Name: 어쿠스틱 막 Microparticle 기술을 사용하여 개발 사용자 지정 중국어 햄스터 난소 - 숙주 세포의 단백질 Assays (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-03T18:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: 배우세요 ViBE 플랫폼을 활용한 맞춤형 면역분석법 개발 방법을 중국 햄스터 난소 숙주 세포 단백질 분석에 적용하세요. 자동화 시스템으로 재현성 높은 결과를 최소한의 수작업 시간으로 얻을 수 있습니다.

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1. MicroParticle 준비 <ol><li> 비오틴 NHS 화학을 사용하여 레이블 항체 </li><li> Biotinylation의 정도 결정 </li><li> Biotinylated 항체와 공액 Streptavidin 비즈 <ol><li> 1~2분에 대한 vortexing하여 원래의 약병에 비즈를 Resuspend </li><li> microcentrifuge 관으로 나누어지는 구슬 원하는 볼륨을 </li><li> 비즈에게 PBST로 3 회 씻어 : <ol><li> 이분에 대한 자석에 구슬이 들어있는 튜브를 배치 </li><li> 자석에 튜브로 흡인하여 표면에 뜨는를 제거합니다. 구슬을 방해하지 않도록주의 </li><li> 자석에서 튜브를 제거하고 1 ML의 PBST를 추가 </li><li> 구슬을 resuspend 20 초 소용돌이 </li><li> 뚜껑에서 비즈를 제거하는 5 초 동안 원심 분리기 </li><li> 두 번 더 2.3.1-2.3.5를 반복 </li></ol></li><li> 자석에 세 번째 세척 장소 관 후 PBST를 기음 </li><li> 비즈로 biotinylated 항체를 추가하고 resuspend </li><li> 필요한 경우하는 것이 PBS 300 μL에 biotinylated 항체의 볼륨을 가져 오십시오. 항체 볼륨이 이미있다면 큰 300 μL는 PBS를 추가하지 마십시오 </li><li> 와동 흔드는 또는 튜브 회전에서 RT 30 분 비드 / 항체 서스펜션을 품어 </li><li> 3 단계에서와 같이 PBST로 3 번 씻으십시오. </li><li> biotinylated BSA와 구슬 블럭 <ol><li> 세번째 세척이 10 μg / MG biotinylated BSA를 추가 후, PBS 필요한 경우 300 μL로 볼륨을 조정하고, 30 분 동안 교반과 부화 </li></ol></li><li> 3 단계에서와 같이 PBST로 3 회 씻어 </li><li> PBS/0.05 %의 BSA 100 μL에 비즈를 Resuspend. 나트륨 azide는 장기 보관을 위해 추가할 수 있습니다 </li></ol></li><li> 표준 NHS 플루오레신 프로토콜을 사용하여 탐지 항체를 fluoresceinate </li><li> Fluorescination에 노출된 정도를 확인하는 </li></ol> 2. HCP - 개발 <ol><li> 작업 솔루션을 준비 : <ol><li> 플루오레신 표시된 항체 (층 - AB) : 대부분의 CHO - HCP assays 400 NG / ML의 최종 농도에 층 - AB를 사용합니다. 층 - AB가 최종 분석 볼륨의 ¼로 추가됩니다 따라서 작업 솔루션의 농도는 1.6 μg / ML입니다. BioScale 비드 / FlAb 희석제와 함께 FlAb 주식을 diluting하여이 솔루션을 준비합니다. </li><li> 비즈 : 대부분의 CHO - HCP assays은 2x10 5 구슬 / ML의 최종 농도에 구슬을 사용합니다. 비드 시약은 최종 분석 볼륨의 ¼을 구성하므로 작업 솔루션의 농도 5 구슬 / ML 8x10입니다. BioScale 비드 / FlAb 희석제와 비드 주식을 diluting하여이 솔루션을 준비합니다. 와동 확실히 모든 비즈 있도록 잘 구슬 주식 사전 나누어지는를 제거하기 위해 중지되어 있습니다. </li><li> 버퍼를 실행 : 실행중인 버퍼의 구성은 그러나 몇 가지 CHO - HCP assays가 10 MM의 HEPES 버퍼, 1 % 트윈, 산도 7.5를 사용하여 개발되었습니다, 분석을 개발하는 데 사용되는 항체에 최적해야 할 수 있습니다. BioScale 사용하기 전에 1 % 농도로 버퍼에 추가됩니다 실행중인 버퍼 (개발 키트와 함께 제공된)에 첨가제를 개발하였습니다. </li></ol></li><li> BioScale 샘플 희석제와 calibrators 및 샘플을 희석. </li></ol> 3. 분위기 시스템 설정 <ol><li> 의 분위기 워크 스테이션 턴 </li><li> 시스템 공급 및 폐기물을 연결 </li><li> 프라임 시스템 </li><li> 분위기 카트리지를 삽입 </li><li> 루트 튜브에게 </li><li> "샘플 설정"이라는 시트를 작성하여 분석 템플릿을 준비합니다. BioScale 각 바이브 워크 스테이션 분석 한 분석 템플릿을 가지고 기능을 제공합니다. 이것은 사용자가 실험의 완전한 기록을 유지 다른 assays에 대한 템플릿의 "주의 사항"시트에서 특정 노트를 편집하고 저장할 수 있습니다. </li><li> 초기 분석 템플릿은 설정 : "예제 설정"시트의 분석에 기준의 농도 범위의 테이블 (왼쪽 상단 모서리)를 작성하여 시작합니다. </li><li> 다음 긴 샘플 부화 필요한 방법 바이브 워크 스테이션을 지시하기 위해 표준의 오른쪽 (단순 칼럼 읽기 설정, 하나 시약 추가하고 두 시약 추가 설정)을 테이블에 추가 정보를 입력, 얼마나 시약의 부피가 전송하는 것입니다 , 샘플 축적되어야 얼마나 오래, 그리고 센서 컨디셔닝 및 프로브 및 카트리지의 오염 제거가 필요한지 여부 등 </li><li> 접시 레이아웃을 작성하십시오. </li><li> 접시에 샘플 / 시약을로드합니다. 느낌이 시약 판에 필요한 볼륨을 제공합니다. 샘플 볼륨은 다양하지만, 120 μL의 총 분석 볼륨의 절반에 좋은 시작 장소입니다 수 있습니다. </li><li> 플레이트 커버를 적용합니다. 워크 스테이션 데크에 번호판을로드합니다. </li><li> 마법사를 시작 분석을 실행 마법사를 통해 이동하여 분석을 시작합니다. </li></ol> 4. 대표 결과 <img src="/files/ftp_upload/2493/2493fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1 : AMMP 샌드위치 면역 분석법 분위기 워크 스테이션에서 AMMP 분석은 항원 농도를 측정합니다. 시그널은 비드 - 항원 - 항체 hapten이 hapten / 안티 - hapten 상호 작용을 통해 센서에 바인딩 할 때 측정됩니다. 중생은 면역 단지를 제거하여 처음 상태로 다시 센서를 제공합니다. <img src="/files/ftp_upload/2493/2493fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2 : CHO - HCP AMMP 분석 교정 곡선 그림 위에 2 CHO HCP AMMP 분석 교정 곡선의 예입니다. 분석은 높은 정밀도와 재현성있는 반응기를 포함하여 정화 스트림 전역에서 표본으로 수행할 수 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/2493/2493fig3.jpg" alt="그림 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 3"> 그림 3 : 단백질 AMMP 분석 교정 곡선 그림 3은 느낌 잔여 단백질 어세이 키트와 함께 수행 잔여 단백질 AMMP 어세를위한 보정 곡선입니다. 동일한 키트는 30 분 잠복기와 빠른 분석, 또는 일반적으로 동급 엘리사의 사용자가보다 나은 둘 중 정밀도 또는 정확성의 손실없이 긴 잠복기와 더 민감한 결과와 넓은 다이나믹 레인지에 사용할 수 있습니다 ' 손 <img src="/files/ftp_upload/2493/2493fig4.jpg" alt="그림 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 4"> 그림 4 : 제품 Titer AMMP 어세이 분위기 워크 스테이션 또한 제품 Titer 분석, 그림 4에 표시된 결과를 사용할 수 있습니다. 다른 AMMP의 Assays 다르게 수행,이 분석은 단순 희석, 또는 구슬보다 샘플 치료가 다른가 필요하지 않으며, quantitation는 viabilities 광범위한 이상 만 10 개 이상의 세포를 포함하는 "아니오 스핀"샘플로 확인되었습니다. <img src="/files/ftp_upload/2493/2493fig5.jpg" alt="그림 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 5"> 그림 5 : GST - Gadd34 biomarker 분석을위한 AMMP 분석 표준 곡선 분위기 BioAnalyzer (패널) 또는 재조합 GST - Gadd34를 사용하여 AlphaScreen 기술로 얻은 신호의 표준 곡선은 그림 5에 표시됩니다. 바이브 플랫폼 결과가 동일한 항체를 사용하여보다 민감한 약 로그되었습니다. AMMP 아직 적은 큰 입자 솔루션 위상 캡처 및 감지 복잡한 형성에서 여전히 혜택의 측정을 활용합니다. <img src="/files/ftp_upload/2493/2493fig6.jpg" alt="그림 6" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 6"> 그림 6 : 종양 샘플에서 GST - Gadd34에 대한 AMMP 분석 표준 곡선 그림 6에서 CWR22 xenografts에서 Gadd34의 유도는 느낌 BioAnalyzer (패널 A) 또는 AlphaScreen (패널 B)에 의해 분석으로 boronate proteasome 억제제의 존재 또는 부재에서 테스트되었습니다. 바이브 플랫폼 AlphaScreen 신호 반면, 생체내 종양 xenografts에있는이 단백질의 증가 μg로 침묵했다에 민감한, 재현성 결과를 얻을 수있었습니다. 이 예제는 매우 복잡한 샘플의 AMMP 기술의 파워를 보여줍니다. 칩 근처 자석의 민감한 감지 칩과 높은 효율성으로 인해, 자기 microparticles의 낮은 숫자는 효율적이고 reproducibly lysed 세포 (용해 시약 포함) 및 혈액 파편의 복잡 가운데 낮은 풍부한 대상에 대한 청소하실 수 있습니다.

이 문서의 저자는이 문서에서 사용되는 악기와 시약의 일부를 생산 Bioscale, 병원에서 근무하고 있습니다.

상기 예제는 복잡한 샘플에 AMMP의 고감도 정량 결과를 보여줍니다. 시스템에 시약 서식의 용이성 및 제어 기능을 통해 전달이 성능, 다양한 어플 리케이션을 위해 사용됩니다. 이러한 응용 프로그램은 종양의 Gadd34에서와 같이, 대상에 대한 구체적으로, 또는 정화 스트림을 교차 샘플에 숙주 세포 단백질 감지 및 quantitation에서 표적의 스펙트럼에 대한 일반적인 수 있습니다. 매우 유연한 AMMP와 결합된 낮은 오버헤드 바이브 플랫폼은 중요한 assays를 전달하기위한 강력한 도구를 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>NHS-Chromogenic-biotin 또는 NHS-Chromogenic Biotin Labeling kit</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NHS-Chromogenic-biotin을 시약으로 구매하는 경우 다음과 같은 추가 재료가 필요합니다</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>dimethylsulfoxide (DMSO) 또는 dimethylformamide (DMF)와 같은 수용성 유기 용매</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Phosphate buffered saline (PBS) 또는 기타 아민 제거 버퍼 (pH 7 &amp;#8211; 9)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>버퍼 교환용 Desalting columns 또는 투석 장치</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>단백질 및 biotin 농도 측정을 위해 354 및 280 nm 측정이 가능한 분광광도계 &amp;#8211;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Biotinylated antibody (2-5 biotins/Ab)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin magnetic beads</td><td><a href="http://www.bioscale.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> BioScale</a></td><td></td><td>(10 mg/mL) ~10&lt;sup&gt;8&lt;/sup&gt; beads/mg</td></tr><tr><td>마이크로 원심분리 튜브용 자석</td><td>New England Biolabs</td><td>cat # S1510S</td><td></td></tr><tr><td>블로킹용 Biotinylated BSA</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Phosphate buffered saline (PBS)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS 0.1% Tween 20</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vortex용 마이크로 원심분리 튜브 홀더 또는 튜브 회전기</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>라벨링할 항체 또는 단백질</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NHS-Fluorescein 또는 NHS-Fluorescein Labeling kit</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NHS-Fluorescein을 시약으로 구매하는 경우 다음과 같은 추가 재료가 필요합니다</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>dimethylsulfoxide (DMSO) 또는 dimethylformamide (DMF)와 같은 수용성 유기 용매</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 mM borate, pH 8.5 또는 기타 아민 제거 버퍼 (pH 7 &amp;#8211; 9)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>버퍼 교환용 Desalting columns 또는 투석 장치</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>단백질 및 fluorescein 농도 측정을 위해 493 및 280 nm 측정이 가능한 분광광도계가 필요합니다.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Diluent</td><td><a href="http://www.bioscale.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> BioScale</a></td><td></td><td>beads 및 FlAb 희석용</td></td></tr><tr><td>Sample Diluent</td><td><a href="http://www.bioscale.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> BioScale</a></td><td></td><td>시료 및 검정물 희석용</td></td></tr><tr><td>Running Buffer Additive</td><td><a href="http://www.bioscale.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> BioScale</a></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

어쿠스틱 막 microparticle 기술을 사용하여 개발 사용자 지정 중국어 햄스터 난소 - 숙주 세포의 단백질 assays

Developing Custom Chinese Hamster Ovary-host Cell Protein Assays using Acoustic Membrane Microparticle Technology

독특한 단백질에 대한 사용자 정의 assays은 종종 시간이 많이 걸리는 수동 검색 및 엘리사 또는 대체 플랫폼 개발의 복잡으로 인해 서양 blots로 quantitation 기술로 제한됩니다. BioScale의 독점 음향 막 MicroParticle (AMMP) 기술은 더 나은 감도, 재현성 및 자동 작동을 제공 샌드위치 immunoassays 쉽게 바이브 플랫폼에서 사용하기 위해 개발된 수 있습니다. 예를로 제공,이 프로토콜은 사용자 정의 중국어 햄스터 난소 - 숙주 세포의 단백질 (CHO - HCP) 분석을 개발하기위한 절차를 설명합니다. 여기에 설명된 일반 원칙은 immunoassays의 다양한 발전을 위해 다음 수 있습니다. 계산하는 센서 표면에 microparticles의 바인딩에 의한 진동 주파수의 변화를 측정하여 AMMP 분석 측정 항원 농도. 그것은 네 개의 주요 컴포넌트로 구성되어 있습니다 : 기능화 팔 센서 칩이 포함되어 있습니다 (1) 카트리지 (2) 항체 라벨 자기 microparticles, 기능화 칩의 표면 (4)의 항원을 포함하는 샘플에 바인딩 (3) hapten 태그 항체 관심. BioScale의 바이오 센서는 별도의 유체 경로의 8 각 세포막을 포함하는 공진 장치입니다. 점막 대량의 표면에 축적이 주파수 변경이 추가 대량의 금액을 quantitate하는 데 사용됩니다에 대한 응답으로 진동 주파수를 변경합니다. 센서 방지 hapten 항체로 작용합니다 immunoassays의 다양한 사용을 촉진합니다. 검정 특정 항체 한 항체 및 다른 비오틴에 hapten 태그의 공유 결합 활용을 통해 수정할 수 있습니다. 비오틴 레이블은 hapten - 태그 항체와 함께, 샌드위치에서 analyte를 캡처하는 데 사용됩니다, 결합 자기 구슬을 streptavidin 수있는 항체를 바인딩하는 데 사용됩니다. 단지 anti-hapten/hapten 상호 작용을 통해 칩을에 바인딩합니다. 각 분석의 끝에 센서가 96 - 웰 플레이트에서 열 순서 분석을 가능하게 희석 염산과 청소됩니다 실행합니다. 여기, 우리는 bioprocess 개발을위한 사용자 정의 CHO - HCP AMMP 분석을 개발하는 방법을 제시한다. AMMP의 assays을 개발하거나 AMMP assays로 기존의 assays를 수정하는 것은 복잡한 샘플 및 감소 연산자는 시간에 더 나은 성능 (재현성, 감도)를 제공할 수 있습니다. 프로토콜 개발을위한 단계를 보여줍니다 및 토론 섹션 대표 결과를 검토합니다. 분석 최적화 및 사용자 정의 매개 변수의보다 깊이 설명 BioScale에 문의하십시오. 이 키트는 잔여 단백질, 제품 titer, 그리고 CHO - HCP와 같은 일반 bioprocess 개발 assays을 제공합니다.

복잡한 매트릭스에서 더 민감한, 재현성, 자동 검색 결과에 대한 바이브 플랫폼에서 사용자 정의 assays의 개발을 설명합니다. 유니버설 카트리지는 assays 쉽게 사용자 정의 assays 사용하기 위해 적응 수 있습니다. 이 다재 다능한이 소설 assays 본 동영상에 exemplified 기존의 수동 assays의 자동 버전의 신속한 개발 및 검증이 가능합니다.

어쿠스틱 막 Microparticle 기술을 사용하여 개발 사용자 지정 중국어 햄스터 난소 - 숙주 세포의 단백질 Assays

특수한 단백질을 위한 맞춤형 분석법은 ...로 인해 ELISA 또는 웨스턴 블롯(Western blot)과 같이 시간이 많이 소요되는 수동 검출 및 정량 기술로 제한되는 경우가 많습니다.

이 프로시저의 전반적인 목표는 최소한의 수작업 시간으로 재현 가능한 결과를 얻을 수 있도록 맞춤형의 견고한 면역 분석법을 구축하는 것입니다. 이를 위해 먼저 적절한 분석 구성 성분을 준비합니다. 프로시저의 두 번째 단계는 분석 파라미터를 기반으로 분석법을 최적화하는 것입니다.절차의 세 번째 단계는 시료 및 시약 플레이트를 로딩하고 분석 절차를 정의함으로써 Vibe 플랫폼에 분석 설정을 하는 것입니다. Vibe 소프트웨어를 사용하여 시작 마법사로 Vibe를 실행하는 것이 절차의 마지막 단계입니다. 최종적으로 Vibe 플랫폼의 사용을 통해 수작업 시간을 최소화하면서 커스텀 항체를 이용한 민감하고 재현성 있는 면역 분석 결과를 얻을 수 있습니다.Eli의 방식과 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 Vibe Workstation이 표준 프로토콜에 따라 자동 운영(walkaway operations)이 가능하며 더 재현성 있는 데이터를 제공한다는 점입니다. NHS Chromogenic, biotin Bio atin, 스트렙타비딘(strep to avid) 및 자성 비드에 비오틴화 항체를 부착하기 위한 캡처 항체를 사용하여, 먼저 스트렙타비딘 및 자성 비드가 든 바이알을 1~2분 동안 볼텍싱하여 재현탁합니다. 필요한 부피의 비드를 퓨즈 튜브(fuge tube)에 피펫으로 옮기고 자성 분리기를 사용하여 상층액을 제거합니다. 서면 프로토콜에 따라 자성 분리를 이용해 비드를 회수하며 PBST로 비드를 3회 세척합니다.마지막 세척 후 PBST를 제거하고, 비오틴화 항체 용액을 비드에 추가한 다음 피펫팅하여 비드를 다시 현탁합니다. 항체 부피가 최소 300 microliters가 되도록 하십시오. 부피가 이보다 적을 경우 PBS로 조정하십시오.현탁액을 상온에서 30분 동안 교반하며 배양합니다. 그 후 이전과 동일하게 PBST로 비드를 세척합니다. 앞서 수행한 것과 동일한 절차에 따라 비오틴화된 BSA를 첨가합니다.바이오틴화 항체를 세척한 후, 장기 보관을 위해 비드들을 PBS 내 0.05% BSA 100 µL에 재현탁할 때 표준 프로토콜에 따라 아지드화 나트륨을 첨가할 수 있습니다. NHS 플루오레세인을 사용하여 검출 항체를 형광 표지하십시오. 이를 통해 중국 햄스터 난소(CHO) 숙주 세포 단백질 분석법 개발을 시작합니다.먼저, 작업 용액을 준비합니다. HAPTEN 표지 항체 또는 HAB는 bio scale bead HAB 희석액으로 희석하여 1.6 µg/mL의 4배 농도 작업 용액으로 준비하고, 해당 용액을 최소 5분 동안 회전 혼합합니다. 다음으로, 비드 용액을 준비합니다.비드 스톡 담즙을 충분히 볼텍싱하십시오. 모든 비드가 부유 상태인지 확인하기 위해, Bio Scale Bead HAB 희석액으로 희석하여 8 × 10⁵ beads/mL 농도의 4배 작동 혼합액(working mixture)을 준비하기 위한 소량을 분취하십시오. 용액을 최소 5분 동안 회전시키십시오.그 다음 전개 버퍼를 준비합니다. 여러 CHO HCP 분석법은 10 millimolar HEPES 버퍼, 1% Tween, pH 7.5 조건에서 개발되었습니다.하지만, 어세이 개발에 사용되는 항체에 따라 버퍼를 최적화해야 할 수도 있습니다. 5개 워크스테이션 어세이마다 어세이 템플릿을 준비하는 것이 좋습니다. 어세이 템플릿은 지침(instructions), 샘플 설정 노트(sample setup notes), 원시 데이터 계산(raw data calculations), 검정 곡선(calibration chart) 및 결과(results)로 표시된 7개의 시트로 구성되어 있습니다.템플릿 설정을 시작하려면, 시료 설정 시트를 선택하고 표에 표준 물질의 농도 범위를 기입하십시오. 시트의 왼쪽 상단에서 표준 물질 우측에 있는 표에 추가 정보를 입력하여 vibe 워크스테이션에 시료의 배양 시간, 전이될 시약의 부피, 시료 축적 시간, 그리고 센서 컨디셔닝 및 프로브와 카트리지의 오염 제거 필요 여부를 지시하십시오. 그 다음 플레이트 레이아웃을 작성하고, bio scale 시료 희석액으로 교정물과 시료를 희석한 후 시료를 플레이트에 로딩하십시오.세 번째 96-well 플레이트에 시약을 분주합니다. 플레이트를 밀봉합니다. 플레이트를 워크스테이션 데크 쉐이커 위에 배치하고, 세척 버퍼와 재생 용액을 사용하여 시스템을 설정합니다.vibe 워크스테이션의 전원을 켜고 시스템 공급 및 폐액 라인을 연결합니다. 시스템 프라이밍을 시작하십시오. vibe 카트리지를 삽입합니다.마지막으로 분석 시작 마법사를 실행합니다. 화면의 지침을 따르고 분석을 시작하십시오. 분석 신호는 A MMP 기술로 측정됩니다. 비드 항원 HAPTEN 항체가 hapten anti hapten 상호작용을 통해 센서에 결합하면, 재생 과정을 통해 면역 복합체를 제거하여 센서를 초기 상태로 되돌립니다. 표시된 바와 같습니다.다음은 CHO H-C-P-A-M-M-P 분석의 예시입니다. 검량선 분석은 바이오리액터 샘플에서 재현 가능한 결과로 수행될 수 있습니다. 이 검량선은 잔류 단백질에 대한 것입니다.vibe 잔류 단백질 분석 키트를 사용하여 A-A-M-M-P 분석을 수행합니다. 동일한 키트를 사용하여 30분 배양 기간으로 더 빠르게 분석하거나, 더 긴 배양 기간을 통해 더 민감한 결과와 더 넓은 동적 범위를 얻을 수 있습니다. Vibe 워크스테이션은 다른 A MMP 분석과는 다른 방식으로 수행되는 제품 타이터 분석에도 사용할 수 있습니다.이 분석법은 시료 처리나 비드(bead)가 필요하지 않으며, 1,000만 개 이상의 세포를 포함하는 원심 분리하지 않은 시료에서 정량 분석이 검증되었습니다. 여기에는 Vibe 플랫폼에서 재조합 GST GAD 34 결과를 사용하여 Vibe Bioanalyzer 또는 Alpha Screen 기술로 얻은 신호의 표준 곡선이 표시되어 있습니다. 이곳에서는 감도가 1 log 더 높습니다.Bate 프로테아좀 억제제의 존재 또는 부재 하에서 CWR 22 이종이식편의 GAD 34 유도를 Vibe, bioanalyzer 또는 Alpha screen으로 분석하여 테스트하였습니다. Vibe 플랫폼은 in vivo 종양 이종이식편에서 민감하고 재현 가능한 결과를 생성할 수 있었던 반면, alpha screen 신호는 단백질 마이크로그램 양이 증가함에 따라 개발 이후 소멸되었습니다. 이 기술은 종양학 약물 발견 분야의 연구자들이 종양 샘플 내 약물 억제를 탐구할 수 있는 길을 열어주었으며, 바이오프로세싱 응용 분야에서 더욱 효율적인 운영을 가능하게 했습니다.

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연구

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생명공학

이 비디오는 중국 햄스터 난소 세포에서 수확한 세포 배양액에서 단클론 항체를 정제하는 분석을 보여줍니다. 이 제품은 고정화된 단백질 A가 있는 다공성 유리 수지를 사용하며, 이 수지는 샘플에 있는 항체의 Fc 영역에 결합하여 오염 물질로부터 효과적으로 분리합니다. 낮은 pH의 용출 완충액을 사용하면 상호 작용이 약화되어 정제된 항체의 회수가 용이해집니다.

중국 햄스터 난소 세포에서 생산된 단일클론 항체를 정제하는 기술

여기, 우리 뒤에 고해상도 (~ 30000) MS-탐지 아군된 펩타이드 표준 단일 클론 항 체에의 정량화에 대 한 펩 티 드 파편의 펩 티 드 선구자 이온 이동성 분리와 결합 하 여 크로마 분석 결과 설명 다이제스트입니다.

액체 크로마토그래피 이온 이동성 QTOF 질량 분석에 의해 단백질 바이오에 주인 세포 단백질의 정량화에 대 한 HS MRM 분석 결과

자동화된 미생물반응기의 수확된 세포 배양 유체(HCCF)로부터의 단일클론 항체의 정제 및 후속 분석을 위한 상세한 프로토콜이 기술되었다. 분석을 사용하여 중요한 품질 특성(CQA)을 결정하고 제한된 샘플 볼륨을 최대화하여 중요한 정보를 추출하는 것도 제공됩니다.

자동화된 미생물체 시스템을 사용하여 중국 햄스터 난소 세포의 단일 클론 항체의 정화 및 분석

Reproducibly 개별 oocytes, 단일 분자 RNA 형광 제자리에서 mRNAs의 숫자를 카운트를 교 잡 (RNA-물고기) 비 부착 한 세포에 대 한 최적화 되었다. Oocytes 수집 했다, 대 본 특정 프로브 때 교배 하 고 이미지 정량화 소프트웨어를 사용 하 여 계량.

Murine Oocytes에 계량 및 방화 mRNAs 단일 분자 형광에서 제자리 교 잡 (SM-물고기)의 사용

여기에서, 우리는 단백질 A 열을 사용하여 세포 수확 및 단백질 정량화에 선행된 자동화된 마이크로 bioreactor에 있는 실험의 디자인을 실행하는 상세한 절차를 제시합니다.

중국 햄스터 난소 세포 재배에서 고처리량 자동화 마이크로 바이오리액터를 사용한 공정 최적화

pIRES2-ZSGreen1-rAbs-APN-CHO 세포에서 발현되는 재조합 항체 단백질과 전통적인 하이브리도마 기술을 사용하여 생산된 단클론 항체는 돼지 아미노펩티다아제 N(APN) 단백질을 인식하고 결합할 수 있습니다.

돼지 장 점막 상피에서 아미노펩티다아제 N을 표적으로 하는 단클론 항체 생산

상기 프로토콜은 해부된 마우스 배아 안면 과정 또는 배양된 마우스 배아 구개 중간엽 세포로부터 전체 세포 단백질 용해물을 단리하고 인산화된 단백질 수준을 평가하기 위해 후속 웨스턴 블롯팅을 수행하는 방법을 제시한다.

마우스 안면 과정으로부터 전체 세포 단백질 용해물을 분리하고 포스포단백질 분석을 위해 배양된 팔라탈 중간엽 세포

항체의 글리코실화 패턴은 그의 임상 성능을 결정하고, 따라서 글리코실화를 조절하기 위한 산업적 및 학문적 노력이 지속된다. 전형적인 글리코엔지니어링 캠페인은 시간과 노동 집약적이기 때문에, 일시적 침묵을 사용하여 글리코실화 유전자의 영향을 특성화하는 신속한 프로토콜의 생성은 유용할 것이다.

중국 햄스터 난소 세포의 신속한 항체 당공학

의약품(DP)에서 숙주 세포 단백질(HCP)을 농축하고 단백질체 농축 비드를 사용하여 펩타이드를 검출하기 위한 프로토콜이 제시됩니다. 이 방법은 자체 제조한 단클론 항체(mAb) 원료의약품(DS)을 사용하여 시연되며, 이는 성능 측면에서 다양한 방법을 평가하고 비교하기 위한 잘 특성화된 표준 물질입니다.

제한된 분해와 결합된 농축 비드를 사용한 숙주 세포 단백질 분석

여기에서는 저산소증 민감성 키메라 항원 수용체(CAR)-T 세포의 생성 및 기능 검증을 위한 프로토콜을 제시합니다. 이 프로토콜은 저산소증 민감성 CAR-T 세포의 렌티바이러스 기반 생성과 저산소증 의존성 CAR 발현 및 선택적 세포 독성의 검증을 포함한 특성 분석을 제시합니다.

저산소증 민감성 키메라 항원 수용체-T 세포의 생성 및 기능 검증

엑소좀은 상당한 임상적 잠재력을 가지고 있지만, in vivo clearance가 쉽고 안정성이 낮아 실제 적용에는 한계가 있습니다. 마이크로니들은 생리적 장벽을 뚫고 건조 상태 보존을 통해 국소 전달을 가능하게 함으로써 엑소좀 투여의 한계를 해결하고 임상적 유용성을 확대하는 솔루션을 제시합니다.

엑소좀의 로딩 및 전달을 위한 Microneedle patches의 제작 및 특성 분석

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어쿠스틱 막 Microparticle 기술을 사용하여 개발 사용자 지정 중국어 햄스터 난소 - 숙주 세포의 단백질 Assays

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