Name: 척수 전기 생리학 II : 세포 흡입 전극 제작 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-20T23:59:00.000+00:00
Duration: 8 min 47 s
Description: 배우세요 척수 전기 생리학 연구를 위한 세포 흡입 전극 제작 방법을 알코올 램프와 PE 90 플라스틱 튜빙을 사용하여 신생 설치류 척수에서 생체 외 전기 생리 기록을 수행하는 기술입니다.

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사무엘 L. 파프는 생물 학적 연구 솔크 연구소에서 유전자 발현 연구소에서 교수와 하워드 휴즈 의학 연구소의 탐정이다. 이 작품은 크리스토퍼와 다나 리브 재단​​에 의해 지원되었다. 조 Belcovson, 켄트 Schnoeker와 솔크 연구소에서 멀티미디어 자원에 마이크 설리반은 사진 촬영 및 편집 지원을 제공했습니다.

절연 척추 코드의 Electrophysiological 녹음 신경 회로 1 유전자 및 개발 변경 사항을 확인할 수 있습니다. 우리는 이전에 신생아 마우스 척추 코드 2을 해부하다하는 방법을 보여주었다. 여기 우리는 고립 척추 코드 3 상상의 운동을 기록에 유용 흡입 전극을 준비하는 방법을 제시한다. 플라스틱 튜브 전극의 끝은 저온 알코올 램프 3-5 사용 손으로 아주 좋은 팁을 그립 수 있습니다. 플라스틱 관 (PE90, 클레이 애덤스 Intramedic TM)는 가단 형태로 튜브를 부드럽게하기 위해 화염을 통해 실시하고 있습니다. 튜브가 녹기 시작하고 더 투명 해짐에 따라 그것은 열원과 종료가 부드럽게 떨어져 행진에서 제거됩니다. 불꽃에서 튜브를 제거하는시기는 플라스틱이 붕괴하거나 그려하면서 분할하지 않습니다 확보하는 것이 중요합니다. 튜빙의 얇은 부분은 원하는 내경에 따라 면도날로 절단 등 표본이나 코드의 segmental 수준의 나이에 의해 결정. 튜브에 O - 링을 배치의 용이성을 위해, 45 ° 삭감은 면도날로 튜브의 두께 끝에 이루어집니다. 물미 및 O - 링은 전극의 배럴당 전극 팁을 첨부하기 위해 두꺼운 끝에 설치되어 있습니다. 특히 중소 전극에 대한 허용의 어려움 피하려면 손을 당기는 전극 팁, 전극은 두꺼운 튜브 (PE90)에 삽입 작은 튜브를 사용하여 건설 수 있습니다. 튜브의 길이는 녹화 설정의 요구 사항을 특정하고 변수입니다. 우리는 실험 1-3,5에 사용되는 측정을 제시한다. PTFE 미세 관 (제우스, 소형 부품) 및 PE90 튜브의 10cm 길이 1cm 길이는 면도날로 절단됩니다. 작은 튜브의 끝을들은이 조각 또는 폐쇄되지 않도록하는 검사해야합니다. 그들은 곤충 핀 (파인 과학 도구)를 사용하여 열 수 있습니다. 접착제 (JB 용접)의 드롭은 PTFE 튜빙의 미드에 배치됩니다. PTFE 튜빙과 접착제는 PE90 튜브에 입 흡입을 사용하여 PE90 튜브로 그려져 있습니다. 45 ° 컷은 튜브의 두께 끝에 만들어진이며 물미 및 O - 링은 같은 이전, 첨부합니다. 물미 및 BNC 커넥터는 상업 흡입 전극에서 unscrewed 있습니다. BNC 커넥터는 왁스 봉인을 제거 한 시간 크실렌에 배어있다. 커넥터는 다음 물로 씻어서 건조합니다. 낮은 직각 사이드 포트 통의 측면에하셔야합니다. 금속 막대는 알콜 램프를 사용하여 가열하고 낮은 각도로 통의 측면에있는 기존 구멍에 누르면됩니다. 0.010 인치 실버 와이어 (AM 시스템)의 15cm 길이를 15 분 동안 잘라 표백제에 배어있다. 이것은 신호 전도 6 에이즈되는 은색 염화물 코팅을 만들 수 이루어집니다. 와이어는 물로 씻어서 건조하고, BNC 커넥터에 다음 납땜합니다. BNC 커넥터와 실버 와이어는 통의 측면을 유지하기 위해 BNC 커넥터에 대한 충분한 공간과 흡입 전극 배럴에 삽입됩니다. 흡입 튜브는 사이드 포트 2-3cm에 삽입됩니다. 실리콘 밀봉제는 배럴당 약 2-3cm로 주입됩니다. BNC 커넥터는 앞으로 밀봉 재를 밀어 전극의 총구에 스레드입니다. 전극의 팁 이제 전극의 프런트 엔드로 스레드입니다. 축소 관은 또한 측면 포트의 흡입 라인을 강화하기 위해 추가할 수 있습니다. 전극 자기 서에 첨부하고, 녹음 요리 근처에 배치 micromanipulators에 탑재하고 있습니다. BNC 동축 케이블은 앰프에 설치된 headstage에 첨부됩니다. 증폭기는 데이터 수집 소프트웨어 (Polyview)와 PC의 컴퓨터에 디지털 카드에 아날로그 (국가 악기)에 연결된 어댑터 (Polyview)에 연결되어 있습니다. electrophysiological 데이터를 기록하면, 모든 외부 간섭을 제거하기 위해 필요합니다. 각각, 전기 및 기계적 간섭을 방지하기 위해 녹음 요리, 증폭기, 그리고 머리 단계는 패러데이 케이지 내에서 공기 테이블에 배치됩니다. 대표 결과 : <img src="/files/ftp_upload/2580/2580fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림은 1. 상용 흡입 전극은 알콜 램프에 그려져, 또는 특정 크기의 상용 플라스틱 튜브와 건설 무거운 게이지 실버 와이어 손으로하는 플라스틱 팁을 추가하여 수정할 수 있습니다. 또한, 파라핀의 밀봉제 더 내구성이 실리콘 편자에 박는 뾰족한 징을 박다 밀봉제로 대체됩니다. <img src="/files/ftp_upload/2580/2580fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 공기 테이블과 관련하여 흡입 전극의 구조 (기계 격리를 위해), 패러데이 케이지 (전기 isolati)에 앰프 및 컴퓨터. 이것은 공기 테이블과 패러데이 케이지에 참조된 기록 요리와 두 번째 접지 참조 지상이있다는 것을 주목하여야한다.

<ol><li>Gallarda, B. W., Sharpee, T. O., Pfaff, S. L., Alaynick, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+rhythmic+locomotor+burst+patterns+using+a+continuous+wavelet+transform%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Defining rhythmic locomotor burst patterns using a continuous wavelet transform.</a> Ann N Y Acad Sci. 1198, 133-139 (2010).</li>
<li>Meyer, A., Gallarda, B. W., Pfaff, S., Alaynick, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+cord+electrophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Spinal cord electrophysiology.</a> J Vis Exp. , (2010).</li>
<li>Gallarda, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segregation+of+axial+motor+and+sensory+pathways+via+heterotypic+trans-axonal+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Segregation of axial motor and sensory pathways via heterotypic trans-axonal signaling.</a> Science. 320, 233-236 (2008).</li>
<li>Landmesser, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+motor+projection+patterns+in+the+chick+hind+limb%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">The development of motor projection patterns in the chick hind limb.</a> J Physiol. 284, 391-414 (1978).</li>
<li>Myers, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholinergic+input+is+required+during+embryonic+development+to+mediate+proper+assembly+of+spinal+locomotor+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Cholinergic input is required during embryonic development to mediate proper assembly of spinal locomotor circuits.</a> Neuron. 46, 37-49 (2005).</li>
<li>Chanin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+determination+of+chloride+by+use+of+the+silver-silver+chloride+electrode%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The determination of chloride by use of the silver-silver chloride electrode.</a> Science. 119, 323-324 (1954).</li>
<li>Goulding, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circuits+controlling+vertebrate+locomotion%3A+moving+in+a+new+direction%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Circuits controlling vertebrate locomotion: moving in a new direction.</a> Nat Rev Neurosci. 10, 507-518 (2009).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

신경 시스템 개발은 격리 쥐 척수 코드를 사용하여 공부하실 수 있습니다. 신경 전달 물질의 존재에 상상의 운동은 패턴 전기 활동을 1,3의 형태로 척수에서 생성할 수 있습니다. 이러한 리듬 파열은 0.2-0.5 Hz에서에서 생산하고 왼쪽, 오른쪽과 flexor - 신근 alternations에서 패턴입니다. 다른 발달 단계에,이 활동의 견고하고 패턴 1 다릅니다. 유전자 변이는 또한이 활동을 3,5,7의 patterning을 방해하실 수 있습니다. 이 활동의​​ 유전자 변형과 발달 연구는 중앙 패턴 생성 회로의 조직에 대한 통찰력을 제공하며 일반적으로 신경 발달의 연구를 알려줍니다.

<table><tbody><tr><td>PTFE Sub Lite Wall 튜빙 (소형 튜빙)</td><td>Zeus</td><td>36AWG</td><td>0.005&amp;#8221;ID x 0.003&amp;#8221; Wall (소형 부품) 0.003&amp;#8221;에서 0.006&amp;#8221; 규격으로도 제공됨</td></tr><tr><td>대형 튜빙 (0.86mm (0.34&amp;#8221;))</td><td>BD Biosciences</td><td>427420</td><td>0.86mm (0.34&amp;#8221;) O.D. 1.27mm (.050&amp;#8221;)</td></tr><tr><td>전극 배럴</td><td>A-M Systems</td><td>573000</td><td></td></tr><tr><td>접착제</td><td>JB Weld</td><td></td><td></td></tr><tr><td>접착제: 실리콘 코킹제</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>납 및 인하기</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>표백제</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>자일렌</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>은선: 0.010&amp;#8221;</td><td>A-M Systems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>곤충 핀: Austerlitz 0.1mm</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td></td></tr><tr><td>마그네틱 스탠드</td><td>Narishige International</td><td>GJ-8</td><td></td></tr><tr><td>마이크로매니퓰레이터</td><td>Narishige International</td><td>MN 151</td><td></td></tr><tr><td>미니보드 (헤드스테이지)</td><td>Grass Technologies</td><td>F-15EB/B1</td><td></td></tr><tr><td>Polyview 어댑터 유닛</td><td>Grass Technologies</td><td>PVA 8</td><td></td></tr><tr><td>양극 휴대용 Physiodata 증폭기 시스템</td><td>Grass Technologies</td><td>15LT</td><td></td></tr><tr><td>아날로그-디지털 변환 카드</td><td>National Instruments</td><td>6035E</td><td></td></tr><tr><td>에어 테이블; Vibraplane</td><td>Kinetic Systems</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

척수 전기 생리학 ii : 세포 흡입 전극 제작

Spinal Cord Electrophysiology II: Extracellular Suction Electrode Fabrication

신경 circuitries와 운동의 발전은 신생아 쥐 척수 중앙 패턴 발생기 (CPG) 동작을 이용하여 공부하실 수 있습니다. 우리는 해부 쥐 척수 코드에서 흡입 CPG 활동을 검사하는 데 사용되는 전극, 또는 상상의 운동을 조작하는 방법을 보여줍니다. 설치류 척추 코드는 인공 뇌척수에 배치되고 복부 뿌리는 흡입 전극으로 그려져있다. 전극은 상용 흡입 전극을 수정하여 구성되어 있습니다. 무거운 은색 와이어는 상용 전극에 의해 주어진 표준 와이어 대신 사용됩니다. 상업 전극에 유리 팁은 증가 내구성 플라스틱 팁로 대체됩니다. 우리는 일관성과 재현성있게, 튜빙의 특정 크기로 만들어진 손으로 그린​​ 전극과 전극을 준비합니다. 데이터는 증폭기 및 neurogram 수집 소프트웨어를 사용하여 수집됩니다. 각각, 기계 및 전기 간섭을 방지하기 위해 녹음은 패러데이 케이지 내에서 공기 테이블에 수행됩니다.

신생아 설치류 척추 코드의 el​​ectrophysiological 녹음을 측정하는 데 사용되는 세포 흡입 전극의 제조 및 사용의 데모<em&gt; 체외에서</em

척수 전기 생리학 II : 세포 흡입 전극 제작

신생 쥐의 척수 중앙 패턴 생성기(CPG) 행동을 통해 신경 회로의 발달과 운동 능력을 연구할 수 있습니다. 본 연구에서는 ...

안녕하세요. 저는 Salk Institute for Biological Studies의 faf Lab 연구 보조원인 Resh Gary Dory입니다. 오늘은 두 가지 방법을 사용하여 세포 외 흡입 전극(extracellular suction electrodes)을 제작하는 방법을 보여드리겠습니다. 이 전극들은 in vitro에서 척수의 전기생리학적 기록을 측정하는 데 사용할 수 있습니다.알코올 램프를 열원으로 사용하여 PE 90 플라스틱 튜브를 원하는 너비로 녹입니다. 튜브를 켜진 불꽃 위에 대고 녹기 시작하면 즉시 떼어낸 다음, 중간 부분이 끊어지지 않도록 주의하며 양 끝을 조심스럽게 잡아당깁니다. 이 과정이 다시 한번 제시됩니다.튜브가 부드러워지며 녹으면 튜브를 제거하고 양 끝을 조심스럽게 벌립니다. 튜브의 두꺼운 쪽 끝부분에서 측정할 샘플의 대략적인 너비에 해당하는 지점을 날카로운 면도날로 자릅니다. 이때 45도 각도로 절단합니다.이제 두꺼운 끝단에 페룰(feral)과 O-링을 설치해야 합니다. 튜브의 이 끝단을 페룰의 육각 구멍을 통해 삽입하십시오. 그런 다음 튜브 끝단을 고무 O-링에 삽입하십시오.이 장치는 전극 앞부분에 나사로 고정됩니다. 날카로운 면도날을 사용하여 Zeus 소형 튜브를 1 cm 길이로 자르고, 절단면이 깨끗한지 그리고 구멍이 막히지 않았는지 확인하십시오. 날카로운 면도날을 사용하여 PE 90 튜브를 10 cm 길이로 자르십시오. 구강 흡입을 이용하여 소형 튜브의 중간 지점에 JB weld 한 방울을 도포하십시오.작은 튜브와 용접 부위를 큰 튜브의 보어 안으로 당겨 넣고, 이 설정을 하룻밤 동안 경화시킵니다. 그림에 표시되지는 않았으나, 이 튜브의 두꺼운 끝부분을 45도로 절단해야 하며, 이 끝부분에 페룰과 O-링을 설치해야 합니다. 이는 앞서 보여드린 방식과 동일합니다.표준 흡입 전극을 분해하여 전극 전단의 페룰과 후단의 BNC 커넥터를 나사로 풀어 제거합니다. 이제 전극 배럴 측면에 낮은 각도의 사이드 포트를 만들어야 합니다. 번젠 버너를 사용하여 금속 조각을 가열하십시오.가열된 금속을 배럴 측면에 이미 뚫려 있는 구멍에 낮은 각도로 밀어 넣습니다. BNC 커넥터와 연결된 부분의 와이어를 잡아당겨 은선을 제거합니다. BNC 커넥터를 xylene에 1시간 동안 담가 왁스를 제거합니다.왁스를 제거한 후, 커넥터를 물로 헹구고 페이퍼 타월로 건조합니다. 은선을 15 centimeter 길이로 자릅니다. 이 선을 표백제에 15분 동안 담급니다.그 후 헹구고 페이퍼 타월로 건조합니다. BNC 커넥터에 은선을 납땜합니다. 흡입 전극 배럴의 뒷부분에 은선을 삽입하고, BNC 커넥터가 측면에 위치할 수 있도록 충분한 공간을 남겨둡니다.흡입 튜브를 사이드 포트에 약 3cm 정도 삽입합니다. 손가락으로 사이드 포트를 막아 실란트가 밖으로 흘러나오지 않게 하면서, 흡입 전극의 후면 개구부에 실리콘 실란트를 주입합니다. 전극 배럴 내부로 실란트를 약 2~3cm 정도 주입하십시오.한 번 실패하면, BNC 커넥터를 단단히 조여 고정하여 밀봉제가 앞으로 밀려나게 합니다. 밀봉제를 하룻밤 동안 경화시킵니다. 팁을 당기는 방식이나 자르는 방식 중 하나로 제작한 튜빙의 페룰을 전극 직선화 장치의 전면에 나사로 고정합니다.은선을 전극으로 쉽게 통과시키기 위한 튜빙 설치가 완료되었습니다. 외부 간섭을 줄이기 위해 기록 장치를 패러데이 케이지(faraday cage) 내부에 배치합니다. 또한, 기계적 진동을 제거하기 위해 장치를 에어 테이블(air table) 위에 배치하였습니다.전극을 마그네틱 스탠드 마이크로 매니퓰레이터에 장착하여 기록 접시 근처에 배치합니다. BNC 동축 케이블을 앰플리파이어에 연결된 헤드 스테이지에 연결합니다. 앰플리파이어는 폴리 뷰 어댑터에 연결되며, 이 어댑터는 다시 컴퓨터에 연결됩니다.이 설정을 근접 촬영하여 보여줍니다. BNC 동축 케이블이 헤드 스테이지에 연결되어 있습니다. 헤드 스테이지는 앰프에 연결되어 있습니다.증폭기 출력단은 패러데이 케이지 외부로 나와 폴리 뷰 어댑터(poly view adapter)에 연결됩니다. 폴리 뷰 어댑터는 적절한 기록 소프트웨어가 설치된 컴퓨터에 연결됩니다. 전체 장치는 적절하게 접지되어야 합니다.Faraday 케이지와 에어 테이블을 접지에 연결하여 외부 접지를 형성합니다. 해부 접시를 헤드 스테이지에 배선하여 내부 접지를 형성합니다. 또한, 케이지의 도어를 본체에 접지해야 합니다.적절한 설정이 완료되었으므로 이제 데이터를 수집할 수 있습니다. 본 영상을 시청해 주셔서 감사드리며, 앞으로의 실험에 도움이 되기를 바랍니다.

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연구

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신경과학

electrophysiologic 연구 신생아 마우스 척수의 고립의 데모.

척수 전기 생리학

의 전극 제작 및 주입 Aplysia californica 손상, 자유롭게 행동 동물의 다중 채널 및 신경 근육질 레코딩을위한

이 비디오는 다중 전극 어레이 또는 MEA 장치를 사용하여 캡처한 척수 절편의 유기형 공동 배양에서 얻은 전기생리학적 기록을 보여줍니다. 이러한 기록은 절편 사이의 신경 세포 재생을 평가합니다. 관찰된 동기화된 전기 활동은 성공적인 신경 재생을 확인합니다.

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이 문서에서는 높은 접촉 밀도 평면 인터페이스 신경 전극 (FINE)의 제조 공정에 대한 자세한 설명을 제공합니다. 이 전극은 기록 및 말초 신경 내에서 선택적으로 신경 활동을 자극에 최적화되어 있습니다.

녹화 및 자극 애플리케이션을위한 높은 접촉 밀도의 제작, 평면 인터페이스 신경 전극

이 상세한 프로토콜 transcranial 전기 자극 자유롭게 이동 하는 쥐에서의 단기 및 장기 효과 조사 하기 위하여 측 뼈에 transcranial 자극 전극 배치를 설명 합니다.

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여기서 제시된 것은 유발되고 자발적인 근전도 전위내의 생체 내 연대순 기록을 위한 이식형 시스템의 제조를 위한 프로토콜이다. 이 시스템은 신경 손상 다음 후두 근육의 회안의 조사에 적용됩니다.

만성 생체 내 근전도를 위한 이식형 시스템

이 프로토콜은 패치 클램프를 사용하여 높은 시공간 분해능으로 척수 자극(SCS)에 대한 운동 뉴런의 전기적 반응을 연구하는 방법을 설명하며, 이를 통해 연구자들은 척수를 분리하고 세포 생존력을 동시에 유지하는 기술을 향상시킬 수 있습니다.

척수 자극 중 운동 뉴런의 전체 세포 패치-클램프 기록을 위한 척수 절편의 생체 외 제조

우리의 목적은 epimysial electromysial electromyography 전극의 제조 및 테스트에 대한 업데이트되고 따라하기 쉬운 가이드를 제공하는 것이었습니다. 이를 위해 재료 소싱에 대한 지침과 제조 및 테스트 프로세스에 대한 자세한 안내를 제공합니다.

저비용 Epimysial Electromysial Electromyography Electroode 개발: 제조 및 테스트를 위한 간소화된 워크플로우

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