2011년 3월 19일
이것은 목적, 운영, 그리고 소설 중력이 분석기의 결과를 보여주는 대표을 단계별로 안내합니다.
중력 가속도 측정 장치는 에피 마운트, 일반 광학 현미경, 디지털 카메라 및 컴퓨터로 구성됩니다. 당사는 이를 사용하여 단분자 분석을 수행합니다. 힘의 평형 상태를 기록하거나, 액적을 이용해 경사력을 가할 수 있습니다.
먼저, 이러한 유형의 공정을 수행할 수 있도록 유리 마이크로 슬라이드를 준비해야 합니다. 사용할 콩 약 10mg을 측정하기 위해, 저는 보통 2K를 준비합니다. 여기에는 3가지 triology를 위해 사용할 5mL가 준비되어 있습니다.
여기서 터미널 Put One을 준비합니다. 트랜스퍼를 이용해 충분히 잘 섞어준 다음, 혼합액 2 mL를 비드 케이크(bead cake) 위에 옮깁니다. 비드 케이크 상태로 2분간 둔 다음, 2분 동안 철저히 볼텍싱합니다.
아래쪽이 젖은 두 개를 먹었습니다. 이중 증류수에 퓨린 한 개가 필요합니다. pH 6 결합.
각 비드에 결합 버퍼 5 mL를 단순히 추가하며, 이 결합 과정을 통해 비드가 연결됩니다. 그 다음 항체를 추가하여 다시 결합시키고, 1분 동안 볼텍싱합니다. 5분 동안 원심 분리하여 가라앉히고, 냉동고에서 글라이드를 꺼내어 결합 버퍼를 사용하여 농도를 5%까지 희석합니다.
그 다음 이 용액 2 mL를 취하여 첨가합니다. 이렇게 하면 TER이 이미 볼텍스에 있는 터미널과 결합하게 됩니다. 두 번 반복하고, 세 번 회전시킵니다. 결합 버퍼 절차입니다.
다시 5 mL의 커플링 버퍼를 피드 케이크에 넣습니다. 다시 혼합하고, 원심 분리한 후 상층액을 흡입합니다. 네 번째 단계에서 케이크 상단에 상층액이 남아 항체가 자유롭게 이동할 수 있도록 합니다.
여기에 준비된 항체가 있습니다. 해당 부피만큼 분주하십시오. 1 M Olmol로 희석한 항체를 2중 증류수와 함께 혼합하여 30분 동안 또는 적절한 시간 동안 회전 혼합합니다.
모든 하부 접착제를 소화시키기 위해 마주 보게 합니다. 원심 분리하여 S를 제거합니다. 그다음 프로토콜 내용에 따라 준비합니다. 비즈 5 mL를 취하는데, 여기 비즈가 있습니다. 이어서 아래로 내립니다.
이 단계를 세 번 반복하고, 수행 중인 다른 분석에서도 동일하게 진행하십시오. 준비를 시작하기 위해 먼저 단백질을 확보해야 합니다. 이 경우 -70°C에 보관된 단백질을 가져오십시오. 이 단백질을 적절히 다루고 가열하는 것이 중요합니다.
이제 이것은 우리가 분석에 사용하려는 것보다 훨씬 더 농축된 상태가 될 것입니다. 따라서 약 15까지 희석한 후 팁에 분주하겠습니다. 하지만 정확한 부피가 필요하므로, 부피를 약 5 µL까지 줄여야 합니다. 큰 비드의 경우 더 많은 부피를 취할 것이며, 이 예시 비드에서는 10 µL를 취하겠습니다.
이제 최종 농도를 맞추기 위해 마이크로 센터 튜브에 분석 버퍼 약 350 µL를 더 추가하겠습니다. 이제 전술한 것과 같이 vortexing을 수행하겠습니다. 여기서 튜브를 가볍게 회전시켜 섞어줍니다. 이제 비드(beads)가 위치하고 고정될 플로우를 실제로 구축할 차례입니다.
표준 현미경 슬라이드를 1% 농도로 준비하여, 앵커링이 유리 표면에 부착될 수 있도록 접착제로 고정합니다. 슬라이드 글라스의 가장자리를 이미 처리해 두었으며, 그 위에 더 얇은 유리 조각 또는 더 두꺼운 하이퍼 슬라이드를 덮어씌울 것입니다. 이렇게 하면 챔버의 크기가 비교적 작게 형성됩니다.
여기 작은 것이 하나 있는데, 손상된 위치에 있습니다. 매일 마주하는 그런 것들 중 하나입니다. 이 시약은 상태를 더 좋게, 혹은 더 개선해 줍니다.
이제 크래커와 치즈를 추가하기 전에, 마지막 두 개의 25년 된 샘플의 맛을 확인하겠습니다. 그리고 일부만 맛을 보셨으므로, 이제 몇 가지만 더 확인하겠습니다.
여기 자세히 보시면 비드를 실제로 확인하실 수 있습니다. 팁의 경우, 먼저 비드가 있는 영역을 가볍게 탭한 다음, 슬라이드 표면의 나머지 부분에 약 40% 정도로 도포하여 슬라이드를 다양한 방향으로 배치해도 비드가 아래로 이동할 걱정이 없도록 합니다. 샘플을 고정하기 위해 나사가 필요하지는 않으며, 슬라이드 뒷면에 고정하고 추가 클립을 사용하여 더 안정적으로 유지합니다. 이제 대물렌즈를 장착할 수 있습니다.
이것은 슬라이드의 위치를 조정하는 데 사용하는 리모컨이며, 카메라를 포함한 모든 장치의 전원이 켜져 있는 상태입니다. 이제 비디오 화면을 모니터링함으로써 잠재적인 비드를 관찰하기 시작할 수 있습니다. 왼쪽에 있는 것은 더 작은 비드이며, 이 작은 비드는 칩 표면에 그냥 놓여 있는 다른 작은 비드들과 비슷하게 보입니다.
하지만, 비드 쌍의 경우, LOP의 오프 비드 표면이 초점에 들어오는 비드가 있다는 것은 해당 비드가 다른 비드 슬라이드와는 다른 초점 영역에 위치함을 나타내며, 또한 오른쪽 A의 비드 쌍은 슬라이드 상에서 쌍이 어떻게 작동하는지 보여줍니다. 따라서 슬라이드를 배치하고 다양한 각도로 회전시키면 서로 다른 길이가 생성되며, 이후 회전 공정을 이용합니다. 컴퓨터를 사용하여 비드 쌍이 어떻게 나타나는지에 대한 예시를 확인할 수 있습니다.
우리는 두 가지 모두를 발견했습니다. 이 경우에는 제공된 측정값을 제외할 수 있으며, 여기서 F 또한 제외되었습니다. 시청해 주셔서 감사합니다.
귀하의 교란 작업에 행운을 빕니다. 이제 춤을 출 시간입니다. 게다가, 그 누구도 나의 승리를 방해할 수 없을 것입니다.
내 친구들은 그걸 얻으려고 애쓰느라 바빠. 난 완전히 뒤처졌어. 내가 같이 왔던 그 여자는 어디 있지?
그녀는 내 친구와 함께 떠납니다. 그녀는 정말로 자신이 그렇다고 생각합니다. 그녀는 진짜 남자를 모르는 것일까요.
다시 타세요, 다시 오른쪽으로, 기계식 황소입니다. 그대로 둡니다. 오른쪽, 오른쪽, 멕시코 깊은 곳으로 내려가세요.
오늘 밤 라운드 방식이 정말 마음에 드네요. 기계식 황소라니. 속도 줄이지 마세요.
왼손 작업이 끝나면 제가 준비할 수 있게 5초만 주세요. 오른손만 사용하겠습니다. 네, 왼손 대신 오른손을 사용하겠습니다.
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본 논문은 새로운 중력 분광계의 목적과 작동 방법에 대한 단계별 가이드와 대표적인 결과물을 제공합니다.
중력 force 분광계(GFS)는 섬유성 단백질 및 거대 분자의 나노역학적 특성을 정밀하고 정량적으로 측정할 수 있게 함으로써 바이오 제약 R&D의 중대한 공백을 메워줍니다. 절대적인 분자 길이를 분석하고 생리학적으로 유의미한 힘을 가할 수 있는 능력은 초기 발견 및 표적 검증 단계에서 예측 신뢰도를 높여줍니다. 이러한 역량은 신약 발견 파이프라인의 주요 변곡점에서 리스크를 조정한 의사결정을 지원합니다.
GFS는 초기 가설 검증부터 리드 화합물 발굴 및 전임상 연구에 이르는 발견 연속체에 통합되어, 기존의 생물물리학적 도구 및 시뮬레이션 도구를 보완합니다.