Name: 옐로 피버 모스키토에서 Hemocytes를 수집 및 스테 이닝을위한 프로토콜 Aedes aegypti /em (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-16T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 33 s
Description: 학습하세요 Aedes aegypti 모기의 혈구 수집 및 염색 방법을 통해 면역 세포 유형과 분포를 정확히 분석하는 기술입니다. 이 프로토콜은 생물학 연구에 필수적인 도구를 제공합니다.

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저자는 모기가 양육을 위해 존 프라이와 벤 피터슨 감사하고 싶습니다. 우리는 또한 hemocyte micrographs와 관련하여 도움이 크리스틴 데이비스와 게리 Radice 감사드립니다. 이 연구는 리치몬드 예술 &amp; AA Qayum와 A. Telang에 교수 부여하는 과학 여름 교제 대학에 의해 투자되었다.

1. hemocyte 컬렉션 사전에 준비 <ol><li> (; 98 MM NaOH, 186 MM NaCl, 1.7 MM EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산), 41 MM 구연산 산성, pH를 4.5 항응고제) 60% 슈나이더의 중간 10 % 태아 소 혈청 (FBS) 및 30 % 구연 산염 버퍼의 구성된 hemolymph의 희석제 솔루션을 준비 11. -20 ° C.에 저장할 수 있습니다 1.0 ML aliquots 만들기 (자료 참조) 한 번만 각 나누어지는을 사용합니다. </li><li> 유리 에칭 도구를 사용하여 한쪽 끝에 1cm 직경의 원을 채점하여 유리 현미경 슬라이드 (75 X 25 X 1mm)를 준비합니다. 또는 두 사전 에칭 원을과 현미경 슬라이드 (예 : 피셔 과학 또는 EMS 소스) 구입할 수 있습니다. 모기 당 하나의 유리 슬라이드가 필요합니다. </li><li> 유리 바늘 세트를 (자료 참조) 준비는 다음과 같은 제안 설정 (셔터 인 스트 루먼트, 모델 P - 87)에 따라 가져온 : <table border="1"><tbody><tr><td> 열 램프 5 </td></tr><tr><td> 당기 : 45 </td></tr><tr><td> 벨 : 75 </td></tr><tr><td> 시간 : 175 </td></tr><tr><td> 압력 580 </td></tr></tbody></table> 이 풀러의 제안 설정을 사용하여, 우리는 약 3mm의 생크 길이와 전체 길이 50​​0mm 주위 바늘을 구축. 미리 뽑아 바늘도 (예 : Tritech 연구) 구입할 수 있습니다. </li></ol> 2. hemocyte 컬렉션 사전에 microinjector의 준비 <ol><li> 제조 업체의 지침에 따라 microinjector 니들 홀더에 뽑아 바늘을 삽입합니다. Backfill는 microinjector (자료 참조) 튜브, 주사기 및 제조 업체의 지침에 따라 광유와 유리 바늘을 뽑아. </li></ol> 3. hemocyte 컬렉션 사전에 여성 모기의 준비 <ol><li> 얼음과 접촉 수있는 작은 고체 케이지 용기에 15 성인 여성을 대기음. 깊은만큼 얼음에 모기와 함께 젖어 케이지는 케이지 모든 측면의 전체 높이 때문에 얼음과 접촉하고 있습니다. 이것은 모든 모기가 추위에 노출 될 수 있도록합니다. 약 8 분 또는 때까지 차가운 마취의 모기들은 더 이상 이동되지 않습니다. </li><li> 우울증 슬라이드에 한 모기를 놓습니다. 이 슬라이드는 주사에 대한 사이트로 될 것입니다. </li></ol> 4. Hemocyte 모음 <ol><li> 가져온 유리 바늘로 hemolymph의 희석제 12 μl를 타고 일곱 번째와 여덟째 복부 세그먼트 사이 모기에 솔루션을 주입하는 microinjector을 설정합니다. 약 3 모기가 차지하는 총 12 μl 볼륨 3-3.5 μl로 주입 수 있습니다. 주입이 수행되는 동안 모기는 부드럽게 포셉와 장소에서 개최한다. 희석액의 작은 볼륨 주입되는 미네랄 오일을 방지하기 위해있는만큼 바늘의 끝에 유지됩니다. 주사 후 복부는 "가득"또는 부풀어 보일 것입니다. </li><li> 장소는 5 분 복구 얼음에 별도의 깨끗한 용기에 모기를 주입했다. 모기 내부 항응고제 희석제 솔루션의 부화는 내부 조직을 준수 hemocytes을 이동시키다 도움이 될 것입니다. 평균 3-5 신선한 모기는 각 5 분 복구 기간 동안 주입 수 있습니다. </li><li> 복구, 다리에서, 싹둑, 날개, 그리고 마이크로 가위를 사용하여 한 번에 하나씩 각 모기 하나의 복부 (여덟째 세그먼트에서)의 팁 5 분 후에. 이것은 얼음에 게재 복구 컵에서 수행되어야합니다. 다리와 날개를 잘랐다 수집 슬라이드로 전송되는 저울의 가능성을 줄여줍니다. 참고 : 다리를 자르고 날개도 흉부 첨부 파일 사이트에 가까이 또는 hemolymph 탈출하기 위해 다른 구멍을 만드는 위험하지 않습니다. Hemolymph은 복부의 끝에 만들어진 구멍을 통해 수집해야합니다. </li><li> 70 % 에탄올 한 유리 에칭 현미경 슬라이드를 세척하고 kimwipe로 건조. 위치 하나는 에칭 원의 바깥쪽 가장자리에 슬라이드에 모기를 주입하고 복구. 신선한 hemolymph의 희석제 12 μl를 데리러와 mesothorax의 측면 측면에서 모기에이 볼륨을 삽입하는 microinjector을 설정합니다. 주입되는 미네랄 오일을 방지하기 위해만큼 - 희석제의가 아닌 전체 볼륨 (10 μl 약 8) 가장 전달하지만. 희석액의 작은 볼륨 바늘의 끝에 유지됩니다. </li><li> 절단 복부 자리가 1cm의 원형의 가장자리에 있습니다 있도록 모기를 놓습니다. 주사 후 희석 hemolymph가 표시된 지역 수집해야합니다. 바늘이 mesothoracic 주사 사이트에서 제거되면, 포셉의 두 팔 사이에 모기를 들고 다시 부드럽게 에칭 서클 지역에 hemolymph 직접 이러한 포셉와 복부를 당겨요. </li><li> 희석 hemolymph은 10 분 정도하거나 가시 건조까지 슬라이드에 건조하도록 허용합니다. </li></ol> 5. Hemocyte 고정 및 염색법 <ol><li> 딥 S : HEMA3 7 (자료 참조)와 별도로 각 슬라이드를 얼룩때마다 일초에 대한 정착액 5 회에 라이드, 각 일초과, 마지막으로, 솔루션 II에서 수영을 슬라이드 3 번, 나는 각각의 일초 3 시간이 솔루션 Dipslide. DI 워터 슬라이드의 뒷면을 씻어. 슬라이드의 앞에는 씻어서해서는 안됩니다. 스테인드 조직을 포함하는 에칭 동그라미 밖 슬라이드의 전면을 가릴 건조. </li><li> 에칭 중심 주위를 장착 매체 (예 : Shur / 마운트 또는 Polymount)를 적용하고 그 위에 덮개 용지를 넣으십시오. 그래서 커버 슬립 (25 X 25mm)로 가볍게 눌러되는 커버 슬립 (스테인드 조직을 포함하는 에칭 동그라미 포함)이 적용되는 전체 영역에 장착 매체 확산. 슬라이드 3 시간 또는 밤새 최소 건조하실 수 있습니다. Hemocytes는 최적의 시각화 및 이미징에 대한 수집 다음과 같은 이주 내에 볼 수 있습니다. </li></ol> 6. 대표 결과 Aedes aegypti 성인 여성에서 수집한 고정 및 HEMA3 스테인드 hemocytes의 예 그림 1A - C에 표시됩니다. 그림 1A 우리가 세포질 비율 (550x 배율) 11 핵 작은 크기, 구형 - 회전 타원체의 형태와 높이에 따라 prohemocyte로 식별되는 hemocyte를 보여줍니다. 그림 1B는 핵 비율 (550x 배율)하​​기 위해 회전 타원체의 형상과 높은 세포질에 따라 oenocytoid로 분류 hemocyte를 보여줍니다. 마지막으로, 그림 1C는 과립 타입 hemocyte (550x 배율)를 보여줍니다. Granulocytes 자연에 더 세분화하고 그들이 유리 표면을 준수 같은 모양과 행동에 더 amoeboid 경향이 있습니다. hemocyte 입력 및 복구 11 이전에 게시된 기준을 사용하여, 우리의 수집 방법은 총 hemocytes의 비슷한 번호를 굴복 우리는 마찬가지로 granulocytes 총 hemocytes의 가장 큰 비율 11 (그림 2) 메이크업 것으로 나타났습니다. <img src="/files/ftp_upload/2772/2772fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 대표 HEMA3 고정, 스테인드 prohemocyte의 빛 현미경 이미지 (A), oenocytoid (B), 그리고 애의 과립 (C). aegypti 성인 여성. C = 세포질, 핵 N = G = 과립. <img src="/files/ftp_upload/2772/2772fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 총 카운트 ± 저희 hemolymph 희석 및 수집 방법으로 여성 모기 당 얻은 모든 hemocytes와 granulocytes의 SE.

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</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

hemocyte 수집 방법은 이전에 게시 방법에서 수정 한 적은 수의 단계를 Aedes 모기에서 hemocytes의 깨끗한 준비를 분리 수있다 여기에서 설명한. 우리의 특별한 관심 Aedes 모기에 hemocyte 인구 특성화에 자리잡고 있지만, 우리는 초기 실험이 적절한 사출 볼륨을 결정하기 위해 실시 후이 기법은 다른 모기 그룹에 적용할 수 믿습니다. 우리 프로토콜은 생리 식염수 대신 항응고제 버퍼를 사용하여 정확하게 생체내의 숫자를 반영 hemocytes 인구를 산출. 그러나, 우리는 아직 문화의 고립 hemocytes를 유지하기위한 프로토콜의 적합성을 결정하지 않았습니다. 컷 코를 통해 hemolymph의 수집은 순환 hemocytes의 적은 숫자를 항복을 보여줘왔다 나아가 여기에 논의되지 않습니다. 행동하기 쉬운 반면 재관류 기반 방법, 내부 조직 및 스케일 11 오염의 큰 수준을 놔둔 것에 대한 비...

<table border="1"><tbody><tr><th> 시약의 이름 </th><th> 회사 </th><th> 카탈로그 번호 </th><th> 댓글 (옵션) </th></tr><tr><td> 슈나이더의 중간 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> S0146 </td><td></td></tr><tr><td> 태아 소 혈청 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> F0643 </td><td></td></tr><tr><td> Hema3 얼룩 키트 </td><td> 어부 </td><td> 123-869 </td><td></td></tr><tr><td> 유리 바늘 (필라멘트와 borosilicate) </td><td> 서터 악기 </td><td> BF100 - 78-10 </td><td> 1.0mm OD 및 0.78mm ID </td></tr><tr><td> 니들 풀러 </td><td> 서터 인 스트 루먼트 </td><td> 모델 P - 87 </td><td></td></tr><tr><td> MicroInjector </td><td> Tritech 연구 </td><td> MINJ - PD </td><td></td></tr><tr><td> 니들 홀더 </td><td> Tritech 연구 </td><td> MINJ - 4 </td><td></td></tr></tbody></table>

옐로 피버 모스키토에서 hemocytes를 수집 및 스테 이닝을위한 프로토콜 aedes aegypti</em

A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

모기는 황열병 바이러스, 말라리아 기생충 및 filarial 웜과 같은 질병을 유발 병원균의 번호를 벡터입니다. 실험실은 병원균 1, 2 내화물 아르 유전자 변형 모기를 생성하는 희망에서 질병 벡터 수종에 본래 면역 시스템의 백신 병원체 구성 요소를 조사하고 있습니다. 모기의 타고난 면역 시스템은 방어 3 몇 가지 라인으로 구성되어 있습니다. 상피 - 줄지어 모기 midgut 사에 의해 부과된 장벽을 탈출하기 위해 관리 병원균은 hemolymph를 입력 순환 hemocytes, 캡슐 중요한 세포 구성 요소와 삼켜의 병원균 5, 6을 발생합니다. 연구팀은 모기의 조혈 조직에 대한 증거를 발견하지 않은 현재의 증거는 hemocytes의 숫자가 성인 출현에 고정하고 숫자가 실제로 모기 세 7로 거부할 수있는 제안합니다. 제대로 수집하고 의료 중요한 곤충의 hemocytes를 식별하는 능력은 세포 면역의 연구에 필수적인 단계입니다. 그러나, 모기의 작은 크기와 hemolymph의 제한된 볼륨 면역 세포를 수집하는 도전을 제기. 모기 hemocytes를 수집하기 위해 두 설립 방법은 상처 코 8 hemolymph의 추방, 그리고 호수가 머리와 흉부 (즉, 자궁 경부)와 perfused hemolymph가 수집되는 사이 막의 necklike 영역으로 주입되는 볼륨 변위 (재관류)를 포함 복부 9, 10의 말초 지역의 찢어진 오프닝에서. 이러한 기술은, 그러나, hemocytes의 낮은 복구 및 각각 11 지방 신체 세포에 의해 오염 가능성에 의해 제한됩니다. 오염 저울 및 내부 조직 11 레벨을 감소하면서 최근에는 방법이 항응고제 버퍼의 사용에 의해 immunocytes 높은 주입 / 복구 개선 복구이라고도합니다. 그 방법이 기본 문화 hemocytes를 수집 및 유지 관리의 개선 방법에 대한 수 있지만, 그것은 주사와 하류 목표가 진단에 대한 hemocytes를 수집, 수정하고 얼룩이있다면 필요하지 않습니다 수집 단계의 숫자를 알아볼 수 있습니다. 여기, 우리는 Aedes 모기에 hemocytes의 깨끗한 준비를 분리 높은 사출 기술의 정확성과 생리 식염수 대신에 항응고제 버퍼를 사용하여 재관류의 단순 결합 모기 hemolymph를 수집하는 우리의 방법을 보여줍니다.

A는 설명 모기 hemocytes를 수집하고 얼룩 아직 정확한 방법을 단순화. 우리의 방법은 Aedes 모기에 hemocytes의 깨끗한 준비를 분리 높은 사출 기술의 정확성과 재관류의 단순 결합. 이 방법은 연구가 필요한 hemocytes의 유형에 대한 지식과 풍부한을 용이하게합니다.

옐로 피버 모스키토에서 Hemocytes를 수집 및 스테 이닝을위한 프로토콜 Aedes aegypti</em

모기는 황열 바이러스, 말라리아 기생충, 사상충과 같은 여러 질병 유발 병원체의 매개체입니다. 연구실에서는...

이 절차의 전반적인 목표는 모기에서 혈구(hemocytes)를 수집하고 염색하는 것입니다. 이는 먼저 냉각된 모기에 소량의 항응고 희석액을 주입함으로써 수행됩니다. 이는 혈구의 결합을 느슨하게 하여 모든 혈구가 용액 속으로 나오게 하기 위함입니다.절차의 두 번째 단계는 모기의 다리, 날개, 그리고 복부 끝부분을 제거하는 것입니다. 셋째로, 관류 과정을 시작하기 위해 모기의 다른 부위에 신선한 희석액을 주입합니다. 마지막 단계는 희석된 혈림프를 준비된 슬라이드 위에 떨어뜨려 수집된 혈구 세포를 고정하고 염색하는 것입니다.최종적으로, 기본적인 글라이드 현미경 검사를 통해 관심 있는 모기 종에서 발견되는 혈구 세포의 주요 유형과 수를 확인할 수 있는 결과를 얻을 수 있습니다. 이 기술이 프로퓨전(profusion)과 같은 기존 방법보다 갖는 주요 장점은 프로퓨전의 간편함과 고압 주입법의 정확성을 결합하면서도, 최종 목표까지 도달하는 단계가 더 적다는 점입니다. 본 연구의 목적은 면역 자극에 반응하는 혈구 세포의 유형과 그 풍부도를 식별하는 것입니다.이 기술을 시연할 사람은 제 연구실의 학부생인 Amina Abdul Kum입니다. 프로토콜을 시작하기 전에, 혈림프 희석액을 1 mL씩 분주하여 준비하십시오. 이를 -20 °C에서 보관하고, 분주된 용액 중 사용하지 않은 부분을 다시 냉동하지 마십시오.이제 1 mm 두께의 현미경 슬라이드 위에 1 cm 크기의 원을 그립니다. 모기 한 마리당 슬라이드 한 장이 필요합니다. 풀드 니들(pulled needles)을 준비합니다.각 인발 바늘의 끝을 부러뜨려 바늘 입구를 만듭니다. 튜브 및 주사기 구성 요소가 연결된 마이크로 인젝터 홀더에 바늘 하나를 조립합니다. 다음으로, 미네랄 오일을 사용하여 튜브와 바늘 홀더 조립체에서 기포를 제거합니다.이 핸드헬드 주사기에 미네랄 오일을 채우고 기포가 생기지 않았는지 확인합니다. 떨어지는 오일을 받칠 수 있도록 바늘 아래에 받침대를 놓습니다. 마이크로 인젝터의 이 부분을 열고 오일을 채워 기포를 모두 제거합니다.그리고 이것을 다른 팁에 연결했던 것과 동일하게 핸드헬드 시린지에 클립으로 고정합니다. 미네랄 오일을 천천히 주입하여 플라스틱 튜브를 통과하게 함으로써 내부에 남아있는 기포를 모두 제거합니다. 그 다음, 다시 한번 팁 윗부분에 미네랄 오일을 방울져 떨어질 때까지 충분히 채웁니다.그 다음, 기포가 생기지 않도록 이를 유리 주사기에 다시 연결합니다. 그런 다음 조립된 구성 요소에 미네랄 오일을 역충전하여 바늘 튜브와 주사기가 모두 채워질 때까지 반복합니다. 이제 마이크로 인젝터를 희석액 전달에 사용할 준비가 되었습니다.다음으로, 15마리의 성체 암컷을 얼음에 완전히 잠길 작은 고체 케이지 용기에 흡입하여 동물을 준비합니다. 모기들은 추위에 의해 움직임이 제한될 때 마취되며, 이는 보통 8분 이내에 이루어집니다. 마취된 모기 한 마리를 미세주입이 수행될 함몰 슬라이드 위에 올립니다.현미경 하에서, 마이크로 인젝터로 혈림프 희석액 12 µL를 흡입합니다. 핀셋을 사용하여 현미경 아래의 모기를 부드럽게 고정한 후, 희석액 3~3.5 µL를 주입합니다. 그러면 복부의 7번째와 8번째 마디 사이가 팽창하게 됩니다.희석액을 주입하면서 모기 3마리에 주입할 수 있습니다. 마이크로 인젝터를 다시 충전하기 전에, 주입이 완료된 모든 모기를 얼음 위에 놓인 깨끗한 플라스틱 컵에 옮겨 약 5분 동안 회복시킵니다. 배양 과정 동안 항응고제 희석액이 내부 조직에 부착된 혈구들을 제거합니다.첫 번째 동물 그룹이 배양 기간 동안 회복하는 동안, 일반적으로 3~5마리의 모기를 추가로 주입할 수 있습니다. 컵 안에서 5분이 지난 후, 마이크로 가위를 사용하여 주입된 모기의 다리, 날개, 그리고 복부의 8번째 마디 끝부분을 잘라내어 준비합니다. 이때 다리와 날개를 흉부나 혈강에 너무 가깝게 자르지 않도록 주의하십시오.림프가 유출될 수 있습니다. 이제 식각 슬라이드를 70% ethanol로 세척하고 킴와이프로 건조하십시오. 현미경 하에서 해부된 모기 한 마리를 식각된 원의 바깥쪽 가장자리에 배치하십시오.마이크로 인젝터에 12 µL의 신선한 희석액을 채웁니다. 핀셋으로 모기를 잡고 중흉부의 측면에 8~10 µL를 주입합니다. 이 주입 단계 이후에 미네랄 오일이 주입되지 않도록 주의하십시오.혈림프가 복부에서 식각 원(etch circle) 내부로 수집될 것입니다. 핀셋으로 복부를 부드럽게 눌러 혈림프의 흐름을 유도하고 촉진하십시오. 이제 슬라이드 위에 수집된 혈림프를 건조시킵니다. 이 과정은 약 10분 정도 소요됩니다.이제 염색 준비가 완료되었습니다. 각 슬라이드를 Hema three로 개별적으로 염색하십시오. 각 슬라이드를 고정액에 5회 담그되, 한 번 담글 때마다 1초 동안만 유지하십시오.이어서 용액 1에 1초씩 세 번 담근 후, 용액 2에 동일하게 반복합니다. 이제 슬라이드의 뒷면만 탈이온수로 헹구고, 앞면은 헹구지 마십시오. 앞면을 건조시킨 후 마운팅 용액을 사용하여 커버슬립을 덮습니다. 커버슬립을 부드럽게 눌러 마운팅 용액이 염색된 조직 전체에 완전히 채워지도록 합니다.최적의 결과를 위해 슬라이드를 최소 3시간 동안 건조하십시오. 염색된 적혈구는 준비 후 2주 이내에 관찰 및 이미징해야 합니다. 성체 암컷에서 얻은 이 세포들은 본 프로토콜을 사용하여 식별되었습니다.첫 번째 이미지는 fal 형태와 높은 핵-세포질 비율을 바탕으로 한 전구 조혈 세포 부위를 보여줍니다. 이 이미지는 fal 형태와 세포질-핵 비율을 바탕으로 한 ENO 세포입니다. 마지막으로, 이는 과립구 유형의 조혈 세포 부위입니다.이전의 고압 주입법과 비교하여 질감이 더 입자형이며 모양이 더 OID에 가깝습니다. 본 프로토콜을 통해 유사한 총 수의 he cytes를 얻었으며, 숙련된 후에는 입자형 부위가 가장 흔한 세포 유형임을 동일하게 확인하였습니다. 적절하게 수행될 경우, 이 기술을 통해 약 15~20마리의 모기를 1시간 이내에 처리할 수 있습니다.이 영상을 시청한 후, 모기에게 dent를 적절하게 주입하는 방법, 헤모림프를 수집하는 방법, 그리고 시각화 및 이미징을 위해 헤모림프를 준비하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

유전자가 뎅그열 바이러스에 대한 잠재적 내화물로 식별되면, 그것은 모기 내에서 바이러스 감염을 방지에의 역할에 대해 평가해야합니다. 이 프로토콜은 모기의 뎅그열 감염의 범위가 assayed 수있는 방법을 보여줍니다. 문화, 멤브레인 수유 모기 인간의 혈액에있는 바이러스를 성장하고, 모기 midgut에서 바이러스 titers을 시금에 대한 기술은 증명됩니다.

모기 (A. aegypti)와 감염 표현형 결정에 뎅그열 감염 프로토콜

유전자가 말라리아에 대한 잠재적 내화물로 식별되면, 그것은 모기 이내 Plasmodium 감염을 예방의 역할에 대해 평가해야합니다. 이 프로토콜은 모기의 plasmodium 감염의 범위가 assayed 수있는 방법을 보여줍니다. gametocyte 문화, 멤브레인 수유 모기 인간의 혈액을 준비하고 모기 midgut에서 바이러스 titers을 시금에 대한 기술은 증명됩니다.

모기와 감염 표현형 결정에서 Plasmodium falciparum 감염에 대한 프로토콜

시간적 및 공간적 유전자 발현 분석은 기능 유전체학에 중요한 역할을합니다. 전체 마운트...

이종 교잡<em&gt; 현장에서</em&gt; 침샘, 난소, 그리고 벡터 모기의 태아의

곤충 hemocytes는 곤충 개발의 모든 단계에 걸쳐 면역 및 비 면역 모두 여러 중요한 기능을, 실시합니다. hemocyte 유형 및 기능의 현재 우리의 지식은 곤충 유전자 모델에 대한 연구에서 비롯됩니다. 여기, 우리는 추출 정량화과 야생 유충에서 hemocytes을 시각화하는 방법을 제시한다.

야생 유충에서 Hemocytes을 추출하기위한 간단한 프로토콜

형광성의<em&gt; 현장에서</em모기의 Mitotic의 염색체에&gt; 하이브리드

전기 생리 학적 시험에 의해 측정 Aedes aegypti의 주요 부속 미각 유전자 발현을 추정하기 위해 두 가지 방법을 사용하여, 우리는, 추정되는 쓴맛 반발 화합물 신경 반응을 기본 유전자 세트를 확인했다.

생리 녹음 및 황열병 모기의 미각 부속 기관의 RNA 시퀀싱 Aedes aegypti

제시된 프로토콜은 봉쇄 환경에서 Zika와 같은 주어진 바이러스에 대한 Aedes aegypti 모기 집단의 벡터 역량을 결정할 수 있다.

지카 바이러스를 사용하여 Aedes aegypti 모기에 벡터 역량 분석

설명된 것은 계란을 계산하고 24개의 잘 조직 배양 판을 사용하여 개별 모기의 해치 비율을 결정하는 시간과 공간 절약 방법이며, 이는 실질적으로 fecundity 및 불임 검사의 규모와 속도를 증가시킬 수 있습니다.

24 잘 조직 배양 플레이트를 사용하여 Aedes aegypti에 대한 개선 된 Fecundity 및 불임 분석 (EAgaL 플레이트)

이 프로토콜의 목표는 인공 막 피더를 통해 Aedes aegypti 모기에 동물 유래 및 인공 혈액 식사를 제공하고 섭취한 식사의 양을 정확하게 정량화하는 것입니다.

Aedes aegypti 모기에서 동물 유래 혈액 및 인공 식사 먹이주기 및 정량화

여기서는 형광염을 마커로 사용하여 남성 Aedes aegypti의 짝짓기 경쟁력을 연구하기 위한 프로토콜을 제시합니다. 여성 모기는 교화를 위해 표시되고 표시되지 않은 수컷 모두에 노출됩니다. 후 짝짓기, 그들의 정자는 그들의 짝짓기 파트너를 결정하기 위하여 형광 현미경의 밑에 검토됩니다.

형광염염을 사용하여 로다민 B, 남성 Aedes aegypti 모기에서 짝짓기 경쟁력을 연구하기 위해

여기에서는 CRISPR-Cas9 기술을 사용하여 모기 A. aegypti 에서 배아 미세주입을 통한 게놈 편집을 위한 자세한 프로토콜에 대해 설명합니다.

CRISPR-Cas9을 이용한 황열병 모기 이집트숲모기(Mosquito Aedes aegypti )의 게놈 편집

학습하세요 Aedes aegypti 모기의 혈구 수집 및 염색 방법을 통해 면역 세포 유형과 분포를 정확히 분석하는 기술입니다. 이 프로토콜은 생물학 연구에 필수적인 도구를 제공합니다.

옐로 피버 모스키토에서 Hemocytes를 수집 및 스테 이닝을위한 프로토콜 Aedes aegypti

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