Name: β - glucuronidase (거스)을 기반으로 세포를 파괴 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 35 s
Description: 배우세요 GUS 리포터 시스템을 활용한 식물 세포 사멸 분석법으로 Nicotiana benthamiana를 이용해 유전자 기능을 신속하게 평가하는 방법입니다. 이 기술은 민감하고 재현성 높은 식물 기반 일시적 분석을 제공합니다.

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Nicotiana benthamiana 공장은 25 ° C에서 온도 제어 성장 챔버 재배하고 있습니다. 3~6주 오래된 식물의 완전 확장 건강한 단풍이 사용됩니다. 팁 : 더 나은 결과를 새로 신흥 잎을 사용하여 얻을 수 있습니다 1. Agrobacterium 과도 침투 프로토콜 : 1 일 <ol><li> 세포 죽음에 대한 assayed하는 유전자 (들)과 포함하는 벡터로 적절한 벡터를 포함하는 Agrobacterium tumefaciens (변형 LBA4404)의 글리세롤 주식과 리크 LB / Rifampicin (25 μg / ML) / Kanamycin (100 μg / ML) 한천 플레이트 제정 발기인 아래 거스 카세트. 항상 부정적인 컨트롤로 빈 벡터 제어를 포함합니다. </li><li> 28 ° C 2 일 품어. </li></ol> 3 일 <ol><li> / Rifampicin / Kanamycin 판은 이전에 줄무늬 각 LB에서 하나의 식민지와 Rifampicin (25 μg / ML)과 Kanamycin (100 μg / ML)를 포함하는 LB 2 ML의 예방. </li><li> 28 흔들어 ° C, 200 rpm으로 24 시간 최대 성장 밀도에 도달할 때까지 각 문화를 품다. </li></ol> 팁 : Clumping 때때로 경우 문화가 철저하게 진행하기 전에 (최대 pipetting 아래 IE) resuspended해야하는, 관찰됩니다. 일 사 <ol><li> 부화 후, 신선한 LB (적절한 항생제를 포함) 및 acetosyringone (최종 농도 25 μm의) 10 ML에 전체 볼륨을 높일 수 있습니다. </li><li> 또 다른 16 시간을위한 28 ° C에서 흔들어하여 각 문화를 품다. </li></ol> 5 일 <ol><li> 다음날 실온에서 10 분 4,000 XG 10 ML (acetosyringone를 추가하지 마십시오) 침투 매체 (10 MM MgSO 4 0.7 H 2 O, 9 MM MES, 산도 5.6) 및 원심 분리기를 추가하여 두 번 각각의 문화를 씻으십시오. </li><li> 최종 원심 분리 단계 후에, acetosyringone를 (100 μm의)이있는 5 ML의 침투 매체의 각 문화를 resuspend. </li><li> OD 600nm를 측정, 0.1과 0.9 사이에 측정 가능합니다. 팁 : 0.1만큼 낮은의 OD 600nm가 문제없이 사용되었습니다 그러나, 높은 ODS 더 일관성있는 결과를 얻을 수 있습니다. </li><li> 감염 Agrobacterium 문화를 준비하는보다 3 시간에 대한 문화를 품다. </li><li> 분석하는 유전자 (들)와 거스 카세트를 포함하는 문화와 1:1 비율에서 대조군 (Agrobacterium은 빈 벡터를 포함)를 포함하는 혼합 문화. </li><li> 1 ML 바늘 적은 주사기를 (그림 1)를 사용 새로 신흥 나뭇잎의 abaxial (아래) 측면을 침투. 팁 : 부정적인 제어 혼합 (빈 벡터 + 거스 카세트)와 같은 식물의 잎 반대에 assayed되도록 유전자를 (유전자 X + 거스 카세트)이있는 혼합물을 모두 침투. 각 치료 세중의 공장을 사용합니다. </li><li> 포스트 침투 소비세 3 일 거스 단백질 표현 나뭇잎과 분석에 침투. </li></ol> 2. Histochemical 거스 분석 일 6.25 <ol><li> excised 나뭇잎에 X - gluc 기판 매체에 침투 진공. </li><li> 하룻밤 상온이나 뚜렷한 파란색 얼룩이 나타날 때까지 어둠 속에 품어. </li></ol> 주 9 <ol><li> distillated 물에 씻어. </li><li> 엽록소가 제거 될 때까지 다시 증류수로 전송 후, 70 % 에탄올에 품어. 시각 거스 표현 수준을 평가. </li></ol> 3. Fluorometric 얼굴 분석 : 일 6.25 <ol><li> 액체 질소를 사용하여 절구에 침투 잎 디스크를 연마하여 전체 단백질을 분리. 거스 추출 버퍼 100 UL (50 MM NaPi 산도 7.0, 10 MM EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산), 0.1 % 트리톤 X - 100, 0.1 % N - lauroylsarcosine 나트륨 소금, β - 메르 캅 토 에탄올 (0.7 μl / ML) 얼음에 샘플을 유지하면서. 추가 </li><li> 4 ° C에서 5 분 1만4천그램에 현탁액을 원심과 총 가용성 단백질로 뜨는 가져가라. </li><li> 제조 업체의 지침에 따라 nanodrop를 사용하여 농도를 측정. </li><li> 거스 추출 버퍼를 사용하여 각 샘플에 대한 전체 가용성 단백질의 100 μg에 단백질 농도를 조정합니다. </li><li> 2 mm의 최종 농도 거스 추출 버퍼 준비 얼굴 기판 (4 methylumbelliferyl - β - D - glucuronide trihydrate)를 추가합니다. 샘플 당 100 μL (단백질 + 얼굴 기판)의 총 볼륨은 충분해야합니다. </li><li> 37 1 시간에 대한 반응을 품어 ° C. </li><li> 거스 중지 버퍼 (0.2 M 나 2 CO 3) 800 μl를 추가하여 반응을 중지합니다. </li><li> 365 NM 및 방출 파장 455 nm의의와 MU 표준 곡선에 값을 비교의 여기 파장에서 플레이트 판독기를 사용하여 형광을 측정합니다. nmol의 MU / μg 총 단백질 / 분 가용성으로 거스 활동의보고 수준. </li></ol> 4. 주식 및 솔루션 : <ol><li> Acetosyringone (1 M) 주식 (FW = 196.2 g) 하위&gt; - DMSO 5 ML에서 0.981 g </li><li> Kanamycin (100 MG / ML) 재고가 - DH 2 0 준비 - 필터 소독 </li><li> Rifampicin (25 MG / ML) 주식 - DMSO의 준비 </li><li> Luria - Bertani (LB) 액체 성장 미디어 (1L) 1% (W / V) bacto - tryptone, 10g 0.5 % (W / V) bacto - 효모 추출물, 5g 170 MM의 나트륨 염화물 10g 산도 - 7 </li><li> Acetosyringone (25 μm의) 1 ML의 최종 볼륨에 1 M의 주식 = 25 μl </li><li> 침투 매체 : (1L) 10 MM MgSO 4 0.7 DH 2 0 (FW = 246.48 g), 2.4648 g 9 밀리 MES (FW = 213.25 g), 1.91925 g 산도 - 5.6 </li><li> Acetosyringone (100 μm의) 1 ML의 최종 볼륨 1M 주식 = 100 μl </li><li> 거스 추출 버퍼 50 MM NaPi 산도 7.0, 10 MM EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산), 0.1 % 트리톤 X - 100, 0.1 % N - lauroylsarcosine 나트륨 소금, β - 메르 캅 토 에탄올 (0.7 μl / ML) </li><li> 2X 인산 버퍼 0.2M 아니 2 PO 4 0.2 M 나 2 HPO 4 산도 7 </li><li> X - Gluc 기판 솔루션 1 MG를 해산 5 브로모 -4 - 클로로 - 3 - 인돌릴 0.1 ML의 메탄올에 BD - glucuronide (X - Gluc). 1 ML 2X 인산 버퍼, ferricyanide 20 μl 0.1M의 칼륨, 10μl 트리톤 X - 100 10 % distillated 물을 850 μl를 추가합니다. </li></ol> 5. 대표 결과 : 세포 사망이 발생하면이 프로토콜에 따라, 거스 표현의 손실이 예상된다. 우리는 동시에 cyto - 보호 Arabidopsis BCL - 2 관련 athanoGene (BAG) 가족의 일원과 β - glucuronidase 리포터 유전자 (거스)을 표현했습니다. 우리는 공동 침투 N. benthamiana는 Agrobacterium 스트레인 LBA4404를 사용하여 35S 구동 가방 표현 카세트와 거스 벡터 pCAMBIA 2301로 떠납니다. 그림 2에 표시된 거스 얼룩에 눈에 띄는 증가는이 침투 다음과 같은 관찰되었다. 반대로, BCL - 2 가족의 알려진 프로 apoptotic 회원 백스가 사용되었을 때, 거스 얼룩의 표시 감소는 (그림 2) 관찰되었다. 이러한 경우 모두에서, 거스 표현식은 컨트롤에 비해 가시 달랐다. 그러나, 표현의 차이가 덜 분명하면 fluorometric 얼굴 assays은 거스 표현 quanitate을 수행할 수 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/2680/2680fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. N.의 abaxial 측면의 Agrobacterium 혼합물의 침투의 예 benthamiana는 1 ML 바늘 적은 주사기를 사용하여 떠납니다. <img src="/files/ftp_upload/2680/2680fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 거스 벡터는 N. 공동 표현했습니다 benthamiana는 안티 - 죽음의 유전자 및 세포 사망의 알려진 유도로 떠납니다. 거스 수준은 빈 벡터 제어 (거스 제어)에 비해했다.

<ol><li>Jefferson, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GUS+fusions%3A+%2C+%CE%B2-glucuronidase+as+a+sensitive+and+versatile+gene+fusion+marker+in+higher+plants%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">GUS fusions: , β-glucuronidase as a sensitive and versatile gene fusion marker in higher plants.</a> EMBO J. 6, 3901-3901 (1987).</li>
<li>Nishihara, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+%CE%B2-Glucuronidase+Gene+in+Pollen+of+Lily+%28Lilium+longiflorum%29%2C+Tobacco+%28Nicotiana+tabacum%29%2C+Nicotiana+rustica%2C+and+Peony+%28Paeonia+lactiflora%29+by+Particle+Bombardment%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Expression of the β-Glucuronidase Gene in Pollen of Lily (Lilium longiflorum), Tobacco (Nicotiana tabacum), Nicotiana rustica, and Peony (Paeonia lactiflora) by Particle Bombardment.</a> Plant Physiol. 102, 357-357 (1993).</li>
<li>Hodal, L. Plant Science. 87, 115-115 (1992).</li>
<li>Kabbage, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+BAG+proteins%3A+a+ubiquitous+family+of+chaperone+regulators%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol.+Life+Sci.+%22%5BJournal%5D)">The BAG proteins: a ubiquitous family of chaperone regulators.</a> Cell Mol. Life Sci. . 65, 1390-1390 (2008).</li>
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<li>Otha, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Construction+and+Expression+in+Tobacco+of+a+%CE%B2-Glucuronidase+%28GUS%29+Reporter+Gene+Containing+an+Intron+Within+the+Coding+Sequence%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Construction and Expression in Tobacco of a β-Glucuronidase (GUS) Reporter Gene Containing an Intron Within the Coding Sequence.</a> Plant Cell Physiol. 31, 805-805 (1990).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

<p class="jove_content"&gt; 그것은 포유류의 시스템에서 일반적인 식물의 세포 사망 탐지 기술을 사용하는 것이 어렵습니다. 귀스 기자 제도와 함께, 우리는 세포 죽음 선수의 검출 및 분석을위한 식물을 기반으로, 중요한 방법을 제시한다. 이 방법은 라이브 세포가 발생하는 거스 표현에 필요한 그 단순한 사실을 활용합니다. 의미있는 결과와 repeatability를 보장하기 위해, 그것은 거스 카세트 및 assayed되도록 유전자를 숨겨주는 문화가 동등한 비율로 침투되는 중요합니다. 추가 잠재적인 세포 죽음의 플레이어를 비교할 때 이러한 비율은 유지되어야합니다. 위의 그림과 같이, 우리는 성공적으로 많은 유전자의 잠재적인 사형 기능을 조사하기 위해 우리가 실험실에서이 방법을 사용했습니다. 때문에 단순하게, 우리는이 시스템이 정기적으로 죽음의 모듈 레이터를 감지하는 데 사용할 수 있다고 생각합니다. 또한, 방법은 단일 문화 혼합물에서 여러 유전자를 수용하도록 조정할 수 있습니다. 때로는 사건으로, 특정 유전자의 세포 죽음 기능은 다른 프로그램 세포 사망 ef...

<table border="1"><tbody><tr><th> 시약의 이름 </th><th> 회사 </th><th> 카탈로그 번호 </th><th> 댓글 (옵션) </th></tr><tr><td> Rifampicin </td><td> VWR </td><td> IC19549001 </td><td> DMSO의 25mg/mL 주식 </td></tr><tr><td> 4&#39; - 히드록시 - 3 &#39;, 5&#39; - dimethoxyacetophenone (Acetosyringone) </td><td> VWR </td><td> TCD2666 </td><td> DMSO에서 0.981 g / ML (1M 주식) </td></tr><tr><td> 2 - (4 - morpholino) ethanesulfonic의 산성 일수화물 (MES) </td><td> VWR </td><td> EM - 6110 </td><td> 1.92 g / 침투 미디어 1 L를 만들기위한 물에 L </td></tr><tr><td> Bacto - tryptone </td><td> 어부 </td><td> BP1421 - 2 </td><td> 10g / LB 매체 1 L를 만들기위한 물에 L </td></tr><tr><td> Bacto - 효모 추출물 </td><td> VWR </td><td> EM1.03753.0500 </td><td> 5g / 물 L LB 매체 1 L을 만들기위한 </td></tr><tr><td> 나트륨 염화물 </td><td> VWR </td><td> EM - 7710 </td><td> 10g / LB 매체 1 L를 만들기위한 물에 L </td></tr><tr><td> 인산 나트륨 일염기의 일수화물 </td><td> VWR </td><td> MK - 7868-12 </td><td> 버퍼 NaPi의 50mM 만들기위한 물에 2.5G / L </td></tr><tr><td> 인산 나트륨 이염의 heptahydrate </td><td> VWR </td><td> EMD - SX0715 - 1 </td><td> 5g / 물 L 버퍼 NaPi의 50mM 만들기위한 </td></tr><tr><td> 마그네슘 황산의 heptahydrate </td><td> VWR </td><td> EM - MX0070 - 1 </td><td> 2.5 G / 침투 미디어 1 L를 만들기위한 물에 L </td></tr><tr><td> N - Lauroylsarcosine </td><td> VWR </td><td> TCL0151 - 500G </td><td> 0.1 % 거스 버퍼에 V / V </td></tr><tr><td> 5 - 브로모 -4 - 클로로 - 3 - indoxyl - 베타 - D - glucuronide cyclohexylammonium 소금 (X - gluc) </td><td> 골드 생명 공학 </td><td> G1281C </td><td> 메탄올 백퍼센트에 1mg/100uL </td></tr><tr><td> 4 Methylumbelliferyl - μ - D - glucuronide 하이드 레이트 (얼굴) </td><td> 시그마 </td><td> M5664 </td><td> 거스 추출 버퍼 100 UL 2 MM </td></tr><tr><td> 칼륨 ferrocyanide trihydrate </td><td> VWR </td><td> EM - PX1460 - 1 </td><td> X - gluc 기판 솔루션 100mM 주식 </td></tr><tr><td> β - Methylumbelliferone (MU) </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> M1381 </td><td> MU 표준 곡선을 사용 거스 추출 버퍼 </td></tr><tr><td> 나트륨 탄산염 </td><td> VWR </td><td> EM - SX0395 - 11 </td><td> 거스 중지 버퍼를 만들기위한 물 0.2 M </td></tr></tbody></table>

β - glucuronidase (거스)을 기반으로 세포를 파괴 분석

A &#946;-glucuronidase (GUS) Based Cell Death Assay

우리는 동시에 세포 죽음의 putative 긍정적이거나 부정적인 규제와 리포터 유전자, β - glucuronidase (거스)를 표현하는 소설 과도 공장 표현 시스템을 개발했습니다. 이 시스템에서는, N. benthamiana의 잎은 분석하는 유전자를 포함하는 35S 구동 표현 카세트 공동 침투되며, 거스 벡터 pCAMBIA 2301은 차량으로 Agrobacterium 스트레인 LBA4404를 사용합니다. 거스 표현식이 발생하는 라이브 세포가 필요하기 때문에이 마커 유전자가 세포 죽음의 긍정적인 규제와 함께 공동으로 표현 때 거스 활동의 손실이 예상된다. 마찬가지로, 거스 활동 안티 apoptotic 유전자는 벡터 제어에 비해 사용하는 경우 관찰 증가했다. 아래 그림과 같이, 우리는 성공적으로 모두 프로와 안티 죽음 플레이어를 분석하기 위해 실험실에서이 시스템을 사용하고 있습니다. 이들은 같은 백스와 같은 세포 사망의 포유 동물 inducers 알려진 안티 - apoptotic 공장 BCL - 2 관련 athanoGene (BAG) 가족뿐만 아니라를 포함. 또한, 우리는이 단백질의 가능한 포스트 translational 수정 / 정품 인증에 대한 단서를 제공할 수 단백질 내의 특정 truncations의 죽음 기능을 분석하기 위해이 시스템을 사용하고 있습니다. 여기, 우리는 특정 유전자의 죽음 기능을 조사하는 초기 단계로, 신속하고 민감한 식물을 기반으로 방법을 제시한다.

일반적으로 이러한 DNA를 laddering 또는 TUNEL의 assays 같은 포유류의 시스템에서 사용되는 프로그램 세포 사망 assays은 종종 공장에서 재현하기가 어렵습니다. 귀스 기자 제도와 함께, 우리는 특정 유전자의 잠재적인 사형 속성을 분석하는 빠른, 식물 기반의 과도 분석을 제안합니다.

우리는 리포터 유전자인 &beta;-glucuronidase (GUS)와 추정 ...을 동시에 발현하는 새로운 일시적 식물 발현 시스템을 개발하였습니다.

본 절차의 전반적인 목적은 Gus 리포터 시스템을 사용하여 특정 유전자의 잠재적인 세포 사멸 특성을 분석하는 것입니다. 관심 유전자를 Gus 카세트에 클로닝하고 35 s 프로모터 하의 적절한 아그로박테리움 벡터에서 배양합니다. 이후 이 벡터들을 아그로박테리움 균주 LBA 44 0 4에 형질전환시키고, Gus 발현 카세트를 포함하는 배양물과 혼합하여 *Nicotiana hamana* 잎에 침투시킵니다.Gus 활성은 조직화학적 염색을 통해 시각적으로 평가하거나, 형광 측정 mug 분석법을 통해 정량적으로 평가할 수 있습니다. DNA laddering이나 tunnel 분석법과 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은, 포유류 시스템에서는 흔히 사용되지만 식물에서는 재현하기 어려운 반면, 이 방법은 살아있는 세포가 있어야 gas 발현이 일어난다는 단순한 사실을 이용한 민감하고 신속한 식물 기반 일시적 분석법이라는 점입니다. 오늘은 Hua RAO를 사용하여 해당 절차를 시연하겠습니다.우리 실험실의 박사후 연구원인 Infiltration 단계에서는 25 °C에서 재배한 3~6주령의 건강하고 완전히 확장된 nicotiana hamana 잎이 필요합니다. 이 프로토콜은 8일에 걸쳐 수행하도록 계획하십시오. 1일 차에는 세포 사멸 분석용 벡터와 Gus 발현 카세트가 포함된 벡터의 agrobacterium tumor fassan 글리세롤 스톡을 플레이트에 스트리킹합니다. 여러 배양 조합을 테스트할 때는 항상 음성 대조군 또는 스터퍼(stuffer)로 빈 벡터를 포함하십시오.플레이트를 28°C에서 2일 동안 배양합니다. 3일째에, 각 플레이트에서 단일 콜로니를 채취하여 2 mL의 선택적 LB 배지에 접종합니다. 최대 성장 밀도에 도달할 때까지 28°C에서 200 RPM으로 24시간 동안 진탕 배양합니다.24시간 동안 배양한 후, 덩어리가 져 있다면 피펫팅을 통해 배양물을 완전히 재현탁하고, 아그로박테리움(agrobacterium)의 병원성 유전자를 유도하기 위해 신선한 선택 LB 배지를 사용하여 각 배양물의 총 부피를 10 milliliters로 늘립니다. 아세톤을 25 micromolar 농도로 첨가하고, 각 배양물을 28 degrees Celsius에서 16시간 동안 더 진탕 배양합니다. 다음 단계로, 각 배양물을 상온에서 4,000 Gs로 10분 동안 원심분리한 후, 펠릿을 10 milliliters의 침투 배지

a-glucuronidase-gus-based-cell-death-assay

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

셀 - 중재의 lymphocytotoxicity (CML) assays는 체외에서 autoreactive 반응 및 세포 사망의 학습 메커니즘을 테스트하는 데 사용할 수 있습니다. 그러나, 형광 염료, 타입 및 세포 죽음뿐만 아니라 활용 경로의 반응 속도론 살 세포 공촛점 미세한 이미징 기술을 사용하여 더 자세히 공부하실 수 있습니다.

세포 독성 T Lymphocytes에 의해 베타 세포 죽음의 중재를 평가하는 방법

이 비디오에서는 β-갈락토시다아제 효소를 발현하는 기생충 트리파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi)에 대한 트리파노시드 약물의 세포 독성 가능성을 결정하는 간단하고 강력한 방법을 설명합니다. β-갈락토시다아제는 세포 용해 지표 역할을 하며, 그 활성은 약물의 효과를 평가하는 데 사용할 수 있습니다.

기생충에서 약물 유발 세포 독성을 평가하기 위한 β-갈락토시다아제 분석

이 동영상은 인플라마좀에 의한 대식세포 사멸을 검출하기 위한 젖산 탈수소효소 분석을 보여줍니다. 대식세포는 프라이밍을 위해 지질다당류에 노출된 후 니제리신에 노출되어 인플라마좀에 의한 세포 사멸을 유발하며, 이는 젖산 탈수소효소 분석에 의해 결정됩니다.

Nigericin 노출 후 대식 세포 사멸을 감지하기 위한 Lactate Dehydrogenase 방출 분석

이 문서에서 우리는 단일 세포 분석을위한 마이크로 유체 칩을 제시한다. 그것은 수있는 세포 내 단백질, 효소, 조효소, 형광 분석이나 면역에 의해 두 번째 메신저의 정량화.

단일 세포의 다목적 화학 분석을위한 미세 유체 칩

멀티 플렉스 분석은 기본 세포 메커니즘에 대한 유익한 정보를 제공하고 시약 및 불필요한 반복 실험의 낭비를 제거 할 수 있습니다. 우리는 팔 미트 산으로 산화 반칙으로 체외 시상 하부 모델에서 세포 생존을 결정하기 위해, 형광 및 발광 기반의 방법을 사용하여, 여기에 멀티 플렉스 카스파 3 / 7 활동 분석에 대해 설명합니다.

시상 하부 세포 모델에서 세포 사멸을 결정하는 카스파 다중 분석의 사용

우리는 인간, 마우스 또는 쥐 Granzyme B (GzmB)의 단백질 분해 활성을 구체적으로 측정하는 간단하고 정량적인 비색 분석을 설명합니다. 이 프로토콜은 적절한 인식 서열을 가진 다른 합성 펩타이드 기질의 가수분해에 의해 다른 과립 세린 프로테아제의 프로테아제 활성을 측정하기 위해 쉽게 조정할 수 있습니다.

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전 임상 재현, 빠르고, 효율적인 약리 보호자를 호출 하는 "고아" 약물의 소설 클래스에 대 한 테스트 있도록 수요가 있다. 우리 소설 약리 보호자 약물으로 서 적격 환자에 대 한 간단 하 고, 고도로 표준화, 다양 한 세포 문화 기반 분석 결과 화면을 개발 했다.

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우라실-DNA 글리코실라제 활성을 분석하기 위한 비표지, 비-방사성-동위원소 방법은 직접 아푸린산/아피리미딘 부위 함유 생성물 분석을 위해 MALDI-TOF 질량 분광법을 사용하여 개발되었다. 이 분석은 DNA 글리코실라제 측정에 매우 간단하고, 구체적이며, 빠르고, 사용하기 쉬운 것으로 판명되었습니다.

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산화된 글루타치온과 환원된 형태의 글루타치온(각각 GSSG 및 GSH)의 정량화는 오르토프탈알데히드(OPA)를 사용하여 달성되었습니다. OPA는 GSH에 접합되면 고농도 형광성이 되지만 감소될 때까지 GSSG를 접합할 수 없습니다. 여기에서는 정규화를 위해 단백질 정량을 사용하여 두 가지를 모두 정량화하는 다중 파라메트릭 분석에 대해 설명합니다.

In vitro에서 배양된 포유류 세포에서 ortho -phthaldehyde를 사용한 산화 및 환원 형태의 글루타치온의 신속한 정량화

배우세요 GUS 리포터 시스템을 활용한 식물 세포 사멸 분석법으로 Nicotiana benthamiana를 이용해 유전자 기능을 신속하게 평가하는 방법입니다. 이 기술은 민감하고 재현성 높은 식물 기반 일시적 분석을 제공합니다.

β - glucuronidase (거스)을 기반으로 세포를 파괴 분석

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