DNA Aptamer-Thermolabile Ligand 상호 작용을 연구하기 위한 시차 주사 열량계

시차 주사 열량계는 리간드의 부재 및 존재 시 생체 분자를 변성시키는 데 필요한 열을 측정하여 생체 분자-리간드 상호 작용을 연구하는 데 도움이 됩니다.

시작하려면 유리 DNA 압타머(구조화된 단일 가닥 올리고뉴클레오티드)를 포함하는 참조와 열불안정한 리간드 결합 압타머를 포함하는 샘플을 채취합니다. 리간드는 압타머의 2차 구조를 안정화합니다.

용액을 가열하여 전방 스캔을 수행합니다. 용융 온도에 도달하면 자유 압타머가 변성됩니다.

리간드 안정화 압타머는 리간드에서 해리되어 상대적으로 높은 온도에서 변성되어 자유 압타머에 비해 용융 온도가 상승합니다. 고온에서 리간드의 하위 집합은 결합 친화력이 낮은 비가역적 2차 형태를 얻습니다.

다음으로, 압타머 구조를 회복하기 위해 용액을 냉각시켜 역스캔을 수행합니다. 낮은 온도에서 샘플의 초기 및 변환된 리간드가 압타머에 결합합니다.

두 번째 순방향 스캔 동안 변환된 리간드에 대한 약한 친화력으로 결합된 압타머는 초기 리간드 결합 압타머보다 낮은 온도에서 해리 및 변성되어 용융 온도의 하향 이동을 유발합니다.

연속적인 스캔을 통해 리간드는 계속해서 2차 형태로 전환되어 초기 형태가 완전히 고갈됩니다. 서모그램을 가져옵니다.

스캔할 때마다 리간드 결합 압타머의 용융 온도가 자유 압타머 쪽으로 이동하여 2차 형태의 약한 결합 친화력을 나타냅니다.

시차 주사 열량계(DSC)에 로딩하기 전에 탁상용 탈기 장치에서 완충액, 생체 분자 및 리간드 용액을 탈기합니다. DSC에서 압력 핸들을 풉니다. 그런 다음 작업 버퍼에서 실리콘 튜브를 실행하고 참조 모세관의 전면 플랜지에 부착합니다.

후면 참조 플랜지를 전면 샘플 플랜지에 연결하여 참조 모세관과 샘플 모세관 사이에 브리지를 만듭니다. 그런 다음 진공 라인이 부착된 폐기물 플라스크로 연결되는 후면 샘플 플랜지에 실리콘 튜브 조각을 부착합니다. 진공 라인을 켜서 200밀리리터의 작업 완충액으로 DSC를 세척합니다.

먼저

약 3-5cm 길이의 실리콘 튜브 섹션을 기준 모세관 플랜지에 부착합니다. 그런 다음 1밀리리터 피펫 팁을 후면 플랜지의 실리콘 튜브에 삽입합니다. 피펫으로 0.8밀리리터의 작업 완충액을 끌어당기고 완충액이 있는 피펫 팁을 전면 기준 플랜지의 실리콘 튜브에 삽입합니다.

피펫 플런저를 부드럽게 눌러 작업 버퍼가 전면 실리콘 튜브를 통해 기준 모세관으로 통과하고 후면 플랜지의 부착된 피펫 팁으로 위로 통과시킵니다. 작업