Name: 알츠하이머병 모델 마우스에서 학습 및 메모리 적자에 대한 모리스 워터 메이즈 테스트 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 2 s
Description: 학습하세요 알츠하이머병 모델 마우스에서 모리스 워터 메이즈를 이용한 공간 학습 및 기억 평가 방법을. 해마 의존성 인지 기능을 분석하여 치료 효과를 검증할 수 있습니다.

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이 작품은 건강 연구의 캐나다 연구소 (CIHR), 타운센드 가족, 잭 브라운 가정 알츠하이머 연구 재단 (WAS)를 지원했습니다. WAS는 알츠하이머 병에있는 캐나다 연구 의자의 소유자입니다. PL은 NSERC 알렉산더 그레이엄 벨 캐나다의 대학원 장학금 박사 연구 대상 및 건강 연구 시니어 대학원 학생이기 위해 마이클 스미스 재단에 의해 지원되었다.

1. 준비 <ol><li> 장비 준비 <ol><li> 150cm의 직경 50cm (그림 1)의 깊이있는 원형 수영장을 구합니다. 검은 마우스를 사용하는 경우, 흰색 수영장을 사용해야합니다, 흰 생쥐를 사용하는 경우, 검은 수영장을 사용해야합니다. </li><li> 테스트중인 동물 테스트 중에 실험자을 볼 수 없다는 같은 방을 배열. 이것은 커튼이나 객실 디바이더로 수행할 수 있습니다. </li><li> 및 / 또는 수면 위에서 될 위치에있는 수영장의 내부에 공간에 대한 높은 콘트라스트 공간적 단서를 놓습니다. </li><li> 하얀 수영장, 블랙 풀에 대한 명확한 플렉시 글라스를위한 화이트 - 수영장에서 10cm 직경 플랫폼을 놓습니다. 플랫폼이 수면 위에 1cm까지 물이 수영장을 채우십시오. 물이 실내 온도 (22 ° C)에 평형하자. 물 온도에 따라이 1~3일 걸릴 수도 있고, 또는 온수는 평균 속도를 추가할 수 있습니다. </li></ol></li><li> 소프트웨어 준비 <ol><li> 카메라가 픽셀 기반 정보의 물리적인 거리 정보를 만들 수 있도록 컴퓨터 소프트웨어의 수영장을 보정합니다. 4 quadrants에 수영장을 나눕니다. 각각의 재판과 함께 변경할 수있는 변수 영역으로 플랫폼 영역을 지정합니다. 각 사분면에있는 하나와 수영장의 중심에서 한 - 5 플랫폼 subzones를 만듭니다. 보정을 저장하고 나머지 시험 일 동안 그것을 사용합니다. (예를 들어 그림을 참조하십시오. 2). </li><li> 60 초로 최대 시험 시간을 설정합니다. 마우스가이 시간 전에 플랫폼을 발견하면, 플랫폼이 발견되었을 때 재판을 중지 프로그램 소프트웨어. </li><li> 자동으로 추적 시작 프로그램, 실험자가 종료 테스트 영역을 지정합니다. 소프트웨어 패키지가 제공하는 "반사 최소화"옵션을 활용합니다. </li><li> 각 사분면에있는 동안 경로 길이, 이스케이프 지연과 시간을 추적할 수 있습니다. </li></ol></li></ol> 2. 1 일 공개 플랫폼 <ol><li> 컴퓨터 프로그램 <ol><li> 추적 소프트웨어로 수영장 보정을로드합니다. </li><li> 실험에 해당하는 인터 재판 간격으로, 5 시련을 만듭니다. 플랫폼 위치와 각각의 재판과 다를 시작 방향을 프로그램. 예제 프로토콜 표 1을 참조하십시오. </li></ol></li><li> 프로 시저를 테스트 <ol><li> 그들의 주거 시설에서 동작 룸에 쥐를 전송합니다. 그들은 수영장이나 공간적 단서를 볼 수 없습니다 영역에서 생쥐 보관하십시오. 그들이 테스트하기 전에 최소한 30 분 동안 새로운 환경에 적응하자. </li><li> 의 가시성을 높이기 위해 플랫폼에 깃발을 놓으십시오. </li><li> 테스트를 시작하려면, 꼬리의 기지에 의해 홈 케이지에서 마우스를 올려. 당신이 테스트 영역에 가져다으로 마우스를 지원합니다. 꼬리의 기본으로 마우스를 리프팅하는 것은 부드럽게 수영장의 가장자리를 마주보고, 바다에 마우스를 놓으십시오. 신속하게 테스트 영역을 둡니다. </li><li> 마우스 60 초 전에 플랫폼을 발견하면 컷 - 오프, 마우스가 5 초 동안 플랫폼에 머물 수 있도록 다음의 홈 케이지로 돌아갑니다. 마우스 플랫폼을 찾을 수없는 경우, 플랫폼에서 마우스를 배치하고 그 홈 케이지에 반환하기 전에 20 초 동안 그 자리에 있으면서 수 있습니다. </li><li> 흔적의 모든 생쥐에 대해 반복합니다. 귀하의 소프트웨어에 프로그램이 같은 다른 플랫폼 위치와 방향을 시작으로 각 후속 재판을 시작합니다. </li><li> 테스트가 완료되면, 자신의 주택 시설에 생쥐를 반환합니다. 생쥐에서 건조하고 normothermia는 동물 시설로 귀환하기 전에 보장합니다. </li><li> 다음날을위한 준비에서 플랫폼에서 플래그를 제거하고 표면 아래에 1cm로 잠수함 플랫폼을 위해 수영장에 추가 물을 추가합니다. </li></ol></li></ol> 3. 일 2-5 : 숨겨진 플랫폼 <ol><li> 컴퓨터 프로그램 <ol><li> 추적 소프트웨어로 수영장 보정을로드합니다. </li><li> 실험에 해당하는 인터 재판 간격으로, 5 시련을 만듭니다. 프로그램 플랫폼 모든 시련과 일 내내 같은 위치에 유지하는 위치에 있지만, 시작 방향을 매일, 각 시험과 다릅니다. </li></ol></li><li> 프로 시저를 테스트 <ol><li> 검은 생쥐 들어, 풀에 무독성, 백색, 분말 온도 페인트를 추가하고 철저히 섞는다. 충분히 잠수 플랫폼이 수면에서 보이지 않는 그러한 페인트를 사용하십시오. 하얀 생쥐 들어, 맑은 물, 맑은 플렉시 글라스 플랫폼과 검은 수영장을 사용해야합니다. </li><li> 2.2.6 단계 2.2.3를 따르십시오. </li></ol></li></ol> 4. 일 6 : 프로브 트라이얼 <ol><li> 컴퓨터 프로그램 <ol><li> 추적 소프트웨어로 수영장 보정을로드합니다. </li><li> 노 플랫폼 영역 1 재판 하나 시작 방향을 만듭니다. 일 2-5에 사용되는 플랫폼 사분에서 멀리 떨어져 시작하는 방향을 선호합니다. 60 초에 트레일 길이를 설정합니다. </li></ol></li><li> 프로 시저를 테스트 <ol><li> 수영장에서 플랫폼을 제거합니다. </li><li> 2.2.6 단계 2.2.3를 따르십시오. </li></ol></li></ol> 5. 데이터 분석 <ol><li> 매일 각 마우스 평균 5 시련 각 시험 과목에 대해 하나의 경로 길이와 탈출 대기 시간을 제공합니다. 적절하게 결합하여 오류를 계산합니다. 일 6, 간단하게 각각의 마우스에 대한 플랫폼 사분면에있는 동안 경로 길이, 이스케이프 지연, 그리고 시간을 수집합니다. </li><li> 어떤 차이가 일 1 그룹간에 존재하는 경우, 그것은 가능성이 오히려 학습과 메모리보다 비전있는 문제입니다. 어떤 차이가 1 일에 보지 경우에만 분석 진행합니다. </li><li> 데이터 집합에 대한 적절한 통계를 사용하는 일 2-5에 대한 학습 곡선을 비교합니다. 험한 곡선 빠른 작업 인수를 나타냅니다, 얕은 곡선 작업 인수의 적자를 나​​타냅니다. 일 5 일 2 데이터 ANOWA를 사용하여 분석하고 있습니다. </li><li> 6 일 들어, 데이터 세트에 적절한 통계를 사용하여 이전에 배운 플랫폼 사분면에 보낸 시간의 비율을 비교. 플랫폼 사분면에있는 동안 시간의 높은 비율은 메모리 유지의 높은 수준으로 해석됩니다. </li></ol> 6. 대표 결과 우리는 광고 pathogenesis (7)과 valproic 산성 (VPA) 유전자 변형 광고 모델 마우스에서 AD 치료 (6)의 제약 가능성에 hypoxia의 효과를 검토하기 위해 모리스 워터 미로 테스트를 사용했습니다. 그림 3은 우리가 APP23 AD 마우스 모델 (6)에서 메모리 적자에 VPA의 영향에 대한 연구에 보고된 대표적인 결과이다. 1 일 (보이는 플랫폼 재판)에서 VPA 치료 및 제어 그룹 지연 (그림 3A)와 그룹 모두 비슷한 모터와 시각적인 기능을 가지고 나타내는 경로 길이 (그림 3A) 사이에는 차이가 없습니다. 이것에서 우리는 생쥐가 표시된 플랫폼과 환경을 주변에서 신호를 볼 수 있으며, acceptably 수영을 얻을 수 있습니다. 일 2-5의 경우 (숨겨진 플랫폼 실험의 4 주 1) 예를 들어 VPA 치료 쥐가 컨트롤보다 훨씬 더 나은 수행되는 제안, 탈출 대기 (그림 3C)와 그룹 간의 경로 길이 (그림 3D)에 차이를 보여줍니다 시간이 지남에. 프로브 트레일 마우스가 숨겨진 플랫폼 이전에 배치되었다 세 번째 사분로 여행 횟수가 제어 (그림 3E)에 비해 VPA 치료로 상당히 큰 것을 마지막 날 (6 일) 공연에 발생합니다. 이러한 데이터는 VPA 치료가 APP23 생쥐에서 본 메모리 적자를 상당히 향상을 나타냅니다. <img src="/files/ftp_upload/2920/2920fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 모리스 워터 미로 보이는 플랫폼 테스트 하루에 장비 설치가. 수영장은 객실 디바이더를 사용하여 실험자 차단할 수 있습니다. 공간적 단서는 벽에 위치하고 있으며, 원하는 경우 어쩌면, 수면 위, 수영장의 내부에 위치하고 있습니다. 수영장은 표면 위에 1cm있는 플랫폼으로, 맑은 물로 가득 차 있습니다. 플래그는 가시성을 향상시키는 플랫폼에 배치되었습니다. <img src="/files/ftp_upload/2920/2920fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 풀 교정을 보여주 모든 - 메이즈 ™ 비디오 추적 시스템에서 화면 캡처. 수영장이 RTV24 디지타이저와 흑백 아날로그 추적 카메라로 위에서 볼 수 있습니다. 여러 영역은 소프트웨어 내에 정의되며 총 수영장 4 quadrants으로 나누어져 있습니다. NW, NE, SW, SE, 또는 센터 다섯째, 플랫폼 영역이있는가 다섯 가지 지역과 시련에 걸쳐 다를 수 있습니다 입력됩니다. 교정 라인 (중앙 통해 쳤다 라인) 소프트웨어가 실제 거리에 픽셀 거리를 변환할 수 있도록 추가됩니다. <img src="/files/ftp_upload/2920/2920fig3.jpg" alt="그림 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 3"> 그림 3. 모리스 워터 미로에 대한 대표 결과가. 인간 스웨덴어 돌연변이 APP 유전자를 갖고 7 개월 APP23 유전자 변형 생쥐는 매일 VPA (n은 = 30 생쥐) 또는 차량 솔루션 (n은 = 30 생쥐) 주사 1 개월 후에 테스트되었습니다. (A) 동안 보이는 플랫폼 시험의 첫날은 VPA 치료 및 제어 APP23 생쥐가 보이는 플랫폼에 탈출하기 위해 유사한 지연 전시. P&gt; 0.05 학생의 T - 테스트에 의해. (B) VPA - 처리 및 제어 APP23 생쥐가 보이는 플랫폼 테스트에서 보이는 플랫폼에 탈출하기 전에 유사한 수영 거리를했다. P&gt; 0.05로 학생의 T - 테스트합니다. (C) 숨겨진 플랫폼 테스트에서는 VPA는 APP23 생쥐는 3 차 및 4 번째 날, P에 숨겨진 플랫폼에 ANOVA에 의해 &lt;0.001를 탈출하는 짧은 대기 시간을 보여주 취급. (D)는 VPA - 처리 APP23 마우스는 ANOVA에 의해 3 차 및 4 번째 날, P에 숨겨진 플랫폼에 &lt;0.01를 탈출하기 전에 짧은 수영장 길이를했다. (E) 6 일에 프로브 재판에서 VPA - 대우 APP23 쥐가 여행 에 숨겨진 플랫폼 이전에 배치되었다 세 번째 사분면, 컨트롤보다 훨씬 더 많은 시간. * P &lt;; 0.005 학생의 T - 테스트로. (적응 및 원래 메드 도이 J.의 특급 출판 실험 의학 205 2781년에서 2789년까지, 2008 년 록펠러 대학 출판부의 저널에서 reprinted :... 10.1084/jem.20081588) (6). <table border="1"><tbody><tr><td> </td><td colspan="2"> 1 일 </td><td> 날 2 </td><td> 3 일 </td><td> 일 사 </td><td> 5 일 </td><td> 6 일 </td></tr><tr><td></td><td> 플랫폼 위치 </td><td> 시작 방향 </td><td colspan="4"> 플랫폼 위치 : SW는 다음과 같이 위치 시작 : </td><td> 아무 플랫폼 없습니다. </td></tr><tr><td> 시행 1 </td><td> SW </td><td> 에스 </td><td> W </td><td> N </td><td> N </td><td> E </td><td> N </td></tr><tr><td> 트라이얼 2 </td><td> NW </td><td> N </td><td> 에스 </td><td> W </td><td> E </td><td> 에스 </td><td></td></tr><tr><td> 트라이얼 3 </td><td> NE </td><td> 에스 </td><td> N </td><td> E </td><td> W </td><td> W </td><td></td></tr><tr><td> 트라이얼 4 </td><td> 센터 </td><td> E </td><td> E </td><td> W </td><td> 에스 </td><td> E </td><td></td></tr><tr><td> 트라이얼 5 </td><td> SE </td><td> W </td><td> 에스 </td><td> 에스 </td><td> N </td><td> N </td><td></td></tr></tbody></table> 표 1. 샘플 물 미로 프로토콜 * 시작 방향을 변경하면서 플랫폼 위치와 일 1 방향의 변화를 시작, 둘 다 일 2-5에 플랫폼 위치가 일정하게 유지하는 방법 * 반면에 있습니다. 일 6, 아무 플랫폼과 단일 재판이 없습니다. 생쥐들이 이전에 배운 플랫폼 사분면에 들어가기 전에 몇 가지 거리를 여행해야하므로 6 일 시작 방향은 이전 플랫폼 위치 (SW)에서 멀리이다.

<ol><li>Morris, R. G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+localization+does+not+require+the+presence+of+local+cues%5BTitle%5D)+AND+%22Learning+and+Motivation%22%5BJournal%5D)">Spatial localization does not require the presence of local cues.</a> Learning and Motivation. 12, 239-260 (1981).</li>
<li>O'Keefe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+the+hippocampal+place+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">A review of the hippocampal place cells.</a> Prog Neurobiol. 13, 419-439 (1979).</li>
<li>Scoville, W. B., Milner, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+recent+memory+after+bilateral+hippocampal+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Neurosurg+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Loss of recent memory after bilateral hippocampal lesions.</a> J Neurol Neurosurg Psychiatry. 20, 11-21 (1957).</li>
<li>Eichenbaum, H., Stewart, C., Morris, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+representation+in+place+learning%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Hippocampal representation in place learning.</a> J Neurosci. 10, 3531-3542 (1990).</li>
<li>Block, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+ischemia+and+behavioural+deficits%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Global ischemia and behavioural deficits.</a> Progress in Neurobiology. 58, 279-295 (1999).</li>
<li>Qing, H., He, G., Ly, P. T., Fox, C. J., Staufenbiel, M., Cai, F., Zhang, Z., Wei, S., Sun, X., Chen, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Valproic+acid+inhibits+Abeta+production%2C+neuritic+plaque+formation%2C+and+behavioral+deficits+in+Alzheimer%27s+disease+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Valproic acid inhibits Abeta production, neuritic plaque formation, and behavioral deficits in Alzheimer's disease mouse models.</a> J Exp Med. 205, 2781-2789 (2008).</li>
<li>Sun, X., He, G., Qing, H., Zhou, W., Dobie, F., Cai, F., Staufenbiel, M., Huang, L. E., Song, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia+facilitates+Alzheimer%27s+disease+pathogenesis+by+up-regulating+BACE1+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Hypoxia facilitates Alzheimer's disease pathogenesis by up-regulating BACE1 gene expression.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. , 18727-18732 (2006).</li>
<li>D'Hooge, R., De Deyn, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+the+Morris+water+maze+in+the+study+of+learning+and+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Reviews%22%5BJournal%5D)">Applications of the Morris water maze in the study of learning and memory.</a> Brain Research Reviews. 36, 60-90 (2001).</li>
<li>Brandeis, R., Brandys, Y., Yehuda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+the+Morris+Water+Maze+in+the+study+of+memory+and+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The use of the Morris Water Maze in the study of memory and learning.</a> Int J Neurosci. 48, 29-69 (1989).</li>
<li>Lipp, H. P., Wolfer, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+modified+mice+and+cognition%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Genetically modified mice and cognition.</a> Curr Opin Neurobiol. 8, 272-280 (1998).</li>
<li>Sandi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+and+mechanisms+of+action+of+glucocorticoid+involvement+in+memory+storage%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Plast%22%5BJournal%5D)">The role and mechanisms of action of glucocorticoid involvement in memory storage.</a> Neural Plast. 6, 41-52 (1998).</li>
</ol>

모든 실험은 브리티시 컬럼비아 애니멀 케어 및 사용위원회 CIHR 지침의 대학에 따라 실시되었다.

나이, 성별, 종 및 스트레인 차이 MWM 성능 (8) 영향을줍니다. 연구는 남성 설치류가 여성보다 나은 수행하는 동안 세 생쥐가 MWM의 성능 저하를 나타냅니다; 또한 부유는 쥐 (9, 10)보다 쥐가 더 발음됩니다. 따라서 이러한 요소는 모든 테스트를 통해 동일시한다. 증거 또한 스트레스 동물 MWM (11) 더 제대로 실행하는 것이 좋습니다, 같은 온도, 빛, 소음 등 스트레스를 일으킬 수 있으므로 환경 요인은 모니터 및 작업을 통해 지속적인 보관해야합니다.

<table border="1"><tbody><tr><th> 시약의 이름 </th><th> 회사 </th><th> 댓글 (옵션) </th></tr><tr><td> AnyMaze 비디오 추적 시스템 </td><td> 스토엘팅 회사 </td><td></td></tr><tr><td> 온도 페인트 </td><td> 리브스 &amp; 풀 그룹 </td><td> 화이트, 가루 </td></tr></tbody></table>

알츠하이머병 모델 마우스에서 학습 및 메모리 적자에 대한 모리스 워터 메이즈 테스트

Morris Water Maze Test for Learning and Memory Deficits in Alzheimer&#39;s Disease Model Mice

모리스 워터 미로 (MWM)는 첫번째 공간 memoryand 장기 공간 메모리 1 인수를 포함 hippocampal 종속적인 학습을 테스트하기 위해 1981 년 신경학 리처드 G. 모리스에 의해 설립되었습니다. MWM은 일반적으로 육일 재판, 공간적 (숨겨진 플랫폼) 사이의 차별되는 큰 장점이 아닌 공간 (표시 플랫폼) 조건을 2-4로 구성된 비교적 간단한 절차입니다. 또한, MWM 테스트 환경은 냄새 트레일 간섭 5 줄여줍니다. 이것은 공간 학습과 기억의 신경 생물학과 신경 약리학의 연구에 광범위하게 사용되는 작업을 주도하고 있습니다. MWM은 알츠하이머 병 6, 7과 같은 neurocognitive 장애에 대한 쥐 모델의 검증에 중요한 역할을합니다. 이 프로토콜 우리는 일반적으로 알츠하이머 질환 유전자 변형 마우스 모델에 사용되는 시험 학습과 메모리 및 데이터 분석을위한 MWM의 일반적인 절차를 논의했다.

모리스 워터 미로는 hippocampal 종속적인 학습과 기억을 테스트하는 행동 작업입니다. 이것은 널리 설치류 모델에서 신경 생물학, 신경 약리학과 neurocognitive 장애의 연구에 사용되었습니다.

모리스 수중 미로(Morris Water Maze, MWM)는 해마 의존적 학습을 테스트하기 위해 1981년 신경과학자 Richard G. Morris에 의해 처음 확립되었으며, 여기에는 ...이 포함됩니다.

다음 실험의 전반적인 목표는 해마 의존적 학습 및 기억력을 테스트하는 것입니다. 1일 차에는 마우스가 탈출 가능한 종점이 있음을 학습할 수 있도록, 투명한 물이 담긴 수조 속에 무작위로 배치된 깃발이 꽂힌 돌출 플랫폼을 찾는 훈련을 실시합니다. 두 번째 단계로, 이후 며칠 동안 플랫폼을 한 곳에 고정하여 수면 아래로 잠기게 한 뒤, 마우스를 다양한 위치에서 불투명한 물이 담긴 수조에 풀어놓아 훈련을 진행합니다.이를 통해 마우스는 주변 단서들을 이용하여 플랫폼의 위치를 학습하게 됩니다. 다음으로, 마지막 날에 플랫폼을 제거하고 마우스의 수영 패턴을 1분 동안 추적하여 과제 습득 정도를 평가합니다. 이를 통해 학습 및 기억 결과를 얻을 수 있습니다.세 가지 서로 다른 테스트 조건에서 나타난 탈출 잠복기(escape latencies)와 경로 길이를 근거로 공간 학습 및 기억 능력이 손상되었음을 보여줍니다. 기존 방식과 비교했을 때 이 기법의 주요 장점은 특수 숨겨진 플랫폼 조건과 비특수 가시적 플랫폼 조건을 비교적 간단하게 구분할 수 있다는 점입니다. 일반적으로 이 방법에 익숙하지 않은 연구자는 실험적 조작에 민감하기 때문에 어려움을 겪을 수 있습니다.절차 과정 중 마우스가 스트레스를 받지 않도록 해야 하며, 이는 결과에 영향을 미칠 수 있습니다. 본 절차의 시연은 제 실험실의 대학원생인 Ms. Kelly Bromley과 Miss Sweden이 담당하겠습니다. 먼저 원형 풀을 준비하십시오. 실험용 마우스가 검은색이면 흰색 풀을 사용하고, 마우스가 흰색이면 검은색 풀을 사용하십시오. 이제 시작합니다.테스트 장소에서 실험 대상 동물이 실험자를 볼 수 없도록 칸막이로 공간을 배치하십시오. 방 내부와 수조 내부의 수면 위 위치에 고대비 공간 단서를 배치하십시오. 수조에 물을 채우고 실온으로 평형을 맞추십시오.그런 다음, 화이트 풀의 경우에는 흰색, 블랙 풀의 경우에는 투명 플렉시글라스로 된 지름 10 centimeter 플랫폼을 수면 위 1 centimeter 높이로 풀에 배치합니다. 카메라가 픽셀 기반 정보를 통해 물리적 거리 정보를 생성할 수 있도록 컴퓨터 소프트웨어에서 풀을 보정합니다.풀을 4개의 사분면으로 나눕니다. 플랫폼 구역을 각 시행마다 변경될 수 있는 가변 구역으로 지정하십시오. 그런 다음 각 사분면에 하나씩, 그리고 풀 중앙에 하나씩, 총 5개의 플랫폼 하위 구역을 생성하십시오.교정 값을 저장하고 남은 테스트 기간 동안 이를 사용하십시오. 다음으로, 최대 시도 시간을 60초로 설정하십시오. 마우스가 이 시간 내에 플랫폼을 찾으면, 플랫폼을 찾았을 때 시도가 종료되도록 소프트웨어를 설정하십시오.또한 실험자가 테스트 구역을 벗어날 때 프로그램이 자동으로 추적을 시작하도록 설정하십시오. 소프트웨어 패키지에서 제공하는 모든 반사 최소화 옵션을 활용하십시오. 마지막으로 경로, 길이, 탈출, 잠복기 및 각 구역에서 보낸 시간을 추적하십시오.테스트 당일에 마우스를 사육 시설에서 행동 실험실로 이동시키되, 풀이나 공간적 단서가 보이지 않는 구역에 둡니다. 새로운 환경에 최소 30분 동안 적응하게 합니다. 테스트를 시작하기 전, 트래킹 소프트웨어에 풀 캘리브레이션을 로드합니다.적절한 시행 간 간격 프로그램, 플랫폼 위치 및 시작 방향이 각 시행마다 다르게 설정된 5회의 시행을 생성하십시오. 가시성을 높이기 위해 플랫폼 위에 깃발을 설치하십시오. 테스트를 시작하려면 꼬리 기부를 잡아 마우스를 홈 케이지에서 들어 올리고, 테스트 구역으로 이동하는 동안 마우스를 지지해 주십시오.그런 다음 마우스를 수조 가장자리를 향하게 하여 조심스럽게 물속에 놓습니다. 신속하게 테스트 구역을 벗어납니다. 마우스가 62초의 컷오프 시간 전에 플랫폼을 찾으면, 마우스가 플랫폼 위에 5초 동안 머무르게 한 다음 홈 케이지로 돌려보냅니다.마우스가 플랫폼을 찾지 못한 경우, 마우스를 플랫폼 위에 올려두고 20초 동안 머물게 한 뒤 홈 케이지로 돌려보냅니다. 해당 시험의 모든 마우스에 대해 이를 반복합니다. 이후의 각 시험은 프로그램 소프트웨어에 따라 다른 플랫폼 위치와 시작 방향으로 시작하십시오.테스트가 완료되면, 다음 날을 위해 마우스를 사육 시설로 옮깁니다. 플랫폼에서 깃발을 제거하고, 풀에 물을 더 추가하여 플랫폼이 수면 아래 1cm까지 잠기도록 합니다. 트래킹 소프트웨어에 풀 보정 값을 불러오고, 적절한 시행 간 간격을 설정하여 5회의 시행을 생성합니다.그런 다음 플랫폼 위치가 모든 시험과 날짜 동안 동일한 위치에 유지되도록 설정하되, 시작 방향은 매일의 각 시험마다 다르게 설정하십시오. 검은색 마우스의 경우, 수조에 독성이 없는 흰색 분말형 템퍼라 물감을 추가하고 충분히 섞어줍니다. 잠긴 플랫폼이 수면에서 보이지 않을 정도로 충분한 양의 물감을 사용하십시오.앞서 설명한 최종 프로브 시험과 동일한 방식으로 물속에서 개별 마우스에 대한 테스트를 진행합니다. 트래킹 소프트웨어에 풀 캘리브레이션(pool calibration) 데이터를 로드합니다. 플랫폼 구역이 없는 하나의 시험과 하나의 시작 방향을 설정합니다.가급적이면 2일 차부터 5일 차까지 사용한 플랫폼 사분면에서 가장 멀리 떨어진 지점을 시작 방향으로 설정하십시오. 또한 트레일 길이를 60초로 설정하십시오. 이제 풀에서 플랫폼을 제거하고, 앞서 설명한 대로 각 날짜별로 개별 마우스를 대상으로 수중 테스트를 진행하며, 각 마우스의 5회 시행 횟수를 평균 내어 각 피험자당 단일 경로 길이와 탈출 잠복기를 산출하십시오.또한, 모리스 수중 미로(Morris water maze)를 사용하여 첨부된 원고에 상세히 기술된 대로 데이터를 분석하고 해석합니다. 인간 Swedish 돌연변이 APP 유전자를 보유한 7개월령의 APP 23 형질전환 생쥐를 대상으로, 첫날 가시적 플랫폼 테스트를 실시하기 전 한 달 동안 매일 발프로산(valproic acid) 또는 매개체 용액을 주입한 후 테스트를 진행하였습니다. VPA 처리군과 대조군 APP 23 생쥐는 가시적 플랫폼으로 탈출하는 데 소요된 잠복기가 유사하게 나타났습니다.VPA 처리군과 대조군 AP P 23 마우스는 가시적 플랫폼 위로 탈출하기 전까지의 수영 거리가 유사했습니다. 셋째 날과 넷째 날에 수행된 은폐 플랫폼 테스트의 가시적 플랫폼 테스트에서, VPA 처리 AP P 23 마우스는 은폐 플랫폼 위로 탈출하는 데 걸리는 잠복기가 더 짧았습니다. 셋째 날과 넷째 날, VPA 처리 AP P 23 마우스는 은폐 플랫폼 위로 탈출하기 전의 수영 길이가 더 짧았습니다.6일 차 탐색 시험에서 VPA 처리된 PP 23 마우스는 대조군 마우스에 비해 이전에 숨겨진 플랫폼이 위치했던 세 번째 사분면으로 훨씬 더 많이 이동하였습니다. 이 절차를 시도할 때는 소음, 온도, 빛과 같이 스트레스를 유발할 수 있는 환경 요인을 모니터링하는 것이 중요하다는 점을 기억해야 합니다. 본 절차 이후, 학습 결손이 해마에 국한된 것인지 아니면 편도체를 포함한 더 광범위한 신경 인지 문제의 일부인지와 같은 추가적인 질문에 답하기 위해 단서 및 맥락적 공포 조건화와 같은 다른 방법들을 수행할 수 있습니다.

morris-water-maze-test-for-learning-memory-deficits-alzheimer-s

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

모리스 물 미로는 행동 작업에 해마의 참여를 문서화하는 데 사용하는 잘 접수 도구입니다.

모리스 워터 메이즈 실험

레쉴리 III의 미로가 자극 aversive 또는 Visual 단서에 의존하지 않는 경로 학습 작업입니다. 그것은 따라서 특히 노화 생쥐의하거나 어디에 스트레스가 고려, 학습 및 메모리를 평가하기위한 매우 매력적인 옵션입니다.

마우스에 레쉴리 III 메이즈를 사용하여 낮은 스트레스 루트 학습

마우스의 물 미로 시험의 얕은 물 (패들링) 변종

뇌 종양의 radiotherapeutic 관리로 인한인지 장애에 부정적인 삶의 질을 영향 임상 처치하기 어려운 상태를 나타냅니다. 비판적으로 방사선 - 유발인지 감소를 ameliorating에 대한 잠재적인 개입을 평가하는 능력은 궁극적으로인지의 엄격한 양적 평가를 수행하는 기능에 따라 달라집니다.

두개골 방사선 치료에 의한인지 감소를 Quantifying

이 비디오에서는 설치류의 작업 기억을 연구하는 데 사용되는 탐색 작업인 플랫폼 재배치를 사용한 Morris 물 미로 테스트에 대해 설명합니다.

플랫폼 재배치를 통한 물 미로: 작업 기억을 평가하는 방법

이 원고는 일반적으로 사용되는 알츠하이머병의 마우스 모델과 함께 사용하도록 맞춤화된 Morris water maze(MWM) 프로토콜을 설명합니다. MWM은 형질전환 마우스 모델에 널리 사용됩니다. 마우스 모델의 배경 변형률에 민감한 절차의 구현은 그룹 차이를 감지하는 데 필수적입니다.

모리스 물 미로 테스트 : 마우스 스트레인 및 테스트 환경을위한 최적화

신규 모델의 병적 알츠하이머 병 (AD)과 입력 조건을 조사하기 위해, 세 가지 동작 태스크 모터 제어,인지 행동 모두를 평가하는 것이 기재되어있다. 이러한 작업은 빔 도보 작업, 실린더 작업 및 모리스 물 미로를 포함한다.

뇌졸중과 알츠하이머 병의 유전자 변형 쥐 모델에서 모터 및 해마 종속 공간 학습 및 참조 메모리 평가

여기서 우리는 수영을 필요로하지 않는 마우스 특유의인지 검사 프로토콜을 제시합니다. 이 테스트는 통제 된 피질 충격 유발 외상성 뇌 손상 마우스와 가짜 컨트롤을 성공적으로 구별하는 데 사용할 수 있습니다.

방사형 워터 트레드 미로를 이용한 외상성 뇌 손상의 마우스 모델에서 공간 기억 장애의 평가

본 명세서에서, 알츠하이머병 모델 마우스의 학습 및 기억 능력을 평가하고 이를 치료하기 위한 수동 침술의 효과를 평가하기 위한 모리스 수질 미로 시험을 수행하는 프로토콜이 기재되어 있다.

모리스 워터 미로를 이용한 알츠하이머 병 마우스 모델의 학습 및 기억 능력 분석

우리는 동시 녹음 및 신경 자극 기능이있는 조명 headstage 사전 증폭기 시스템을 설계 및 구축에 저렴한 비용으로 방법을 제시한다. 이 장치는 수영을 동물에 사용하기 위해 waterproofed 수 있습니다.

동시 신경 자극과 워터 미로에서 녹음을위한 설계 및 비용 효율적인 Headstage 구축

학습하세요 알츠하이머병 모델 마우스에서 모리스 워터 메이즈를 이용한 공간 학습 및 기억 평가 방법을. 해마 의존성 인지 기능을 분석하여 치료 효과를 검증할 수 있습니다.

알츠하이머병 모델 마우스에서 학습 및 메모리 적자에 대한 모리스 워터 메이즈 테스트

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