Name: Methicillin 내성 황색 포도상 구균 아리 어스의 피하 감염 (MRSA) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-09T18:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 18 s
Description: 배우세요 생쥐 피하 감염 모델을 이용한 MRSA 독성 및 면역 반응 분석 방법입니다. 이 기술은 피부 연성 조직 감염에서 세균 생존과 사이토카인 수준을 평가하는 데 활용됩니다.

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이 작품은 버로스 - 웰컴 경력 수상 및 GY 리우에 보건 부여 AI074832 국립 연구소에 의해 지원되었다.

1. 감염 MRSA를 (감염하기 전에 이틀) 준비 <ol><li> 주식 문화의 혈액 한천 (Trypticase의 소이 아가르 (TSA)) 접시에 MRSA의 loopful의 예방. </li><li> 혈액 한천 플레이트에 용혈의 표현형 (각 콜로니 주위에 맑은 구역)을 확인하시기 바랍니다. </li><li> 다른 실험과 일치하는 용혈성 표현형을 가진 식민지를 선택하십시오. </li><li> 15 ML 스냅 덮인 관에서, appropriated 항생제 필요한 경우와 3 ML 토드 휴이트 맛을 (THB)에 식민지의 예방. </li><li> 37 품어 ° C 220 rpm으로 잡고 하룻밤. </li></ol> 2. 감염에 대한 마우스를 준비하는 것은 (이전 감염 하루) <ol><li> 생쥐의 크기에 따라 생쥐의 뒷면에 3 X 4cm 지역에서 모피를​​ 면도. </li><li> 면도 영역에 ~ 5mm 3 머리 제거 크림 (현지 약국에서 구입한)이 적용됩니다. </li><li> 머리 제거 크림은 약 1 분 피부 표면에 품어 수 있습니다. </li><li> ddH 2 O.와 젖은 종이 타올 </li><li> 젖은 종이 타월로 머리 제거 크림을 닦아주십시오. </li></ol> 3. (감염의 날)에 감염 MRSA 준비 <ol><li> 50 ML 나사 덮인 관에서, 사전 예열 THB 10 ML과 1:500에서 1:1000으로 밤새 박테리아 문화를 희석. </li><li> ° C 약 2.5 시간 동안 540 2.5에 도달할 때까지, 220 rpm으로 잡고 37 알을 품다. </li><li> 4 10 분 3,225 XG에서 원심 분리하여 MRSA를 수집 ° C. </li><li> 뜨는 폐기하십시오. </li><li> 10 ML Dulbecco의 인산에있는 박테리아 펠렛을 Resuspend 호수 (DPBS)가 버퍼. </li><li> 3 단계와 4 단계를 반복합니다. </li><li> 원하는 농도에 DPBS에있는 박테리아 펠렛을 Resuspend. </li><li> 순차적으로 10월 8일부터 10월 1일까지에서 세균 현탁액을 희석. </li><li> 혈액 한천 플레이트 플레이트에 희석 박테리아 현탁액합니다. </li><li> ° C 야간 37 번호판을 품어. </li><li> 관찰과 inocula의 용혈성 표현형를 기록합니다. </li><li> 접시 단위를 형성하는 콜로니 (CFU)이 번호를 세어보세요. </li><li> 접시에 CFU 번호를 기반으로 inocula을 계산합니다. </li></ol> 4. MRSA의 피하 감염 (감염의 일 및 3 일 후 감염에 대한) <ol><li> 면도 지역의 subcutaneously 100 μL 세균 현탁액을 주사. </li><li> 생쥐가 살아 있는지 확인하기 위해 주사 후 3~5시간 위해 동물을 관찰. </li><li> 매일 동물의 뒷면에있는 병변을 관찰하고 필요하면 매일 장애 영역을 기록합니다. 병변 관찰 병변의 크기와 형태의 기록을 포함해야합니다. 피부와 근육 병변 모두 병변의 길이와 넓이를 곱하여 quantitated 있습니다. 불규칙 모양의 병변은 작은 대칭 조각으로 분류하고, 각 조각은 같은 방법으로 측정해야합니다. ; 병변 측정은 또한 컴퓨터를 이용한 histomorphometric 평가 프로그램 (에서 NIH에서 제공 오픈 소스 ImageJ 사용할 수 있습니다 <a href="http://rsb.info.nih.gov/ij">http://rsb.info.nih.gov/ij/</a> 2). </li><li> 자궁 경부 전위 다음 isoflurane의 흡입하여 3 일 후 감염에 동물을 희생. </li><li> 관찰 및 피부에 병변을 기록합니다. </li><li> 멸균 가위로 닉은 피부. </li><li> 피부 껍질에서 신중하고 관찰하고 근육의 병변을 기록합니다. </li><li> 엑사이스 병변과 약 2 - 주변 지역의 5mm. </li><li> 비장과 신장을 수집합니다. </li><li> 조직 균 질기를 사용하여 조직을 균질하거나 조직 및 DPBS 100 μL를 포함하는 microfuge 튜브에 1 ML의 주사기에서 플런저의 반복 응용 프로그램에 의해. </li><li> 각각의 튜브에 DPBS 900 μL를 추가합니다. </li><li> 5 분 소용돌이 샘플을. </li><li> 순차적으로 10 6 DPBS 10 1과 현탁액을 희석. </li><li> 플레이트 THA 접시에 희석 suspensions합니다. </li></ol> 5. 대표 결과 : <ol><li> 즉시 각 피하 주입 후 물집은 감염 (그림 1A) 제대로 때 피부 표면에 관찰됩니다. 아무 물집이 피부 표면에 관찰되지 않은 경우, 사출이 너무 깊이 될 수 있으며, 이것은 감염의 결과 (병변의 크기, CFU)를 영향을 미칠 수 있습니다. </li><li> 세균 현탁액은 순차적으로 희석해야하며 CFU 각 실험에 대한 혈액 한천 플레이트에 검사해야합니다. inocula가 균질 표현형을 가지고 있는지 여부 1), 감염 2) 정확한 가능한 세균성 카운트 :이 단계는 중요한 정보를 얻을 수 있습니다. </li><li> 병변과 박테리아 생존는 다양한 시간 지점 후 감염에서 평가 수 있습니다. 여기서 우리는 3 일 후 감염에 대한 감염을 조사. 병변 크기가 피부 표면 (1X 10 9, 그림 1D : 그림 1B 1 X 10 7 CFU)를 분석하고 근육의 표면 (그림 1C에서 : 1X 10 9 7 CFU). 병변 면적 (mm) × 폭 (mm)가 조직 손상 (Figs. 2 A와 B)을 평가하기위한 측정 수 길이를 같습니다. 이 결과는 주어진 독성 인자에 의한 조직 손상의 정도를 결정하는 데 도움이 될 수 있습니다. 또한 병변이 excised과 DPBS에 균질하고, 감염 사이트에있는 박테리아의 생존을 나타내는 CFU 번호를 (그림 2C), quantitate로 비쳐지게 만들려합니다. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/2528/2528fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 피부와 근육 병변. CD1 생쥐는 MRSA (LAC) 하나의 측면에 피하 주사를했다. 사진은 시간 0에서 3 일 이후의 감염에 찍은. (A) 시간 0 이후의 감염 (PI), (B) - (G) 3 일 PI, B, D 및 F : 피부 병변, C, E 및 G : 근육 병변, B 및 C : 1X 10 9 CFU 감염, D와 E : 1X 10 7 CFU 감염, F 및 G : 모의. <img src="/files/ftp_upload/2528/2528fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 피부 병변의 크기와 가능한 박테리아 CD1 쥐를 감염 MRSA (LAC)에서 3 일 후 감염. 피부와 근육의 병변에 감염 사이트에 포함됩니다. (A) 피부 병변의 크기. (B) 근육 병변의 크기. (C) 총 조직 CFU. H : 1 X 10 9 CFU의 inocula, L : 1 X 10 7 CFU의 inocula. * : P &lt;0.05, 만 - 휘트니 테스트.

<ol><li>Ahn, J. Y., Song, J. Y., Yun, Y. S., Jeong, G., Choi, I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protection+of+Staphylococcus+aureus-infected+septic+mice+by+suppression+of+early+acute+inflammation+and+enhanced+antimicrobial+activity+by+ginsan%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Immunol+Med+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Protection of Staphylococcus aureus-infected septic mice by suppression of early acute inflammation and enhanced antimicrobial activity by ginsan.</a> FEMS Immunol Med Microbiol. 46, 187-197 (2006).</li>
<li>Girish, V., Vijayalakshmi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Affordable+image+analysis+using+NIH+Image%2FImageJ%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Affordable image analysis using NIH Image/ImageJ.</a> Indian J Cancer. 41, 47-47 (2004).</li>
<li>Hahn, B. L., Onunkwo, C. C., Watts, C. J., Sohnle, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+dissemination+and+cutaneous+damage+in+a+mouse+model+of+staphylococcal+skin+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Microb+Pathog%22%5BJournal%5D)">Systemic dissemination and cutaneous damage in a mouse model of staphylococcal skin infections.</a> Microb Pathog. 47, 16-23 (2009).</li>
<li>Hruz, P., Zinkernagel, A. S., Jenikova, G., Botwin, G. J., Hugot, J. P., Karin, M., Nizet, V., Eckmann, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NOD2+contributes+to+cutaneous+defense+against+Staphylococcus+aureus+through+alpha-toxin-dependent+innate+immune+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">NOD2 contributes to cutaneous defense against Staphylococcus aureus through alpha-toxin-dependent innate immune activation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 12873-12878 (2009).</li>
<li>Ji, Y., Zhang, B., Van, S. F., Horn, P. W. arren, Woodnutt, G., Burnham, M. K., Rosenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+critical+staphylococcal+genes+using+conditional+phenotypes+generated+by+antisense+RNA%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Identification of critical staphylococcal genes using conditional phenotypes generated by antisense RNA.</a> Science. 293, 2266-2269 (2001).</li>
<li>Somerville, G. A., Beres, S. B., Fitzgerald, J. R., DeLeo, F. R., Cole, R. L., Hoff, J. S., Musser, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+serial+passage+of+Staphylococcus+aureus%3A+changes+in+physiology%2C+virulence+factor+production%2C+and+agr+nucleotide+sequence%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">In vitro serial passage of Staphylococcus aureus: changes in physiology, virulence factor production, and agr nucleotide sequence.</a> J Bacteriol. 184, 1430-1437 (2002).</li>
<li>Tseng, C. W., Kyme, P., Low, J., Rocha, M. A., Alsabeh, R., Miller, L. G., Otto, M., Arditi, M., Diep, B. A., Nizet, V., Doherty, T. M., Beenhouwer, D. O., Liu, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staphylococcus+aureus+Panton-Valentine+leukocidin+contributes+to+inflammation+and+muscle+tissue+injury%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Staphylococcus aureus Panton-Valentine leukocidin contributes to inflammation and muscle tissue injury.</a> PLoS One. 4, e6387-e6387 (2009).</li>
<li>von Kockritz-Blickwede, M., Rohde, M., Oehmcke, S., Miller, L. S., Cheung, A. L., Herwald, H., Foster, S., Medina, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+mechanisms+underlying+the+genetic+predisposition+to+severe+Staphylococcus+aureus+infection+in+the+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Immunological mechanisms underlying the genetic predisposition to severe Staphylococcus aureus infection in the mouse model.</a> Am J Pathol. 173, 1657-1668 (2008).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

<ol><li> murine 피부와 부드러운 조직 감염 모델은 병원체의 생체내 독성 평가에 대한 강력한 도구입니다. S.의 pathogenicity 피부와 부드러운 조직 감염의 구균이 매개 변수의 수에 따라 달라질 수 있습니다. 이들은 inoculum 크기, 세균성 성장 단계 접종의 깊이, 마우스의 연령, 및 마우스 유전 배경에 7, 8을 포함합니다. 이 모델을 사용하여 독성 기능을 검사하면 결과가 일치하는지 확인하려면이 매개 변수에 대한 통제 중요합니다. 우리는 SKH1 (사나이 답게 마우스), C57Bl / 6, BALB / C 및 CD1 포함하여 생쥐의 몇 가지 계통에 피부의 MRSA 감염을 공부했습니다. 감염의 결과는 마우스의 유전자 구조는 MRSA 감염 1의 심각의 중요한 결정자임을 다른보고와 일치하는 다른 변종 7에 차이가 있습니다. 이 마우스 변형은 S. 연구에 적합해야 표시 되었기 때문에 본 실험에서 우리는 CD1 쥐를...

<table><tbody><tr><td>THB</td><td>VWR international</td><td>95025-314</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Invitrogen</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>1 ml 주사기</td><td>BD Biosciences</td><td>309602</td><td></td></tr><tr><td>27G1/2 바늘</td><td>BD Biosciences</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>양 혈액 한천 배지 (TSA)</td><td>VWR international</td><td>90004-328</td><td></td></tr></tbody></table>

methicillin 내성 황색 포도상 구균 아리 어스의 피하 감염 (mrsa)

Subcutaneous Infection of Methicillin Resistant Staphylococcus Aureus (MRSA)

MRSA는 공중 보건에 대한 세계적인 위협이며, MRSA 피부와 부드러운 조직 감염은 이제 더 미국에있는 모든 소프트 조직 감염의 절반 이상을 차지하고있다. 소프트 조직 감염 가운데, myositis, pyomyositis 및 염 괴사는 점차 MRSA가 지역 사회에서 발생하는과 공동으로보고되었습니다. MRSA 더 심각한 감염으로 이어지는 호스트 면역 간의 상호 작용을 이해하기 위해서는, 동물 모델의 가용성은 호스트 및 세균성 요인의 연구를 허용, 중요합니다. 여러 감염 모델은 S.의 pathogenesis을 평가하기 위해 도입되었습니다 표면 피부 감염 동안 구균. 여기, 우리는 피부, 피하 및 근육 pathologies을 검사 피하 감염 모델을 설명합니다.

Murine 피부와 부드러운 조직 감염 모델은 methicillin 내성 포도상 구균 (MRSA) 및 호스트 면역 응답의 독성 기능을 평가하기위한 활용합니다. 여기, 우리는 피부와 부드러운 조직 감염 피하 감염 모델을 소개하고 있습니다.

Methicillin 내성 황색 포도상 구균 아리 어스의 피하 감염 (MRSA)

MRSA는 전 세계적인 공중 보건의 위협이며, 현재 MRSA 피부 및 연조직 감염은 전체 연조직 감염의 절반 이상을 차지하고 있습니다...

다음 실험의 전반적인 목표는 메티실린 내성 황색포도상구균(methicillin resistant staphylococcus aureus) 또는 MRSA의 생존 및 확산과 감염 부위의 케모카인 및 사이토카인 수치를 조사하는 것입니다. 이를 위해 생쥐 등의 털을 제거하여 관찰 영역을 확보합니다. 두 번째 단계로,현탁액 상태의 MRSA를 감염 3일 후 마우스에 피하 투여하며, 조직 균질액을 한천 배지에 도말하여 형성된 콜로니 형성 단위(CFU) 수를 측정함으로써 감염 병리와 세균 수를 평가할 수 있습니다. 안녕하세요, 반갑습니다. 제 이름은 De Lordon입니다.저는 박사후 연구원입니다. 안녕하세요, 제 이름은 Mariel Sanchez입니다. 저는 박사과정 학생이며, 저는 Andrea Huda입니다.저는 Cedar-Sinai Medical Center 소아과 George Lee 교수 연구실의 연구원입니다. 이 방법은 근염, 다발성 근염 및 괴사성 근막염을 포함한 중증 감염 모델링과 같이 의료 분야의 핵심적인 질문들에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 방법은 중증 응급 감염에 대한 통찰을 제공할 뿐만 아니라, A군 연쇄상구균 및 기타 미생물과 같은 다른 시스템에도 적용될 수 있습니다.또한, 근염 및 다발성 근염을 유발하는 다른 생물체의 기능과 병인에 대해 연구할 수 있습니다. 일반적으로 이 절차에 익숙하지 않은 개인의 경우, caucus areas global regulator의 스태프 중 하나가 변이가 매우 심하기 때문에 어려움을 겪을 수 있습니다. 주의를 기울이지 않으면 수집된 데이터에 상당한 변동이 생겨 데이터 해석에 어려움이 있을 수 있습니다.시작하겠습니다. BSL 2 시설에서 TSA 베이스의 양 혈액 한천 배지 플레이트와 냉동 블록을 이용한 멸균 루프를 준비하십시오. -80 °C 보관소에서 Mercer 균주 스톡 배양액을 꺼내십시오.그런 다음 멸균 루프를 사용하여 스톡 배양액의 얼음 조각을 소량 떼어 플레이트에 옮깁니다. Mercer 스톡 배양액 조각을 소량 취한 후에는 즉시 스톡 배양액을 냉동고로 다시 옮겨 해동을 방지하십시오. 반복적인 냉동 및 해동은 스톡 배양액에 손상을 줄 수 있기 때문입니다. 루프를 사용하여 한천 배지를 스트리킹함으로써 개별 Mercer 콜로니가 성장하도록 유도합니다.CO2 보충 없이 37°C에서 플레이트를 하룻밤 동안 배양합니다. 다음 날, 새로운 혈액 우뭇가사리 배지(blood agar) 플레이트와 TSA 플레이트를 준비하여 라벨을 붙이고, 15 mL 스냅 캡 튜브에 THB 3 mL를 분주하여 준비합니다.하룻밤 동안 배양한 M SSA 플레이트를 회수하여 콜로니의 용혈 표현형을 관찰합니다. 멸균 루프를 사용하여 이전 실험 콜로니와 일치하는 표현형을 가진 콜로니를 선택합니다. 동일한 루프 도말법을 사용하여 선택한 콜로니를 THB에 접종합니다.THB 용액이 담긴 플레이트를 37 °C에서 220 rpm으로 흔들어주며 밤새 배양합니다. 이 박테리아는 이후 단계에서 마우스의 피하 감염을 위한 배양액 접종에 사용됩니다. 혈액 우뭇가사리 배지 플레이트 또한 인큐베이터에 넣습니다.다음 날 아침, 이 플레이트를 사용하여 THB 용액 내 박테리아의 용혈 표현형이 처음에 선택한 콜로니의 표현형과 일치하는지 확인합니다. 용혈 표현형이 원래의 클론과 일치하지 않는 경우, 실험을 시작하지 마십시오. 마우스를 플랫폼으로 옮기고 등 부분의 털을 깎습니다.동물이 지나치게 공격적인 경우, isof fluorine을 이용한 진정이 필요할 수 있습니다. 제모된 부위에 NA와 같은 제모 크림을 약 5 cubic millimeters 도포하십시오. NA는 인근 약국에서 구입할 수 있습니다.베이비 오일이 포함되지 않은 제품은 생쥐에게 너무 강한 자극을 줄 수 있으므로, 반드시 베이비 오일이 함유된 제모 크림을 구매하십시오. 크림을 피부 표면에 도포하고 약 1분 동안 방치합니다. 제모 크림이 작용하는 동안 이중 증류수로 페이퍼 타월 몇 장을 적셔 둡니다. 1분 후, 젖은 페이퍼 타월을 사용하여 제모 부위를 깨끗이 닦아냅니다.피부에 제모 크림이 남아 있지 않은지 확인하십시오. 50 mL 스크류 캡 튜브에 10 mL의 THB를 넣고 세균 배양기에서 37 °C로 4~10시간 동안 예열하십시오. 하룻밤 동안 배양한 세균 배양액 20 µL를 예열된 THB로 옮깁니다. 이렇게 하면 하룻밤 동안 배양된 merc가 희석됩니다.1:500 비율로 현탁액을 만듭니다. 배양 기간 후, 튜브를 37 °C의 진탕 배양기에 넣고 220 rpm으로 약 2.5~3시간 동안 배양합니다. 더 많은 THB를 사용하여 박테리아 현탁액을 1:10으로 추가 희석한 후 분광광도계로 현탁액을 측정합니다.514 nm에서 흡광도를 측정합니다. 1:10 희석액의 흡광도가 0.25에 도달할 때까지 현탁액을 37 °C에서 분당 220회 회전하며 진탕 배양합니다. M er를 수집하기 위해, 50 mL 튜브를 4 °C에서 3,225 ×g로 10분간 원심분리하고 상층액을 제거한 후 재현탁합니다.박테리아 펠렛을 10 milliliters의 DPBS에 현탁하고, 이 중증 감염 모델을 위해 원심분리 단계를 반복하여 박테리아를 다시 세척합니다. 박테리아 펠렛을 약 one milliliter의 DPBS에 재현탁하여 milliliter당 약 one times 10 to the 10 colony forming units가 되도록 합니다. 양 혈액 A-R-T-S-A 플레이트를 준비하고, DPBS 플레이트에서 박테리아를 10 to the one에서 10 to the eight배까지 단계적으로 희석합니다.연속 희석한 박테리아 현탁액 10 µL를 혈액 배지 플레이트에 세 번 반복하여 점적합니다. 플레이트를 37 °C에서 하룻밤 동안 배양합니다. 16~18시간 동안 배양한 후, 접종균의 용혈 표현형을 관찰하고 기록합니다.플레이트의 콜로니 형성 단위(colony forming units) 수를 측정합니다. 감염 접종량은 플레이트의 콜로니 형성 단위 수를 기반으로 계산됩니다.앞서 준비한 DPBS 내 박테리아 현탁액 100 µL를 시린지에 채웁니다. 주입 전, 마우스의 호흡수가 초당 약 1회가 되도록 진정시켜야 합니다. 시연을 위해 본 영상에서는 안락사시킨 마우스가 사용되었습니다.주사 후 한쪽 옆구리에 M ser를 주입합니다. 마우스를 케이지로 옮깁니다. 동물실로 다시 옮기기 전, 마우스가 살아 있는지 확인하기 위해 주사 후 3~5시간 동안 동물을 관찰합니다.동물을 희생시킨 후 매일 동물의 등 부분에 나타난 병변을 관찰하십시오. 피부 병변의 크기와 상태를 측정하고 기록하십시오. 피부 및 근육 병변 부위는 병변의 길이와 너비를 밀리미터 단위로 곱하여 정량화합니다.불규칙한 모양의 병변은 더 작은 대칭 조각으로 나누어야 하며, 각 조각을 동일한 방법으로 측정해야 합니다. 조직 수집을 위해 100 µL의 DPBS가 들어 있는 1.5 mL 마이크로 원심분리 튜브를 준비합니다. 멸균 면도날로 피부에 절개선을 넣은 후, 멸균 가위로 병변을 절제합니다.병변을 절제할 때, 해당 부위 주변의 건강한 피부를 약 2~5mm 정도 함께 절제하십시오. 근육 병변 분석을 위해 병변을 조직 수집 튜브에 넣습니다. 피부를 조심스럽게 벗겨내어 크기를 측정하고 근육 조직의 병변 상태를 기록하십시오.비장과 신장을 채취합니다. 이 조직들을 각각 별도의 채취 튜브에 넣습니다. 1 mL 주사기를 사용하여 약 30초 동안 흔들어 조직을 균질화합니다.각 튜브에 900 µL의 DPBS를 추가합니다. THA 플레이트를 준비하고 균질화된 조직 샘플을 5분 동안 볼텍싱합니다. 샘플을 단계적으로 희석합니다.현탁액을 10⁻⁶배까지 단계 희석합니다. 96-웰 플레이트에 각 단계 희석 현탁액 10 µL를 분주합니다. 플레이트를 37 °C 박테리아 배양기에 넣고 하룻밤 동안 배양합니다.다음 날 아침, 플레이트의 콜로니 형성 단위(colony forming units)를 측정하고 희석 배수를 기반으로 콜로니 형성 단위의 수를 계산합니다. 감염 과정이 올바르게 수행되었다면, 피하 주사 직후 피부 표면에 팽진(bleb)이 관찰될 것입니다. 팽진이 관찰되지 않는다면 주입 깊이가 너무 깊은 것일 수 있으며, 이는 감염 결과에 영향을 미칠 수 있습니다.MSA 감염 후 다양한 시점에서 병변 크기와 세균 생존율을 평가할 수 있습니다. 다음의 피부 병변은 감염 후 3일째에 관찰된 것이며, 한쪽 옆구리에 1×10⁷ CFU를 감염시킨 CD1 마우스의 병변 예시입니다. 근육 병변은 일반적으로 피부 병변 아래의 조직에서 발견됩니다.다음은 앞서 제시한 피부 병변 사진과 일치하는 근육 표면 병변의 예시입니다. 이는 1×10⁷ CFU를 접종한 감염 마우스의 감염 후 3일 차에 관찰된 근육 병변입니다. 병변 영역은 mm 단위로 측정한 병변의 길이 곱하기 너비로 결정하며, 이를 통해 피부의 조직 손상 정도를 평가할 수 있습니다.감염 부위에 국소화된 박테리아의 콜로니 형성 단위(colony forming unit) 수는 절제된 병변에서 정량화할 수 있습니다. 콜로니 형성 단위 수는 독성 인자가 MSA에 생존 우위를 제공하는지 여부를 나타낼 수 있습니다. 이 절차를 수행할 때는 바늘과 고병원성 미생물을 사용하므로 표준 안전 예방 조치를 준수하는 것이 중요합니다.마지막으로, 농양 모델에서는 기존 모델보다 1,000배 낮은 접종량을 사용하며, 이를 통해 지속적인 RSA 감염을 촉진하는 S 인자는 무엇인가와 같은 추가적인 질문에 대한 답을 얻을 수 있습니다. Mars A가 충전된 주사기를 사용하는 것은 매우 위험할 수 있으므로, 주사기를 즉시 샤프 컨테이너(sharp container)에 폐기하는 등 바늘에 의한 우발적인 찔림 사고를 방지하기 위한 주의 사항을 반드시 준수하십시오. 또한, 본 실험에서는 작업 구역의 적절한 소독을 보장하기 위해 표준 BSO2 프로토콜을 준수하는 것이 중요합니다.이상입니다. 시청해주셔서 감사합니다. 안녕하세요. 안녕히 계세요.

subcutaneous-infection-methicillin-resistant-staphylococcus-aureus

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

methicillin - 내성으로 인해 실험 쥐의 심내막염...

Methicillin 내성의 실험 심내막염 모델<em&gt; 황색 포도상 구균</em&gt; (MRSA) 쥐에서

용해성 파지 바이오 센서 및 항체 비즈 메티 실린 내성 (MRSA) 및 민감한 황색 포도상 구균 박테리아를 구별 할 수 있습니다. 파지는 석영 크리스탈 마이크로 센서의 표면에 랭 뮤어 - 블로 젯 방식으로 고정 넓은 범위 포도상 구균 프로브로 근무 하였다. 항체 비즈 MRSA를 인식하고 있습니다.

항생제 내성 황색 포도상 구균 박테리아의 검출을위한 바이오 센서

피부 부상에 타고 난 면역 반응의 실시간 탐지 및 쥐의 포도 상 구 균 감염에 대 한 접근 방식을 설명 합니다. 비교 LysM EGFP 여 쥐 (형광 neutrophils 보유) LysM EGFP와 잡종 immunodeficient 마우스 스트레인, 우리가 미리 감염에 대 한 우리의 이해 및 감염을 방지 하는 방법의 개발.

마우스 모델을 평가 타고 난 면역 반응 포도 상 구 균 감염

본 프로토콜은 새로운 나노에멀젼 보조제 백신의 물리적 특성, 면역 반응 및 생체 내 보호 효과를 준비하고 평가합니다.

메티실린 내성 황색포도상구균 (MRSA) 감염에 대한 나노에멀젼 보조제 백신의 면역 반응 평가

황색포도상구균 (S. aureus)은 몸 전체로 퍼질 수 있는 능력이 있어 지속적이고 재발성 감염을 일으킵니다. 이러한 과정을 더 잘 이해하기 위해 이 연구는 S. aureus에 대한 세포 내 감염 모델을 확립합니다. 이 모델은 세포 내 감염의 기전을 조사하는 데 중요한 토대를 제공할 것입니다.

황색포도상구균에 대한 세포 내 감염 모델의 개발 및 평가

본 프로토콜은 임플란트 관련 감염을 조사하기 위해 피하 등쪽 이식을 사용하는 마우스 모델을 설명하며, 이를 통해 병태생리학적 메커니즘을 포괄적으로 조사할 수 있고 표적 치료 전략으로 진단 기준 개발을 지원할 수 있습니다.

마우스의 임플란트 관련 감염에 대한 동물 모델

드립 흐름 반응기로 개방형 시스템 흐름 biofilms을 활용하여 디스크 원자로 회전을위한 프로토콜이 상세하게 제공됩니다.

에 대한 드립 흐름 및 회전 디스크 원자로의 사용 포도상 구균 Biofilm 분석

철 소스로 인간 혈색소를 사용하여 황색 포도상 구균 성장

메티실린 내성 황색포도상구균에 대한 포도상구균 카세트 염색체 mec(SCCmec) I-V 유형의 빠른 스크리닝 및 타이핑을 위한 간단한 멀티플렉스 PCR 분석을 시연하고, 이 분석을 개별 실험실에 성공적으로 적용할 수 있도록 하는 몇 가지 중요한 단계와 절차적 뉘앙스를 제공합니다.

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우리는에 의해 분비 PSMS 및 기타 독소의 효과를 연구하는 방법을...

의 상호 작용을 연구<em&gt; 황색 포도상 구균</em&gt; 유동 세포 계측법 및 시간 경과 현미경에 의한 호중구와

배우세요 생쥐 피하 감염 모델을 이용한 MRSA 독성 및 면역 반응 분석 방법입니다. 이 기술은 피부 연성 조직 감염에서 세균 생존과 사이토카인 수준을 평가하는 데 활용됩니다.

Methicillin 내성 황색 포도상 구균 아리 어스의 피하 감염 (MRSA)

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