마이크로 볼륨 바이오 사양 나노 분광 광도계를 사용하여 핵산 및 단백질 농도 결정

본 절차의 전반적인 목표는 마이크로 볼륨 분광광도계를 사용하여 핵산과 단백질의 농도를 정확하고 재현성 있게 측정하는 것입니다. 이는 먼저 측정 대상 샘플에 적합한 광경로 길이를 선택함으로써 수행됩니다. 절차의 두 번째 단계는 블랭크를 측정하는 것입니다.

다음으로, DNA 또는 단백질 샘플을 측정합니다. 프로시저의 마지막 단계는 데이터를 PDF 또는 CSV 형식으로 저장하는 것입니다. 결과적으로, DNA와 단백질에 대해 재현성이 매우 높은 결과를 얻을 수 있습니다.

이 방법을 통해 정량 분석을 빠르고 정확하게 수행할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 속도가 빠르고 정밀하며 재현성이 높다는 점입니다. DNA 정량 분석 절차를 시작하려면 BIOS spec nano 분광광도계를 켭니다.

PC 데스크톱에서 BIOS spec nano 소프트웨어를 실행하십시오. simple nucleic acid D-S-D-N-A 탭을 클릭하십시오. 소프트웨어가 기기와의 통신을 설정하고 초기화 시퀀스를 실행합니다.

이를 통해 기기가 사양에 따라 작동하는지 확인할 수 있습니다. 다음으로 광경로 길이를 선택합니다. 광경로 길이 슬라이더에서 설정하십시오.

마이크로리터 부피의 샘플을 위해 세 가지 옵션을 사용할 수 있습니다. 0.2 mm 또는 0.7 mm를 사용할 수 있으며, 희석된 샘플의 경우 5 mm 광로 길이를 가진 큐벳을 사용하는 옵션이 있습니다.

본 시연에서는 2 µL 샘플을 측정하기 위해 0.7 mm를 선택합니다. 모든 계산은 선택한 광경로 길이를 기준으로 이루어집니다. 다음으로 소프트웨어에서 setup 탭을 클릭하고 auto wiping setup을 선택하십시오.

한 번 닦아낼 때마다 하나씩 선택하십시오. 시료 측정 전 또는 새로운 광경로 길이를 선택할 때마다 블랭크 측정이 필요합니다. 0.7 millimeter 광경로 길이의 경우, 페데스탈 위에 2 µL의 물 또는 버퍼를 피펫팅하십시오. 블랭크 측정을 위해 blank를 클릭하십시오.

상단 윈도우가 이동하여 시료 액적과 접촉하며 제논 플래시가 관찰됩니다. 측정이 완료되면 와이퍼가 자동으로 시료를 닦아냅니다. 이제 시료 측정 가능 상태가 됩니다.

미용해 입자가 존재할 경우 재현성 없는 데이터가 도출되므로 균질한 시료 용액을 사용하는 것이 중요합니다. 기포 유입을 방지하기 위해 시료 2 µL를 조심스럽게 흡입한 후, 피펫 팁에서 페데스탈 위로 시료를 균일하게 분주하십시오.

기기의 시작 버튼을 누릅니다. 이전과 마찬가지로 상단 윈도우가 이동하여 샘플 액적에 접촉하며, 제논 플래시가 관찰됩니다. 재현성을 확인하기 위해 동일한 샘플을 3회 반복 측정하며, 기록된 모든 데이터는 자동으로 BUD 파일로 저장됩니다. PDF 또는 CSV 파일로 저장하려면 save P-D-F-C-S-V를 클릭하십시오.

저장 탭에서 적절한 항목을 선택하여 결과를 CSV 파일로 저장할 수 있습니다. 단백질 정량은 absorbance two 80 법을 사용하여 수행할 수 있습니다. 단백질 정량을 하려면 단백질 정량 탭을 선택하십시오.

소멸 계수 epsilon 280을 알고 있다면 입력하십시오. Epsilon 280을 모르는 경우, Epsilon 280 calc를 사용하여 계산하십시오. path length 슬라이더에서 0.2 millimeters를 선택하여 3 µL 샘플을 측정하십시오. 다음으로 소프트웨어에서 setup 탭을 클릭하고 auto wiping setup을 선택하십시오. 샘플의 오염을 방지하고 정확한 측정값을 얻기 위해 2회 세척하도록 2를 선택하십시오.

피펫의 블랭크를 측정하려면 3 µL의 물 또는 완충액을 페데스탈 위에 분주한 후, 블랭크 측정 버튼을 클릭하십시오. 다음으로, 3 µL의 단백질 샘플을 페데스탈 위에 조심스럽게 분주합니다. 샘플 측정을 시작할 때 기포가 유입되지 않도록 주의하며, 소프트웨어의 시작 버튼을 클릭하거나 기기의 시작 버튼을 누르십시오.

재현성을 확인하기 위해 동일한 샘플을 세 번 반복 측정합니다. 다음은 전형적인 이중 가닥 DNA 샘플의 측정 데이터입니다. DNA 농도를 계산하는 공식은 샘플 농도 = DF × (OD 260 - OD 320) × NACF이며, 여기서 DF는 샘플 희석 배수이고 NACF는 핵산 농도 계수입니다.

핵산 농도 계수는 선택한 분석물에 따라 설정됩니다. 계산된 핵산 농도와 OD 260/280 비율이 표시됩니다. 이 표에는 DNA 정량의 재현성 테스트 결과가 포함되어 있습니다.

종합적인 데이터는 0.26%라는 낮은 상대 표준 편차에서 알 수 있듯이 결과의 재현성이 매우 높음을 보여줍니다. BSA에 대한 단백질 농도 분석의 대표적인 결과가 여기에 제시되어 있습니다. 밀리리터당 마이크로그램 단위의 단백질 농도는 Epsilon two 80 값에 근거합니다. 마지막으로, 이 표는 단백질 정량의 재현성 분석 결과를 보여줍니다.

0.51%의 상대 표준 편차는 BIOS spec nano가 DNA뿐만 아니라 단백질의 od 또한 정확하게 측정함을 나타냅니다. 숙련되면 1분 이내에 여러 개의 시료를 분석할 수 있습니다.