Name: Methicillin 내성 황색 포도상 구균 아리 어스의 피하 감염 (MRSA) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-09T18:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 18 s
Description: 배우세요 생쥐 피하 감염 모델을 이용한 MRSA 독성 및 면역 반응 분석 방법입니다. 이 기술은 피부 연성 조직 감염에서 세균 생존과 사이토카인 수준을 평가하는 데 활용됩니다.

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이 작품은 버로스 - 웰컴 경력 수상 및 GY 리우에 보건 부여 AI074832 국립 연구소에 의해 지원되었다.

1. 감염 MRSA를 (감염하기 전에 이틀) 준비 <ol><li> 주식 문화의 혈액 한천 (Trypticase의 소이 아가르 (TSA)) 접시에 MRSA의 loopful의 예방. </li><li> 혈액 한천 플레이트에 용혈의 표현형 (각 콜로니 주위에 맑은 구역)을 확인하시기 바랍니다. </li><li> 다른 실험과 일치하는 용혈성 표현형을 가진 식민지를 선택하십시오. </li><li> 15 ML 스냅 덮인 관에서, appropriated 항생제 필요한 경우와 3 ML 토드 휴이트 맛을 (THB)에 식민지의 예방. </li><li> 37 품어 ° C 220 rpm으로 잡고 하룻밤. </li></ol> 2. 감염에 대한 마우스를 준비하는 것은 (이전 감염 하루) <ol><li> 생쥐의 크기에 따라 생쥐의 뒷면에 3 X 4cm 지역에서 모피를​​ 면도. </li><li> 면도 영역에 ~ 5mm 3 머리 제거 크림 (현지 약국에서 구입한)이 적용됩니다. </li><li> 머리 제거 크림은 약 1 분 피부 표면에 품어 수 있습니다. </li><li> ddH 2 O.와 젖은 종이 타올 </li><li> 젖은 종이 타월로 머리 제거 크림을 닦아주십시오. </li></ol> 3. (감염의 날)에 감염 MRSA 준비 <ol><li> 50 ML 나사 덮인 관에서, 사전 예열 THB 10 ML과 1:500에서 1:1000으로 밤새 박테리아 문화를 희석. </li><li> ° C 약 2.5 시간 동안 540 2.5에 도달할 때까지, 220 rpm으로 잡고 37 알을 품다. </li><li> 4 10 분 3,225 XG에서 원심 분리하여 MRSA를 수집 ° C. </li><li> 뜨는 폐기하십시오. </li><li> 10 ML Dulbecco의 인산에있는 박테리아 펠렛을 Resuspend 호수 (DPBS)가 버퍼. </li><li> 3 단계와 4 단계를 반복합니다. </li><li> 원하는 농도에 DPBS에있는 박테리아 펠렛을 Resuspend. </li><li> 순차적으로 10월 8일부터 10월 1일까지에서 세균 현탁액을 희석. </li><li> 혈액 한천 플레이트 플레이트에 희석 박테리아 현탁액합니다. </li><li> ° C 야간 37 번호판을 품어. </li><li> 관찰과 inocula의 용혈성 표현형를 기록합니다. </li><li> 접시 단위를 형성하는 콜로니 (CFU)이 번호를 세어보세요. </li><li> 접시에 CFU 번호를 기반으로 inocula을 계산합니다. </li></ol> 4. MRSA의 피하 감염 (감염의 일 및 3 일 후 감염에 대한) <ol><li> 면도 지역의 subcutaneously 100 μL 세균 현탁액을 주사. </li><li> 생쥐가 살아 있는지 확인하기 위해 주사 후 3~5시간 위해 동물을 관찰. </li><li> 매일 동물의 뒷면에있는 병변을 관찰하고 필요하면 매일 장애 영역을 기록합니다. 병변 관찰 병변의 크기와 형태의 기록을 포함해야합니다. 피부와 근육 병변 모두 병변의 길이와 넓이를 곱하여 quantitated 있습니다. 불규칙 모양의 병변은 작은 대칭 조각으로 분류하고, 각 조각은 같은 방법으로 측정해야합니다. ; 병변 측정은 또한 컴퓨터를 이용한 histomorphometric 평가 프로그램 (에서 NIH에서 제공 오픈 소스 ImageJ 사용할 수 있습니다 <a href="http://rsb.info.nih.gov/ij">http://rsb.info.nih.gov/ij/</a> 2). </li><li> 자궁 경부 전위 다음 isoflurane의 흡입하여 3 일 후 감염에 동물을 희생. </li><li> 관찰 및 피부에 병변을 기록합니다. </li><li> 멸균 가위로 닉은 피부. </li><li> 피부 껍질에서 신중하고 관찰하고 근육의 병변을 기록합니다. </li><li> 엑사이스 병변과 약 2 - 주변 지역의 5mm. </li><li> 비장과 신장을 수집합니다. </li><li> 조직 균 질기를 사용하여 조직을 균질하거나 조직 및 DPBS 100 μL를 포함하는 microfuge 튜브에 1 ML의 주사기에서 플런저의 반복 응용 프로그램에 의해. </li><li> 각각의 튜브에 DPBS 900 μL를 추가합니다. </li><li> 5 분 소용돌이 샘플을. </li><li> 순차적으로 10 6 DPBS 10 1과 현탁액을 희석. </li><li> 플레이트 THA 접시에 희석 suspensions합니다. </li></ol> 5. 대표 결과 : <ol><li> 즉시 각 피하 주입 후 물집은 감염 (그림 1A) 제대로 때 피부 표면에 관찰됩니다. 아무 물집이 피부 표면에 관찰되지 않은 경우, 사출이 너무 깊이 될 수 있으며, 이것은 감염의 결과 (병변의 크기, CFU)를 영향을 미칠 수 있습니다. </li><li> 세균 현탁액은 순차적으로 희석해야하며 CFU 각 실험에 대한 혈액 한천 플레이트에 검사해야합니다. inocula가 균질 표현형을 가지고 있는지 여부 1), 감염 2) 정확한 가능한 세균성 카운트 :이 단계는 중요한 정보를 얻을 수 있습니다. </li><li> 병변과 박테리아 생존는 다양한 시간 지점 후 감염에서 평가 수 있습니다. 여기서 우리는 3 일 후 감염에 대한 감염을 조사. 병변 크기가 피부 표면 (1X 10 9, 그림 1D : 그림 1B 1 X 10 7 CFU)를 분석하고 근육의 표면 (그림 1C에서 : 1X 10 9 7 CFU). 병변 면적 (mm) × 폭 (mm)가 조직 손상 (Figs. 2 A와 B)을 평가하기위한 측정 수 길이를 같습니다. 이 결과는 주어진 독성 인자에 의한 조직 손상의 정도를 결정하는 데 도움이 될 수 있습니다. 또한 병변이 excised과 DPBS에 균질하고, 감염 사이트에있는 박테리아의 생존을 나타내는 CFU 번호를 (그림 2C), quantitate로 비쳐지게 만들려합니다. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/2528/2528fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 피부와 근육 병변. CD1 생쥐는 MRSA (LAC) 하나의 측면에 피하 주사를했다. 사진은 시간 0에서 3 일 이후의 감염에 찍은. (A) 시간 0 이후의 감염 (PI), (B) - (G) 3 일 PI, B, D 및 F : 피부 병변, C, E 및 G : 근육 병변, B 및 C : 1X 10 9 CFU 감염, D와 E : 1X 10 7 CFU 감염, F 및 G : 모의. <img src="/files/ftp_upload/2528/2528fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 피부 병변의 크기와 가능한 박테리아 CD1 쥐를 감염 MRSA (LAC)에서 3 일 후 감염. 피부와 근육의 병변에 감염 사이트에 포함됩니다. (A) 피부 병변의 크기. (B) 근육 병변의 크기. (C) 총 조직 CFU. H : 1 X 10 9 CFU의 inocula, L : 1 X 10 7 CFU의 inocula. * : P &lt;0.05, 만 - 휘트니 테스트.

<ol><li>Ahn, J. Y., Song, J. Y., Yun, Y. S., Jeong, G., Choi, I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protection+of+Staphylococcus+aureus-infected+septic+mice+by+suppression+of+early+acute+inflammation+and+enhanced+antimicrobial+activity+by+ginsan%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Immunol+Med+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Protection of Staphylococcus aureus-infected septic mice by suppression of early acute inflammation and enhanced antimicrobial activity by ginsan.</a> FEMS Immunol Med Microbiol. 46, 187-197 (2006).</li>
<li>Girish, V., Vijayalakshmi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Affordable+image+analysis+using+NIH+Image%2FImageJ%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Affordable image analysis using NIH Image/ImageJ.</a> Indian J Cancer. 41, 47-47 (2004).</li>
<li>Hahn, B. L., Onunkwo, C. C., Watts, C. J., Sohnle, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+dissemination+and+cutaneous+damage+in+a+mouse+model+of+staphylococcal+skin+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Microb+Pathog%22%5BJournal%5D)">Systemic dissemination and cutaneous damage in a mouse model of staphylococcal skin infections.</a> Microb Pathog. 47, 16-23 (2009).</li>
<li>Hruz, P., Zinkernagel, A. S., Jenikova, G., Botwin, G. J., Hugot, J. P., Karin, M., Nizet, V., Eckmann, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NOD2+contributes+to+cutaneous+defense+against+Staphylococcus+aureus+through+alpha-toxin-dependent+innate+immune+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">NOD2 contributes to cutaneous defense against Staphylococcus aureus through alpha-toxin-dependent innate immune activation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 12873-12878 (2009).</li>
<li>Ji, Y., Zhang, B., Van, S. F., Horn, P. W. arren, Woodnutt, G., Burnham, M. K., Rosenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+critical+staphylococcal+genes+using+conditional+phenotypes+generated+by+antisense+RNA%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Identification of critical staphylococcal genes using conditional phenotypes generated by antisense RNA.</a> Science. 293, 2266-2269 (2001).</li>
<li>Somerville, G. A., Beres, S. B., Fitzgerald, J. R., DeLeo, F. R., Cole, R. L., Hoff, J. S., Musser, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+serial+passage+of+Staphylococcus+aureus%3A+changes+in+physiology%2C+virulence+factor+production%2C+and+agr+nucleotide+sequence%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">In vitro serial passage of Staphylococcus aureus: changes in physiology, virulence factor production, and agr nucleotide sequence.</a> J Bacteriol. 184, 1430-1437 (2002).</li>
<li>Tseng, C. W., Kyme, P., Low, J., Rocha, M. A., Alsabeh, R., Miller, L. G., Otto, M., Arditi, M., Diep, B. A., Nizet, V., Doherty, T. M., Beenhouwer, D. O., Liu, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staphylococcus+aureus+Panton-Valentine+leukocidin+contributes+to+inflammation+and+muscle+tissue+injury%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Staphylococcus aureus Panton-Valentine leukocidin contributes to inflammation and muscle tissue injury.</a> PLoS One. 4, e6387-e6387 (2009).</li>
<li>von Kockritz-Blickwede, M., Rohde, M., Oehmcke, S., Miller, L. S., Cheung, A. L., Herwald, H., Foster, S., Medina, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+mechanisms+underlying+the+genetic+predisposition+to+severe+Staphylococcus+aureus+infection+in+the+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Immunological mechanisms underlying the genetic predisposition to severe Staphylococcus aureus infection in the mouse model.</a> Am J Pathol. 173, 1657-1668 (2008).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

<ol><li> murine 피부와 부드러운 조직 감염 모델은 병원체의 생체내 독성 평가에 대한 강력한 도구입니다. S.의 pathogenicity 피부와 부드러운 조직 감염의 구균이 매개 변수의 수에 따라 달라질 수 있습니다. 이들은 inoculum 크기, 세균성 성장 단계 접종의 깊이, 마우스의 연령, 및 마우스 유전 배경에 7, 8을 포함합니다. 이 모델을 사용하여 독성 기능을 검사하면 결과가 일치하는지 확인하려면이 매개 변수에 대한 통제 중요합니다. 우리는 SKH1 (사나이 답게 마우스), C57Bl / 6, BALB / C 및 CD1 포함하여 생쥐의 몇 가지 계통에 피부의 MRSA 감염을 공부했습니다. 감염의 결과는 마우스의 유전자 구조는 MRSA 감염 1의 심각의 중요한 결정자임을 다른보고와 일치하는 다른 변종 7에 차이가 있습니다. 이 마우스 변형은 S. 연구에 적합해야 표시 되었기 때문에 본 실험에서 우리는 CD1 쥐를...

<table><tbody><tr><td>THB</td><td>VWR international</td><td>95025-314</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Invitrogen</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>1 ml 주사기</td><td>BD Biosciences</td><td>309602</td><td></td></tr><tr><td>27G1/2 바늘</td><td>BD Biosciences</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>양 혈액 한천 배지 (TSA)</td><td>VWR international</td><td>90004-328</td><td></td></tr></tbody></table>

methicillin 내성 황색 포도상 구균 아리 어스의 피하 감염 (mrsa)

Subcutaneous Infection of Methicillin Resistant Staphylococcus Aureus (MRSA)

MRSA는 공중 보건에 대한 세계적인 위협이며, MRSA 피부와 부드러운 조직 감염은 이제 더 미국에있는 모든 소프트 조직 감염의 절반 이상을 차지하고있다. 소프트 조직 감염 가운데, myositis, pyomyositis 및 염 괴사는 점차 MRSA가 지역 사회에서 발생하는과 공동으로보고되었습니다. MRSA 더 심각한 감염으로 이어지는 호스트 면역 간의 상호 작용을 이해하기 위해서는, 동물 모델의 가용성은 호스트 및 세균성 요인의 연구를 허용, 중요합니다. 여러 감염 모델은 S.의 pathogenesis을 평가하기 위해 도입되었습니다 표면 피부 감염 동안 구균. 여기, 우리는 피부, 피하 및 근육 pathologies을 검사 피하 감염 모델을 설명합니다.

Murine 피부와 부드러운 조직 감염 모델은 methicillin 내성 포도상 구균 (MRSA) 및 호스트 면역 응답의 독성 기능을 평가하기위한 활용합니다. 여기, 우리는 피부와 부드러운 조직 감염 피하 감염 모델을 소개하고 있습니다.

Methicillin 내성 황색 포도상 구균 아리 어스의 피하 감염 (MRSA)

MRSA는 전 세계적인 공중 보건의 위협이며, 현재 MRSA 피부 및 연조직 감염은 전체 연조직 감염의 절반 이상을 차지하고 있습니다...

다음 실험의 전반적인 목표는 메티실린 내성 황색포도상구균(methicillin resistant staphylococcus aureus) 또는 MRSA의 생존 및 확산과 감염 부위의 케모카인 및 사이토카인 수치를 조사하는 것입니다. 이를 위해 생쥐 등의 털을 제거하여 관찰 영역을 확보합니다. 두 번째 단계로,현탁액 상태의 MRSA를 감염 3일 후 마우스에 피하 투여하며, 조직 균질액을 한천 배지에 도말하여 형성된 콜로니 형성 단위(CFU) 수를 측정함으로써 감염 병리와 세균 수를 평가할 수 있습니다. 안녕하세요, 반갑습니다. 제 이름은 De Lordon입니다.저는 박사후 연구원입니다. 안녕하세요, 제 이름은 Mariel Sanchez입니다. 저는 박사과정 학생이며, 저는 Andrea Huda입니다.저는 Cedar-Sinai Medical Center 소아과 George Lee 교수 연구실의 연구원입니다. 이 방법은 근염, 다발성 근염 및 괴사성 근막염을 포함한 중증 감염 모델링과 같이 의료 분야의 핵심적인 질문들에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 방법은 중증 응급 감염에 대한 통찰을 제공할 뿐만 아니라, A군 연쇄상구균 및 기타 미생물과 같은 다른 시스템에도 적용될 수 있습니다.또한, 근염 및 다발성 근염을 유발하는 다른 생물체의 기능과 병인에 대해 연구할 수 있습니다. 일반적으로 이 절차에 익숙하지 않은 개인의 경우, caucus areas global regulator의 스태프 중 하나가 변이가 매우 심하기 때문에 어려움을 겪을 수 있습니다. 주의를 기울이지 않으면 수집된 데이터에 상당한 변동이 생겨 데이터 해석에 어려움이 있을 수 있습니다.시작하겠습니다. BSL 2 시설에서 TSA 베이스의 양 혈액 한천 배지 플레이트와 냉동 블록을 이용한 멸균 루프를 준비하십시오. -80 °C 보관소에서 Mercer 균주 스톡 배양액을 꺼내십시오.그런 다음 멸균 루프를 사용하여 스톡 배양액의 얼음 조각을 소량 떼어 플레이트에 옮깁니다. Mercer 스톡 배양액 조각을 소량 취한 후에는 즉시 스톡 배양액을 냉동고로 다시 옮겨 해동을 방지하십시오. 반복적인 냉동 및 해동은 스톡 배양액에 손상을 줄 수 있기 때문입니다. 루프를 사용하여 한천 배지를 스트리킹함으로써 개별 Mercer 콜로니가 성장하도록 유도합니다.CO2 보충 없이 37°C에서 플레이트를 하룻밤 동안 배양합니다. 다음 날, 새로운 혈액 우뭇가사리 배지(bl

subcutaneous-infection-methicillin-resistant-staphylococcus-aureus

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

methicillin - 내성으로 인해 실험 쥐의 심내막염...

Methicillin 내성의 실험 심내막염 모델<em&gt; 황색 포도상 구균</em&gt; (MRSA) 쥐에서

용해성 파지 바이오 센서 및 항체 비즈 메티 실린 내성 (MRSA) 및 민감한 황색 포도상 구균 박테리아를 구별 할 수 있습니다. 파지는 석영 크리스탈 마이크로 센서의 표면에 랭 뮤어 - 블로 젯 방식으로 고정 넓은 범위 포도상 구균 프로브로 근무 하였다. 항체 비즈 MRSA를 인식하고 있습니다.

항생제 내성 황색 포도상 구균 박테리아의 검출을위한 바이오 센서

피부 부상에 타고 난 면역 반응의 실시간 탐지 및 쥐의 포도 상 구 균 감염에 대 한 접근 방식을 설명 합니다. 비교 LysM EGFP 여 쥐 (형광 neutrophils 보유) LysM EGFP와 잡종 immunodeficient 마우스 스트레인, 우리가 미리 감염에 대 한 우리의 이해 및 감염을 방지 하는 방법의 개발.

마우스 모델을 평가 타고 난 면역 반응 포도 상 구 균 감염

본 프로토콜은 새로운 나노에멀젼 보조제 백신의 물리적 특성, 면역 반응 및 생체 내 보호 효과를 준비하고 평가합니다.

메티실린 내성 황색포도상구균 (MRSA) 감염에 대한 나노에멀젼 보조제 백신의 면역 반응 평가

황색포도상구균 (S. aureus)은 몸 전체로 퍼질 수 있는 능력이 있어 지속적이고 재발성 감염을 일으킵니다. 이러한 과정을 더 잘 이해하기 위해 이 연구는 S. aureus에 대한 세포 내 감염 모델을 확립합니다. 이 모델은 세포 내 감염의 기전을 조사하는 데 중요한 토대를 제공할 것입니다.

황색포도상구균에 대한 세포 내 감염 모델의 개발 및 평가

본 프로토콜은 임플란트 관련 감염을 조사하기 위해 피하 등쪽 이식을 사용하는 마우스 모델을 설명하며, 이를 통해 병태생리학적 메커니즘을 포괄적으로 조사할 수 있고 표적 치료 전략으로 진단 기준 개발을 지원할 수 있습니다.

마우스의 임플란트 관련 감염에 대한 동물 모델

드립 흐름 반응기로 개방형 시스템 흐름 biofilms을 활용하여 디스크 원자로 회전을위한 프로토콜이 상세하게 제공됩니다.

에 대한 드립 흐름 및 회전 디스크 원자로의 사용 포도상 구균 Biofilm 분석

철 소스로 인간 혈색소를 사용하여 황색 포도상 구균 성장

메티실린 내성 황색포도상구균에 대한 포도상구균 카세트 염색체 mec(SCCmec) I-V 유형의 빠른 스크리닝 및 타이핑을 위한 간단한 멀티플렉스 PCR 분석을 시연하고, 이 분석을 개별 실험실에 성공적으로 적용할 수 있도록 하는 몇 가지 중요한 단계와 절차적 뉘앙스를 제공합니다.

Methicillin - ??? V? ??? ?? ??? ??? ? ?? I? ?????? ?? ??? PCR ?? ??<em&gt; ?? ??? ??</em

우리는에 의해 분비 PSMS 및 기타 독소의 효과를 연구하는 방법을...

의 상호 작용을 연구<em&gt; 황색 포도상 구균</em&gt; 유동 세포 계측법 및 시간 경과 현미경에 의한 호중구와

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