Name: 암 세포에 의해 내피 세포 단층의 침략을 측정하는 실시간 전기 임피던스 기반 기술 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 51 s
Description: 학습하세요 실시간 전기 임피던스 기술을 이용하여 암 세포의 내피 세포 단층 침략을 정량적으로 측정하는 방법을. HUVEC 단층 형성 후 암 세포를 첨가하여 임피던스 변화로 침윤 정도를 실시간 모니터링할 수 있습니다.

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이 작품은 넉넉한 어린이 암 재단 (볼티모어, MD), 브랜든 리 캐링턴 재단 (실버 스프링, MD), DOD (W81XWH-10-1-0137)와 NIH (R01CA108641)에서 기금에 의해 지원되었다. 우리는 박사 안톤 Wellstein과 경험을 공유하고 제시된 방법을 최적화하기 위해 우리를 돕는 그의 실험실의 구성원을 감사드립니다.

1. 준비하기 <ol><li> 모든 단계는 조직 문화 후드에서 무균 조건 하에서 수행되어야한다. </li><li> xCELLigence 역은 5 % CO 2의 존재에 37 ° C 배양기에 배치됩니다. </li><li> 통로 6보다 바람직하게 낮은 통로 HUVEC 세포를 사용합니다. 또한, 세포가 더 이상 수확의 시간에 합류 % 75 이상 없는지 확인합니다. </li><li> HUVEC 세포는 성장 인자, 보충 교재 및 5 % 태아 소 혈청을 포함하는 EGM-2 총알 키트 (Lonza의 생물 과학)를 재구성 EGM - 2 미디어에서 재배된다. </li><li> 트립신의 모든 흔적은 200xg에서 세포를 회전 PBS로 한번 세척 및 표시 셀 밀도에게 현탁하여 세포 현탁액에서 제거해야합니다. </li><li> 37에서 1 시간 동안 젤라틴 0.1 %로 코트 xCELLigence E-플레이트 16 ° C 또는 하룻​​밤에 ° C. PBS로 접시를 씻고 100μL 재구성 EGM - 2 미디어를 추가 할 수 있습니다. 배경을 측정하는 xCELLigence 시스템에 빈 읽기를 수행세포의 부재 임피던스. </li></ol> 2. HUVEC 단층 생성 <ol><li> 트립신에 의한 HUVEC 세포의 하위 합류 플라스크를 수확. 2.5 X 10 5 세포 / ML의 최종 농도로 재구성 EGM - 2 미디어 세포를 resuspend. </li><li> 100μL EGM-2 미디어를 포함하는 E-플레이트 교정 배경의 각 웰에, HUVEC 세포 현탁액 (2.5 × 10 4 HUVEC 세포)의 100μL 추가 할 수 있습니다. </li><li> 즉시 xCELLigence 악기의 E-플레이트를 설치합니다. </li><li> 프로그램 xCELLigence 소프트웨어가 10 분 간격으로 임피던스 판독을 수행합니다. </li><li> 그들은 단일 층을 형성 때까지 내피 세포로 (그림 2) 셀 인덱스의 병합에 의해 입증 18-21 시간 동안 성장하자. </li></ol> 3. 셀 및 데이터 정규화를 침입의 추가. <ol><li> 일단 안정 HUVEC 단층은 최종 굴을 트립신과를 Resuspend으로 수확 종양 세포가 형성1 X 10 5 세포 / 종양 세포 (예 : RPMI 또는 DMEM 매체 10 % FBS를 포함)을 성장하는 데 사용 미디어 ML의 ITY </li><li> 일시 정지 임피던스 xCELLigence 소프트웨어를 판독하고 역에서 E-플레이트를 제거합니다. </li><li> 흡인에 의해 EGM-2 용지를 제거합니다. 1 × 10 4 세포를 포함하는 종양 세포 현탁액의 100μL를 추가합니다. 일반적으로, 종양 세포의 1:2.5 비율 : 내피 세포 시드, 분석에 가장 적합합니다. 그러나 비율은 각각의 세포주 최적화 할 수 있습니다. </li><li> 인큐베이터에있는 xCELLigence 시스템에 E-플레이트를 놓고 10 분 간격으로 임피던스 수치를 계속합니다. </li><li> 침공은 종양 세포에 침입하여 내피 세포 접합 및 침투의 수축에 의한 세포 지수의 하락으로 다음 6-12 시간 동안 실시간으로 모니터링 할 수 있습니다. </li><li> 종양 세포를 침입의 추가 시점에 결과를 정상화. xCELLigence 소프트웨어는 시점과 결과를 정상화 허용직접 소프트웨어 창에서 볼 수 있습니다. </li></ol> 4. 대표 결과 : 전이성 및 비 전이성 세포에 의해 HUVEC 단층 침공의 예는 그림 3에 나와 있습니다. K7M2는 전이성 골육종 세포주이다. 이러한 세포는이 세포주 13,14의 침략적 속성을 차지하고있는 골격 링커 단백질 ezrin의 높은 수준을 표현한다. HUVEC 세포가 K7M2 세포와 도전하면 6 시간 이내에 전기 저항의 저하가있다. 전기 저항이 드롭 침입 종양 세포에 의해 HUVEC 단층의 침공을 나타냅니다. K12 셀 라인은, 다른 한편으로는, ezrin 훨씬 낮은 수준을 표현 13 결과적으로 덜 전이성이다. 세포가 준수 또는 HUVEC 단층 (그림 3)를 통해 침입 할 수없는만큼 저항을 덜 가파른 드롭 K12 세포 결과 HUVEC 단층 도전. <imgsrc files></imgsrc> 그림 1. 종양 세포에 의해 내피 세포의 침윤을위한 워크 플로우 프로세스의 개략도. HUVEC 세포는 젤라틴 코팅 E-접시에 도금과 합류 단층을 형성 할 수 있습니다. 단일 층을 형성하고 세포 지수는 내피 세포 단일 층의 침략으로 인해 변경으로 침공이 실시간으로 모니터링되면 악성 세포가 추가됩니다. <img src="/files/ftp_upload/2792/2792fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. HUVEC 단층 형성. HUVEC 세포에 부착 젤라틴 코팅 금 전극에 확산으로 세포 지수의 변화. 합류 단층의 형성 18 개의 시간 후에 세포 색인의 안정화로 표시됩니다. <img src="/files/ftp_upload/2792/2792fig3.jpg" alt="그림 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 3"> 그림 3. K7M2 및 K12 골육종 세포에 의해 HUVEC 세포의 침공. CEL의 가파른 감소L-지수는 높은 전이성 K7M2 세포의 도입 몇 시간 내에 발생합니다. K12 세포는 반면에, 덜 전이성하고 효율적으로 K7M2 세포와 같은 내피 세포 단일 층을 통과 할 수 없습니다. 이 HUVEC 단층은 K12 세포와 도전 셀 인덱스에서 덜 가파른 감소에 의해 표시됩니다. 컨트롤 암 세포의 부재에서 HUVEC 단층의 임피던스를 나타냅니다. 실험 세중의에서 수행 하였다.

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</ol>

이 논문의 출판 비용은 친절 로슈 응용 과학에 의해 제공되었다.

실시간 HUVEC의 침공 분석은 모니터링 침략을위한 간단하면서도 강력한 방법입니다. 그것은 엔드 포인트 분석에 의존하는 기존의 다른 기술에 비해 상당한 장점입니다 실시간으로 결과를 제공합니다. 분석은 시험 약물, 항체, 리간드와 전이 억제제 또는 촉진제로 단백질을 수정할 수 있습니다. 암 / 내피 세포 간 이야기에 다른 에이전트의 효과뿐만 아니라 평가 될 수있다. 이러한 문화 미디어의 성장 요인과 약물 등 외인성 에이전트를 도입 할 때, 그것은 그들이 HUVEC 단층의 무결성에 영향을주지 않도록하는 것이 중요합니다. HUVEC 단층의 파괴는 세포를 침입의 부재에서 외생 에이전트를 소개하고, 세포 지수의 변화가없는 것을 확인하여 테스트 할 수 있습니다. 따라서, 적절한 제어는 실험 설계의 일부로 포함되어야한다. 그들은 conf의 형태로 다른 세포 라인에서 여러 가지 셀 인덱스 곡선을 보여luent 단층. 곡선뿐만 아니라, 최대 셀 인덱스 달성의 형태는 셀 타입 별입니다. HUVEC 세포의 16-18 시간 후 이상 세포의 인덱스에 다른 안정화 한 다음, 4-6시간 파종 한 후 세포 색인의 평 평화 특성 과도을 보여줍니다. 따라서, 세포가 종양 세포의 추가 전에 적어도 18 시간 동안 합류 단층을 형성하게하는 것이 중요합니다. 세포 지수는 전극 / 세포 계면에서 이온 환경에 의존하기 때문에, 이러한 세포 형태와 세포 간 유착의 품질 등 다양한 요소가 적용 잘 하단의 영역뿐만 아니라, 세포 인덱스에 영향을 미친다. 따라서, 종양 세포의 침략에 발생하는 셀 인덱스의 감소, 내피 세포 접합 및 후속 종양 세포 침공의 철회를 포함 여러 가지 요인의 함수이다. xCELLigence 악기는 세 가지 다른 구성으로 제작되어 실시간으로 세포 분석기(RTCA) SP, RTCA MP 및 RTCA DP. RTCA MP 악기는 96 - 웰 E-플레이트를 동시에 여섯까지 저장할 수있는 반면 RTCA SP 악기 하나 96 - 웰 E-플레이트를 보유하고 있습니다. 이 마약과 화합물의 높은 처리량 검사 할 수 있습니다. 이 문서에 나와있는 실험은 3 개의 16도 E-접시를 보유 할 수 있습니다 RTCA DP 악기를 사용하여 수행됩니다. 각 E-플레이트 보유 스테이션은 독립적으로 여러 사용자가 동시에 실험을 실행할 수있는 운영 할 수있다. RTCA DP 악기는 또한 CIM 플레이트를 사용하여 마이그레이션을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 이들은 8um의 평균 기공 크기와 폴리에틸렌 테레 프탈레이트 (PET) 막으로 구분 상단 및 하단 챔버 16 - 웰 플레이트입니다. 전자 센서는 상부 챔버의 다공성 멤브레인의 아래쪽에 있습니다. 하부 챔버의 상부 챔버의 세포에 대한 화학 주성을위한 저수지 역할을합니다. 그러나 CIM 플레이트에 HUVEC 침공 분석의 주요 장점은 이전에 종양 세포 침공 전내피 세포의 침공은 종양과 내피 세포 사이의 크로스 토크에 달려들, 기공 크기에 의해 제한되지 않습니다. HUVEC 침공 분석도 응용 생물 물리학 (트로이, NY)에 의해 제조 ECIS Z 기기에서 수행 할 수 있습니다. ECIS Z 악기 배열 전극 구성의 차이, xCELLigence 악기와 유사한 기술을 사용합니다. 우리는 성공적으로 8 잘 ECIS 배열을 사용하여 HUVEC 침공 분석을 수행했습니다. 2.5 × 10 5 1 X 10 5 세포를 각각 : 그것은 잘 바닥 면적 도금으로 내피와 종양 세포의 큰 숫자를 요구하는 ECIS 배열에있는 큰 점에 유의하는 것이 중요합니다.

<table><tbody><tr><td>xCELLigence RTCA DP 스테이션</td><td><a href="http://www.aceabio.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> 로슈 그룹(Roche Group)</a></td><td>05469759001</td><td></td></tr><tr><td>RTCA 제어 장치</td><td><a href="http://www.aceabio.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> 로슈 그룹</a></td><td>05454417001</td><td>RTCA 소프트웨어가 사전 설치된 노트북</td></tr><tr><td>E-Plate 16</td><td><a href="http://www.aceabio.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> 로슈 그룹</a></td><td>05469830001</td><td></td></tr><tr><td>HUVEC 세포</td><td>Lonza Inc.</td><td>CC-2517</td><td></td></tr><tr><td>EGM-2 배지</td><td>Lonza Inc.</td><td>CC-3156</td><td></td></tr><tr><td>EGM-2 불렛 키트</td><td>Lonza Inc.</td><td>CC-4176</td><td></td></tr><tr><td>멸균된 H 내의 0.1% 젤라틴&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td>EMD Millipore</td><td>MCPROTO045</td><td></td></tr></tbody></table>

암 세포에 의해 내피 세포 단층의 침략을 측정하는 실시간 전기 임피던스 기반 기술

A Real-time Electrical Impedance Based Technique to Measure Invasion of Endothelial Cell Monolayer by Cancer Cells

악성 세포의 전이성 확산은 호스트에서 먼 사이트에 교통 수단으로 혈류를 입력 할 내피 층을 지하 막, 혈관 내피 세포에 종양 세포의 부착, 혈관 접합의 철회 및 종양 세포의 마지막 침략과 이동의 저하를 필요로 1-3. 일단 순환 시스템, 암 세포 벽을 모세와 전이성 종양 4,5 형성하는 주변 조직에 extravasate을 준수합니다. 종양 세포 - 내피 세포 상호 작용의 다양한 구성 요소는 암 세포와 인간 제대 정맥 내피 세포 (HUVEC)의 단층에 도전하여 체외에서 복제 할 수 있습니다. 전자 및 위상 대비 현미경으로 수행 연구의 이벤트 체외 순서에서 상당히 생체 전이성 과정 6을 대표하는 것이 좋습니다. 여기, 우리는 모니터링 및 실시간 invas의 정량화 전기 임피던스 기반 기술을 설명악성 종양 세포에 의해 내피 세포의 이온. Giaever 및 Keese 먼저 세포의 인구는 전극 7,8의 표면에서 자랄 때 임피던스의 변동을 측정하는 방법을 설명합니다. 로슈에 의해 제조 xCELLigence 악기, 세포가 잘 하단에있는 면적의 약 80 %를 커버 골드 미세 전극 배열로 덮여 문화 접시에 부착 확산으로 전기 임피던스 변화를 측정하기 위해 유사한 기술을 사용합니다. 세포 부착 및 전극 표면에 확산으로, 그것은 9-12 전기 임피던스의 증가로 연결됩니다. 임피던스는 세포에 의해 덮여 잘 조직 문화의 총 면적에 비례 차원 매개 변수 되나 세포 인덱스로 표시됩니다. 따라서, 세포 지수는 세포 부착, 확산, 형태학 및 세포 밀도를 모니터링하는 데 사용할 수 있습니다. 이 문서에서 설명 침공 분석은 변화에 근거전극 / 세포 계면에서의 전기 임피던스, 악성 세포의 인구로 HUVEC 단층 (그림 1)를 통해 침입. 내피 분기점의 장애, 종양 세포에 의해 내피 세포의 단층 및 교체의 철회는 임피던스 큰 변화로 이어집니다. 이러한 변화는 직접적으로 종양 세포의 침입 용량 상관 관계, 즉, 매우 공격적인 세포에 의해 침략 세포 임피던스와 그 반대의 큰 변화로 이어집니다. 내피 세포 종양 세포의 상호 작용이 더 밀접하게 생체 과정에서 모방, 2) 데이터의 실시간 얻을 수있다 : 1)이 기술은 보이든 챔버와 마트 리젤의 분석으로 침략을 측정하는 기존의 방법에 비해 두 가지 이점을 제공합니다 시간과 같은 다른 방법에 대한 엔드 포인트 분석이 아닌, 더 쉽게 정량화 할 수있다.

이 문서에 설명<em&gt; 체외에서</em내피 세포의 단일 층을 통해 침입 감시 암 세포&gt; 기술. 데이터가 잘 하단에 전극의 표면 임피던스의 변화의 함수로 실시간으로 획득됩니다.

악성 세포의 전이성 확산에는 기저막의 분해, 종양 세포의 혈관 내피세포 부착, 그리고 ...의 수축이 필요합니다.

이 영상에서는 실시간 전기 임피던스 기반 기술을 사용하여 암세포에 의한 혈관내피세포 단일층의 침습을 모니터링하는 방법을 설명합니다. 먼저, VE로 지칭되는 인간 제대정맥 내피세포를 웰 바닥에 금 전극이 코팅된 16-웰 EPL에 배양합니다. 합성 단일층을 형성하기 위해 암세포를 첨가하면, 암세포가 VE에 부착되어 혈관내피세포 단일층을 침습하고 내피세포 접합부를 파괴합니다. 이후 세포가 덮고 있는 웰 바닥의 총 면적에 따라 달라지는 임피던스 측정값을 획득합니다.그 후 전기 임피던스의 변화를 기반으로 침습 정도를 결정할 수 있습니다. 이 기술 또는 보이드 챔버(void chamber) 및 METROGEL 분석과 같은 기존 방법의 주요 장점은 내피 세포와 종양 세포 간의 상호작용이 체내 전이 과정을 더 밀접하게 모방하며, 다른 방법들의 엔드포인트 분석과 달리 데이터를 실시간으로 얻을 수 있고 정량화가 더 쉽다는 점입니다. 이 방법은 암세포 침습에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다.이는 면역 체계 내의 세포 간 상호작용 조사와 같은 다른 시스템에도 적용될 수 있습니다. 또한, UX 세포의 성장을 관찰하는 실험 초기 단계는 추가적인 침습 단계 없이도 모든 세포주의 세포 증식을 평가하는 데 사용할 수 있으며, 본 절차는 저희 실험실의 대학원생인 site Rahim이 시연할 것입니다. 본 프로토콜의 모든 단계는 조직 배양 후드 내에서 무균 조건하에 수행되어야 합니다.본 실험에 사용된 Xcel 시스템은 첫 사용 시 해당 기기 전용으로 37 °C, 5% CO2 배양기에 상시 보관합니다. 기기가 새로운 온도 및 습도 환경에 평형을 이룰 수 있도록 배양기에 최소 16시간 동안 두어야 합니다. 그 다음, Thence EPL 16을 0.1% gelatin으로 37 °C에서 1시간 동안 코팅하여 준비합니다.플레이트 코팅이 완료되면 PBS로 한 번 세척합니다. 그 다음, 블랭크 측정을 위해 재구성된 e gm two 배지를 100 µL 첨가합니다. 이는 세포가 없는 상태에서의 배경 임피던스를 측정하기 위함입니다.컴퓨터의 Excel agent 시스템에 EPL을 장착하십시오. 소프트웨어 창의 바탕 화면에 있는 RTCA 소프트웨어 아이콘을 클릭하여 Excel agent 소프트웨어를 실행하십시오. 레이아웃 탭을 클릭하고 샘플이 포함된 웰을 선택하십시오.실시간 데이터 수집 빈도를 설정하려면 [schedule] 탭을 클릭한 다음 [add a step] 아이콘을 클릭하십시오. sweeps는 측정 횟수를 나타내며 intervals는 측정 간의 시간 간격을 나타냅니다. 이 값들은 각각 1과 1.00 minute로 자동 설정되어 있습니다.이 단계는 시스템이 배경 측정을 수행하도록 설정하는 과정입니다. '단계 추가(add a step)'를 클릭하고 '스윕(sweeps)' 상자에 300을, '간격(intervals)' 상자에 10분(10 minutes)을 입력하십시오. 이렇게 하면 장비가 최대 50시간 동안 임피던스 측정을 수행하도록 설정됩니다.실험을 시작하려면 단계 시작 아이콘을 클릭하십시오. 배경 측정이 수행된 후 각 웰의 배경 임피던스가 측정됩니다. 창에 메시지가 표시됩니다.다음 단계를 위해 클릭하십시오. 다음 단계로 시작합니다. 이제 세포를 추가하고 설명된 대로 단층 형성을 모니터링할 수 있습니다.다음 섹션에서는, 여기에 사용된 인간 제대정맥 내피세포(HUVEC)를 성장 인자 보충제가 포함된 EGM-2 불렛 키트로 재구성한 EGM-2 배지와 5% FBS에서 배양합니다. 세포는 5% CO₂가 포함된 37 °C 인큐베이터에서 유지해야 합니다. 실험 당일, 현미경으로 HUVEC의 합류도(confluency)를 확인하십시오. 세포는 낮은 계代(passage number)여야 하며, 가급적 6회 이하이고 합류도가 75% 미만이어야 합니다. 단층 세포층을 생성하기 위해 트립신으로 세포를 회수하십시오. 세포가 플라스크에서 분리되면, 200 ×g에서 원심분리하여 트립신의 모든 흔적을 제거해야 합니다. 원심분리 후, PBS로 세포를 한 번 세척하십시오.그런 다음 세포와 재구성된 e GM two 배지를 2.5 × 10⁵ cells/mL 농도로 재현탁합니다. 세포 현탁이 완료되면, EXOGEN 시스템에서 백그라운드 보정된 EPL을 제거하고, 플레이트에 이미 들어 있는 100 µL의 E GM two 배지에 HX 현탁액 100 µL를 추가합니다. 즉시 EPL을 Excel 시스템 세포 분석기에 넣습니다.소프트웨어 창의 시작 단계 버튼을 클릭하여 임피던스 측정값을 얻기 시작하십시오. 혈관 내피 세포가 성장하도록 둡니다. 시스템은 10분마다 지속적으로 임피던스 측정값을 기록합니다.Uve 세포는 파종 후 4~6시간 후에 세포 지수(cell index)가 일시적으로 평탄해지는 특성을 보이며, 이후 16~18시간 후에 다시 안정화됩니다. 따라서 세포가 최소 18시간 동안 합성 단층(confluent monolayer)을 형성하도록 하는 것이 중요합니다. 단층이 형성되면, 침습 분석(invasion assay) 준비를 위해 침습 세포를 추가할 차례입니다.침습성 종양 세포를 준비합니다. 여기서는 골육종 세포가 사용되었습니다. 먼저 트립신을 사용하여 세포를 회수합니다.세포를 200 G에서 원심분리하고 PPS로 한 번 세척하여 트립신의 모든 흔적을 제거합니다. 세척 후, 종양 세포 배양에 사용된 RPMI 또는 10% FBS가 포함된 DMEA 배지와 같은 배지에서 최종 밀도가 1×10⁵ cells/mL가 되도록 세포를 현탁합니다. 소프트웨어 창의 일시 정지 단계 아이콘을 클릭하여 실험을 잠시 멈춥니다.EPL을 제거하고 vac 단층에서 EGM two 배지를 흡입하여 제거합니다. 1×10⁴ cells를 포함하는 종양 세포 현탁액 100 µL를 첨가합니다. 일반적으로 이 분석에는 종양 세포와 내피 세포의 비율이 1:2.5일 때 가장 결과가 좋습니다.하지만, 이 비율은 개별 세포주에 맞춰 최적화할 수 있습니다. EPL을 인큐베이터 내의 Excel agent 시스템에 다시 넣으십시오. 계속하기(continue) 단계를 클릭하여 10분 간격으로 임피던스 측정을 계속 진행합니다.향후 6~12시간 동안 침습 과정을 실시간으로 모니터링하십시오. 내피 세포 접합부의 수축과 침습 종양 세포의 침투로 인해 세포 지수(cell index)가 감소하게 됩니다. 실험이 완료되면 exergen 소프트웨어를 사용하여 침습 종양 세포를 첨가한 시점을 기준으로 결과를 정규화하십시오.exergen 소프트웨어를 사용하면 이 비디오에서 보여주는 것과 같이 VEX가 exergen 시스템에서 배양된 모든 시점으로 정규화할 수 있으며, 단층이 형성된 후 K seven M two 세포 또는 K 12 세포를 추가하였습니다. 여기서 보는 바와 같이, K seven M two 세포를 도입한 후 몇 시간 이내에 세포 지수(cell index)가 급격히 감소합니다. K seven M two는 전이성이 매우 높은 골육종 세포주입니다.이 세포들은 세포골격 연결 단백질인 ene를 높게 발현하며, 이는 해당 세포주의 침습적 특성의 원인이 됩니다. 반면, K 12 세포는 전이 능력이 더 낮으며 K seven M two 세포만큼 효율적으로 내피 단일층을 통과하지 못합니다. 이는 여기에서 보여지는 바와 같이 세포 지수의 감소 폭이 더 적은 것으로 나타납니다.여기에 제시된 대조군은 uve 단층의 임피던스를 나타냅니다. 암세포가 없는 상태에서 실험은 3회 반복 수행되었습니다. 이 영상을 시청한 후에는 내피세포 단층을 형성하고 암세포로 해당 단층을 자극함으로써 침습을 실시간으로 측정하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.HU XL 단층 형성을 포함하는 실험의 초기 단계는 임피던스를 통해 세포 증식을 평가하는 데 사용될 수 있습니다. 두 번째.

a-real-time-electrical-impedance-based-technique-to-measure-invasion

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 비디오는 전기 임피던스를 기반으로 하는 3챔버 어레이를 사용하는 침입 분석에 대해 설명합니다. 이 기술은 종양 미세환경에서 상주하는 기질 세포가 분비하는 수용성 인자의 영향으로 암세포의 침습 가능성을 측정합니다.

Three-chambered Array-based Impedance Assay: 전기 임피던스를 측정하여 암세포의 침습 가능성을 평가하는 실시간 분석 기법

출처: Mudduluru, G., et. al. 암세포 이동 및 침입의 임피던스 기반 실시간 측정. J. Vis. Exp. (2020)이 비디오는 교모세포종 세포 침입 및 이동을 측정하기 위한 임피던스 기반 분석을 보여줍니다. 세포는 세포외 기질을 분해하고, 미세 다공성 막을 통해 이동하며, 전극에 부착하여 임피던스를 생성합니다. 이 실시간 분석은 암 연구 응용 분야에 대한 침습적 잠재력을 반영합니다.

뇌암 세포 침입의 임피던스 기반 측정

이 프로토콜은 전기 세포 기판 임피던스 감지, 세포 부착, 증식, 운동성 및 약리 및 독성 자극에 대한 세포 반응의 정량화에 부착 세포의 임피던스 스펙트럼을 기록하고 분석 할 수있는 방법을 검토합니다. 내피 세포의 투과성과 세포 - 세포 및 세포 - 기질 연락처 평가의 검출이 강조된다.

전기 세포 기판 임피던스 내피 증식, 장벽 기능의 정량화에 대한 감지 및 운동성

암은 다른 장기로 전이하는 능력으로 인한 치명적인 질병입니다. 다양한 치료 조건하에서 암세포가 이동하고 침입하는 능력을 결정하는 것은 치료 전략을 평가하는 데 매우 중요합니다. 이 프로토콜은 교모세포종 암 세포주들의 실시간 전이성 능력을 평가하는 방법을 제시한다.

암세포 이동 및 침입에 대한 임피던스 기반 실시간 측정

우리는 침습적 세포 하위집단을 실시간으로 검출하고 포획하는 접근법을 기술한다. 실험 설계는 세포의 전기 임피던스의 변화를 모니터링하여 실시간 세포 분석을 사용합니다. 복잡한 조직에서 침습성 암, 면역, 내피 또는 기질 세포를 포획 할 수 있으며 공동 배양의 영향을 평가할 수 있습니다.

공동 배양물로부터의 침습적 세포 하위집단의 실시간 검출 및 포획

상향 조절된 많은 유전자는 종양 세포의 이동과 침입을 자극하여 예후를 악화시킵니다. 어떤 유전자가 종양 세포의 이동과 침입을 조절하는지 알아내는 것은 매우 중요합니다. 이 프로토콜은 종양 세포의 이동 및 침입에 대한 유전자 발현 증가의 효과를 실시간으로 조사하는 방법을 제시합니다.

합성 mRNA transfection 후 종양 세포 이동 및 침습의 실시간 정량 측정

여기에서는 뇌 내피 장벽 강도를 측정하기 위해 임피던스 기반 바이오센서인 ECIS 및 cellZscope를 사용하는 기술을 보여줍니다. 우리는 뇌 내피의 체외 모델에 다양한 자극을 추가하는 준비 및 기술에 대해 자세히 설명합니다. 우리는 결과를 측정, 기록 및 대표 분석을 제공합니다.

암세포와 사이토카인에 대응하는 두 개의 임피던스 기반 바이오센서를 사용한 뇌내피 장벽 무결성 측정

우리는 조류 배아 모델 동적, 실시간 intravital 이미지를 사용하여 인간의 xenografted 종양의 vasculature에 nanoparticle의 국제화를 수치 소설 접근법을 제시한다.

Intravital 이미징을 사용하여 실시간으로 종양의 Nanoparticle의 이해 평가

표시 셀 다중 광자 현미경을 통해 혀를 이내 구강 암 종양 침략의 양적 모니터링 마우스 모델을 생성에 관련된 기술의 포괄적인 개요는 제공됩니다. 이 시스템은 침입 방지 화합물의 분자 평가 및 약물 효능을위한 유용한 플랫폼이 될 수 있습니다.

구강 편평 세포 암종의 Orthotopic 마우스 모델에서 종양 세포 침략의 다중 광자 이미징

양적 성장 인자 (TGF) - β - 유도 3 차원 콜라겐 젤의 침공을 변형 측정하는 분석이 설명되어 있습니다. 이 분석은 유방암 개발의 다른 단계를 나타내는 세포 라인의 MCF10A 시리즈의 활용합니다. 이 방법은 다른 세포 라인과 함께 사용하는 다른 가능성 activators 또는 침해의 억제제를 조사하기 위해 사용될 수 채택 수 있습니다.

TGF - β - 유발 침략을 측정하는 회전 타원체 분석

학습하세요 실시간 전기 임피던스 기술을 이용하여 암 세포의 내피 세포 단층 침략을 정량적으로 측정하는 방법을. HUVEC 단층 형성 후 암 세포를 첨가하여 임피던스 변화로 침윤 정도를 실시간 모니터링할 수 있습니다.

암 세포에 의해 내피 세포 단층의 침략을 측정하는 실시간 전기 임피던스 기반 기술

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