마우스 모델에서 정소성 방광 종양 모델링: 쥐 방광에 암세포의 방광 내 투여 절차

방광내 점적은 수혜 동물의 방광으로의 암세포 전달을 촉진합니다. 시작하려면 마취된 암컷 마우스를 온열 패드 위에 누운 자세로 준비하여 체온을 조절합니다. 방광에서 소변을 비우십시오.

다음으로, 폴리-L-라이신 또는 PLL 용액이 들어 있는 주사기에 연결된 카테터를 조립합니다. 카테터 팁에 윤활유를 발라 요도가 원활하게 삽입되고 방광에 접근할 수 있도록 합니다. 삽입 후 PLL 용액을 방광에 천천히 주입합니다.

PLL의 느린 전달은 방광에서 요관과 신장으로 소변이 역류하는 방광요관 역류를 방지합니다. 조기 유출을 방지하기 위해 카테터에 마개를 놓습니다. 주입된 양전하를 띤 PLL 분자는 방광 내벽의 음전하를 띤 글리코사미노글리칸 코팅에 상호 작용하여 부착합니다.

카테터를 제거하고 결합되지 않은 PLL 용액과 소변의 방광을 비웁니다. 다른 카테터-주사기 어셈블리를 사용하여 냉각된 암세포 현탁액을 방광에 천천히 주입하여 방광 요관 역류와 그에 따른 신장에 세포 이식을 방지합니다. 카테터에 마개를 고정합니다.

글리코사미노글리칸층의 표면 전하가 변경되면 암세포와의 정전기 상호 작용이 향상되어 암세포의 접착이 촉진됩니다. 카테터를 제거하고 유착되지 않은 암세포와 소변의 방광을 비우십시오. 시간이 지남에 따라 방광 내에 이식된 암세포가 증식하여 원발성 종양을 형성합니다.

암컷 마우스가 마취되면 체중 10g당 0.1밀리리터의 Hartmann 용액을 복강내 주사하여 수분 공급을 제공합니다. 마취 중에 한두 시간마다 이것을 반복하십시오.

다음으로 멸균 안과용 연고를 양쪽 눈에 바릅니다. 필요에 따라 다시 바르십시오. 그런 다음 체온을 유지하기 위해 열 패드 위의 종이 타월 위에 마우스를 바로 누운 상태로 놓습니다. 다음으로 뒷다리를 테이프로 고정합니다. 이제 하복부에 부드러운 압력을 가하고 소변을 1.5밀리리터 튜브에 모으십시오.

그런 다음 멸균 PLL이 있는 1밀리리터 주사기를 넣고 바늘 탐침을 제거한 상태에서 24게이지 IV 카테터를 부착합니다. 카테터 끝에 윤활제를 바릅니다. 그런 다음 카테터를 요도에 삽입하고 겸자를 사용하여 방광으로 안내합니다. 저항이 느껴지면 중지하십시오. 그런 다음 방광요관 역류를 방지하기 위해 20초마다 10마이크로리터의 속도로 50마이크로리터의 PLL을 천천히 배출합니다.

이제 유출을 방지하기 위해 마개를 사용하여 카테터를 방광에 20분 동안 그대로 두십시오. 20분 후 카테터를 제거하고 하복부를 부드럽게 눌러 방광에서 내용물을 비웁니다. 그런 다음 1밀리리터 주사기를 사용하여 카테터에서 남은 내용물을 씻어냅니다.

이제 피펫팅으로 MB49-PSA 세포를 완전히 혼합하고 1밀리리터 주사기에 넣습니다. 카테터를 부착하고 이전과 같이 윤활유를 바릅니다. 이전과 같이 카테터를 방광에 삽입하고 20초당 10마이크로리터의 점진적인 분출을 사용하여 세포 주입을 시작합니다. 그런 다음 1시간 동안 기다리십시오.

한 시간 후에 카테터를 제거하고 방광에서 내용물을 비우십시오. 그런 다음 마우스를 놓습니다. 복부에 배치하고 아티파메졸 주사로 소생시킵니다. 이제 쥐가 흉골 누운 자세를 회복할 때까지 모니터링한 다음 홈 케이지로 돌려보냅니다.