Name: 카테고리의 감지 세균성 병원균에 대한 발광 생물리포터 파지 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-08T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 31 s
Description: 학습하세요 Yersinia pestis를 발광 리포터 파지를 이용해 신속하게 검출하는 방법을. 이 기술은 세균성 병원균 식별과 생물안전 연구에 활용됩니다.

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이 연구는 국립 보건원의 중소 기업 혁신 연구 프로그램 (NIAID, 1R43AI082698 - 01)과 식량 농업의 국립 연구소 USDA (NIFA, 2009-33610-20028)에 의해 지원되었다.

1. Y. pestis 플레이트 접종 <ol><li> 리크 Y. pestis A1122 (BeiResources # NR15) Luria - Bertani에 재고 문화 (LB) 한천 (밀러). 무균 기술을 사용하여 모든 Y.을 수행 클래스 II 타입 biosafety 캐비닛. Y. pestis의 조작에 pestis A1122은 BioSafety 수준 (BSL) 2 제외를 선택 에이전트 부담입니다. 그것은 모두 75킬로바이트 쌍은 낮은 칼슘 플라스미드 응답 (LCR) 독성 및 독성에 필요한 PGM의 로커스 부족하다. Y. 그로 28 pestis ° C 공기 배양기를 제어 정적 온도 48 H하십시오. 와이의 성장률 pestis는 H 9 1.25의 세대 시간 느립니다. </li></ol> 2. Y. pestis 액체 미디어 접종 <ol><li> 단일 Y.을 전송 멸균 금속 접종 루프를 사용하여 LB 제품 국물 2 ML을 포함하는 멸균 17 X 100mm 문화 튜브에 pestis 콜로니. 균일한 크기의는 식민지를 선택하고, 다른 식민지는 지표이며, 명확하게 접시에있는 식민지의 나머지 부분에서 분리됩니다. 소용돌이 간략 튜브 28에서 문화를 성장 ° C 떨고 인큐베이터 (225 RPM)에 약 20 H하십시오. </li></ol> 3. Y. pestis의 파생물, 기자 파지 추가하고, 발광 생물 검출 <ol><li> 밤새 Y.을 희석 pestis 문화 50 ML 팔콘 튜브에 신선한 LB의 국물 (예 : 매체의 9.5 ML로 세포 500 μL)로 1시 20분과 ° C (225 RPM) 잡고 28 성장. 0.2 600 NM (600)에서 광학 밀도 (약 5 H)에 도달할 때까지 성장합니다. 적극적으로 성장 세포는 발광 생물 응답 호스트 박테리아의 생존 및 피트니스에 상관이다 transduce로 파지의 능력부터 감지 바람직합니다. 그럼에도 불구하고, 탐지 시스템은 성장주기 7 모든 단계에서 수확 전지와 호환되도록 표시되었습니다. </li><li> 2 % N - 지구장의 솔루션을 준비하여 발광 생물 반응에 필요한 기판을 생성합니다. LB의 국물의 9.8 ML과 N - 지구장의 200 μL를 섞습니다. 5 S. 위해 적극적으로 소용돌이 프라임 2퍼센트 N - 지구장의 솔루션 2 ML과 microplate luminometer 주입기. luminometer 잘하고 다음 각 microplate에 지구장의 솔루션을 67 μL를 autoinject 즉시 10 S.에 대한 샘플을 읽을 사전 설정된 </li><li> 3 문화 튜브에 LB의 국물 1 ML aliquots 하는걸. 각각의 튜브에 기자 파지 주식 솔루션 (5 X 10 9 플라크 형성 단위의 주식 [PFU] / ML) 20 μL를 추가, 파지 및 미디어 혼자 샘플은 부정적인 제어 역할을합니다. 와이의 부재에 pestis 세포는 기자의 파지의 추가는 발광 생물 반응을 이끌어해서는 안됩니다. </li><li> Y. 1 ML aliquots 하는걸 6 문화 튜브에 pestis 문화 (단계 3.1에서). 문화 (테스트 문화)의 3 기자 파지 주식 20 μL를 추가합니다. 나머지 세 문화는 '셀 혼자'대조군 (배경 autobioluminescence)로 제공하고 있습니다. 간략 vortexing으로 문화를 믹스하고, 각 샘플에서 수확 200 μL (시간 0 읽기)과 흰색 96 - 웰 플레이트 microtiter로 분배. 28에 남아있는 문화를 품어 ° C를 (225 RPM) 잡고. </li><li> microplate의 luminometer를 사용하여 bioluminescence (상대적인 빛의 단위, RLU)에 대한 시간 0 명 샘플을 측정합니다. </li><li> 10 일 이후 각 샘플의 수확 200 μL, 20, 30, 40, 50, 그리고 60 분 후 기자 파지 추가하고, bioluminescence에 대한 샘플을 측정합니다. 경우 Y. pestis 세포가 존재, 기자의 파지는 특히 세포에 바인딩의 DNA를 삽입하고, luxAB 기자 유전자 (그림 1)을 녹음하고 번역하는 호스트에게 transcriptional과 translational 기계를 사용합니다. </li><li> 신호의 강도와 신호 응답 시간은 현재 세포의 수에 비례합니다. 셀 (10 5 -10 8 CFU / ML), 컨트롤에 비해 RLU에 상당한 증가의 높은 농도에서 20 분 이내에 분명해야합니다. 낮은 세포 농도에서, (10 2 -10 4 CFU / ML), RLU 크게 증가 40-60 분 이내에 분명해야합니다. </li><li> 또는, Y. 필요없이 탐지 과정을 진행할 수 있도록 갓 어른이 접시에서 pestis의 파생물, 식민지 직접 기자의 파지를 숨겨주 LB의 국물 200 μL와 1.5 ML eppendorf 튜브에 (vortexing으로) 혼합 수 있습니다. microtiter 접시에 잘으로 셀 / 파지 혼합 분배. 28 ° C에서 microtiter 접시를 부화하고 60 분 (단일 시점 전용) 이후 bioluminescence에 대한 샘플을 참조하십시오. </li></ol> 4. 대표 결과 : 기자 파지의 대표적인 시간 코스 실험 Y.의 검색을 중재 pestis는 그림 2에 그려져 있습니다. 1의 부정적인 컨트롤) 파지 혼자 (NO 세포), 또는 혼자서 2) 전지 (NO 파지) 60 분 병원 전반에 걸쳐 약 20 RLU의 bioluminescence의 기본 수준을 제공합니다ubation (기준 레벨 luminometer의 특정됩니다.) 대조적으로, 테스트 샘플 (기자의 파지 및 세포)에 대한 bioluminescence의 증가 파지 추가 후 15 분 분명하다. 신호 강도는 60 분 이상 꾸준히 증가한다. 연장 기간 (80 분)에 대한 Incubations는 호스트 세포의 중재 용해를 파지에 의한 피크 신호​​로부터 거부하는 신호가 발생합니다. 비슷한 결과는 37 배양 온도를 얻을 수있다 ° C에도 Y.을위한 최적 온도 pestis 성장 28 ° C 9. <img src="/files/ftp_upload/2740/2740fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 와이의 파지 - 중재 발광 생물 검출 pestis. 시간이 0, 기자의 파지와 세포가 28 ° C에서 incubated, 혼합되었고, bioluminescence가 (RLU) 시간이 지남에 모니터됨. RLU 크게 증가 (* 학생 T - 테스트, P &lt;0.05) 15 분 이내에 분명하다.

<ol><li>Darling, R. G., Catlett, C. L., Huebner, K. D., Jarrett, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Threats+in+bioterrorism.+I%3A+CDC+category+A+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg+Med+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Threats in bioterrorism. I: CDC category A agents.</a> Emerg Med Clin North Am. 20, 273-309 (2002).</li>
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</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

이 방법은 빠르게 Y.을 감지하기 위해 기자 파지의 능력을 보여줍니다 기자 파지 이후 pestis는 교양 Y까지 발광 생물 신호 응답을 transduce 수 파지 추가 후 20 분 이내에 pestis 세포. 기자 파지도 직접 Y. 검출이 가능합니다 절연 이후 재배 7 전제 조건없이 임상 매트릭스에 pestis. 일반적으로 완료 48 H를 필요로하는 표준 파지의 용해 assays에 비해, 이것은 크게 검색 시간을 감소시킵니다. 이전 연구는 야생 형 ΦA1122의 파지는 거의 모든 천연 Y.을 lyse 수있는 증명 pestis는 격리하고, Y.에 대해 &#39;구체적인&#39;입니다 pestis 6,10,11 있지만, 일부 Y. pseudotuberculosis의 변...

<table border="1"><tbody><tr><th> 시약의 이름 </th><th> 회사 </th><th> 카탈로그 번호 </th></tr><tr><td> Difco의 LB 한천, 밀러 </td><td> VWR </td><td> 90003-346 </td></tr><tr><td> Difco LB 국물, 밀러 </td><td> VWR </td><td> 90003-350 </td></tr><tr><td> 17 X 100mm 문화 튜브 </td><td> 미국 과학 </td><td> 1485-0810 </td></tr><tr><td> N - 지구장의 </td><td> 시그마 </td><td> D7384 </td></tr><tr><td> 베리타스 microplate의 luminometer </td><td> 터너 Biosystems </td><td> 9100-001 </td></tr><tr><td> Microlite microtiter 96 - 웰 플레이트 </td><td> VWR </td><td> 62402-984 </td></tr></tbody></table>

카테고리의 감지 세균성 병원균에 대한 &#39;발광 생물&#39;리포터 파지

'Bioluminescent' Reporter Phage for the Detection of Category A Bacterial Pathogens

Yersinia pestis의 및 바실러스 anthracis는 각각 1, 역병과 탄저병의 원인이되는 대리인하는 세균성 병원균 카테고리입니다. 두 질환 '의 자연 발생 지금은 비교적 드문이지만, 분류된 생물학 무기 이러한 병원균을 사용하는 테러 집단의 가능성은 현실입니다. 질병의 고유한 communicability, 신속한 임상 과정, 높은 사망률 때문에 그것은 확산이 빠르게 감지하는 것이 중요합니다. 따라서 빠른 감지 및 진단을 제공하는 방법은 공중 보건 조치 및 위기 관리의 활성화의 즉각적인 이행을 보장하기 위해 필수적입니다. 재조합 기자 파지는 Y.의 검색에 대한 신속하고 구체적인 접근 방식을 제공할 수 있습니다 pestis와 B. anthracis가. 질병 통제 예방 센터 (CDC)는 현재 이러한 세균 병원균 2-4 확인 식별에 대한 고전적인 파지의 용해 assays를 사용합니다. 이러한 assays는 자연스럽게 자신의 세균 호스트에 대한 구체적이고 lytic 아르 파지를 발생 활용합니다. 특정 파지의 존재에 재배 세균의 하룻밤 성장 후, plaques (세균 용해)의 형성은 박테리아 타겟의 긍정적인 식별을 제공합니다. 이러한 assays는 강력한 있지만, 그들은 세 가지 결점으로 고통 : 1) 그들은 실험실을 기반으로, 2) 그들이 의심되는 시료에서 세균 분리 및 배양을 필요로하고, 3) 그들은 완료하는 데 2​​4-36 H 가져가라. 이러한 문제를 해결하기 위해 재조합 "빛을 태그"기자 파지는 유전자 Y.의 게놈에 장염 harveyi luxAB의 유전자를 통합하여 설계되었습니다 pestis와 B. anthracis 특정 파지 5-8. 그 결과 luxAB 기자의 파지는 빠르게하여 특정 목표를 감지할 수 있었다 (분 이내) 및 sensitively받는 세포에 발광 생물 표현형를 부여. 중요한 것은 감지 재배받는 세포 또는 모의에 감염된 임상 표본 7 중 얻은 것입니다. 데모를 위해, 우리가 알려진 Y.의 파지 - 중재 검출하는 방법을 설명 pestis는 CDC 전염병 진단 파지 ΦA1122 6,7 (그림 1)에서 만들어진 luxAB 기자 파지를 사용하여 분리. 사소한 수정 (성장 온도와 미디어 예 변화)와 유사한 방법, B.의 검색에 사용할 수 있습니다 anthracis은 B.를 사용하여 분리 anthracis 기자의 파지의 Wβ : luxAB 8. 방법은 재배 Y까지 biolumescent 표현형의 파지 - 중재 전달을 설명합니다 이후 microplate의 luminometer를 사용하여 측정 pestis 세포. 전통적인 파지의 용해 assays를 통해이 방법의 주요 장점은 사용, 빠른 결과를, 그리고 96 - 웰 플레이트 microtiter 형식으로 동시에 여러 샘플을 테스트하는 기능의 용이성이다. <img src="/files/ftp_upload/2740/2740fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 검색 설계도. 파지를 예제와 함께 혼합되어, 파지는 세포, luxAB가 표현되며, 세포를 감염 bioluminesces. 샘플 처리가 필요하지 않습니다, 파지와 세포가 혼합되고 이후 신호를 측정.

우선 세균성 병원균의 식별을위한 간단한 방법은 유전자 조작 기자 파지를 사용하는 것입니다. 자신의 특정 호스트 수종와 관련된 이러한 기자의 파지는 빠르게 호스트 세포에 발광 생물 신호 응답을 transducing 수 있습니다. 여기에, 우리는의 검출에 대한 기자의 파지의 사용을 설명<em&gt; Yersinia pestis</em&gt;.

Yersinia pestis와 Bacillus anthracis는 각각 페스트와 탄저병의 원인균이며, Category A 세균성 병원체로 분류됩니다 1. ...

Yesinia Pestis와 Bacillus Anthrax는 각각 페스트와 탄저병의 원인균인 카테고리 A 세균성 병원체입니다. 현재 두 질병의 자연 발생은 비교적 드물지만, 테러 집단이 이러한 병원체를 생물학 무기로 사용할 가능성은 실재합니다. 이 영상에서는 yersinia pestis를 검출하고 식별하는 방법을 시연합니다.먼저, 미생물을 농업용 플레이트와 액체 배지에서 배양합니다. 다음으로, y pesti 특이적 리포터 pH를 배양액에 첨가합니다. 이 리포터 pH의 게놈에는 박테리아 루시페라아제인 luxe AB를 인코딩하는 유전자가 포함되어 있습니다.Y. pestis 세포가 존재하면, 리포터 파지가 세포에 특이적으로 결합하여 luxe AB 유전자를 포함하는 재조합 DNA를 주입하며, 숙주의 전사 및 번역 기전을 사용하여 luxe AB 리포터 유전자를 전사 및 번역합니다. 그 결과 샘플이 생물 발광 표현형을 획득한 것이 확인되며, 이는 미지의 미생물이 Y. pestis로 양성 확인되었음을 나타냅니다. 전통적인 파지 용해 분석과 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 Y. pestis를 검출하고 확인하는 데 소요되는 시간이 며칠이 아닌 몇 분으로 단축된다는 점입니다. 이 방법은 분리 배양물뿐만 아니라 복잡한 임상 또는 환경 샘플에서 직접 Y. pestis의 존재를 신속하게 식별하고 검출하는 데 도움을 줄 수 있습니다.이 기술의 시사점은 페스트 진단으로 확장될 수 있는데, 이는 해당 질병이 증상 발현 후 24시간 이내에 치료되지 않으면 대개 치명적이기 때문입니다. 따라서 긍정적인 예후를 위해서는 Yesenia pests의 신속한 식별이 필수적입니다. 거의 모든 박테리아 종에 대해 파지가 존재하므로, 이 방법론은 Y pestis와 마찬가지로 의학적, 환경적 또는 농업적으로 중요한 모든 종에 잠재적으로 적용될 수 있습니다.A 1122는 생물안전 2등급(BSafety Level 2)의 제외된 선택 약제 균주입니다. 이 균주는 병원성에 필요한 75 Kilobase Perlo 칼슘 반응 또는 LCR 병원성 플라스미드와 PGM locus가 모두 결여되어 있습니다. 이 절차는 멸균 기술을 사용하여 2등급 A형 생물안전 작업대 내에서 Y pestis A 1122의 획선 도말(streak)부터 시작하십시오.여기에 표시된 대로 LB agar에 보존 균주를 도말합니다. 플레이트를 뒤집어 28°C의 정적 온도 조절 공기 배양기에 넣고 48시간 동안 배양합니다. Y pestis의 성장 속도는 느리며, 이틀 후 세대 시간은 1.25시간입니다.멸균된 금속 접종 루프를 사용하여 y pestis 단일 콜로니를 채취합니다. 크기가 균일하고 다른 콜로니들을 대표하며, 플레이트 상의 나머지 콜로니들과 명확히 분리된 콜로니를 선택하십시오. 해당 콜로니를 2 mL의 LB 배지가 들어 있는 멸균된 17 x 100 mm 배양 튜브로 옮깁니다.튜브 캡을 닫고 짧게 볼텍싱한 후, 28 °C에서 225 RPM으로 설정된 진탕 배양기에 넣고 약 20시간 동안 배양합니다. 본 분석에서는 검출을 위해 활발하게 성장하는 세포를 사용하는 것이 바람직합니다. 파지의 형질전환 능력으로 인해, 생물 발광 반응은 숙주 박테리아의 생존력 및 적응도와 상관관계를 갖습니다.그럼에도 불구하고, 이 검출 시스템은 성장 주기의 모든 단계에서 수확한 세포와 호환되는 것으로 나타났습니다. 20시간 동안 배양한 후, 500 µL의 세포를 10 mL의 lb broth에 추가하여 Y pestis 배양액을 50 mL 원심분리관(conical tube)에서 20배로 희석합니다. 배양액을 28 °C의 진탕 배양기에 다시 넣습니다.600 nanometers에서의 광학 밀도(optical density)가 0.2에 도달할 때까지 배양액을 성장시킵니다. 생체 발광 반응 기질을 생성하는 데 약 5시간이 소요됩니다. 200 µL의 N decanal을 9.8 mL의 LB broth와 혼합하여 2%N decanal 용액을 준비합니다.5초 동안 강하게 볼텍싱합니다. 다음으로 마이크로플레이트 루미노미터(Microplate Luminometer) 주입기를 프라이밍합니다. 주입기 튜브의 한쪽 끝은 2% end decal 용액이 담긴 13 mL 튜브에 넣고, 주입기 튜브의 반대쪽 끝은 폐기물 용기에 넣습니다.장비 소프트웨어를 사용하여 기기가 decanal 용액 2 mL로 인젝터 라인을 프라이밍하도록 설정하십시오. 프로세스가 완료되면 라인이 기질로 채워지며, 인젝터의 끝단을 웰에 주입할 수 있도록 원래의 설정 위치로 되돌려 놓으십시오. 그런 다음, 루미노미터(luminometer)가 각 마이크로플레이트에 deel 용액 67 µL를 자동 주입하도록 설정하십시오.그런 다음 즉시 10초 동안 방출되는 생물 발광 수준을 측정하십시오. 다음으로, 각 샘플을 준비하기 위해 각 조건당 3개의 배양 튜브에 라벨을 부착하여 3반복으로 준비합니다. 여기서는 테스트 샘플 외에 페이즈 전용 대조군과 세포 전용 대조군을 함께 준비합니다.따라서 파지 단독 대조군 시료를 준비하기 위해 9개의 튜브가 필요하며, 3개의 배양 튜브에 1 mL씩 lb broth를 분주합니다. 각 튜브에 1 mL당 5×10⁹ plaque forming units(PFU)를 함유한 리포터 파지 스톡 용액 20 µL를 첨가합니다.Y pesti 세포가 없는 경우, 리포터 파지를 첨가해도 생물 발광 반응이 일어나지 않아야 합니다. 다음으로, 테스트 샘플을 준비하기 위해 Y pesti 배양액 1 mL씩을 3개의 배양 튜브에 분주합니다. 세 개의 배양액 각각에 리포터 파지 스톡 20 µL를 첨가합니다.볼텍싱을 통해 배양액을 짧게 혼합하여 세포 단독 시료를 준비합니다. 배경 자동 발광(auto bioluminescence)을 결정하는 데 사용되는 음성 대조군을 위해, Y pestis 배양액 1 mL 분량을 추가 배양 튜브 3개에 각각 분주합니다. 시료 준비가 완료되면, 0분 시점의 측정을 위해 각 배양액에서 200 µL를 취해 흰색 96웰 마이크로타이터 플레이트의 웰에 옮깁니다.각 배양액의 나머지를 마이크로플레이트 루미노미터를 사용하여 28 °C의 쉐이커에 넣습니다. 시간을 측정합니다. 생물 발광 또는 상대 광도(RLU)를 위해 샘플을 제로화합니다.각 배양액에서 200 µL를 수확하여 Microplate Luminometer로 20, 30, 40, 60분 후에 생물 발광 측정을 수행합니다. y pestis의 증식 과정 없이 검출 과정을 빠르게 하기 위해 리포터 파지를 첨가한 후, 신선하게 배양된 플레이트에서 콜로니를 채취하여 리포터 파지가 포함된 200 µL의 lb가 들어 있는 마이크로 원심분리 튜브로 옮깁니다. 볼텍싱으로 시료를 혼합한 다음, 세포-파지 혼합물을 마이크로타이터 플레이트의 웰에 분주합니다.마이크로타이터 플레이트를 28 °C에서 60분 동안 배양하십시오. 그 후 샘플의 생물 발광을 측정합니다. 이 비디오에서 시연된 분석법은 서론에서 설명한 바와 같이 Y pesti 세포의 존재를 검출합니다.Y. pestis가 존재할 때, 리포터 파지는 세포의 특정 수용체에 결합하여 자신의 DNA를 주입하고, 숙주의 전사 및 번역 기작을 이용하여 luxE 리포터 유전자를 전사 및 번역합니다. 신호의 강도와 신호 응답 시간은 존재하는 세포 수에 비례하며, 세포 농도가 mL당 10⁵에서 10⁸ CFU인 고농도 상태에서 나타납니다.낮은 세포 농도인 mL당 10²에서 10⁴ CFU의 경우, 대조군과 비교하여 20분 이내에 RLU의 유의미한 증가가 나타나야 합니다. RLU의 유의미한 증가는 40분에서 60분 이내에 분명하게 나타나야 합니다. 여기에는 0분 시점에서의 Y pestis에 대한 리포터-파지 매개 검출의 대표적인 시간 경과 실험이 제시되어 있습니다.리포터 파지와 세포를 혼합하여 28 °C에서 배양하였으며, 시간 경과에 따른 생물 발광 RLU를 모니터링하였습니다. 12분 이내에 RLU의 증가가 뚜렷하게 나타났으며, 이는 P 값이 P < 0.05로 유의미했습니다. 파지만 단독으로 또는 세포만 단독으로 처리한 음성 대조군에서는 60분 배양 기간 동안 약 20 RLU의 기저 생물 발광 수준이 유지되었습니다. 기저 수준은 루미노미터 기기마다 다를 수 있음에 유의하십시오.이와 대조적으로, phia 첨가 12분 후에 테스트 샘플 리포터 phant 세포의 생물 발광 증가가 뚜렷하게 나타납니다. 신호 강도는 50분 동안 꾸준히 증가해야 하며, 여기에는 표시되지 않았으나 80분 이상의 배양 시간은 파지 매개 숙주 세포 용해로 인해 정점 신호부터 감소하는 결과가 나타날 것입니다. Y pestis 성장의 최적 온도는 28 °C임에도 불구하고, 37 °C의 배양 온도에서도 유사한 결과가 얻어집니다.이 영상을 시청한 후, 여러분은 검출을 위한 재조합 리포터를 사용하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다. Yesenia Pestis 식별법을 숙달하면, S Golden Colonies를 초기 접종균으로 사용하여 30분 이내에 이 기술을 수행할 수 있습니다. 실험실에서 파지를 사용하여 이 절차를 시도할 때, 박테리아 스톡 배양액이 파지에 의해 매우 쉽게 오염될 수 있음을 기억하는 것이 중요하며, 오염 가능성을 줄이기 위한 주의가 필요합니다.일회용 플라스틱 웨어와 피펫 팁을 사용하고 장갑을 정기적으로 교체하십시오. 리포터가 Blum 반응을 유도하는 능력은 세포의 적응도와 상관관계가 있습니다. 따라서 Yesenia Pesta 확인 후, 리포터를 사용하여 분리주의 항생제 감수성을 결정할 수 있습니다.예를 들어, 항생제의 억제 농도에서 배양된 Yesenia pesta 세포는 생물 발광 신호를 생성할 수 없거나 그 능력이 심하게 제한됩니다. 반면, 항생제 내성이 있는 Yesenia pesta 세포는 항생제 존재에 의해 영향을 받지 않으며, 억제되지 않은 세포와 유사한 생물 발광 반응을 유도할 수 있습니다. 따라서 병원균의 항생제 감수성 프로파일을 신속하게 결정할 수 있습니다.설명을 돕기 위해, 감쇠된 Yesenia pesta 균주를 사용하였습니다. 본 실험에서 Yesenia pests는 세균성 병원체 범주에 해당합니다. Yesenia Pestis가 포함되어 있을 것으로 예상되는 시료로 이 기술을 수행할 때는 적절한 생물 보안 및 생물학적 위험 예방 조치를 준수해야 합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

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