신호 강도 추세를 비교하여 종양 진행 및 전이를 분석합니다.