Name: 환경 샘플에서 유기 P의 높은 처리량 측정 및 분류 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 58 s
Description: 배우세요 토양 및 분뇨 샘플에서 효소 가수분해를 이용한 유기 인의 고처리량 분류 방법을. 몰리브덴 블루 비색법으로 측정하며 토양 비옥도 및 환경 영향 예측에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

우리는 USGS와 버몬트 워터 자원과 자금을 제공하는 호 연구 센터를 주셔서 감사합니다.

1. 인 추출 <ol><li> 0.25 M의 수산화 나트륨 (NaOH, 40.00 g / 몰) + 0.05 M Ethylenediaminetetraacetic의 산 (EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산), 292.24 g / 몰)의 1L 솔루션을 준비합니다. </li><li> 50 ML 원뿔 관에서 습식 마른 흙 / 샘플 2g에 NaOH + EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) 솔루션 30 ML을 추가합니다. </li><li> 상온 16 H에 대한 동요와 부화. </li><li> 3 분 3,000 XG를 원심 분리기. </li></ol> 2. 샘플 추출 산도 조정 <ol><li> 1.5 ML 마이크로 원심 튜브에 0.1 ML의 나누어지는을 전송합니다. </li><li> 2.5 M 아세트산의 산성의 0.017 ML, 0.4 M 아세트산 버퍼 (아세트산 나트륨의 70.5 % [CH 3 쿠나, 82.03 g / 몰]과 초산의 29.5 %, 산도 5.0), 그리고 탈이온수의 0.739 ML.의 0.144 ML 추가 </li><li> 조정 추출의 최종 부피는 1 ML되며 최종 산도 5.0 것입니다. </li></ol> 3. 효소 주식 솔루션 준비 <ol><li> 0.1 M의 아세트산 나트륨 (CH 3 쿠나, 82.03 g / 몰) 솔루션, 산도 5.0 1 L를 준비합니다. </li><li> 최종 농도가 각각 0.5 단위 / ML하는 등 단계 3.1 준비 아세트산 나트륨 버퍼 2 X 10 ML의 산성 인산 가수 분해 효소 주식 솔루션을 준비합니다. 산성 인산 가수 분해 효소는 Triticum aestivum (; GP, 일반적으로 0.5 U MG - 1 고체, EC 3.1.3.2 밀 배아)에서 I를 입력합니다 솔라넘 tuberosum에서 산성 인산 가수 분해 효소 유형 IV - S (감자, PP, 일반적으로 4.6 U MG - 1 고체, EC 3.1.3.2) 활동 * 단위는 1 단위가 37 시간당 솔루션 orthophosphate 1 micromole의 해방로 정의됩니다 공급자 ° C.에 의해 지정 </li><li> 중 하나를 ML에 탈이온수 - 이것이 지금 4 저장할 수 있습니다 ° C 나중에 사용하기 위해, Reconstitute은 Penicillium citrinum (NP1, 일반적으로 500 U MG -1 고체 곰팡이)에서 nuclease P1 (EC 3.1.30.1)을 동결 건조된. </li><li> 최종 농도가 2.5 단위 / ML NP1는 그러한 단계 3.2 준비 10 ML 튜브 중 하나에 피펫 NP1은, 부드럽게 여러 번 반전하여 섞는다. </li><li> 30 분 2 인용 10 ML 효소 솔루션 3,000 XG를 원심 분리기. </li></ol> 4. P 보정 곡선 및 제어 <ol><li> 1 ㎜의 칼륨 인산 1 L (K2HPO4, 174.18 g / 몰) 재고 솔루션을 준비합니다. </li><li> 1.5 ML의 원심 관에 1 ㎜ 인산 칼륨 주식 솔루션 1 ML 추가 일곱 0.5 ML 시리얼 dilutions을 수행합니다. </li><li> 당신이 20 nmol - 0.625 nmol P.까지 7 dilutions를 제공받을 수 있도록 최초의 튜브를 삭제 </li><li> 표준 96 - 웰 플레이트의 H​​ - 행 B에 중복 각 관에서 80 μL를 전송합니다. </li><li> 열 11 12이 0 nmol P 교정 포인트입니다.의 로우에 아세트산 나트륨 버퍼 (섹션 3.1) 80 μL를 추가 </li><li> 각 열은 11 지금 12 0 nmol 20 nmol 무기 인산염 8 참조 샘플을 포함하고 있습니다. </li><li> 열 10 다음 컨트롤을 포함합니다 : <ol><li> 열 10 처음 세 개의 우물을 40μL PP + GP 효소 솔루션 + 40 μL 아세트산 나트륨 버퍼 (섹션 3.1) 추가합니다. </li><li> 40 μL PP + GP + NP1 효소 솔루션 + 다음 세 우물 40 μL 아세트산 나트륨 버퍼를 추가합니다. </li><li> 10 nmol 포도당 - 6 인산를 (C 6 H 11 나 2 O 9 P &amp;bullet; xH 2 O, 304.1 g / 몰) 잘 하나와 최종 잘하는 + 40 μL PP + GP 효소 솔루션이 포함된 40 μL 아세트산 나트륨 솔루션 추가 대신 효소 솔루션의 열 열 추가 나트륨 아세테이트 용액 인치 </li></ol></li></ol> 5. 샘플 + 효소 인큐베이션 <ol><li> 테스트중인 각 예제는 표준 96 - 웰 플레이트 1 행의 최초의 9 웰스를 차지합니다. </li><li> 제 2의 우물 1-9로 산도 - 조정 시료 추출물의 40 μL를 배포 최대 8 행을 인치 </li><li> 모든 샘플이 배포되고 나면 *은 PP + GP 효소 컬럼에 솔루션을 1-3, PP + GP + NP1 열 4-6 열을 7-9로 아세트산 나트륨 버퍼 (섹션 3.1에서 준비)합니다. 배포하는 멀티채널 피펫을 사용하여 *이 단계는 모든 샘플은 동일한 배양 시간을 보장하기 위해 신속하게 수행되어야합니다. </li><li> 37 96 잘 뚜껑과 부화 샘플과 함께 플레이트 + 효소 솔루션, 컨트롤 및 교정 곡선 정확하게 1 시간 ° C. 표지 </li></ol> 6. 발표 및 배경 무기 P의 Colorimetric 측정 <ol><li> 탈이온수에 다음과 같은 솔루션을 각각 50 ML 준비 : 솔루션 A * : 0.1 M의 아스코르비 산 (C6H8O6, 176.12 g / 몰) + 0.5M trichloroacetic 산 (Cl3CCOOH, 163.39 g / 몰) 솔루션 B : 0.01 M의 암모늄 molybdate ((NH4) 2MoO4, 196.01 g / 몰) 솔루션 C : 0.1 M 나트륨 구연 산염 (HOC (쿠나) (CH2COONa) 2 2H2O, 294.10 g / 몰) + 0.2 M 나트륨 arsenate이 (NaAsO2, 129.91 g / 몰) + 5% 빙초산 (CH3CO2H, 60.05 g / 몰) * 솔루션은 매일 준비되어야합니다. </li><li> 솔루션 SDS 25 μL, 100 μL 솔루션을 추가, 솔루션 B 50 μL의 모든 우물에 솔루션 C 20 μL 96 잘 PL에먹었다. 멀티채널 피펫로 빠르게이 작업을 수행합니다. </li><li> 접시 커버하고 실온에서 30 분 알을 품다. </li><li> 모든 조정할 수있는 마이크로 플레이트 판독기에서 850 nm의 흡광도에서를 측정. </li></ol> 7. P 화합물의 분류 <ol><li> 스프레드 시트 응용 프로그램 (예 : Microsoft Excel의)에 원시 데이터를 가져옵니다. </li><li> X 축에 0-40 nmol의 P와 Y - 축에 중복 흡광도 측정 의미 : 무기 인 교정 곡선을 플롯. </li><li> 선형 회귀를 수행하고 가장 적합한의 라인의 방정식을 찾으십시오. </li><li> 열 1-3 : 직접 보정 적용 곡선을이 배경이되고 무기 P. </li><li> 열 4-6 :. 평균 세중의 샘플 값 및에서 총 흡광도 - 이것이 P hydrolysable P의 monoesters에서 파생되는 컨트롤을 (효소 솔루션 + 배경 무기의 P) 밖으로 뺍니다 </li><li> 열 7-9 : 열 4-6에서 빼기의 흡광도 값을 제외하고 7.5과 같은 -이이 hydrolysable P의 diesters에서 P 있습니다. </li><li> 보정 방정식을 적용하여 발표 nmol P로 흡광도 데이터를 변환합니다. </li><li> nmol P는 MG P / 원래 토양 kg으로 관련이 수 발표했다. 또한, 각각의 P 클래스의 비율을 평가하면 데이터를 분석하는 데 유용한 접근법 수 있습니다. </li></ol> 8. 대표 결과 : colorimetric 화학 후 96 - 웰 플레이트의 빠른 영상 검사 절차가 올바르게 수행되었는지 여부를 단서를 제공합니다. 확인하는 첫번째 것은 접시의 측면 프로필을 검색하여 각 우물에 액체의 수준입니다. 모든 우물의 시약을 정확히 275 μL이 있어야합니다. 다음 시각 세중의 샘플 우물의 색상을 검사 및 교정의 우물 중복. 이러한 기술 복제 파란색 같은 그늘해야합니다. 다음 포도당 - 6 인산염을 포함하는 두 개의 우물에 교정 곡선을 적용하고 확인 그들은 전체 P이를 사용하여 계산된 값을 확인, ICP - 관한 것 또는 다른 방법을 사용하여 측정되어 총 추출 P 후에 무기 P. 모든 10 nmol을 발표 프로토콜은 추출되었다 P의 금액을 초과하지 않습니다. 참고 : 스프레드 시트에 조심해 데이터 관리가 양적 오류 방지 도움이 될 것입니다. 당신은 너무 템플릿을 만들어 한번에 숫자를 많이 다루려고합니다하는 것은 시간을 잘 보낸 것입니다. <img src="/files/ftp_upload/2660/2660fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1 8. 샘플 (행 AH) 및 보정 곡선 (열 11, 12)에 대한 결과를 보여주는 96 - 웰 플레이트. 컨트롤 열에 10입니다. 열 1-3와 4-6 사이의 색상 강도 증가 분해 diester의 P 화합물에 의한 열 4-6와 7-9 사이에 분해 monoester P 화합물에 의한 것입니다. <img src="/files/ftp_upload/2660/2660fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 높은 처리량 효소 가수 분해를 사용하여 버몬트 토양 샘플의 0.25 M NaOH - 0.05 M EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) 추출물의 P 클래스의 유통. 오차 막대는 표준 편차, N = 3을 나타냅니다.

<ol><li>Turner, B. L., Frossard, E., Baldwin, D. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTurner%2C+BL+%22Organic+phosphorus+in+the+environment%22">Organic phosphorus in the environment</a>. , Cabi Publishing. Wallingford. (2005).</li>
<li>Murphy, J., Riley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+single+solution+method+for+determination+of+phosphate+in+natural+waters%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">A modified single solution method for determination of phosphate in natural waters.</a> Anal. Chim. Acta. 27, 31-36 (1962).</li>
<li>Dick, W. A., Tabatabai, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+orthophosphate+in+aqueous+solutions+containing+labile+organic+and+inorganic+phosphorus+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Environ.+Qual%22%5BJournal%5D)">Determination of orthophosphate in aqueous solutions containing labile organic and inorganic phosphorus compounds.</a> J. Environ. Qual. 6, 82-85 (1977).</li>
<li>He, Z., Toor, G. S., Honeycutt, C. W., Sims, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+enzymatic+hydrolysis+approach+for+characterizing+labile+phosphorus+forms+in+dairy+manure+under+mild+assay+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Bioresour.+Technol%22%5BJournal%5D)">An enzymatic hydrolysis approach for characterizing labile phosphorus forms in dairy manure under mild assay conditions.</a> Bioresour. Technol. 97, 1660-1668 (2006).</li>
<li>He, Z., Honeycutt, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+molybdenum+blue+method+for+orthophosphate+determination+suitable+for+investigating+enzymatic+hydrolysis+of+organic+phosphates%5BTitle%5D)+AND+%22Commun.+Soil+Sci.+Plant+Anal%22%5BJournal%5D)">A modified molybdenum blue method for orthophosphate determination suitable for investigating enzymatic hydrolysis of organic phosphates.</a> Commun. Soil Sci. Plant Anal. 36, 1373-1383 (2005).</li>
<li>Cade-Menun, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterizing+phosphorus+in+environmental+and+agricultural+samples+by+31P+nuclear+magnetic+resonance+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Talanta%22%5BJournal%5D)">Characterizing phosphorus in environmental and agricultural samples by 31P nuclear magnetic resonance spectroscopy.</a> Talanta. 66, 359-371 (2005).</li>
<li>Johnson, N. R., Hill, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphorus+species+composition+of+poultry+manure-amended+soil+using+high-throughput+enzymatic+hydrolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Soil+Sci.+Soc.+Am.+J%22%5BJournal%5D)">Phosphorus species composition of poultry manure-amended soil using high-throughput enzymatic hydrolysis.</a> Soil Sci. Soc. Am. J. 74, 1786-1791 (2010).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

본질적으로, 작은 볼륨을 사용하여 빠른 방법은 큰 관심이 필요합니다. 따라서 가장 중요한 단계는 접시에 pipetting 솔루션을 포함하는 사람입니다. 정확하고 가장 중요한 일관성 피펫 기술이 분석의 성공을 위해 필수적입니다. NaOH - EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) 추출 많은 샘플에서 P의 대부분은 세 가지 클래스로 특성화 될 수 있습니다 : orthophosphate, monoester P와 diester P.의 소일스, manures, 퇴적물 또는 NaOH - EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) - 추출물 P가 특징 수를 포함 다른 환경 샘플을 . 환경 샘플에서 P 양식은 반드시 안정되지 않고 샘플 연구자의 군대를 고용하지 않고 손상되기 전에이 기술은 샘플이 특징 보장합니다. 샘플 많은 처리하는 경우이 분석은 특히 적합합니다. 시약의 요구와 공간 요구 사항은 관리 수준 (예 : 1.5 ML의 microcentrifuge 튜브보다는 50 ML 유리 flasks) 크기를 줄일되었습니다. 이 적응은 또한 폐기물 생산을 제한합니다.

<table border="1"><tbody><tr><th> 시약의 이름 </th><th> 회사 </th><th> 카탈로그 번호 </th></tr><tr><td> NaOH </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> S8045 </td></tr><tr><td> EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> EDS </td></tr><tr><td> 빙초산 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> 242853 </td></tr><tr><td> 아세트산 나트륨 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> S2889 </td></tr><tr><td> 위트 산성 인산 분해 효소 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> P3627 </td></tr><tr><td> 감자 산성 인산 분해 효소 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> P1146 </td></tr><tr><td> Nuclease P1 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> N8630 </td></tr><tr><td> 인산 칼륨 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> P2222 </td></tr><tr><td></td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td></td></tr><tr><td></td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td></td></tr><tr><td> 포도당 - 6 인산 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> G7250 </td></tr><tr><td> SDS </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> L4390 </td></tr><tr><td> 아스코르비 산 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> A5960 </td></tr><tr><td> TCA </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> T9159 </td></tr><tr><td> 암모늄 Molybdate </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> A1343 </td></tr><tr><td> 나트륨 구연 산염 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> S1804 </td></tr><tr><td> 나트륨 Arsenate </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> S9663 </td></tr></tbody></table>

환경 샘플에서 유기 p의 높은 처리량 측정 및 분류

High-Throughput Measurement and Classification of Organic P in Environmental Samples

유기 인 (P) 분자의 많은 종류의 환경 샘플 1 존재합니다. 그들이 colorimetric 시약 2,3와 반응하지 않기 때문에 전통 P 측정이 유기 P 화합물을 감지하지 않습니다. 효소 가수 분해가 (EH) 정확 4,5 환경 샘플에서 유기 P 양식을 특성화를위한 새로운 방법입니다. 이 방법은 인 - 31 핵 자기 공명 분광학 (31 P - NMR) - 고가이며 전문 기술을 필요로 training6 방법으로 정확도상에있다. 우리는 microplate 리더 시스템 7 인 세 클래스 (monoester P, diester의 P 및 무기 P)를 측정할 수 효소 가수 분해 방법을 적응있다. 이 방법은 토양, 퇴적물, manures하고있다면 집중, 수생 샘플에서 P 수종을 측정할 수있는, 빠르고 정확 저렴하고 사용자 친화적인 방법으로 연구자를 제공합니다. 이것은 표준 실험실에서 수행할 수 있습니다 유기 P의 형태와 효소 - lability을 측정하는 유일한 높은 처리량 방법입니다. 결과 데이터는 시스템의 양분 콘텐츠 및 부영 양화 가능성을 연구 과학자로 통찰력을 제공합니다.

이 프로토콜은 측정하고 분류 P monoesters, P의 diesters 및 무기 P. 같은 토양 인을 최대 96 샘플에 대한 표준 실험실에서 한 번에 측정할 수에 microplate 리더를 활용하여 효소 가수 분해의 높은 처리량 방법을 설명합니다.

환경 샘플에서 유기 P의 높은 처리량 측정 및 분류

환경 시료에는 다양한 유형의 유기 인(P) 분자가 존재합니다1. 전통적인 인 측정법은 ... 하기 때문에 이러한 유기 인 화합물을 검출하지 못합니다.

본 절차의 전반적인 목적은 토양 또는 퇴비 시료 추출물 내의 효소 가수분해 유기 인을 분류하는 것입니다. 이는 먼저 수산화나트륨 EDTA 용액으로 시료를 추출하고 추출물의 pH를 조절함으로써 수행됩니다. 그 다음, pH가 조절된 추출물을 두 가지 서로 다른 효소 용액과 함께 배양합니다.96웰 플레이트에서 마지막 단계는 몰리브덴 블루 비색법을 사용하여 효소에 의해 방출된 정인산염을 측정하는 것입니다. 궁극적으로, 대부분의 천연 정인산 모노에스테르 인과 디에스테르 인 형태는 효소 가수분해법에 의한 정인산염의 차등 방출을 기반으로 토양 또는 퇴비 시료 내에서 분류될 수 있습니다. 이 방법은 모든 표준 실험실에서 저렴한 비용으로 수행할 수 있습니다.인 31 핵자기공명 분광법(phosphorus 31 nuclear magnetic resonance spectroscopy)과 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 방법의 주요 장점은, 향후 토양 내 천연 효소가 유기 완두 화합물로부터 정인산염을 방출할 수 있는 잠재력을 측정할 수 있다는 점입니다. 따라서 이 방법으로 얻은 데이터는 토양 비옥도 또는 토양이 조류가 이용 가능한 유해한 양의 정인산염을 방출할 가능성을 예측하는 데 도움이 될 수 있습니다. 50 mL 원추형 튜브에 담긴 2 g의 습식 또는 건식 시료에 0.25 M 수산화나트륨 용액 30 mL를 첨가하십시오.실온에서 16시간 동안 교반하며 배양합니다. 샘플을 3000 ×g에서 30분 동안 원심분리한 후, 이미 아세테이트 완충액이 들어 있는 1.5 mL 마이크로 원심분리 튜브에 100 µL를 옮깁니다. 조정된 샘플의 총 부피는 1 mL이며 pH는 5.0입니다.새로 제조한 0.1 M sodium acetate pH 5 10 mL에 acid phosphatase가 mL당 0.5 unit 함유되도록 stock 용액 두 개를 준비합니다. 이제 Penicillium Citron 유래의 재구성된 lyophilized nuclease NP1을 acid phosphatase stock 용액이 담긴 10 mL 튜브 중 하나에 최종 농도가 mL당 2.5 unit NP1이 되도록 첨가하고, 튜브를 여러 번 뒤집어 부드럽게 혼합한 후 두 효소 용액을 3000 ×g에서 30분 동안 원심분리합니다. 검량선을 작성하기 위해, 먼저 1.5 mL 원심분리 튜브에 1 mM potassium phosphate stock 용액 1 mL를 넣고 0.5 mL씩 7회 연속 희석하며, 첫 번째 튜브는 버려서 최종 희석 범위가 20 µM에서 0.625 nM phosphorus가 되도록 합니다.이제 ORTHOPHOSPHATE 표준 용액들을 플레이트의 마지막 두 열로 옮깁니다. A행의 0 NM orthophosphate부터 시작하여 H행의 20 nm orthophosphate까지를 10번 열의 처음 세 웰에 넣습니다. 10번 열의 다음 세 웰에는 40 µL의 PP 및 GP 효소 용액을 첨가합니다. 이어서 40 µL의 PP, GP 및 NP 단일 효소 용액을 첨가합니다.마지막으로, 6개의 모든 웰에 100 millimolar 아세테이트 완충액 40 µL를 첨가합니다. 이제 10번 열의 처음 6개 웰에는 각각 80 µL의 용액이 들어 있어야 합니다. 다음 두 웰에 10 M glucose와 six phosphate가 포함된 소듐 아세테이트 용액 40 µL와 PP 및 GP 효소 용액 40 µL를 첨가합니다.테스트할 각 샘플에 대해, 모든 샘플의 분주가 완료된 후 pH가 조정된 샘플 추출물 40 µL를 최대 8개 행의 1번에서 9번 웰에 분주합니다. 멀티 채널 피펫을 사용하여 1~3열에는 PP 및 GP 효소 용액을, 4~6열에는 PP, GP 및 NP 1을, 7~9열에는 0.1 M 아세트산 나트륨 완충액을 분주합니다. 모든 샘플이 동일한 배양 시간을 갖도록 이 단계를 신속하게 수행하십시오.96-웰 플레이트를 덮개로 덮고 시료, 효소 용액, 대조군 및 검량선 시료를 탈이온수가 담긴 37 °C 환경에서 정확히 1시간 동안 배양합니다. 4가지 스톡 용액을 각각 50 mL씩 준비합니다. 용액 A는 멀티채널 피펫을 사용하여 매일 신속하게 조제해야 합니다.96-웰 플레이트의 모든 웰에 25 µL의 SDS, 100 µL의 용액 A, 20 µL의 용액 B, 그리고 50 µL의 용액 C를 첨가합니다. 플레이트를 덮고 상온에서 30분 동안 배양합니다. 마지막으로, 스프레드시트 프로그램을 사용하여 조정 가능한 마이크로플레이트 리더기로 850 nm에서 흡광도를 측정합니다.먼저, x축에는 0에서 20 nanomoles phosphorus를, y축에는 두 번 반복 측정한 흡광도의 평균값을 설정하여 무기 인산 검량선을 작성하고, 선형 회귀 분석을 수행하여 최적 적합선의 방정식을 구합니다. 다음으로, 1~3열의 값들을 평균한 후 해당 데이터 세트에 검량선을 적용하여 배경 무기 인산량을 계산합니다. 이어서 가수분해된 인산 모노에스테르 유래 인의 양을 결정하기 위해, 4~6열의 3반복 시료 값들을 평균하고 여기서 대조군 효소 용액 값과 배경 무기 인산량을 뺍니다.그 후, 가수분해된 인으로부터 인 함량을 계산하기 위해, DER은 7열부터 9열까지의 3반복 시료 값의 평균을 구한 뒤, 4열부터 6열까지의 대조군 효소 용액, 배경 무기 인, 가수분해된 모노 에스테르 인 값을 뺍니다. 일반적인 96웰 플레이트에는 8개 시료의 결과와 검량선이 나타납니다. 대조군은 10열에 있습니다.1~3번 컬럼과 4~6번 컬럼 사이의 색 강도 증가는 가수분해된 모노에스테르 인 화합물 때문이며, 4~6번 컬럼과 7~9번 컬럼 사이의 증가는 가수분해된 디에스테르 인 화합물 때문입니다. 본 영상에서는 고처리량 효소 가수분해법을 사용하여 버몬트 토양 샘플의 0.25 molar 수산화나트륨 0.05 molar EDTA 추출물 내 인 분류 분포를 성공적으로 분석하였습니다. 이 영상을 시청한 후에는 효소 가수분해를 이용하여 토양 또는 퇴비 추출물 내의 천연 오르토인산염, 모노에스테르 및 디에스테르 인 화합물을 측정하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.이 기술은 환경 화학 및 영양 관리 분야의 연구자들이 토양 또는 가축분뇨 시스템 내 유기 P의 거동을 탐구하는 길을 여는 데 도움이 될 수 있습니다.

high-throughput-measurement-classification-organic-p-environmental

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

타겟이 불분명 한 대사는 대사 프로파일의 스냅 샷을 생성하는 가설을 제공합니다. 이 프로토콜은 혈청 세포 또는 조직에서 대사 산물의 추출 및 분석을 보여줍니다. 대사 산물의 범위는 액체 - 액체 상 추출을 사용하여 조사하는, 마이크로 ultraperformance 액체 크로마토 그래피 / 차동 분석 소프트웨어에 결합 고해상도 질량 분석법 (UPLC-HRMS).

Ultraperformance 액체 크로마토 그래피 고해상도 질량 분석 (UPLC-HRMS)를 사용하여 생물 소스에서 타겟이 불분명 한 대사

부르크 홀데 리아의 sartisoli RP037-mChe와 전 세포 bioreporter 분석은 물 불포화 모델 시스템에서 공기로 채워진 모공을 해소 균사체에 의한 능동 수송 후 세균 분해 가능한 유기 오염 물질 (즉, 플루 오렌)의 분수를 감지하기 위해 개발되었다.

전체 셀 Bioreporter 접근 물 불포화 시스템에서 유기 오염 물질의 운송과 생체 이용률을 평가하기 위해

식물 세포벽 구조 및 화학적 특성을 평가하여 바이오 연료 및 바이오 재료에 이상적인 공급 원료를 식별합니다. 표준 방법은 대규모 데이터 세트에 적용할 때 제한이 있습니다. 이러한 고처리량 전처리, 효소 당화 및 열분해 분자 빔 질량 분석 방법은 많은 수의 바이오매스 샘플을 비교하여 실험 시간과 비용을 줄입니다.

총 리그닌, 리그닌 단량체, 및 효소 설탕 자료 : 리그 노 셀룰로오스 바이오 매스의 반항의 변화의 높은 처리량 검열

5개의 서로 다른 수동 샘플링 장치의 특성화 및 적용에 대한 프로토콜이 제시됩니다.

물에 농약의 모니터링을위한 특성화 및 패시브 샘플러의 응용 프로그램

Proton Transfer Reaction Time of Flight 질량 분석기를 사용하면 휘발성 유기 화합물의 고감도, 신속 및 비침습적 분석을 수행할 수 있습니다. 그 잠재력을 입증하기 위해 요구르트의 젖산 발효(온라인 바이오프로세스 모니터링), 다양한 사과 유전자형(대규모 스크리닝) 및 커피 마신 후 후비강 공간(노즈스페이스 분석)의 세 가지 예를 제공합니다.

자동 샘플링 시스템과 결합 된 PTR-ToF-MS 및 식품 연구를위한 맞춤형 데이터 분석 : 바이오 프로세스 모니터링, 스크리닝 및 코 공간 분석

이 신문은 하버드 환경 챔버 (HEC) 및 가스 측정 및 입자 종에 대 한 관련된 계측에 대 한 작업 절차를 설명 합니다. 환경 챔버는 생산 보조 유기 종 유기 선구자, 특히와 관련 된 대기 유기 미 립 자 물질에서에서 생산을 연구 하는 데 사용 됩니다.

생산 및 하버드 환경 챔버에 유기 미 립 자 물질의 측정

이 프로토콜 자연 유기 물질과 다른 생태계에서 미생물 단백질의 완전 한 쌍 특성에 culminating 보완 분석 및 omics 기술에 대 한 단일 처리량을 설명 합니다. 이 이렇게 강력한 비교 대사 경로 및 변환을 설명 하는 온실 가스 생산 및 환경 변화에 대 한 응답을 예측에 대 한 중요 한 식별 수 있습니다.

복잡 한 자연 유기 물질 혼합물을 특성화에 대 한 단일 처리량 보완 고해상도 분석 기법

우리는 지구 시스템에서 미 량 영양소 bioavailability 및 매출에 기여 하는 siderophore 잠재적인 환경 샘플의 신속한 심사에 대 한 프로토콜을 제시.

환경 샘플에서 높은 처리량 Siderophore 심사: 식물 조직, 대량 토양, 및 Rhizosphere 토양

본 프로토콜은 밀에서 퍼플루오로알킬산의 장거리 수송을 위한 간단하고 효율적인 방법을 기술한다.

분할 뿌리 노출 기술을 통한 밀에서 과불화알킬산의 장거리 운송 조사

본 프로토콜은 토양 샘플에서 유기염소 농약 잔류물을 성공적으로 측정하기 위해 가스 크로마토그래피-질량분석법과 함께 QuEChERS에서 상 분할을 위한 포름산암모늄의 활용을 설명합니다.

포름산암모늄을 사용한 수정된 QuEChERS 접근법에 의한 토양 샘플의 유기염소 살충제 분석

배우세요 토양 및 분뇨 샘플에서 효소 가수분해를 이용한 유기 인의 고처리량 분류 방법을. 몰리브덴 블루 비색법으로 측정하며 토양 비옥도 및 환경 영향 예측에 활용됩니다.

환경 샘플에서 유기 P의 높은 처리량 측정 및 분류

더 많은 동영상 탐색