Name: 준비 및 사용 HIV - 1 차 감염된 CD4 + 대상 세포로 T 세포 자연 킬러 세포 세포 독성 Assays에서 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-14T11:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 7 s
Description: 배우세요 HIV-1 감염 CD4+ T 세포를 분리하여 NK 세포 세포독성 반응을 평가하는 방법을. 유동세포측정법과 크로뮴 방출 분석을 통해 면역학 및 바이러스학 연구에 활용할 수 있습니다.

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<ol><li>Ruscetti, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+effector+mechanisms+against+HTLV-I-+and+HTLV-III%2FLAV-infected+lymphoid+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Analysis of effector mechanisms against HTLV-I- and HTLV-III/LAV-infected lymphoid cells.</a> J Immunol. 136, 3619-3624 (1986).</li>
<li>Zheng, Z. Y., Zucker-Franklin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apparent+ineffectiveness+of+natural+killer+cells+vis-a-vis+retrovirus-infected+targets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Apparent ineffectiveness of natural killer cells vis-a-vis retrovirus-infected targets.</a> J Immunol. 148, 3679-3685 (1992).</li>
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</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

제대로하면이 프로토콜에서 설명한 assays는 반대 degranulate 및 HIV - 1 감염 세포를 (그림 5 참조) lyse하는 NK 세포의 능력의 대표 사진을 제공해야합니다. HIV에 감염된 세포와 NK 세포의 용해 HIV에 감염된 세포에 대한 응답으로 NK 세포 degranulation 10 직접 비례한다. HIV에 감염된 세포에 세포 독성 반응을 측정하는 두 NK 세포 기능 assays에 대한 신뢰할 수있는 결과에 높은 NK 세포뿐만 아니라 감염된 세포의 높은 정화 인구 정화의 고립에 의존하고 있습니다. NK 세포와 HIV - 1 감염 세포가 세포 비율을 대상으로 상당히 정확하게 이펙터의 달성을 위해 중요하다. 투석을 갖는 마찬가지로, 대상 세포 집단에서 죽은 및 apoptotic 세포의 제거는 효과기 세포와 51 피크 라벨 또는 부화하기 전에 중요합니다. 51 CR은 동위 원소의 분류 단계에서 죽은 apoptotic 세포의 존재로 apoptosis를 겪고 아르 세포 internalized 수 있습니다 높은 자발적인 릴리스의 결과하고 계산 % 특정 용해를 왜곡합니다. 또한, 죽은이나 apoptotic 세포의 존재는 CD107a 표현의 비정상적으로 높은 수준의 결과로 NK 세포 degranulation를 실행할 수 있습니다. 정확한 pipetting는 51 피크 릴리스 assays의 NK 세포와 표적 세포의 배양 다음 셀 무료 supernatants를 제거하면, 필요한 각 복제에서 제거 뜨는의 볼륨의 차이뿐만 아니라 높은 수준의 편차가 발생합니다. 수정은 특정 수용체 또는 리간드 6,11에 대립 항체와 공동 문화 사전 effectors이나 목표를 잠복기에 의해 HIV에 감염된 세포 NK 세포의 용해를 실행에서 특정 NK 수용체의 역할을 평가하는 이러한 프로토콜을 만들 수 있습니다. 시토킨 - 처리 NK 세포 (예, IL - 2, IL - 15) 자극 NK 세포를 12의 기능을 평가하는 데 사용할 수 있습니다. 마찬가지로, 항체 의존 세포 세포 독성의 assays 이러한 프로토콜을 사용하여 수행할 수 있습니다. 안티 HIV 항체 (예, 안티 - gp120) NK 세포 낮은 친화 FC 수용체 CD16 13에서 인식의 대상 세포에 추가할 수 있습니다. HIV에 감염된 세포 NK 세포 세포 독성 반응을 측정하는 설정이지만 이러한 assays은 또한 HIV에 감염된 세포 인식 아래 크린 시토킨 생산 NK 세포의 능력을 측정하기 위해 수정할 수 있습니다. 우리는이 프로토콜의 목표 세포로 체외 감염된 세포에의 사용을 설명하지만 우리는 최근에 HIV에 감염된 환자에서 대상 세포의 생성을 설명합니다. 이것은 CD4 + T - 세포가 인터루킨 - 2 11의 존재에 mitogens와 자극을 다음과 같은 두 주간 기간 동안 세포의 확장에 의해 다음의 절연을 필요로합니다. 확장의 두 주 기간 후,이 문서에서 설명하는 프로토콜은 대상 세포를 분리하는 데 사용됩니다.

<table><tbody><tr><td>Vaccutainer 튜브 (Sodium Heparin)</td><td>BD Biosciences</td><td>367874</td><td></td></tr><tr><td>RosetteSep CD4+ T-세포 분리 키트</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>15062</td><td></td></tr><tr><td>CMF PBS</td><td>Hyclone</td><td>SH30256.01</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Hyclone</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>림프구 분리 배지</td><td>Cellgro</td><td>25-072-CV</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640</td><td>Hyclone</td><td>SH30096.01</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin / Streptomycin</td><td>Hyclone</td><td>SV30010</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Cellgro</td><td>25-005-Cl</td><td></td></tr><tr><td>T-세포 증식 키트</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-441</td><td></td></tr><tr><td>CMF HBSS (1x)</td><td>Hyclone</td><td>SH30588.01</td><td></td></tr><tr><td>0.5M EDTA</td><td></td><td>46-034-Cl</td><td></td></tr><tr><td>NK 세포 음성 분리 키트</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-657</td><td></td></tr><tr><td>IMDM</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>12440-046</td><td></td></tr><tr><td>CD4+ 양성 분리 키트</td><td>Invitrogen</td><td>113.31D</td><td></td></tr><tr><td>사멸 세포 제거 키트</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-101</td><td></td></tr><tr><td>Polybrene</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>sc-134220</td><td></td></tr><tr><td>CD3 PacificBlue</td><td>BD Biosciences</td><td>558117</td><td></td></tr><tr><td>CD14 PacificBlue</td><td>Biolegend</td><td>325616</td><td></td></tr><tr><td>CD20 PacificBlue</td><td>Biolegend</td><td>302328</td><td></td></tr><tr><td>CD56 APC</td><td>Biolegend</td><td>318310</td><td></td></tr><tr><td>CD69 PE</td><td>BD Biosciences</td><td>555531</td><td></td></tr><tr><td>CD107a FITC</td><td>BD Biosciences</td><td>555800</td><td></td></tr><tr><td>&lt;sup&gt;51&lt;/sup&gt;Chromium</td><td>PerkinElmer, Inc.</td><td>NEZ030002MC</td><td></td></tr><tr><td>감마 카운터 튜브</td><td>PerkinElmer, Inc.</td><td>1270-401</td><td></td></tr><tr><td>2470 자동 감마 카운터</td><td>PerkinElmer, Inc.</td><td>2470-0050</td><td></td></tr><tr><td>FACS Diva</td><td>BD Biosciences</td><td>643629</td><td></td></tr><tr><td>FlowJo</td><td>Tree Star, Inc.</td><td>FJ-9-1YR</td><td></td></tr></tbody></table>

준비 및 사용 hiv - 1 차 감염된 cd4 + 대상 세포로 t 세포 자연 킬러 세포 세포 독성 assays에서

Preparation and Use of HIV-1 Infected Primary CD4+ T-Cells as Target Cells in Natural Killer Cell Cytotoxic Assays

자연 킬러 (NK) 세포가 바이러스에 감염된 세포에 타고난 면역 반응의 중요한 구성 요소입니다. 그것은 HIV에 감염된 세포로부터 NK 세포 기능에 aberrancy를 식별하기 때문에 잠재적으로 자신의 cytolytic 활동을 강화 것입 치료로 이어질 수 HIV - 1 감염 세포를 인식하고 lyse하는 NK 세포의 능력을 이해하는 것이 중요합니다. 오히려 다음 목표 세포를 세포 독성의 assays에 감염된 - T - 세포 라인으로 HIV에 감염된 기본 T - 세포의 폭발을 사용하려면 필요가있다. T - 세포 라인, 심지어 감염없이 NK 세포 용해에 매우 취약합니다. 또한, 그것은 용해가 발생합니다 대상과 효과기 세포 사이에 난 불일치 주요 histocompatibility 복합 클래스를 방지하기 위해 autologous 기본 세포를 사용해야합니다. 기본 HIV에 감염된 세포 NK 세포 cytolytic 반응을 평가하는 초기 연구는 감염된 세포의 1,2의 상당 살해를 표시하지 못했습니다. 그러나, 사용하는 HIV - 1을 NK 세포 기능 assays의 대상 세포로 감염된 기본 T - 세포가 감염되지 않은 세포에게 3 오염의 존재를 인해 어려운되었습니다. 감염되지 않은 세포의 비율이 일관성이 감염된 세포는 기증자 NK 세포 기능의 변화로 인해하지 않을 수 있습니다 표본 간의 NK 세포 죽이는에서 편차가 발생합니다. 그러므로, 그것은 실험 3,4 사이의 세포 비율을 대상으로 이펙터를 표준화하기 위해 정화 감염된 세포 인구 작업 도움이 될 것입니다. 여기는 죽었거나 죽어가는 세포에게 3-6 제거 감염 세포 및 상업 키트의 가용성에 아래쪽 조절 CD4에 HIV - 1의 능력을 활용하여 HIV - 1 감염 세포의 높은 정화 인구의 절연을 보여줍니다. 정화 감염된 기본 T - 세포 폭발 그런 다음 5-7 효과기 인구로 NK 세포를 정화와 degranulation 또는 세포 독성 분석 중 하나의 대상으로 사용할 수 있습니다. degranulation 분석에 effectors로 NK 세포의 이용 8 &quot;cytolytic 과립 &#39;라는 전문 lysosomes의 lytic 내용을 공개하는 NK 세포의 능력을 평가합니다. CD107a, cytolytic 과립은 플라즈마 막에 퓨즈 NK 세포 표면에 표현된다 lysosomal 멤브레인 단백질에 대한 fluorochrome 복합 항체와 얼룩으로, 우리는 세포 인식 대상에 대한 응답으로 degranulate NK 세포의 비율을 결정할 수 있습니다. 또는, NK 세포 lytic 활동이 NK 세포의 존재에있는 대상 세포 내에서 51 피크의 릴리스에 의해 lysed 대상 세포의 비율의 결정을 허용 세포 독성 분석에 평가할 수있다.

HIV에 감염된 세포 자연 킬러 세포 lytic 응답을 측정하기 위해 세포 독성의 assays는 대상 세포의 순도에 의해 제한됩니다. 우리는 여기서 CD4 아래로 조절하는 HIV - 1의 능력을 활용하여 HIV - 1 감염 기본 T - 세포 폭발의 고도 정화 인구의 절연을 보여줍니다.

준비 및 사용 HIV - 1 차 감염된 CD4 + 대상 세포로 T 세포 자연 킬러 세포 세포 독성 Assays에서

자연살해(NK) 세포는 바이러스에 감염된 세포에 대한 선천성 면역 반응의 핵심 구성 요소입니다. NK 세포의 능력을 이해하는 것은 ...

이 실험 절차의 전반적인 목표는 HIV-1 감염 세포에 대한 NK 세포의 세포독성 반응을 평가하는 것입니다. 이를 위해 먼저 정맥혈에서 CD4 양성 T 세포를 분리하여 감염시킨 후, 동일한 기증자로부터 자연 살해(natural killer) 세포를 분리합니다.다음으로, 감염되지 않은 CD4 양성 T 세포를 감염된 세포로부터 분리합니다. 마지막으로, 감염된 세포와 NK 세포를 각각 표적 세포와 작동 세포로 사용하여 두 가지 분석법 중 하나로 NK 세포의 세포독성을 평가합니다. 최종적으로, 유세포 분석법으로 측정된 CD107a 발현의 상향 조절 또는 감마 카운터를 통해 검출된 ⁵¹Cr 방출을 통해, NK 세포가 HIV-1 감염 세포에 반응할 수 있음을 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다.이 방법은 NK 세포가 HIV-1 감염 세포에 반응하는지, NK T-세포 상호작용에서 어떤 수용체 리간드 상호작용이 중요한지, 그리고 HIV-1 바이러스 단백질이 HIV-1 감염 세포에 대한 NK 세포 반응을 조절하는지와 같은 HIV-1 분야의 핵심 질문들에 답할 수 있습니다. 인간 말초혈액에서 분리한 CD4+ T 세포를 anti-CD3 및 anti-CD28이 결합된 비드로 72시간 동안 자극한 후, 헤모사이토미터(hemocytometer)를 사용하여 결과 T 세포 군집의 수를 측정합니다. 그 다음, 배양액을 두 그룹으로 나누어 약 2×10⁶개의 T 세포를 15mL 코니컬 튜브에 넣어 비감염 대조군으로 사용하고, 나머지 CD4+ T-세포 현탁액은 50mL 코니컬 튜브에 넣어 감염군으로 배치합니다.두 그룹 모두 22°C에서 300 G로 10분 동안 원심분리한 후 상층액을 흡입하여 제거합니다. 50 mL 튜브에 있는 CD4 positive T 세포를 바이러스 입자가 포함된 배양액에 직접 현탁시키고, polybrene을 최종 농도 10 mg/mL가 되도록 첨가합니다. 그런 다음 20~25°C에서 1200 ×g로 2시간 동안 스핀 감염(spin infection)을 수행합니다.여기서 세포를 DHIV three에 5의 다중도로 감염시키고 있습니다. 스핀 감염이 완료되면 상층액을 제거하고, 100 units/mL의 IL two가 보충된 RPMI 완전 배지에서 감염된 세포를 mL당 3 × 10⁶의 밀도로 재현탁합니다.그 후, 감염되지 않은 세포와 새로 감염된 세포를 6-웰 플레이트에서 72시간 동안 배양합니다. 복제 불능 바이러스를 사용하여 세포를 감염시킨 경우에는 72시간 동안, 복제 가능 바이러스를 사용한 경우에는 5~7일 동안 배양한 후, 감염된 CD4 양성 T세포 배양액이 포함된 상층액을 수집하고, 브레이크를 설정한 상태에서 22 °C, 300 G로 10분 동안 세포를 원심 분리합니다. 상층액을 흡입하여 제거하고, 펠렛을 2% FBS와 2 mM EDTA가 포함된 2 mL의 PBS에 재현탁한 후, CD4 양성 분리 키트를 사용하여 헤모사이토미터로 세포 수를 측정합니다.CD4 양성 비감염 T 세포를 제거합니다. CD4 양성 T 세포 분리를 위해 제조사의 지침을 따르되, A1 anti-CD4 B per cell 비율을 사용하는 점만 다르게 적용합니다. 그 다음, 사멸 세포 제거 키트를 사용하여 정제된 바이러스 함유 세포 집단에서 사멸 세포를 제거합니다.제조사의 지침에 따라 살아있는 T 세포군을 수집하고, 정제된 세포를 300 G에서 10분 동안 원심분리합니다. 브레이크를 건 상태에서 상층액을 제거한 후, 펠렛을 1 mL의 RPMI complete 배지에 현탁하고 세포 수를 측정합니다. 말초혈액 NK 세포는 CD4 양성 T 세포와 동일한 기증자로부터 우선적으로 분리합니다.하룻밤 동안 배양한 후, 혈구계수기(hemocytometer)를 사용하여 NK 세포의 수를 측정합니다. 브레이크를 설정한 상태에서 300 G로 10분간 원심분리한 다음, RPMI 완전 배지로 세포를 재현탁하여 최종 농도를 10⁶ cells/mL로 조정합니다. 다음으로, 정제된 감염 T 세포 및 대조군 비감염 T 세포 현탁액을 수집하여 300 G에서 10분간 원심분리합니다. 브레이크를 설정한 상태에서 상층액을 제거하고 펠릿을 재현탁합니다.양성 대조군으로 mL당 2×10⁶ cells 농도의 RPMI 완전 배지에 NK 세포 용해에 민감한 K 5 62 세포를 약 2×10⁶ cells 사용합니다. K 5 62 세포를 브레이크를 켠 상태에서 300 G로 10분간 원심분리한 후, 상층액을 제거하고 펠릿을 mL당 2×10⁶ cells 농도의 RPMI 완전 배지에 재부유시킵니다.모든 세포 집단을 세척하고 실험 농도로 재현탁한 후, NK 세포를 K 5 62 세포, 감염되지 않은 T 세포 또는 HIV 감염 T 세포와 함께 배치합니다. 비특이적 NK 세포 탈과립을 측정하기 위해, 96-well V-bottom 플레이트의 개별 웰에 표적 세포 유형당 하나의 반복구만 사용합니다. 한 개의 웰에 100 µL의 NK 작동 세포와 100 µL의 배지만을 첨가합니다.각 웰에 10 µL 부피의 형광색소 접합 anti-CD107A 항체를 추가하고, 22 °C에서 브레이크를 설정한 상태로 20 G에서 2분간 플레이트를 원심분리합니다. 그런 다음 37 °C, 5% CO2 조건에서 4시간 동안 플레이트를 배양합니다. 배양 후, 22 °C에서 브레이크를 설정한 상태로 400 G에서 5분간 플레이트를 원심분리하고, P 200 팁이 장착된 2 mL 흡입 피펫을 사용하여 상층액을 제거합니다.다음으로, 각 웰에 100 µL의 flow buffer를 추가한 후, anti CD 3 14 20 Pacific blue 항체와 anti CD 56 APC 항체를 이용하여 얼음 위에서 20분 동안 세포를 염색합니다. 세포 염색이 완료되면, 각 웰에 200 µL의 flow buffer를 추가하고 플레이트를 400 ×g에서 5분 동안 원심분리합니다. 22 °C에서 브레이크를 설정한 상태로, 각 웰의 flow buffer를 조심스럽게 흡입하여 제거합니다.200 µL 마이크로 피펫 팁이 장착된 2 mL 흡입 피펫을 사용하여, 펠릿이 흐트러지지 않도록 주의하며 세포를 다시 세척한 후, 칼슘 및 마그네슘이 제거된 PBS 내의 1% 파라포름알데히드 200 µL에 펠릿을 재현탁합니다. 마지막으로, 세포 현탁액을 유량 튜브(flow tube)로 옮기고, 각 튜브에 칼슘 및 마그네슘이 제거된 PBS 내의 1% 파라포름알데히드 약 100 µL를 추가하여 총 부피를 300 µL로 맞춥니다. 그 후, FACSDiva 소프트웨어를 사용하여 유세포 분석기로 2 × 10⁴ 개의 NK 세포 이벤트를 읽고 FlowJo 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석합니다. 양성 대조군으로서, 정제된 HIV V1 감염 및 비감염 T 세포 표적 세포를 15 mL 원추형 튜브에서 37 °C, 5% CO₂ 조건으로 2시간 동안 세포 10⁶ 개당 생리식염수 내 125 µCi chromium 51로 표지합니다. 또한, 10⁶ 개의 K562 세포를 100 µCi chromium 51로 2시간 동안 표지합니다.동일한 배양 조건 하에서 수행합니다. RPMI 완전 배지를 사용하여 각 세포군에 대한 염색 용액의 최종 부피를 500 µL로 맞춥니다. 표적 세포에 첨가할 chromium 51의 부피는 표적 세포를 라벨링하는 동안 PerkinElmer 웹사이트에 있는 범용 방사성 붕괴 계산기를 사용하여 계산합니다.이전에 분리한 NK 세포를 배양액에서 제거하고 수를 측정합니다. NK 세포를 브레이크를 켠 상태에서 300 G로 10분간 원심분리하고, 펠릿을 RPMI complete에 재현탁합니다. 생성된 세포 현탁액을 세 개의 15 mL 원추형 튜브에 나누어 담습니다. 첫 번째 튜브의 세포 밀도는 10⁵/mL, 두 번째 튜브는 2.5 × 10⁵/mL, 세 번째 튜브는 5 × 10⁵/mL로 조정합니다. 이렇게 준비된 NK 세포는 chromium 51 방출 분석에서 각각 1:1, 2.5:1, 5:1의 비율로 작동 세포로 사용될 것입니다.라벨링된 표적 세포를 인큐베이터에서 꺼내고 각 튜브에 4.5 milliliters의 RPMI complete를 추가합니다. 튜브를 300 G에서 10분 동안 원심분리합니다. 그 후 펠렛이 흐트러지지 않도록 주의하며 상층액을 방사성 액체 폐기물 용기에 붓습니다.흡수되지 않은 chromium 51을 모두 제거하기 위해 표적 세포를 두 번 더 세척합니다. 세 번째 세척에서 나온 상층액은 비방사성 액체 폐기물 용기에 버릴 수 있습니다. 이제 표적 세포를 RPMI complete에 재현탁하여 chromium 51 방출 분석의 전형적인 설정 예시인 ml당 10⁵의 최종 세포 밀도로 맞춥니다.각 그룹은 3회 반복 실험으로 수행됨에 유의하십시오. 96-well V-bottom 플레이트의 지정된 각 웰에 표지된 타겟 세포를 100 µL씩 분주하여 웰당 최종 타겟 세포 수가 10⁴개가 되도록 합니다. 다음으로, 적절하게 지정된 작동세포 대 타겟세포 비율(effector target cell ratios)에 따라 NK 세포 현탁액 100 µL를 타겟 세포에 첨가합니다. 그 후, 최대 방출 및 자발적 방출 그룹을 위해 작동세포가 없는 해당 웰에 타겟 세포 100 µL를 첨가합니다.자발적 방출군에 RPMI complete 100 µL를 추가로 보충하고, 브레이크를 설정한 상태에서 20 G로 2분 동안 플레이트를 원심분리한 후, 37 °C 및 5% CO2 조건에서 4시간 동안 플레이트를 배양합니다. 4시간 배양 후, 최대 방출 웰을 제외한 각 웰에 RPMI complete로 1:10 희석한 인간 적혈구 5 µL를 첨가합니다. 그다음 최대 방출 웰에 10% sodium ESAL sulfate 100 µL를 첨가하고 400 G로 5분 동안 플레이트를 원심분리합니다. 세포를 펠렛화하기 위해, 실험군 및 대조군 웰 각각에 해당하는 감마 카운터 튜브에 라벨을 부착합니다.96-웰 플레이트의 각 웰에서 100 µL의 세포 제거 상층액을 수확하여 각 웰의 상층액을 미리 라벨링된 튜브에 넣습니다. PerkinElmer 24 70 자동 감마 카운터를 사용하여 각 튜브 내의 chromium 51 양을 측정합니다. 다음의 산점도는 CD 1 0 7의 결과를 분석하기 위한 전형적인 유세포 분석 게이팅 전략을 보여줍니다.탈과립 분석법입니다. 먼저 FSCA 대 FSCH 도표에서 세포 뭉침이나 더블렛(doublet)을 제외하고 단일 세포를 게이팅합니다. 다음으로, FSCA 대 SSC로 표시된 단일 세포 게이트에서 분홍색 타원으로 표시된 림프구 집단을 다시 게이팅합니다.그 후 림프구 게이트는 CD 3 14 20 대 CD 56으로 도식화하며, 수직 분홍색 타원으로 표시된 CD 56 양성 및 CD 3 14 20 음성 집단을 게이팅합니다. 여기에서 NK GA는 CD 1 0 7 A 대 CD 56으로 도식화하여 탈과립화된 NK 세포를 시각화합니다. 다음 두 그림에는 HIV 1 감염 세포에 대한 자연 살해 세포의 세포독성 반응을 평가한 대표적인 결과가 나타나 있습니다. 표면 CD 1 0 7 A를 발현하는 NK 세포의 백분율을 통해, 표적 세포가 없을 때와 K 5 62 세포, 일차 CD 4 양성 T 세포 및 HIV 감염 일차 T 세포에 반응했을 때의 NK 세포 탈과립화 능력을 평가했습니다. 각 사분면의 숫자는 이 그림에서 전체 NK 세포의 백분율을 나타냅니다.NK 세포의 용해 능력을 평가하기 위해, 효과 세포와 표적 세포의 비율을 2.5:1, 5:1 및 7.5:1로 설정하여 K 5 62 세포, 감염되지 않은 CD4 양성 T 세포, 그리고 HIV-1 감염 T 세포에 대해 $^{51}\text{Cr}$ 방출 분석을 수행하였습니다. 이 기술의 개발은 HIV-1 생물학 분야의 연구자들이 HIV 감염 환자의 체내에서 자연살해세포가 HIV-1 감염 세포에 어떻게 반응하는지 탐구할 수 있는 기반을 마련하는 데 기여하였습니다.

preparation-use-hiv-1-infected-primary-cd4-t-cells-as-target-cells

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

이 시각 실험 라이브 공촛점 이미징 실험에 대한 HIV의 형광 분자 클론을 활용을위한 가이드입니다.

HIV와 라이브 공촛점 현미경의 형광 클론을 사용하여 HIV의 머릿속 휴대 전화 전송

nanomole 친화력과 HIV - 1Ba - L gp120에 대한 몇 가지 2' - 플루오로 RNA의 aptamers는 RNA 라이브러리에서에 의해 고립...

siRNA 전달을위한 셀 타입의 특정 안티 HIV gp120 aptamers의 개발

이 비디오는 표적 암세포에 대한 자연살해(NK) 세포의 세포독성을 결정하기 위해 젖산 탈수소효소 방출 분석을 수행하는 방법을 보여줍니다. 이 분석은 형성된 붉은 색 생성물의 흡광도를 측정하여 암세포에서 세포질 젖산 탈수소효소의 방출을 정량화합니다.

암세포에 대한 자연살해세포독성 평가를 위한 체외 분석

CD4+ 조절 T 세포는 강력한 면역 조절제이며 면역 항상성에서 중요한 기능을 수행합니다. 말초 혈액에서 이러한 세포가 부족하기 때문에 특히 HIV-1 감염과 관련하여 기능 연구가 어렵습니다. 여기에서는 HIV-1에 감염된 개인의 말초 혈액에서 기능적 CD4+ Tregs를 분리하고 확장하는 방법을 설명합니다.

새로운 도구는 HIV-1에 감염된 개인으로부터 규제 T 세포를 확장하려면

우리는 HIV 특정 CD4 T 세포에 의한 사이토 카인 분비의 조절에 면역 경로의 역할을 조사하기 위해 시험 관내 분석을 개발 하였다.

시험 관내 분석에서 HIV 특정 CD4 T 세포의 이펙터 기능에 면역 경로의 영향을 평가하기

무 세포 HIV-1 입자와는 달리, 감염된 CD4 + T 세포를 형질 효과적으로 수지상 세포 (PDCS)에 의해 감지된다. 이 원고는 타입 I IFN의 방출에 의해 평가로서 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 또는 격리 PDCS는 PDCS 의해 선천성 센싱을 평가하는 HIV-1 감염 T 세포와 공동 배양 방법을 설명한다.

HIV-1 감염 CD4의 타고난 감지 평가<sup&gt; +</sup&gt;를 사용하여 형질 수지상 세포에 의한 T 세포<em&gt; 예 생체 내</em&gt; 공동 문화 시스템.

이 연구의 목표는 기본 자연적인 살인자 (NK) 세포에서 성공적인 유전자 변환에 대 한 허용 하는 기술을 공식화 했다. 인간의 lentiviral 변환 dextran 중재 또는 더 높은 유전자 식 효율성에 마우스 기본 NK 세포 결과. 이 방법은 유전자 변환의 NK 세포 유전자 조작을 향상 방대 하 게 됩니다.

Dextran Murine 및 인간의 기본 NK 세포의 Lentiviral 변환 효율 향상

양적 인간의 자연 킬러 세포의 세포 독성 활동을 결정 하는 흐름 cytometry 기반 방법은 여기에 표시 됩니다.

인간 NK 세포 활동의 평가 대 한 흐름 Cytometry 기반 세포 독성 분석 실험

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여기에서는 종양 항 원에 대 한 세포 독성 T 림프 구 (CTL) 반응에서 면역 우세의 검사를 가능 하 게 하는 유 세포 분석 기반의 생체 사 멸 분석 법을 설명 한다. 이 우아한 분석을 기계 론 적 연구와 약물 효능 테스트에 사용 하는 방법의 예를 제공 합니다.

종양 특이 CD8+ T 세포 반응에서 면역 우세를 연구 하기 위한 생체 내 세포 독성 분석 법

여기에서는 특히 HIV-1 감염에 중점을 두고 소포체(ER) 스트레스 및 풀린 단백질 반응(UPR) 활성화를 측정하기 위한 몇 가지 확립된 방법에 대해 설명합니다. 이 기사에서는 또한 ER 스트레스/UPR이 HIV-1 복제 및 바이러스 감염성에 미치는 영향을 조사하기 위한 일련의 프로토콜에 대해 설명합니다.

HIV-1에 감염된 T 세포에서 소포체 스트레스 및 풀린 단백질 반응을 측정하고 HIV-1 복제에서 그 역할을 분석합니다.

배우세요 HIV-1 감염 CD4+ T 세포를 분리하여 NK 세포 세포독성 반응을 평가하는 방법을. 유동세포측정법과 크로뮴 방출 분석을 통해 면역학 및 바이러스학 연구에 활용할 수 있습니다.

준비 및 사용 HIV - 1 차 감염된 CD4 + 대상 세포로 T 세포 자연 킬러 세포 세포 독성 Assays에서

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