Name: 면역 결함 마우스의 확립과 인간 Retinoblastoma 종양의 전파 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 55 s
Description: 학습하세요 면역 결함 마우스에 인간 망막모세포종을 이식하여 종양 전파를 연구하는 방법을. 이 기법은 종양 생물학 및 치료 개발 연구에 필수적인 동물 모델을 제공합니다.

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이 프로젝트에 대한 자금은 연구 및 망막 연구 재단 클레이튼 재단에 의해 제공됩니다.

1. retinoblastoma의 tumorspheres의 준비 <ol><li> IRB 승인 프로토콜에 따라 retinoblastoma 종양 샘플을 구합니다. </li><li> 신선한 정의 줄기 세포 미디어를 준비 (Neurobasal - A 미디어, 1X B - 27 보충 마이너스 비타민 A, 1X 아닌 필수 아미노산 솔루션 1X L - 글루타민, 20 NG / ML EGF, 10 NG / ML bFGF). </li><li> 기계식 멸균, 조직의 크로스 커팅 기법을 사용하여 메스 문화 처리 6 잘 플레이트와 종양 조직을 disaggregate. 즉시 조직에 정의된 줄기 세포 미디어 100 μL를 추가하고 부드럽게 메스를 사용하여 다진 조직을 확산. 잘 정의된 줄기 세포 미디어의 5 ML을 추가합니다. </li><li> 37 품어 ° C, 5 humidified 인큐베이터에서 % CO 2 및 일일 점검. 일부 tumorspheres는 2~4일 과정 이상의 증가와 함께, 거의 즉시 중단 종양 조직에서 발생한다. </li><li> 주간, 5 분 300xg에서 원심 분리기의 tumorspheres은 신선한 정의 줄기 세포 미디어에 resuspend하고, pipet 위아래로 10 배 이상 큰, 중앙 괴사 분야를 방해하고 새로운, 건강 분야는 양식 수 있습니다. </li></ol> 2. 주사에 대한 종양 세포의 준비 <ol><li> 경우 15 ML 원뿔 관에 부드럽게 교양 tumorspheres, pipet의 분야를 넣고. serological pipet 분야를 혼란 10-15 시간으로 부드럽게 위아래로 pipet. </li><li> 새로운 튜브에 hemacytometer하고, 나누어지는 주사 적어도 초당 50,000 전지를 사용하여 주입하는 세포를 계산합니다. 가능한 세포의 개수에 따라 가능한 한 많은 주사 준비. </li><li> 5 분 300xg에서 원심 분리기. 조심스럽게 5 ML PBS에서 뜨는 및 resuspend을 대기음. 원심 분리와 열망을 반복하고, 사출 당 10 μL PBS에 resuspend. </li></ol> 3. 동물의 준비 <ol><li> 인슐린 주사기를 사용하여, 쥐 마취 칵테일의 intraperitoneal 주사 (케타민을 37.6 MG / ML, xylazine 1.92 MG / ML, acepromazine 0.38 MG / ML) g 체중 당 1 μL (gbw)에서.를 관리 진정이 될 수있는 동물 5 분 동안 기다리십시오. 하트 비트에 대한 확인 및 온수 패드에 동물을 놓으십시오. 복구까지 항상 온수 패드에 동물을 유지합니다. </li><li> 진정 작용 후, 오른쪽 눈에 proparacaine HCL 1 방울을 관리할 수 있습니다. 온수 패드에 동물을 교체하고 1 분 기다립니다. </li><li> 오른쪽 눈에 HCL을 phenylephrine 1 방울을 관리할 수 있습니다. 온수 패드에있는 동물을 교체하고 5 분간 기다립니다. 학생의 지연이 발생하지 않은 경우 1, 드롭을 다시 관리하고 다른 5 분 기다립니다. </li><li> &gt; 삼십분 후 진정 작용에서 발생할 수있는 운동이나 꿈틀의 흔적에 대한 동물을 모니터링합니다. 운동의 초기 징조에, 1 μL / 케타민을 HCL의 gbw (10 MG / PBS에 ML에 희석) 관리하고 5 분 기다립니다. </li></ol> 4. 종양 세포의 주입 <ol><li> 최대 직면한 오른쪽 눈과 머리는 거즈에 휴식과 현미경을 통해 관찰하면 오른쪽 눈이 fundus (학생이 동시에 확대되어야합니다)의 붉은 반사를 얻을 중심으로 자사의 측면에있는 현미경 anesthetized 동물을 플레이스 . </li><li> 부드럽게 눈꺼풀에 두 손가락으로 동시에 아래로 밀어와 절차의 나머지를 위해 꾸준히이 위치를 고수하여 바로 세계를 프로프. </li><li> 피어스 갈 거예요 플라나의 영역에서 각막 limbus에 인접 결막 및 공막엔 (그림 1)를 통해 단 유리 구멍에 맥락막 통해 옆으로, Luer - 잠금 주사기에 부착된 멸균 30 게이지 바늘을 세계 사용합니다. 오프닝에서 바늘을 제거합니다. </li><li> 알코올 면봉으로 해밀턴 바늘을 소독. 해밀턴 주사기로 세포 현탁액을 내리고 바늘이 망막 근처의 유리체에서 렌즈 뒤에 현미경을 통해 시각 때까지 개방에 바늘을 삽입합니다. 이 위치에 꾸준히 바늘을 누른 상태에서 두 번째 사람의 도움으로 플런저를 천천히 우울. 바늘을 제거합니다. 필요한 경우, 개막으로부터 액체를 흡수하기 위해 면봉을 사용합니다. </li><li> 부드럽게 마우스 눈꺼풀을 닫을 수있는 눈꺼풀의 압력을 풀어주고있다. </li><li> 각각의 눈에 hypromellose 1 방울을 관리하고 복구를 위해 온수 패드로 동물을 반환합니다. </li></ol> 5. 주입 마우스 및 종양의 수확의 모니터링 <ol><li> 매일, 보통 2~4주 포스트 분사 명백한된다 주입 leukocoria 눈을 (화이트 젖꼭지 반사) 및 / 또는 periocular 팽창을 확인합니다. </li><li> 일단 종양 성장 동물 제도적 지침에 따라, 안락사 감지합니다. </li><li> 눈 및 종양은 눈꺼풀이 적용하는 경우, palpebral 균열 (fissure)에 직교이 incisions을 만들고 피부 날개를 리프트에 메스를 사용합니다. </li><li> 실체 현미경을 사용하여 시각화에서 각막과 렌즈를 제거 limbus에서 원주 절개를하고, 신중하게 트위를 사용하여 다른 조직에서 종양 질량의 대부분을 해부하다zers. 무균 RPMI - 1640 미디어 종양을 놓으십시오. </li><li> 천천히 소켓에서 열린 세계를 당길 족집게를 사용합니다. 종양 침공은 시각 수 있도록 연결된 시신경을 보장하기 위해, 신경이 노출까지 세계를 당겨하고 가능한 한 오랫동안 신경을 절단하는 가위를 사용합니다. histological 시험에 대한 일반적인 처리를 위해 포르말린 10 % 놓습니다. </li></ol> 6. 대표 결과 : Retinoblastoma의 tumorspheres 거의 즉시 그들은 종양 덩어리에서 해방되면서 disaggregated 조직에서 나타나기 시작합니다. 2-4일 내에 더 많은 tumorspheres는 형태와 크기로 증가하기 시작합니다. 분야는 정기적으로하고 집계합니다 (그림 2) 주변의 잘 정의된, 보조 멤브레인을 전시하는 경향이 있습니다. 동물은 일반적으로 세계와 종양이 성장함에 따라 5~8주 주입 후 주변 조직의 팽창의 확대에 의해 다음, 사주 후 사출 (그림 3B) 이내 leukocoria과 함께 선물 (그림 3C). <img src="/files/ftp_upload/2644/2644fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 프로토콜에 언급된 기능을 강조 마우스 눈의 크로스 - 단면. <img src="/files/ftp_upload/2644/2644fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 체외에서 인간 retinoblastoma 세포의 문화) 4X에서 몇 군데, 그리고 B) 10X 목적의 확대. Retinoblastoma 기본 종양 세포는 일반적인 회전 타원체 모양과 선명한 외부 막과 tumorspheres을 생산합니다. 스케일 바) 500 μm의를 대표하고, B) 200 μm의. <img src="/files/ftp_upload/2644/2644fig3.jpg" alt="그림 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 3"> 그림 3 Rag2의 눈 -. / -, B를 A) 정상적인 기능을 보여주는 마우스) 유리 곳에 종양이 대량 나타내는 leukocoria, 및 C)은 큰 종양의 질량 관련 periocular의 팽만, intraocular 출혈과 함께 지구를 작성.

<ol><li>Chèvez-Barrios, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+and+Nonmetastatic+Models+of+Retinoblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Metastatic and Nonmetastatic Models of Retinoblastoma.</a> Am. J. Pathol. 157, 1405-1412 (2000).</li>
<li>Suber, M. L., Hurwitz, M. Y., Chèvez-Barrios, P., Hurwitz, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+consequences+of+intraocular+administration+of+modified+adenoviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Immune consequences of intraocular administration of modified adenoviral vectors.</a> Hum. Gene Ther. 12, 833-838 (2001).</li>
<li>Mallam, J. N., Hurwitz, M. Y., Mahoney, T., Chèvez-Barrios, P., Hurwitz, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+Gene+Transfer+into+Retinal+Cells+Using+Adenoviral+Vectors%3A+Dependence+on+Receptor+Expression%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Efficient Gene Transfer into Retinal Cells Using Adenoviral Vectors: Dependence on Receptor Expression.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 45, 1680-1687 (2004).</li>
</ol>

동물 실험은 의학 IACUC위원회의 베일러 대학에서 정한 지침과 규정에 따라 수행되었다.

여기 설명한 기술들은 intraocular, intravitreal 환경에서 전파 retinoblastoma의 종양을 용이하게합니다. intraocular 사출 기술은 retinoblastoma 유도 세포 라인 한뿐 아니라 intraocular 유전자 치료 2,3에 대한 바이러스 벡터를 제공하는에서 종양을 만들기 위해 과거에 사용되고 있습니다. 이 기술은 현재 성공적으로 기본 종양 및 사출 tumorspheres의뿐만 아니라 이종 이식 종양의 일련 전파의 세포를 직접 주입하여 인간 retinoblastoma의 종양을 생산하기 위해 이용되었다. 종양 형성 (보통 leukocoria)의 표시 증거는 대개 먼저 궤도를 둘러싼 세계 및 / 또는 조직의 intraocular 출혈과 팽창이 5-8주 이내에 개발하는 후 4 주 이내에 기록됩니다. 주입된 생쥐의 소수 민족은 눈꺼풀의 영구 폐쇄에 이르는, 주입 눈을 다치게. 이러한 경우에는 팽창은 종양 형성의 유일한 기호이다. 설립 이종 이식 종양의 전파는 매우 성공하지만 murine 이종 이식 종양의 확립, 모든 인간의 retinoblastoma의 종양과 함께 성공되지 않았습니다. 이 관찰은 invasiveness과 차별화 또는 다른 알려지지 않은 요소의 수준으로 기본 종양의 특정 특성, murine 안구 환경에서 계속 이러한 종양의 능력에 영향을 미치는있을 것입니다. 인간 retinoblastoma 종양에서 얻은 수있는 조직의 양은 매우 작은, 그리고 제한된 수명, 고체 종양의 조직학의 손실과 세포 표현형 변화로 체외에서 문화 인간 retinoblastoma 세포 수있는 능력에 상당한 제한이있다. 이 프로토콜은 인간의 종양을 전파하고 인간의 질병의 murine 모델을 수립하는 비교적 간단한 방법을 제공합니다. 이것은 체외에서 retinoblastoma와 환자의 종양 이외의 더 이상 유지 보수의 생물학의 생체내 실험에서 추가하실 수 있습니다.

<table border="1"><tbody><tr><th> 이름 </th><th> 회사 </th><th> 카탈로그 # </th><th> 댓글 </th></tr><tr><td> HCL 2.5 % Phenylephrine </td><td> 바우 &amp; 롬 </td><td> 053-11 </td><td> 안과 솔루션 </td></tr><tr><td> 30가 니들 </td><td> BD </td><td> 305128 </td><td> 정기 베벨 </td></tr><tr><td> 10 - ML Luer - 잠금 주사기 </td><td> BD </td><td> 309604 </td><td></td></tr><tr><td> 3/10-cc의 인슐린 주사기 </td><td> BD </td><td> 328431 </td><td></td></tr><tr><td> 알코올 면봉 </td><td> BD </td><td> 326895 </td><td></td></tr><tr><td> 6 자 플레이트, 조직 문화 치료 </td><td> BD </td><td> 353046 </td><td></td></tr><tr><td> Proparacaine HCL 0.5 % </td><td> 버틀러 AHS </td><td> 017239 </td><td> 안과 솔루션 </td></tr><tr><td> 케타민을 HCL 100mg/mL </td><td> 포르 다지 </td><td> 4402A </td><td></td></tr><tr><td> 10 - μL 해밀턴 주사기 </td><td> 해밀턴 회사 </td><td> 7648-01 </td><td></td></tr><tr><td> 32 - GA 해밀턴 니들 </td><td> 해밀턴 회사 </td><td> 7803-04 </td><td> 지정 길이 - 0.5 &quot; </td></tr><tr><td> Neurobasal - 미디어 </td><td> Invitrogen </td><td> 10888-022 </td><td></td></tr><tr><td> B - 27 보충 마이너스 비타민 A, 50X </td><td> Invitrogen </td><td> 12587-010 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI - 1640 미디어 </td><td> Mediatech </td><td> 10-040 - CV </td><td></td></tr><tr><td> 비 필수 아미노산 솔루션, 100X </td><td> Mediatech </td><td> 25-025 - CI </td><td></td></tr><tr><td> L - 글루타민, 100X </td><td> Mediatech </td><td> 25-005 - CI </td><td></td></tr><tr><td> 일회용 # 11 메스 </td><td> Miltex </td><td> 4-411 </td><td></td></tr><tr><td> 쥐 아나스타샤 콤보 </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 자체 약국 제제 (케타민을 37.6 MG / ML, xylazine 1.92 MG / ML, acepromazine 0.38 MG / ML) </td></tr><tr><td> 재조합 인간 표피 성장 인자 (EGF) </td><td> STEMCELL 기술 </td><td> 02,633 </td><td> 10 μg / ML 주식 솔루션에 Reconstitute </td></tr><tr><td> 재조합 인간 기본 Fibroblast의 성장 인자 (bFGF) </td><td> STEMCELL 기술 </td><td> 02,634 </td><td> 10 μg / ML 주식 솔루션에 Reconstitute </td></tr><tr><td> OMS - 75 운영 현미경 </td><td> Topcon 의료 장비 </td><td> OMS - 75 </td><td> 이 모델은 단종되었습니다 </td></tr><tr><td> 포르말린 10% </td><td> VWR </td><td> 95042-908 </td><td></td></tr></tbody></table>

면역 결함 마우스의 확립과 인간 retinoblastoma 종양의 전파

Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

정의 줄기 세포 미디어에 Culturing의 retinoblastoma 종양 세포는 제한된 시간 동안 성장 유지 수있는 기본 tumorspheres에 상승을 제공합니다. 원래 종양에 비해 이러한 교양 tumorspheres은 현저하게 다른 세포 phenotypes 발생할 수 있습니다. 교양 세포가 새로운 종양을 형성의 기능을 가지고 데모는 교양 세포 모델에게 원래 종양의 생물학을 보장하는 것이 중요합니다. / - - 면역 결함 쥐들이 여기 Rag2를 사용하여 생체내 인간의 retinoblastoma의 종양 증식을위한 프로토콜을 제시한다. 낮은 통로 또는 murine 눈 유리체 캐비티에 직접 주입 갓 수확 인간 retinoblastoma의 종양에서 얻은 세포의 교양 인간 retinoblastoma의 tumorspheres는 2~4주 이내에 종양을 형성. 이러한 종양은 수확과 중 추가로 생체내에 murine 눈을 passaged이나 체외에서 tumorspheres로 성장하실 수 있습니다. 전파가 성공적으로 추가되므로 실험에 대한 인간의 retinoblastoma 조직의 지속적인 소스를 수립 최소한 세 구절에 대해 실시되었습니다. 웨슬리 S. 본드와 Lalita Wadhwa는 공동 첫번째 작가입니다.

방법은 생쥐에서 인간의 retinoblastoma 종양을 전파하기 위해 설명되어 있습니다. 종양 세포에 직접 면역 결함 생쥐의 눈을에 주입하고 있습니다. 이차 종양이 성공적으로 직접적으로 인간의 종양과 교양 tumorspheres에서 수확을 모두 세포를 사용하여 설립되었습니다.

면역 결함 마우스의 확립과 인간 Retinoblastoma 종양의 전파

정의된 줄기세포 배지에서 망막세포종 종양 세포를 배양하면 일차 종양구(tumorspheres)가 형성되며, 이는 제한된 기간 동안만 성장 및 유지될 수 있습니다...

본 절차의 전반적인 목표는 면역결핍 마우스에 정위성 망막모세포종 종양을 형성하여, 추가 실험을 위한 편리한 모델을 제공하고 종양의 증식을 가능하게 하는 것입니다. 이는 먼저 일차 종양 또는 이종이식 종양에서 세포를 채취하고, 체외에서 종양 구체를 배양함으로써 수행됩니다. 절차의 두 번째 단계는 배양된 종양 세포를 rag2 null 면역결핍 마우스의 안구 내 유리체강 또는 망막하 공간에 주입하는 것입니다.절차의 세 번째 단계는 Leukocoria GLO 확대 및 안구 주변 팽창을 포함하여, 주입된 마우스에서 종양 형성 징후가 나타나는지 모니터링하는 것입니다. 절차의 마지막 단계는 이종이식 종양을 적출하는 것입니다. 최종적으로, 조직병리학적 검사를 통해 마우스 안구 내의 정위성 종양 형성을 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다.안구 내 주입의 섬세한 특성 때문에 이 기술에 대한 시각적 시연이 매우 중요합니다. 주변 구조물을 제대로 식별하지 못하면 쉽게 손상될 수 있습니다. 일반적으로 이 방법에 익숙하지 않은 사람들은 유리체강 내에 종양 세포를 정확한 위치에 전달하기 위한 정밀한 주입 위치 설정에 어려움을 겪습니다.이제 이 방법은 망막모세포종의 생물학적 특성에 대한 통찰을 제공할 수 있습니다. 또한 유전자 전달을 위한 벡터의 안구 내 투여와 같은 다른 시스템에도 적용될 수 있습니다. 먼저, 멸균된 조직 배양 처리된 10 centimeter 디시에 신선한 확정 줄기세포 배지를 준비하십시오.망막세포종 종양 조직을 배치하고 건조를 방지할 정도의 양만 남긴 후 과량의 운송 배지를 흡입하여 제거합니다. 메스로 십자 절단법(cross-cutting technique)을 사용하여 조직을 기계적으로 분쇄한 즉시, 100 µL의 정의된 줄기세포 배지를 조직에 첨가하고 메스를 사용하여 분쇄된 조직을 부드럽게 폅니다. 다음으로, 디시에 10 mL의 정의된 줄기세포 배지를 첨가합니다. 습윤 인큐베이터에서 37 °C, 5% CO₂ 조건으로 플레이트를 배양하며, 매일 탁도 및 pH 변화를 점검합니다.충분한 신생 성장이 관찰될 때까지 7~10일 동안 파쇄된 종양 조직으로부터 일부 종양 구체(tumor spheres)가 거의 즉시 발생하며 그 수가 점차 증가해야 합니다. 그 이후부터는 매주 종양 구체를 300 ×g에서 5분 동안 원심 분리합니다. 이를 새로 조제한 확정 줄기세포 배지에 다시 현탁시킨 후, 중앙부 괴사가 일어난 큰 구체들을 파쇄하고 새롭고 건강한 구체들이 형성될 수 있도록 피펫으로 10회 상하 혼합합니다.주입을 위해 배양된 종양 구체(tumor spheres)를 준비하려면, 구체를 15 milliliter 원심분리관으로 조심스럽게 옮깁니다. 파이펫으로 10~15회 천천히 상하로 섞어 구체를 해리시킵니다. tripan blue를 사용하여 생존하지 않은 세포를 제외하고, 헤모사이토미터(hemo cytometer)를 이용해 주입할 세포 수를 측정합니다.사용 가능한 세포 수와 실험 요구 사항에 따라 필요한 만큼의 주입 분량을 준비하십시오. 다음으로, 튜브를 300 ×g에서 5분 동안 원심분리합니다. 상층액을 조심스럽게 흡입하여 제거하고 세포를 5 mL에 재현탁하십시오.PBS를 사용하여 원심분리와 흡입 단계를 한 번 더 반복합니다. 마지막으로, 주사 1회당 10 µL의 멸균 PBS에 세포를 재부유시킵니다. 실험 절차를 위해 마취된 마우스를 가열 패드 위에 놓아 준비합니다.체온을 유지하기 위해, 오른쪽 눈에 propane HCL 한 방울을 점안하고 1분 동안 기다립니다. 다음으로, 오른쪽 눈에 phenylephrine HCL 한 방울을 점안하고 5분 동안 기다립니다. 동공 확장이 일어나지 않은 경우, 한 방울을 더 점안하고 다시 5분 동안 기다립니다.마취된 동물을 현미경 아래에 옆으로 눕히고, 머리를 거즈 위에 올립니다. 오른쪽 면이 위로 향하게 하고 눈을 중앙에 맞춰 우안의 적색 반사(red reflex)를 얻습니다. 현미경을 통해 안저를 관찰할 때, 두 손가락으로 눈꺼풀을 동시에 부드럽게 눌러 오른쪽 안구를 지지합니다.절차가 끝날 때까지 이 자세를 안정적으로 유지하십시오. 루어 락 시린지에 장착된 멸균된 30 gauge 바늘을 사용합니다. 각막 연주(corneal limbus) 인근의 평평부(pars plana) 영역에서 결막과 공막을 통해 안구를 측면으로 뚫고, 맥락막을 지나 유리체강까지 삽입하십시오.개구부에서 바늘을 제거합니다. Hamilton 바늘을 알코올 스왑으로 멸균합니다. Hamilton 주사기에 세포 현탁액을 흡입한 다음, 바늘이 렌즈 뒤쪽 유리체 내 망막 근처에서 현미경으로 보일 때까지 개구부에 바늘을 삽입합니다.다른 사람의 도움을 받아 플런저를 누르는 동안 바늘을 이 위치에 고정시킨 상태에서 천천히 바늘을 제거합니다. 필요한 경우, 면봉을 사용하여 개구부의 혈액이나 액체를 흡수합니다. 압력을 천천히 해제하여 마우스의 눈꺼풀을 닫습니다.동물을 가열 패드 위로 옮겨 회복시킵니다. 주사 후 매일 눈에 백색동공증이 나타나는지 확인하십시오. 이는 보통 주사 후 2~4주 후에 뚜렷하게 나타납니다.종양 성장이 확인되면 기관 가이드라인에 따라 동물을 안락사시킵니다. 실체 현미경 하에서 각막연을 따라 원형으로 절개하여 각막과 수정체를 제거하고, 핀셋을 사용하여 다른 조직으로부터 종양 덩어리 대부분을 조심스럽게 분리합니다. 분리한 종양을 멸균된 RPMI 1640에 넣습니다.핀셋을 사용하여 안구가 소켓에서 천천히 빠져나와 시신경이 노출될 때까지 당깁니다. 소켓에서 안구를 조심스럽게 들어 올리면서, 가위로 시신경을 절단합니다. 이때 종양의 시신경 침범 여부를 평가하기 위해 가능한 한 많은 신경이 안구에 붙어 있도록 합니다. 조직학적 검사를 위해 10% neutral buffered formalin에 넣습니다.배양된 종양 구체(tumor spheres)의 예시입니다. 3일 후에는 해리된 종양 조직 사이에 소수의 종양 구체만이 관찰됩니다. 그러나 10일째에는 종양 구체의 수가 증가한 것을 확인할 수 있습니다.주입 후 몇 주가 지나면 오른쪽 상단 삽입 그림에서 보는 바와 같이 구체들이 선명한 외막을 나타냅니다. 주입된 마우스는 백색 동공 반사를 보이는 백색동공증을 나타내며, 이는 안구 뒤쪽에 위치한 종양으로 인한 것입니다. H&amp;E 염색된 안구 절편의 이 예시들에서, 왼쪽의 유리체강을 채우고 있는 제노그라프트 망막모세포종 종양과 오른쪽의 모의 주입된 안구에서는 그러한 성장이 없음을 확인하십시오.본 영상을 시청한 후, 배양된 종양 세포를 준비하고 마우스 안구에 안구 내 주사를 적절히 수행하며, 종양의 진행 상황을 관찰하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다. 숙련되면 주사 기법은 동물 한 마리당 약 30분 내에 완료할 수 있습니다. 적절하게 수행된다면 말입니다. 종양 세포는 위험할 수 있으므로, 이 절차를 수행하는 동안 실험복과 마스크를 포함한 적절한 개인 보호 장구(PPE) 착용과 같은 예방 조치를 항상 취해야 함을 잊지 마십시오. 인간 암 세포는 항상 BSL 2 조건 하에서 취급해야 합니다.

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본 프로토콜은 인간 골육종 조직을 이용하여 환자 유래 이종이식(PDX) 마우스 모델을 확립하는 방법을 설명한다.

인간 골육종 조직을 이용한 환자 유래 이종이식 마우스 모델 구축

지난 몇 년 동안, 새로운 세대의 내시경은 쥐 대장염과 대장 종양을 평가하기위한 중요한 진단 연구 보조로 등장했습니다. 우리는 생쥐의 염증과 대장 종양의 내시경 적 평가뿐만 아니라 대장염과 대장 종양의 내시경 심각도를 문서화하는 진수 식별자를 사용하는 새로운 채점 시스템에 여기에 대한 자세한 프로토콜을 제시한다.

검증 된 내시경 채점 시스템을 사용하여 대장염과 대장 종양의 위험을 평가하기 위해 마우스의 유연한 대장 내시경 검사

학습하세요 면역 결함 마우스에 인간 망막모세포종을 이식하여 종양 전파를 연구하는 방법을. 이 기법은 종양 생물학 및 치료 개발 연구에 필수적인 동물 모델을 제공합니다.

면역 결함 마우스의 확립과 인간 Retinoblastoma 종양의 전파

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