종양에서 오가노이드 준비: 3D 체외 종양 모델

종양 조직을 작은 조각으로 다집니다. 조각을 소화 완충액이 있는 튜브로 옮깁니다. 세포를 둘러싼 콜라겐 섬유가 분해되어 조직의 기질이 저하됩니다. 그런 다음 소화된 조각을 펠릿화하고 대부분의 분해 완충액을 버립니다. 튜브를 튕겨 펠릿을 부수십시오.

용액은 다양한 크기의 세포 덩어리로 구성됩니다. 트립신과 ROCK 억제제 용액에 세포 덩어리를 재현탁합니다. 트립신은 계속해서 종양을 분해하고 억제제는 세포 사멸을 방지합니다. 일정한 간격으로 용액을 피펫팅하여 덩어리를 부수고 세포를 분산시킵니다. 그런 다음 세포를 적절한 농도의 매트릭스 용액에 재현탁했습니다.

배양 플레이트에 용액 방울을 떨어뜨려 매트릭스 돔을 형성합니다. 플레이트를 인큐베이터에 거꾸로 놓고 매트릭스가 완전히 응고되도록 합니다. 그런 다음 세포 배양 배지를 추가하고 오른쪽이 위로 향하도록 배양합니다. 매트릭스는 오가노이드의 3차원 성장을 지원하는 스캐폴드를 제공합니다.

진 후 종양 조각을 섭씨 37도에서 1.5-2시간 동안 소화 완충액 15밀리리터 튜브에 넣습니다. 소화가 끝나면 원심분리로 소화된 조직을 침전시키고 상청액을 버립니다.

튜브를 튕겨 세포 펠릿을 풉니다. 10마이크로몰 Y-27632 ROCK 억제제가 보충된 예열된 트립신 1밀리리터에 세포를 섭씨 37도에서 5분 동안 재현

배양이 끝나면 표준 P1000 피펫 팁으로 조직 슬러리를 5회 분쇄합니다. 튜브를 수조로 되돌려 추가로 5분 동안 배양하고 분쇄합니다.

매트릭스 돔 도금의 경우 소화된 세포를 9밀리리터의 차가운 배지로 세척한 다음 원심분리로 세포를 수집합니다. 계수를 위해 세포를 신선한 배지 1밀리리터에 재현탁하고, 계수 후 원심분리로 세포를 다시 한 번 수집합니다. 종양 세포를 적절한 부피의 매트릭스로 희석합니다.

섭씨 55도에 따뜻하게 데운 6웰 플레이트의 각 웰에 200마이크로리터의 매트릭스 세포 용액을 조심스럽게 떨어뜨립니다. 돔을 실온에서 2분 동안 응고시킨 후 플레이트를 거꾸로 섭씨 37도 인큐베이터에 20분 동안 넣습니다.

돔이 완전히 응고되면 안드로겐 R1881 및 ROCK 억제제가 보충된 전립선 오가노이드 배지 2밀리리터를 각 웰에 추가합니다. 플레이트를 세포 배양 인큐베이터로 되돌립니다.

• In vitro tumor models - Methods for studying tumor behavior in lab-controlled conditions.
• PeproTech Noggin - A protein used to regulate cellular processes in tissue culture.
• Tumor model - A method or process used to replicate tumor environment and behavior for scientific studies.
• Cell pellet - Cluster of cells collected at the bottom of a tube after centrifugation.
• ROCK inhibitor organoids - Compounds that prevent cell apoptosis during organoid creation.
• Noggin conditioned media - Media enriched with Noggin protein, used in cellular culture and experiments.
• Cell pellet in tube - Term refers to cells that have been concentrated by centrifugation in a sample tube.

• Introduce In vitro tumor models by defining this as a replicate of tumor behavior (e.g., in vitro tumor models).
• Key Concepts by summarizing principles involved in cell pellet creation (e.g., cell pellet).
• Underlying Mechanisms through visualizing the process of using ROCK inhibitor in organoid creation.
• Connect the process of tumor tissue mincing to the creation of a cell pellet and suspension in a matrix solution.

• What are in vitro tumor models and how to create a cell pellet in lab conditions?
• What role does the PeproTech Noggin play in the tumor model creation?
• How does the ROCK inhibitor assist in the creation of organoids?

• Practical Applications - Tumor models help study cancer growth and potential cures (e.g., in vitro tumor models).
• Industry Impact - Lab studies benefit the healthcare industry and the field of oncology (e.g., ROCK inhibitor organoids).
• Societal Importance - The research contributes to advancements in cancer treatment options (e.g., Noggin conditioned media).
• Link to Scientific Advancements - Understanding tumor behavior facilitates innovative treatment approaches.