Name: 만성 실험에 장착 전극 또는 Microdialysis 프로브를위한 라이트 - 치료 치과 접착제 수지의 응용 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 30 s
Description: 배우세요 광경화 치과 접착제 수지를 이용한 전극 및 마이크로다이얼리시스 프로브 장착법을. 이 방법은 두개골에 직접 결합하여 나사 고정 없이 만성 실험의 안정성을 높이고 조직 염증 위험을 줄입니다.

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우리가이 일을하는 동안 그들의 친절 지원하고 유익한 조언을위한 RIKEN - BSI 우리의 동료 주셔서 감사합니다. 교수님 시게미 모리 교수 G 보르 Juh SZ, DRS에게 진심으로 감사드립니다. 내가 고급 연구 대학원 대학, 일본에서 대학원 과정 중에 microdialysis 방법을 공부하는 것이 좋다 Kiyoji 마쓰야마, 카탈린 AK kesi 및 RP D Dobolyi. 마지막으로, 우리는 비디오 녹화에서 지원 씨 크리스 Sarnecky 박사 Akitsugu 다카스 감사합니다.

1 단계. 프로브 주입의 준비 <ol><li> 마취 (비디오에 표시되지 않음) interperitoneal 300ml의 주사 (12.5 밀리그램 / kg 체중)와 외과 마취의 안정 수준을 생산 xylazine (25 MG / kg) 혼합 각 새 마취. </li><li> stereotaxic 프레임에 머리를 수정 귀 바 &#39;압력의 로컬 통증을 줄이기 위해 Xylocaine (TM) 젤리를 사용합니다. 조류의 머리는 귀 바, 45 °의 각도로 머리를 가지고 부리 홀더 구성된 stereotaxic 장치에서 해결되었습니다. 이식에 대한 stereotaxic 수술하는 동안, 열 제어 외과 패드에 의해 조류의 시신을 따뜻하게 (온도 = 34 ~ 36 ° C). </li><li> 외과 영역을 소독 수술하기 전에 isodine (TM)으로 수술 부위를 소독. </li></ol> 2 단계. Stereotaxic 위치 <ol><li> 기준점 정렬 람다 (Y - 포인트) 마크 Y - 포인트 염료 채워진 피펫과 함께하는 더미 프로브 (유리 micropipette)를 맞춥니다. 마지막 추적 연구 남은 Dextran - TMR은 비디오에 사용되었습니다. </li><li> 피부의 절개 피부를 제거하고 두개골의 표면을 쉽게받을 수 있습니다. 그런 다음, 면화 면봉으로 두개골의 표면을 청소하십시오. </li><li> 가짜 정맥의 위치 (수평 방향) 대상 사이트 (AP 축과 래터럴 조정)에 더미 정맥으로 이동 </li><li> 소형 craniotomy 및 두라 메이터의 절개. craniotomy에 대한 좋은 포셉 및 두라 메이터의 incisions에 대한 훌륭한 주사 바늘 (30 G)를 사용합니다. 그런 다음, 두개골의 표면을 청소하십시오. </li><li> 가짜 정맥의 최종 위치 (주입) microdialysis 프로브 - 목표는 지역 위 0.30 mm에서 가이드 정맥의 끝부분을 찾습니다. 깨끗하고 건조한 표면이 거친 결합이 필요하기 때문에 마지막으로, 다시 두개골의 표면을 청소하십시오. </li></ol> 3 단계. 두개골 표면 전처리 (치과 제품의 &quot;직접 작성 복원&quot;에 대한 유사한 절차가 등장한다.) <ol><li> 프라이머 처리 <ol><li> 접시에 A와 B를 혼합 PRIMAR 액체. </li><li> 작은 브러시와 함께 두개골의 표면에 혼합물을 적용합니다. </li><li> 30 초 동안 둡니다. </li><li> 부드러운 공기 흐름과 건조. (세척하지 마십시오.) </li></ol></li><li> 접착제의 응용 <ol><li> 작은 브러시와 함께 두개골의 표면에 접착제를 적용합니다. </li><li> 부드러운 공기 흐름을 적용합니다. (세척하지 마십시오.) </li><li> 20 초 동안 빛을 치료. </li></ol></li></ol> 4 단계. 합성 수지 장착 <ol><li> 일반 충전기로 마운트 수지 일반 충전기를 사용할 수없는 경우, 마이크로 주걱 대신 사용할 수 있습니다. </li><li> 라이트 치료 </li><li> 증분 설치 증분 설치는 수지의 완전한 반응을 보장하는 것이 좋습니다. 증분 설치를위한 모든 설치하기 전에 접착제를 적용합니다. </li><li> 최종 경화에 대한 합성 수지 및 가벼운 치료를 몰드. </li><li> 수술의 끝 </li></ol> 외과 영역을 청소 (Gentamicin의 연고) 항생제 적용하고, stereotaxic 불꽃에서 동물을 제거합니다. 그런 다음, 온도 제어 챔버 (온도 = 33-35 ° C) 후 마취 회복을 위해 동물을 유지. 마찬가지로 비디오와 같이, 더 이상 문제는 수술 후 다음날에있는 동물의에서 관찰되지 않았습니다.

<ol><li>Adell, A., Artigas, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+Brain+microdialysis%3A+Principles+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vivo+Neuromethods%3A+Neuromethods%22%5BJournal%5D)">In vivo Brain microdialysis: Principles and applications.</a> In Vivo Neuromethods: Neuromethods. Boulton, A., Baker, G., Bateson, A. 32, Humana Press Inc. Totowa. 325-357 (1998).</li>
<li>Kendrick, K. Microdialysis in large unrestrained animals: neuroendocrine and behavioral studies of acetylcholine, amino acid, monoamine and neuropeptide release in the sheep. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKendrick%2C+K+%22Microdialysis+in+the+Neuroscience%22">Microdialysis in the Neuroscience</a>. Robinson, T., Justice, J., Bateson, A. 7, Elsevier. Amsterdam. 327-348 (1991).</li>
<li>Oakley, B., Schafer, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOakley%2C+B+%22Experimental+Neurobiology%3A+A+laboratory+Manual%22">Experimental Neurobiology: A laboratory Manual</a>. , University of Michigan Press. Ann Arbor. (1978).</li>
<li>Okumura, T., Yamashita, Y., Okanoya, K., Tani, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+of+the+sensori-motor+nucleus+NIf+in+generation+of+complex+syntactical+song+in+the+Bengalese+Finch+I.+A+Biological+study%5BTitle%5D)+AND+%22Soc.+Neurosci+Abst%22%5BJournal%5D)">Function of the sensori-motor nucleus NIf in generation of complex syntactical song in the Bengalese Finch I. A Biological study.</a> Soc. Neurosci Abst. 33, (2007).</li>
<li>Boulton, A., Baker, G. The relation of brain electrical activity to behavior. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBoulton%2C+A+%22In+Vivo+Neuromethods%3A+Neuromethods%22">In Vivo Neuromethods: Neuromethods</a>. Robinson, T., Bateson, A. 32, Humana Press Inc. Totowa. 325-357 (1998).</li>
<li>Yamashita, Y., Okumura, T., Okanoya, K., Tani, J. Function of the sensori-motor nucleus NIf in generation of complex syntactical song in the Bengalese finch. Proceeding of the 2nd International Symposium on Mobiligence, , 101-104 (2007).</li>
</ol>

실험 동물의 두뇌의 실험 과학 연구소, RIKEN (RIKEN - BSI) 및 연구소의 동물 윤리위원회를 승인에 대한 지침에 따라 실시되었다.

종래의 자기 경화 아크릴 수지의 응용 프로그램에 비해 도입 기술은 몇 가지 중요한 장점이 있습니다 : 1. 직접 결합 : 셀프 경화 아크릴 잠시 동안 뼛속까지 장착할 수 있지만 그것은 뼛속까지 준수하지 않습니다. 따라서, 앵커리지 나사는 (그림 2A 참조) 마운트베이스를 수정해야합니다. 반면, 광 경화 수지는 뼈가 직접 있도록 나사가 필요하지 않습니다 (그림 2B)로 결합 수 있습니다. 따라서, 장착베이스의 크기가 상당히 줄어들 수 있습니다. 당신이 그것의 &quot;금속 프라이머&quot;를 사용하면 또한, 광 경화 수지는 또한 몇 가지 금속을 준수합니다. 변수 자료 결합의이 기능은 우리에게 응용 프로그램의 다양한 수 있습니다. 그림 2는 기존 자경성 acrylics (2A) 및 가벼운 치료 접착제 수지를 (2B)를 사용하여 주입을 사용하여 주입을 보여줍니다. 2A에서 앵커 나사가 장착 기지 문제를 해결하는 데 사용됩니다. 2B에서 장착베이스의 크기로 인해 빛을 경화 수지의 두개골과 같은 나사을 준수...

사진의 1A는 microdialysis 프로브 (A), 캡 너트 (B) 및 가이드 정맥 (C)를 보여줍니다. 이 사진에서 안내 정맥 직접 두개골을 준수 치과 수지로 둘러싸여 있습니다. 사진 B는 마약 재관류 동안 조류를 보여줍니다. 머리의 상단에, 벌금 tefron 튜브에 연결된 microdialysis 탐사선이 있습니다. B에 대한 A와 2cm에 대한 스케일 바 = 1cm, 각각. <img src="http://www.jove.com/files/249_2008_8_26_3/249_Figure-01.png" /> 그림 1 - microdialysis 프로브 (A) 및 약물 재관류 동안 조류의 사진 (B)

만성 실험에 장착 전극 또는 microdialysis 프로브를위한 라이트 - 치료 치과 접착제 수지의 응용

Application of Light-cured Dental Adhesive Resin for Mounting Electrodes or Microdialysis Probes in Chronic Experiments

만성 녹음 실험에서, 자기 치료 치과 아크릴 수지는 전극 또는 microdialysis - 프로브의 장착 기지로 사용되었습니다. 이러한 acrylics이 뼈에 결합하지 않기 때문에, 나사는 앵커로 사용되었습니다. 그러나, 핀치즈 드나 마우스 같은 작은 실험 동물에 그들의 craniums은 매우 연약하고 성공적으로 앵커를 물을 수 없습니다. 이 보고서에서는, 우리는 전극이나 만성적인 실험에 microdialysis 프로브의 설치 기반에 대한 가벼운 치료 치과 수지의 새로운 응용 프로그램을 제안합니다. 이 자료는 두개골에 직접 접착 수 있습니다. 따라서, 앵커 나사가 필요 없으며 수술 분야는 상당히 줄일 수 있습니다. 과거의 경험이 결합 효과 이상 이개월 유지 보여줍니다. 자료 고분 고 분한하고 가능한 아르 시간이 종래의 수지의 창이 몇 분 거리에 있습니다. 그러나 이러한 치과 접착제 근무 시간의 창 상당히 넓은하고 조정합니다.

이 보고서에서는, 우리는 전극이나 만성적인 실험에 microdialysis 프로브의 설치 기반에 대한 가벼운 치료 치과 수지의 새로운 응용 프로그램을 제안합니다. 이 자료는 두개골에 직접 접착 수 있습니다.

만성 실험에 장착 전극 또는 Microdialysis 프로브를위한 라이트 - 치료 치과 접착제 수지의 응용

만성 기록 실험에서 자가 경화형 치과용 아크릴 수지는 전극 또는 미세투석 프로브의 고정 기판으로 사용되어 왔습니다. 이러한...

전기생리학 또는 미세투석의 만성 실험에서 자가 경화 치과용 레진은 전극이나 미세투석 프로브의 고정 베이스로 널리 사용되어 왔습니다. 이러한 아크릴 수지는 뼈 표면에 결합되지 않기 때문에 나사를 앵커로 사용해 왔습니다. 하지만 FIEs나 구강과 같이 두개골이 매우 취약한 소형 동물 실험의 경우, 앵커를 성공적으로 유지할 수 없습니다.때로는 이러한 발목 나사못이 조직의 감염과 염증을 유발합니다. 본 보고서에서는 마운팅 베이스의 고정물을 위한 광경화성 치과용 레진의 새로운 적용 방법을 제안합니다. 이 재료는 두개골에 직접적인 결합을 가능하게 합니다.따라서 고정 나사가 필요하지 않으며 수술 부위를 상당히 줄일 수 있습니다. 프로브, 가이드 캐뉼라, 캐비닛 및 장착 베이스의 총 무게는 1 g 미만이었습니다. 과거 경험에 따르면 접합 효과가 2개월 이상 유지되는 것으로 나타났습니다.이 기술은 마우스, 어류 등 다른 실험 동물에게도 활용될 수 있습니다. 두 개의 막대에서 두 번의 구현 과정이 비디오로 녹화되었습니다. 본 비디오 시연에서는 프로토콜의 각 단계에서 가장 적절한 장면을 선택하여 사용하였습니다.이것은 정위 고정 장치와 온도 조절 회복 챔버입니다. 이들은 수술용 기구들입니다. 왼쪽은 Prime PR이며 마이크로 프로브입니다.오른쪽에 부속품들이 있습니다. 프라이밍 프로그램(prime program)을 사용할 수 없는 경우, 대신 마이크로 스패튤라(micro spatula)를 사용할 수 있습니다. 이는 광경화 치과용 레진 세트입니다.AP 프라이머와 접착제가 이 약제 병에 담겨 있었습니다. 당사는 자가 접착 및 이중 경화 시스템인 이 제품을 선택했습니다. 다른 대체 제품을 선택하는 경우, 제품 사용 설명서에 따라 세부 절차를 수정하시기 바랍니다. 왼쪽에 있는 총 모양의 도구는 광경화 장치입니다.오른쪽에 표시된 것과 같이 수제 LED 조명 유닛을 조립할 수 있습니다. 자세한 내용은 관련 문서를 참조하십시오. 이어 수술 마취를 유도한 후 수술 부위를 추가로 제거하고 머리를 정위 고정틀에 고정했습니다.EVA 삽입 전, 통증을 방지하기 위해 EVA 팁 부분에 DI 손상을 가했습니다. 동물의 머리를 프레임에 고정하고 머리 각도를 적절하게 조정했습니다. 요오드(Iodine)로 수술 부위를 소독한 후, 유리 마이크로피펫을 전극 홀더에 고정했습니다.이 마이크로피펫은 잘못된 실험에서 기준점을 만드는 데 사용되었습니다. Lambda Y 지점이 기준점으로 사용되었습니다. 기준점을 노출시키기 위해 피부에 작은 절개를 가했습니다.염료가 채워진 글라스 마이크로피펫으로 지점을 표시합니다. 피부를 절개하여 두개골 표면을 노출시키고, 면봉으로 뼈 표면을 닦아 혈흔을 제거합니다. 강력한 접착을 위해서는 깨끗하고 건조한 표면이 필요합니다.표시된 표적 위치를 따라 미세 핀셋(Forceps)으로 소형 개두술을 실시합니다. 개두술을 위해 마이크로닷(microdot)이나 골 핀셋(bone forceps)을 사용할 수도 있습니다. 그런 다음 홀더와 가이드에서 거친 마이크로 파이프를 제거하고, 캐뉼라(canula) 또는 전극을 홀더에 고정합니다.가이드 캐뉼라의 팁을 기준점에 맞춘 후 조심스럽게 표적 지점으로 이동시켰습니다. 30게이지 주사 바늘을 사용하여 회색질에 최소한의 절개를 가했습니다. 가이드 캐뉼라를 표적 위치로 이동시켰습니다.골 표면의 2차 스크리닝을 위해 Supp를 도포하였습니다. 이 프라이머는 강성 A와 B로 구성됩니다. 각 강성 성분을 디쉬 위에 한 방울씩 떨어뜨린 후 브러시로 혼합하였습니다. 접촉 부위에 프라이머를 면봉으로 도포하였습니다. 가이드 캐뉼라의 표면 또한 면봉으로 도포하였습니다.프라이머를 도포하고 건조시키기 위해 가벼운 공기 흐름을 제공한 후, 브러시를 교체하여 해당 부위에 본딩제를 도포합니다. 이 본딩제는 빛에 민감하므로 시술 중에 가려져야 합니다. 가이드 캐뉼라의 표면 또한 닦아내었습니다.결합제의 화학 반응을 촉진하기 위해 온화한 공기를 공급하고 가시광선 청색광을 제거하였습니다. 작업자의 눈을 보호하기 위해 오렌지색 코랄 투명 보호안경을 착용해야 합니다. 필요한 경우 동물의 눈에 직접적인 조명을 비추지 않아야 합니다.동물의 눈을 보호하기 위해 알루미늄 홀을 사용합니다. 소량의 복합 레진을 두개골 표면과 평면 플러그 형태의 가이드 캐뉼라에 도포합니다. 그 다음, 레진을 경화시켜 점진적으로 고정하기 위해 가시광선 청색광을 조사합니다.모든 마운팅 전에 접착제를 도포하였습니다. 비디오 녹화로 인해 수술 부위를 지속적으로 정위시켰습니다. 하지만, 재료가 성형 가능한 시간 범위를 단축시킬 수 있으므로 과도한 정위 조절은 피하는 것이 좋습니다.시술 체계의 완전한 반응을 보장하기 위해 점진적인 장착 및 교정을 권장합니다. 육안으로 확인될 때까지 모양을 재형성할 수 있습니다. 감염을 방지하기 위해 항생제를 투여하거나 수술 부위에 연고를 도포하였습니다.수술이 완료되었으므로, 전극 홀더에서 스테레오 어댑터를 해제하였습니다. 스테레오 어댑터를 제거하였습니다. 대신 DAMing cane을 삽입하고 동물을 스테레오택식 프레임에서 해제하였습니다.마지막으로, 동물은 마취에서 회복하기 위해 하절기 대조 챔버로 이동되었습니다. 수술 다음 날, 기존의 자가 경화 적용과 비교했을 때, 도입된 기술은 몇 가지 중요한 장점을 가지고 있었습니다.먼저, 이는 뼈에 직접 결합합니다. 자가 경화형 아크릴은 와이어가 있는 뼈에 부착될 수 있지만, 뼈 자체에 접착되지는 않습니다. 반면, 광경화형 레진은 뼈에 직접 결합할 수 있습니다.또한 금속 프라이머를 함께 사용하면 플라스틱과 금속을 포함한 일부 재료에도 접착됩니다. 이러한 다양한 재료와의 결합 특성 덕분에 광범위한 응용이 가능합니다. 둘째, 취급이 용이합니다. 기존 레진의 처리 시간 윈도우는 상대적으로 짧습니다.몇 분 이내에 유동성이 높아져 초기에는 다루기가 쉽지 않습니다. 하지만 화학 반응이 시작되면 발열 반응에 의해 반응이 가속화됩니다. 열이 발생하며 수지는 짧은 시간 내에 경화됩니다.적정 경화 수지의 처리 시간 창은 상당히 넓으며 조절 가능합니다. 기본적으로 수지는 시작 시점부터 적정 상태에 도달할 때까지 지속적으로 유지됩니다. 경화된 3차 반응에서는 열이 발생하지 않습니다.자가 경화성 레진의 경화 반응은 발열 반응입니다. 마운팅 베이스가 두꺼우면 이 열이 축적되어 조직에 손상을 줄 수 있습니다. 광경화성 레진의 조직 반응은 열을 발생시키지 않으며 재료가 생체 적합성을 가집니다.재료비와 광원 장치와 같은 특수 장비 비용이 문제가 될 수 있습니다. 보충 문서에서 비용 부담이 적은 수제 LED 광원 장치를 소개합니다. 자세한 내용은 해당 문서를 빠르게 참조하시기 바랍니다.이 기술은 물고기, 생쥐, 토끼, 고양이, 원숭이와 같은 다른 실험 동물에 전극 또는 마이크로 프로브를 삽입하는 데 적용 가능합니다.

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연구

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생물학

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쥐의 뇌에 무선 양방향 미세전극 시스템 이식

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