3D 신경 줄기 세포 문화 번역하는 단백질 : 하이브리드 시각화 방법론

뇌의 신경발생 니치(neurogenic niches)에서 분리된 신경 전구 세포는 부유 배양 시 증식하여 뉴로스피어(neurospheres)를 형성합니다. 본 영상에서는 3차원 뉴로스피어 내의 단백질 발현 위치를 확인하기 위해, 부유 상태의 출생 후 해마 유래 뉴로스피어를 분리하고 연속 절편을 제작하는 방법을 보여줍니다. 여기서는 특정 표적 단백질인 Conexion 29에 대해 면역 염색을 수행한 후, 2차원 현미경 이미지를 조립 및 변환하여 뉴로스피어의 3차원 재구성 영상을 제작하는 과정을 진행합니다.

자유 부유 신경구 또는 조직과 같은 고유의 3차원 구조 내에서 단백질을 시각화하면, 이러한 구조 내의 위치에 기반하여 단백질 기능을 더 잘 이해할 수 있으며, 위치는 알려져 있으나 기능은 알려지지 않은 단백질에 대한 가능한 규칙을 추론할 수 있습니다. 안녕하세요, 저는 오타와 대학교 신경 재생 연구실의 Sophia Ambo입니다. 그리고 저는 오타와 소재 칼턴 대학교의 칼턴 이머시브 미디어 스튜디오의 Nicholas Valenzuela입니다.

오늘은 해마 유래 생후 신경 전구 세포를 신경구(nerve spheres) 형태로 분리, 확장 및 연속 절편화하는 방법을 시연하겠습니다. 면역 염색을 통해 단백질 발현 위치를 파악하기 위해, 면역 염색 후 수집한 연속 신경구 절편의 2차원 이미지를 사용하여 3차원 구조 내 세포 및 단백질 위치를 재구성하는 방법을 설명하고, 이를 통해 신경구 전체의 단백질 발현 공간 조직을 평가하겠습니다. 그럼 시작하겠습니다.

뇌 조직을 수집한 후, 뇌가 적절하게 안착할 수 있도록 평평한 표면을 만들어 척(chuck) 위에 올릴 준비를 합니다. 이를 블로킹(blocking)이라고 합니다. 면도날과 핀셋을 사용하여 소뇌를 블로킹합니다.

다음으로, 척(chuck) 위에 순간접착제를 한 방울 떨어뜨리고 첫 번째 뇌를 전면이 위로, 배측이 연구자를 향하게 하여 고정합니다. 나머지 뇌들도 동일하게 진행하되, 마지막 뇌의 경우 절단이 불완전할 수 있으므로 배측이 연구자의 반대편을 향하도록 배치하는 것이 바람직합니다. 만약 절단이 불완전하게 되었다면, 메스를 사용하여 완전히 절개한 후 섹션을 수집하십시오.

뇌가 공기에 너무 오래 노출되면 안 되므로 접착 단계에서는 속도가 매우 중요합니다. 모든 뇌를 접착한 후, 척(chuck)을 진동기에 배치하고 홀더를 차가운 CSF로 채웁니다.

진동기의 주파수를 8.5로, 속도를 3.5에서 4.5로 설정하십시오. 칼날을 A CSF에 접촉시키고 자동 절단(automatic cut)을 설정합니다. 이제 500 micron 두께의 절편을 절단하겠습니다.

해마가 포함된 절편들을 보관합니다. 이를 얼음처럼 차가운 A CSF가 채워진 디쉬에 넣고 나머지 절편들은 폐기합니다. 모든 절편이 수집되면 해마 박리 단계로 진행합니다.

실체 현미경을 사용하여 bgma 기준 약 -1.65 mm에서 -2.10 mm 사이의 배측 해마만을 채취합니다. 채취한 해마들을 빈 얼음 냉각 접시에 넣습니다. 슬라이스로부터 모든 해마를 수집했다면, 이제 기계적 해리를 위해 이들을 클린벤치(flow hood)로 옮깁니다.

메스 날에 70% ethanol을 뿌리고 화염 멸균합니다. 조직이 액체처럼 보일 때까지 메스로 자릅니다. 이제 papain, DNase 및 neural protease가 이미 포함된 해리 배지를 사용하여, 피펫팅으로 조직을 수집하여 15 milliliter 튜브에 넣습니다.

효소적 해리를 위해, 37 °C로 설정된 회전 오븐에 튜브를 넣고 45분에서 1시간 동안 소화를 진행합니다. 소화가 완료되면, 효소 반응을 중단시키기 위해 멸균된 조직 배양용 PBS 10 mL를 첨가하고 300 ×g에서 5분 동안 원심분리하여 세포를 침전시킵니다. 상층액을 제거하고 펠릿을 재현탁합니다.

5 mL의 PBS에서 파스퇴르 피펫을 사용하여 샘플을 피펫팅함으로써 조직을 추가로 해리시킵니다. 조직 조각이 더 이상 작아지지 않을 때까지 피펫팅을 계속합니다. 이 단계에서 세포를 다시 펠렛화합니다.

PBS를 제거하고 펠렛을 3 mL의 유지 배지에 다시 현탁합니다. 그 후, 샘플을 충분히 분쇄합니다. 15 µL의 분취액을 취해 동일한 부피의 tripan blue와 혼합합니다.

10 µL 샘플 두 개를 취해 세포 수 측정을 위해 혈구계수기(hemo cytometer)에 로딩합니다. 각 구역에서 3개의 시야를 측정하여 총 6개의 시야 내 세포 수를 셉니다. 측정값의 평균을 내어 세포 밀도를 계산합니다.

샘플이 희석되었음을 유의하십시오. 트립판 블루(trypan blue)로 세포 수를 측정하여, 저부착 디쉬(low adherence dishes)에 디쉬당 2.5 × 10⁵ cells의 밀도로 5 mL의 유지 배지를 최종 부피로 하여 분주합니다. 저부착 디쉬를 사용할 수 없는 경우, 페트리 접시를 사용할 수 있습니다.

이 경우, neurosphere가 배양 접시 바닥에 부착되지 않도록 처음 6일 동안은 매일 오전과 오후에 neurosphere를 가볍게 두드려 주어야 합니다. 배양 접시를 인큐베이터에 넣기 전에 EG, F 및 FGF를 첨가하십시오. 이러한 성장 인자들은 배양 기간 전체에 걸쳐 2일마다 보충해 주어야 합니다. in vitro 14일째에, 포름알데히드를 배양액에 직접 첨가하여 최종 농도가 약 4%가 되게 하여 neurosphere를 고정하고, 실온에서 20분 동안 배양하십시오.

300 ×g에서 5분 동안 원심분리하여 세포를 펠렛화합니다. PBS로 세포를 두 번 세척한 후, 10 mM 인산 완충액으로 제조한 15~20% sucrose 용액에 재부유시킵니다. 크라이오스탯(cryostat)으로 절편을 만들기 전, 4 °C에서 최소 24시간 동안 저온 보호 처리합니다.

냉장고에서 동결 보호 처리된 뉴로스피어(neurospheres)를 꺼내 60mm 디쉬에 옮깁니다. 모든 단면의 수집이 중요한 연속 절편 제작의 경우, 실체 현미경을 사용하여 크기와 모양이 적절한 뉴로스피어를 선택하는 것이 가장 좋습니다. 피펫터를 사용하여 뉴로스피어를 OCT 화합물이 채워진 동결 몰드에 배치합니다. 동결 몰드 위에 뉴로스피어가 위치한 지점을 표시합니다.

이 단계는 절편 제작 과정에서 뉴로스피어(neurosphere)를 찾는 데 도움이 됩니다. 5~10개의 스피어를 몰드에 빠르게 넣은 후, CO2를 사용하여 급속 냉동시킵니다. 크라이오 몰드의 표시를 참고하여 뉴로스피어가 위치한 지점을 냉동된 OTC 블록에 직접 표시하십시오.

몰드에서 OCT 블록을 분리하여 크라이오스탯 척(chuck) 위에 놓습니다. CO2를 사용하여 몰드를 척에 고정시킨 후 크라이오스탯 내부에 넣습니다. 샘플이 최소 30분 동안 평형 상태에 도달하도록 둡니다.

이 과정이 완료되면 몰드에 표시한 지점까지 빠르게 절단한 후, 그 시점부터 모든 섹션을 수집하기 시작합니다. 광학 현미경을 사용하여 neurosphere 슬라이스 조각이 시작되는 지점을 확인하십시오. 섹셔닝이 완료되면 면역화학 분석을 수행할 때까지 슬라이드를 냉동고에 보관하십시오. 이 단계에서는 연속 절단된 neurosphere 중 하나가 포함된 슬라이드와 그 앞뒤로 각각 5장씩의 섹션이 포함된 슬라이드를 꺼냅니다.

이렇게 하면 뉴로스피어(neurosphere) 전체를 이미징할 수 있습니다. 뉴로스피어의 모든 절편을 찾기 위해서는 핵 대조 염색이 필수적입니다. 따라서 면역 염색을 계획할 때 이 점을 유념하십시오. 슬라이드에 PBS를 도포하고 최소 5분 동안 실온에서 가온하는 동안, 투과를 위한 0.3% Triton X 100과 블로킹을 위한 3% bovine serum albumin이 포함된 항체 버퍼를 사용합니다.

이 버퍼를 사용하여 1차 항체를 적절히 희석한 후, 사람 세포 챔버 내에서 4°C로 하룻밤 동안 배양하십시오. PBS를 사용하여 신경구에서 파라폼(paraform)을 띄운 다음 핀셋으로 조심스럽게 제거하십시오. 이것이 5분간 진행하는 총 4회의 PBS 세척 과정 중 첫 번째 단계입니다.

슬라이드에 2차 항체를 도포하고 실온에서 1시간 동안 배양합니다. 이전과 마찬가지로, PBS를 사용하여 파라폼을 슬라이드에서 띄운 후 핀셋으로 제거합니다. 이는 5분간 진행하는 총 4회의 PBS 세척 과정 중 첫 번째 단계입니다.

세 번째 세척 단계에서는 핵 대조 염색제로 0.5 µg/mL로 희석한 HOS 3 3 2, 5 8를 포함합니다. HOS 세척 후에는 PBS로 5분 동안 한 번 더 세척합니다. 모든 세척 과정이 완료되면 슬라이드 바닥에 마운팅 매질을 충분히 도포하고 유리 커버슬립으로 덮습니다.

매니큐어를 사용하여 모서리를 고정합니다. 모든 슬라이드에 커버슬립을 덮었다면, 커버슬립의 나머지 가장자리 부분도 고정합니다. 즉시 슬라이드를 촬영하거나, 촬영 준비가 될 때까지 -20 °C에서 보관하십시오.

이미징 시 슬라이드에서 세포를 찾는 것이 가장 어려운 부분인데, 핵 대조 염색을 이용하여 세포를 찾으면 스피어(sphere)에 속한 세포를 쉽게 검출할 수 있습니다. 단 몇 개의 세포로만 구성되어 있을 수 있는 신경 스피어(neuros sphere)의 시작 부분을 찾으면, 그 이후부터는 모든 섹션을 이미징하십시오. 핵 염색, 표적 단백질 또는 단백질들, 그리고 위상차 이미지를 촬영하십시오.

이 위상차 이미지는 모델링 단계에서 매우 중요하게 사용됩니다. open lab 3.56 소프트웨어에서 설정한 10 micrometers 및 50 micrometers의 기본 스케일 바가 포함된 이미지를 3,300 by 2,550 픽셀의 표준 캔버스 크기를 사용하는 Photoshop CS4로 가져옵니다.

모든 연속 절편 이미지는 표준 캔버스 크기를 유지한 TIFF 파일로 저장됩니다. 신경구 연속 절편의 1단계 및 2단계 대비 이미지를 엽니다. 이미지 탭에서 두 번째 절편의 투명도를 높이고, 이미지 회전을 열어 임의(arbitrary)를 선택합니다.

이미지 간의 기하학적 및 구조적 연속성이 확인될 때까지 두 번째 섹션을 회전시킵니다. 모든 연속 절편에 대해 이 과정을 반복하며, 각 섹션을 별도의 레이어로 저장합니다. 위상 및 단백질 발현에 해당하는 각 이미지 레이어를 링크하여, 모든 채널의 회전이 동시에 수행되도록 합니다.

Maya의 사용자 인터페이스 상태 표시줄에 표시된 Photoshop 파일과 동일한 비율의 평면을 생성합니다. 메뉴 바의 설정을 기본 애니메이션(animation)에서 서피스(surfaces)로 변경합니다. 구체를 선택한 상태에서 기본 세분화 구체(primitive subdivision sphere)를 사용하여 세포체를 생성합니다.

객체 위에서 마우스 오른쪽 버튼을 클릭하고 마킹 메뉴에서 vertex를 선택하여 정점 조작을 시작하십시오. 이어서, 메인 메뉴의 subdivision surfaces 탭에 있는 마킹 메뉴에서 디스플레이 레벨을 변경하여 구의 표면을 세분화하십시오. collapse hierarchy 옵션 상자를 열고 레벨 수를 2로 설정하십시오.

구체를 축소합니다. 구체가 선택된 상태에서 메뉴 바를 표면(surfaces)에서 폴리곤(polygons)으로 변경합니다. 메인 메뉴의 메시(mesh) 탭에서 조각 기하학(sculpt geometry) 도구를 엽니다.

세포의 표면을 다듬어 최종 형태로 만듭니다. 도구 설정 탭의 sculpt geometry 도구 세트를 사용하십시오. 신경구(neurospheres)에 존재하는 다양한 전구세포를 모사하기 위해, 설정한 유형의 각 세포에 대해 이 과정을 반복합니다.

본 시연에서는 10가지의 서로 다른 전구 세포가 뉴로스피어(neurosphere)의 기반을 형성합니다. 세포 유형을 선택하고 해당 유형의 세포를 사용하여 프리즈 변형(freeze transformations)을 수행하십시오. 단백질 connects in 29를 발현하는 세포와 해당 단백질이 없는 세포를 각각 나타내기 위해 두 가지의 서피스 셰이더(surface shaders)를 설계합니다.

메인 메뉴의 윈도우 렌더링 에디터(windows rendering editor) 탭에서 하이퍼 셰이드(hyper shade) 창을 엽니다. 서피스 재질(surface materials) 탭에서 램프 셰이더(ramp shader)를 선택합니다. 속성 에디터(attribute editor)를 열고 셰이더 색상(shader color), 백열광(incandescent), 주변광 색상(ambient color), 범프(bump), 맵(map) 및 정반사 색상(specular color) 속성을 설정합니다.

앰비언트 컬러(ambient color) 노드에 브라운(Brownian) 3D 텍스처를 할당하고, 범프 매핑(bump mapping) 노드에 2D 프랙탈 텍스처를 할당하십시오. 결과로 생성된 셰이더 입력 및 출력 연결을 선택한 다음, 선택한 네트워크를 내보내십시오. 세포 유형(cell typology)을 선택하고 내보내기 선택 옵션 상자를 여십시오.

파일 형식을 Maya A-S-C-I-I로 선택하고 export selection의 include these inputs 확인란을 해제하십시오. 정렬된 연속 절편 파일을 Adobe Photoshop에서 엽니다. 연속 절편 내 각 전구 세포의 위치를 표시하기 위해 연필 선으로 키를 설정하십시오.

본 시연에서는 세 가지 표시 체계를 사용합니다. 실선 정사각형, 점선 정사각형, 그리고 십자 표시가 있는 정사각형은 각각 세포가 하나, 둘 또는 세 개의 구역에 위치하는지를 나타내는 데 사용됩니다.

이 스트로크 키는 Conexion 29를 발현하는 세포를 나타내는 빨간색과 Conexion 29를 발현하지 않는 세포를 나타내는 흰색으로 추가 정의됩니다. 위상 레이어(phase layer)를 켜고 흰색 연필 스트로크로 각 전구 세포의 중심을 표시하기 시작하십시오. 맵을 구축하기 위해 섹션 폴더 내의 별도 레이어를 사용하십시오.

섹션들을 전환하며 세포의 위치를 찾고, 여러 섹션에 걸쳐 있는 세포들이 적절하게 표시되었는지 확인하십시오. CX 29 레이어를 켠 상태에서, CX 29가 양성으로 발현된 영역에 해당하는 세포들을 선택하십시오.

Photoshop 메인 메뉴 바의 편집 탭에서 칠 명령을 선택하고, 완성된 맵의 흰색 선을 빨간색으로 변경합니다. 각 섹션을 Maya 프로젝트의 소스 이미지 폴더에 개별 JPEG 이미지로 저장하십시오. 이를 위해서는 먼저 Maya 사용자 인터페이스의 상태 표시줄에서 새로운 Maya 프로젝트를 생성해야 합니다.

메뉴 바의 기본 애니메이션 설정을 폴리곤(polygons)으로 변경하여 평면(planes)을 가져옵니다. scale bar와 ma 파일을 설정합니다. 평면이 선택된 상태에서 projects seen 폴더의 ma 파일을 불러옵니다.

객체를 마우스 오른쪽 버튼으로 클릭하고 속성 편집기(attribute editor)에서 새 재질 할당(assign new material) 탭을 열어 Lambert 셰이더를 할당합니다. 팝업 메뉴에서 재질 색상(materials color) 속성 오른쪽에 있는 체크무늬 상자를 클릭합니다. 속성 편집기의 파일(file) 속성 섹션 아래에 있는 2D 텍스처 섹션에서 파일(file)을 선택합니다.

이미지 이름 속성 오른쪽에 있는 파일 아이콘을 클릭하십시오. 소스 이미지 폴더에서 첫 번째 섹션을 선택하십시오. 해당 패널의 탭을 열어 작업 영역 창의 카메라를 투시도(perspective view)에서 기본 정투영 상단뷰(orthographic top view)로 전환하십시오.

메인 메뉴의 mesh 탭에서 create polygon 도구를 선택하고 단면의 외곽선을 따라 그립니다. source images 폴더에서 첫 번째 맵을 선택하여 새로 생성된 polygon plane에 할당합니다. 객체가 선택된 상태에서 polygon plane을 생성하기 위해 설정된 단계에 따라, plane 위에서 마우스 오른쪽 버튼을 클릭하여 marking 메뉴에서 UV를 선택합니다.

모든 평면 UV 포인트를 선택하고 메인 메뉴의 windows 탭에서 UV 텍스처 에디터를 엽니다. 섹션 평면에 맞게 UV를 비례적으로 스케일 조정하십시오. 뉴런 구(neuros sphere)의 각 섹션에 대해 이 과정을 반복하며, 각 섹션 사이의 간격이 Maya 사용자 인터페이스의 상태 표시줄에 있는 스케일 바의 높이와 일치하도록 합니다. 메뉴 바의 설정을 기본값인 animation에서 dynamics로 변경하고, 뉴런 구의 첫 번째 섹션만 보이게 설정하십시오.

CV 곡선 도구 옵션 상자를 연 상태에서 메인 메뉴의 디스플레이 탭에 있는 디스플레이 설정을 변경하여 다른 모든 섹션을 숨기고, CV 곡선 설정에서 one linear를 선택하십시오. 탑 뷰 카메라로 장면을 보면서 셀 맵에 포인트를 할당하여 CX 29 음성 세포와 CX 29 양성 세포에 대해 각각 하나의 곡선을 생성합니다. 결과 곡선들은 사이드 뷰 카메라로 보았을 때 평평하게 나타납니다.

Y축에서 곡선의 점들을 이동시켜 섹션의 두께를 추정하십시오. 이때 스케일 바를 가이드로 사용하십시오. 뉴로스피어(neuros sphere)의 각 섹션에 대해 이 과정을 반복하십시오.

프로젝트의 scenes 폴더에서 cell typology.ma 파일을 가져온 후, CX 29 음성 및 CX 29 양성 Progenitors 모두에 대해 cell typology를 복제합니다. 메인 메뉴의 windows rendering editors 탭에서 hyper shade 창을 엽니다.

아웃라이너 창에서 이전에 구축한 셰이더를 가져와 타이폴로지의 셀에 할당하십시오. 가져온 객체의 이름 앞부분에서 파일 이름을 제거하십시오. 이는 모델링 프로세스의 후기 단계에서 중요하게 작용합니다.

메인 메뉴에서 particles 탭을 선택하고 첫 번째 CV 곡선을 위한 파티클 이미터를 생성합니다. particle shape 1 탭을 열고 emission attributes 항목에서 max count를 -1에서 첫 번째 곡선의 포인트 수로 변경합니다. render attributes 탭에서 particle render type을 blobby surface로 변경합니다.

아래의 현재 렌더링 유형 상자를 클릭하고 입자의 반지름을 0.01로 변경하십시오. 먼저 입자를 선택한 다음, shift 키를 누른 상태로 곡선을 선택하여 입자를 곡선의 정점에 부착하십시오.

메인 메뉴의 particles 탭에서 goal 옵션을 열고 goal weight를 1로 설정하십시오. create를 클릭하십시오. outliner 창에서 1번부터 10번까지의 셀을 순서대로 선택하고 메인 메뉴의 particles 탭에서 in instant replacement 옵션 상자를 여십시오.

인스턴스 객체(instance objects) 상자에 10개의 셀이 모두 순서대로 나열되어야 합니다. 인스턴스화할 파티클 객체(particle object to instance) 탭의 드롭다운 목록에서 올바른 파티클 모양 이름을 선택하십시오. 생성(create)을 클릭합니다. 기본적으로는 처음 선택된 셀만 곡선을 따라 파티클을 대체하게 되므로, 10개의 셀이 모두 나타나고 파티클 사이에서 무작위로 순환하게 하려면 식(expression)이 필요합니다.

두 번째 식을 통해 세포가 매번 동일하게 무작위로 방출되도록 설정합니다. 이미터(emitter)를 선택한 상태에서 범위 슬라이더의 위치를 조정합니다. '동적 속성 추가(add dynamic attribute)' 아래의 입자 모양 탭에서 속성 편집기를 엽니다.

long name 아래의 일반 상자를 클릭하십시오. attribute type을 scaler에서 per particle array로 전환한 다음, random underscore index를 입력하고 per particle array attributes 탭의 add를 누르십시오. random underscore index 상자가 추가되었습니다.

빈 공간에서 마우스 오른쪽 버튼을 클릭하고 드롭다운 상자에서 식 생성(create expression)을 선택하십시오. 식 상자에 다음 텍스트를 입력하여 식을 완성하십시오. 특성 편집기에서 즉시 검색 기하 구조 교체(instant search geometry replacement) 탭을 열고 일반 옵션의 객체 인덱스(object index)를 확인하십시오.

드롭다운 목록에서 무작위 언더스코어 인덱스를 선택하십시오. 시간 슬라이더를 첫 번째 프레임으로 이동시킨 후 재생 버튼을 누르십시오. 이제 세포 유형이 입자들 사이에 무작위로 분포됩니다.

뉴로스 구체(neuros sphere)의 각 섹션에 대해 이 과정을 반복하십시오. 각 새로운 이미터(emitter) 인스턴스와 랜덤 인덱스가 이름으로 구분되고 렌더의 아웃라이너(outliner) 창에서 적절하게 정리되었는지 확인하십시오. 렌더 설정 창의 섹션을 사용하여 렌더를 Maya software에서 mental ray로 변경하십시오.

품질 탭을 열고 레이 트레이싱 항목에서 반사 설정을 0으로 변경하십시오. 프레임 버퍼 탭을 열고 컬러 클립을 raw에서 alpha로 변경한 뒤, Pre multiply 항목의 체크를 해제하십시오.

채널 박스 레이어 편집기를 열고 레이어 편집기 설정을 display에서 render로 변경하십시오. 임포트된 타이폴로지 세포들을 선택하고 새 레이어 생성 및 선택 객체 할당 아이콘을 클릭하십시오. 레이어 이름을 ambient occlusion으로 변경하십시오.

새로 생성된 레이어 위에서 마우스 오른쪽 버튼을 클릭하고, 렌더 레이어 상자 오른쪽에 있는 메뉴에서 속성을 선택하십시오. 프리셋 버튼을 클릭하고 드롭다운 목록에서 occlusion을 선택하십시오. MIB_AMB_occlusion 1 탭을 선택하고 샘플 수를 16에서 256으로 변경하십시오.

채널 박스 레이어 에디터를 다시 열고 옵션 탭 아래의 모든 레이어 렌더링 옵션 상자를 연 다음, composite를 선택하고 ambient occlusion 레이어가 선택된 상태에서 layers를 유지합니다. 레이어 목록 바로 위의 드롭다운 박스에서 normal을 multiply로 변경하고, ambient occlusion 레이어를 켠 상태와 master 레이어를 켠 상태로 각각 한 번씩 neuros sphere를 두 패스 렌더링합니다. 이미지를 프로젝트의 images 폴더에 IFF 파일로 저장합니다.

두 이미지를 모두 Adobe Photoshop에서 엽니다. 앰비언트 오클루전(ambient occlusion) 레이어를 마스터 레이어 위에 배치하고 블렌딩 모드를 곱하기(multiply)로 설정합니다. 배경을 생성하고 이미지를 병합합니다.

지금까지 해마 유래 신경줄기세포를 신경구체로 배양하는 방법, 크라이오스탯을 사용하여 신경구체 배양물을 연속 절편화하는 방법, 그리고 특정 표적 단백질에 대한 면역 염색을 수행하는 방법을 살펴보았습니다. 또한 세포 배양 등록과 3차원 모델링 소프트웨어의 조합을 통해 해당 단백질 발현의 공간적 위치를 3차원으로 모델링하는 방법도 확인하였습니다.

이 내용이 도움이 되기를 바라며, 귀하의 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.