February 17th, 2011
의사 소통이 dsDNA와 단백질 quantitation에 대한 BioSpec - UV - VIS 나노 분광 광도계의 정확성과 재현성에 대한 데이터를 제공합니다. 자동 닦는 함수가 처리량과 더 정확한 결과를 위해 최소한의 carryover 결과를 개선하는 동안에도 초소형 볼륨 (1-2 패), 재현성이 우수합니다.
이 절차의 전반적인 목표는 마이크로 부피 분광 광도계를 사용하여 핵산 및 단백질의 농도를 정확하고 재현성 있게 측정하는 것입니다. 이는 먼저 측정할 샘플에 적합한 경로 길이를 선택하여 수행됩니다. 절차의 두 번째 단계는 블랭크를 측정하는 것입니다.
다음으로 DNA 또는 단백질 샘플을 측정합니다. 절차의 마지막 단계는 데이터를 PDF 또는 CSV 형식으로 저장하는 것입니다. 궁극적으로 DNA와 단백질에 대한 재현성이 높은 결과를 얻을 수 있습니다.
이 방법으로 빠르고 정확하게 정량화를 얻을 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 빠르고 정확하며 재현 가능하다는 것입니다. DNA 정량 분석 절차를 시작하려면 BIOS 사양 나노 분광 광도계를 켭니다.
PC 바탕 화면에서 BIOS 사양 나노 소프트웨어를 엽니다. 단순 핵산 D-S-D-N-A 탭을 클릭합니다. 소프트웨어는 기기와의 통신을 설정하고 초기화 시퀀스를 실행합니다.
이를 통해 기기가 사양에 따라 작동하는지 확인할 수 있습니다. 그런 다음 경로 길이를 선택합니다. 경로 길이 슬라이더에서.
마이크로리터 부피의 샘플에 대해 세 가지 옵션을 사용할 수 있습니다. 0.2mm 또는 0.7mm를 사용할 수 있습니다. 그리고 희석된 샘플의 경우 5mm 경로 길이 베테를 사용하는 옵션이 있습니다.
이 데모에서는 2마이크로리터 샘플을 측정하기 위해 0.7mm를 선택합니다. 모든 계산은 선택한 경로 길이를 기준으로 합니다. 다음으로 소프트웨어에서 설정 탭을 클릭하고 자동 지우기 설정을 선택합니다.
하나의 와이프에 대해 하나를 선택합니다. 시료 측정 전에 또는 새로운 경로 길이를 선택할 때마다 빈 측정이 필요합니다: 0.7mm 경로 길이 피펫의 경우 2마이크로리터의 물 또는 버퍼를 받침대에 놓습니다. 공백 측정을 위해 공백을 클릭합니다.
상단 창은 샘플 액적과 접촉하기 위해 이동하고 크세논 섬광을 관찰할 수 있습니다. 측정이 완료되면 와이퍼가 자동으로 샘플을 닦아냅니다. 이제 샘플을 측정할 수 있습니다.
용해되지 않은 미립자의 존재로 균질한 샘플 용액을 사용하는 것이 중요합니다. 샘플 입자는 재현할 수 없는 데이터를 생성합니다. 기포가 발생하지 않도록 2마이크로리터의 샘플을 조심스럽게 흡입한 다음 피펫 팁에서 받침대로 샘플을 균일하게 피펫으로 빼냅니다.
기기의 시작 버튼을 누릅니다. 이전과 마찬가지로 상단 창은 샘플 방울 및 크세논 플래시와 접촉하기 위해 이동하여 재현성을 결정하기 위해 동일한 샘플의 반복 측정을 세 번 관찰할 수 있으며, 기록된 모든 데이터는 자동으로 BUD 파일로 저장됩니다. PDF 또는 CCSV 파일로 저장하려면 P-D-F-C-S-V 저장을 클릭합니다.
결과는 저장 탭에서 적절한 선택 항목을 사용하여 CSV 파일로 저장할 수도 있습니다. 단백질 정량화는 흡광도 2 80 방법을 사용하여 수행할 수 있습니다. 단백질 정량화의 경우 단백질 정량 탭을 선택합니다.
알고 있는 경우 흡광 계수 엡실론 2 80을 입력하고, 엡실론 2 80을 알 수 없는 경우 Epsilon 2 80 calc를 사용하여 경로 길이 슬라이더에서 0.2mm를 선택하여 3마이크로리터 샘플을 측정합니다. 다음으로 소프트웨어에서 설정 탭을 클릭하고 자동 지우기 설정을 선택합니다. 두 개의 와이프에 대해 두 개를 선택하여 샘플 캐리오버를 방지하고 정확한 판독을 보장합니다.
3마이크로리터의 물 또는 받침대에 있는 버퍼를 빈 피펫으로 측정하려면 blank 측정을 위해 blank를 클릭합니다. 다음으로, 3마이크로리터의 단백질 샘플을 받침대에 조심스럽게 피펫으로 얹습니다. 샘플 측정을 시작하기 위해 기포를 도입하지 않고 소프트웨어에서 시작을 클릭하거나 기기의 시작 버튼을 누릅니다.
동일한 샘플의 측정을 세 번 반복하여 표시된 재현성을 확인합니다. 다음은 일반적인 이중 가닥 DNA 샘플에 대한 측정 데이터입니다. DNA 농도를 계산하는 데 사용되는 공식은 샘플 농도가 DF 곱하기 OD 2 60 - OD 3 20 곱하기 NACF이며, 여기서 DF는 샘플 희석 계수와 같고 NACF는 핵산 농도 계수와 같습니다.
핵산 농도 계수는 선택한 분석물에 따라 설정됩니다. 계산된 핵산 농도 및 OD 2 62 80 비율이 표시됩니다. 이 표에는 DNA 정량화를 위한 재현성 테스트 결과가 포함되어 있습니다.
이 데이터는 0.26%의 낮은 상대 표준 편차에서 알 수 있듯이 재현성이 높은 결과를 보여줍니다.BSA에 대한 단백질 농도 분석의 대표 결과가 여기에 나와 있습니다. 밀리리터당 마이크로그램 단백질 농도는 Epsilon two 80 값을 기준으로 합니다. 마지막으로, 이 표는 단백질 정량화의 재현성 분석을 보여줍니다.
0.51%의 상대 표준 편차는 BIOS 사양 나노가 DNA뿐만 아니라 단백질에 대해서도 정확하게 측정한다는 것을 나타냅니다. 마스터링하면 1분 안에 여러 샘플을 분석할 수 있습니다.
이 연구는 BioSpec-nano UV-VIS 분광광도계를 사용하여 dsDNA 및 단백질을 정량화할 때의 정확도와 재현성을 평가합니다. 이 방법은 매우 작은 시료 부피에서도 우수한 재현성을 보여주며, 최소한의 반영 현상으로 처리량을 향상시킵니다.
Accurate and reproducible quantification of nucleic acids and proteins is essential for target validation and assay development in early drug discovery. The BioSpec-nano micro-volume spectrophotometer enables high-throughput, low-sample-consumption measurements with automated sample handling, reducing variability and improving data reliability for lead identification workflows. Its rapid measurement cycle and low relative standard deviation support predictive confidence in downstream screening and translational applications.
The BioSpec-nano fits within the discovery continuum from initial target validation through assay development and into preclinical sample analysis, particularly where sample conservation and measurement reproducibility are critical.