Name: 발달 연구를위한 윈도우 치킨 계란 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 1 s
Description: 배우세요 닭 계란 윈도우 기법을 신경생물학 실험에 활용하는 방법을. 배아 생존 시간을 연장하여 세포 운명 매핑 연구에 유용한 최적화된 프로토콜을 제공합니다.

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1. 인큐베이터에서 계란을 제거합니다 <ol><li> 37 ° C 유지 60% 위에 설정된 상대 습도. </li><li> 계란을 제거, 계란 90 ° 회전 큰 기지가 수평으로 놓여 있도록. </li></ol> 2. 면봉 계란 소독을 <ol><li> 70 % 에탄올과 비 멸균 거즈의 스택을 포화. </li><li> 5 달걀까지 면봉에 2 ~ 3 조각을 사용합니다. 거즈가 더러워진 경우 폐기하십시오. </li></ol> 3. 준비 횐자위 제거 사이트 <ol><li> 그냥 알부민이 밖으로 그려진 것입니다 지역을 보호하기 위해 기본 왼쪽 3M 플라스틱 테이프 1 &quot;X 1&quot;조각을 잘라 장소. </li></ol> 4. 횐자위 제거 <ol><li> 테이프의 중간에 작은 구멍을 만들기 위해 가위의 요점을 사용합니다. </li><li> 18 게이지 1 인치 바늘과 10 CC 주사기를 사용하면 천천히 가위에 의해 만들어진 구멍을 통해 바늘을 드릴. </li><li> 계란의 바닥을 향해 45 ° C 각도에서 바늘을 아래로 드라이브. </li><li> 중앙쪽으로 바늘을 기울이기 및 횐자위의 3-4 ML을 그립니다. </li></ol> 5. 윈도우 <ol><li> 플라스틱 테이프 3 &quot;X 3&quot;조각을 잘라 계란의 상단에 맞게 그것을 스트레칭. 너무 열심히 끌어 않도록 조심하고, 계란의 수평 표면의 둥근 끝을 주변 광장의 모서리를 확장합니다. 그것이없이 주름과 달걀의 표면에 대한 꽉되도록 테이프를 당겨. </li><li> 날카로운 직선 4 &quot;해부 가위의 쌍을 사용하여 테이프가 위치했던 지역의 하단 중앙에 구멍을 비꼬아. 천천히 안쪽에 대한 도움말을 계속해야되는 계란에 가위의 낮은 블레이드 안내 쉘은. 기본 향해 칼날을 직접 천천히 껍질을 잘라 시작합니다. 시계 반대 방향으로 방식으로 진행 그냥 맨 중심에 도달하기 전에 중지.만이 작은 비트까지 가위를 제거하고 반대 방향으로가는 반복 계란 첨부. 난자가 수정된 있는지 확인 확인은. 창을 닫아 남아있다. </li></ol> 6. 폐쇄 재개와 계란을 씰링. <ol><li> 넓은 비닐 테이프 &quot;2분의 1의 길이&quot;2-3에 대한 절단하고 절단했던 구멍으로 다시 맞는 있도록 창을 종료. 테이프의 다른 한 X 1 &quot;조각을 가지고 계란이 말라 버린하는 구멍을 밀봉. 모든 조작을 할 수있는 계란을 재개하기 위해 포셉의 한 켤레를 사용. 당신은 인큐베이터에 달걀을 반환하는 준비가되면, 한 조각 잘라 창문을 봉인하고 계란의 전체 수평 표면을 충당하기 위해 충분히 큰 테이프. </li></ol>

<ol><li>Cramer, K. S., Fraser, S. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 224, 138-151 (2000).</li>
<li>Cramer, K. S., Bermingham-McDonogh, O., Krull, C. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 269, 26-35 (2004).</li>
<li>Cramer, K. S., Cerretti, D. P., Siddiqui, S. A. Dev Biol. 295, 76-89 (2006).</li>
<li>Huffman, K. J., Cramer, K. S. Dev Neurobiol. 67, 1655-1668 (2007).</li>
<li>Krull, C. E. Dev Dyn. 229, 433-439 (2004).</li>
<li>Gerlach-Bank, L. M., Cleveland, A. R., Barald, K. F. Dev Dyn. 229, 219-230 (2004).</li>
</ol>

이 방법은 실험 조작에 따라 긴 생존 시간을 허용합니다. 예를 들어, 염료 라벨링 연구는 나중에 운명 매핑 연구 (1) E10 또는 생존을 허용했다. 또한, 그것은 유전자 발현 수준의 변경 및 나중에 발달 단계 (2-6)를 진행하는 데 필요한 개발을 제공 비켜 electroporation 연구에 사용되었습니다. 이 윈도우 기술은 배아에 조작 후 생존을 요구하는 절차와 함께 사용할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>회전 인큐베이터</td><td> </td><td>Profi</td><td></td><td>상대 습도를 60% 이상으로 설정하여 37&amp;deg; 도로 유지</td></tr><tr><td>70 % EtOH</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>거즈</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>3M 플라스틱 테이프</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>10cc 주사기</td><td> </td><td></td><td></td><td>알 1개당 1개</td></tr><tr><td>18G 바늘</td><td> </td><td></td><td></td><td>1&amp;#189; 인치 바늘, 주사기당 1개</td></tr><tr><td>해부용 가위</td><td> </td><td></td><td></td><td>4&quot; 예리한 직선형 날</td></tr><tr><td>수정란</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr></tbody></table>

발달 연구를위한 윈도우 치킨 계란

Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies

개발의 연구는 크게 실험 모델로 여자의 배아를 사용하여 주었되었습니다. 배아의 접근의 용이성은 여자 퀘일 chimeras 및 초점 염료 라벨 등 여러 방법을 사용하여 세포의 운명을지도하기 위해 실험에 사용할 수 있습니다. 또한, 그것은 단백질 코팅 구슬과 비켜 electroporation을 사용하여 플라스미드 DNA의 도입의 배치를 포함한 여러 종류의 분자 perturbations에 대한 수 있습니다. 이러한 실험은 중앙과 주변 신경 시스템의 개발에 중요한 데이터를 굴복했습니다. 이러한 연구의 많은 경우, 그것은 달걀 껍질을 열고 배아의 성장을 perturbing없이 reclose 필요합니다. 배아는 달걀 껍질을 다시 열어 연속 발달 단계에서 검사를하실 수 있습니다. 이 문서에서, 닭고기 계란을 열 몇 가지 훌륭한 방법이 있지만 우리는 긴 생존 시간에 대한 최적화된 한 가지 방법을 보여줍니다. 이 방법에서, 계란은 측면에 달려 있으며 작은 창이 껍질에 상처입니다. 실험 절차 후, 쉘은 개발 기간 동안 계란을 커버하는 데 사용됩니다. 달걀 껍질을 overlying 투명한 플라스틱 테이프는 배아를 보호하고 부화 기간의 남은 기간 동안 수화를 유지하는 데 도움이됩니다. 이 방법은 배양이 이틀 동안에 처음 사용되었으며, 성숙 배아 세를 통해 생존을 허용하고 있습니다.

배아의 접근의 용이성은 여자 퀘일 chimeras 및 초점 염료 라벨 등 여러 방법을 사용하여 세포의 운명을지도하기 위해 실험에 사용할 수 있습니다. 이 문서에서 우리는 긴 생존 시간에 최적화된있는 하나의 계란 준비 방법을 보여줍니다.

발생학 연구는 실험 모델로서의 병아리 배아 활용을 통해 큰 도움을 받아왔습니다. 배아의 접근 용이성은...

Kramer Lab에 오신 것을 환영합니다. 저는 캘리포니아 대학교 어바인 캠퍼스 신경생물학 및 행동학과의 Matt Korn입니다. 오늘은 비드 배치, 염료 주입 또는 ovum 내 탐색을 포함한 다양한 조작을 위해 닭 달걀을 준비하는 방법을 보여드리겠습니다.그럼 더 지체하지 않고 바로 시작하겠습니다. 먼저 알을 세척하겠습니다. 그 이유는 인큐베이터 안에 들어갈 수 있는 이물질이 많기 때문입니다.이 부분을 테이프로 밀봉하겠습니다. 윈도우를 통해 알에 접근할 때 작은 이물질이 들어가는 것을 방지하여, 배아를 꺼내고자 하는 시점까지 배아가 사멸할 가능성을 줄이기 위함입니다. 인큐베이터에서 보셨듯이, 알들은 넓은 쪽이 위를 향하도록 놓여 있습니다.이제 알을 옆으로 눕히겠습니다. 이렇게 하면 두 가지 효과가 있습니다. 첫째, 관찰창이 바로 이 위치에 오게 되며, 둘째, 배아가 위로 떠올라 다양한 조작을 수행할 수 있는 상태가 됩니다.이제 인큐베이터에 있던 랙에서 몇 개의 알을 꺼내 골판지 계란 홀더로 옮기겠습니다. 이것은 원래 알이 배송될 때 상자에 함께 들어있는 부품입니다. 오늘은 단순히 알을 받쳐두는 용도로 사용하겠습니다.이제 배치는 여러분의 선택에 달려 있습니다. 저는 언제든 모든 알에 접근할 수 있고 알들이 서로 닿지 않기 때문에 이 방식을 선호합니다. 혹시라도 금이 가서 헐거워진 알을 발견해 떨어뜨리더라도, 알들 사이에 어느 정도 간격이 있기 때문입니다.이제 거즈를 가져와서 이렇게 적당한 양을 쌓은 다음 두 개로 나눕니다. 여기에 70% alcohol을 사용하여 바닥 부분이 촉촉해지는 것이 느껴질 때까지 적십니다. 이 거즈 뭉치 전체를 사용하여 모든 알을 닦아낼 것이기 때문입니다.그러면 상단에서 몇 개를 떼어내어, 우선 상단 위주로 진행하되 결과적으로는 알 전체를 거의 다 감싸도록 하겠습니다. 이 작업이 끝나면 알코올이 상당히 빠르게 건조되므로, 바로 테이프를 붙일 수 있습니다. 테이프가 잘 밀착될 것이며, 한 세트 작업을 마칠 때쯤이면 보통 첫 번째 표본이 건조되어 알 준비의 다음 단계로 진행할 수 있습니다.다시 한번, 그것을 쓰레기통에 넣고 다음 단계로 넘어갈 준비를 하겠습니다. 이제 모든 달걀을 알코올로 닦아냈으므로, 달걀의 넓은 쪽인 하단부에 배출 구멍을 낼 수 있습니다. 이렇게 하면 알부민을 일부 추출할 수 있는데, 알부민을 추출하지 않으면 배아가 적절한 위치에 자리 잡지 못하기 때문입니다.어떠한 조작

windowing-chicken-eggs-for-developmental-studies

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

메추라기 - 병아리 키메라 배아에서 조류 신경 능선 세포의 마이 그 레이션 및 최종 운명을 분석을위한 접근 방법이 설명되어 있습니다. 이 방법은 unmanipulated 여자의 배아 내에 구별하기 어렵습니다 별도로 마이 그 레이션과 차별화하는 동안 신경 능선 세포를 추적하는 단순하고 간단 기법입니다.

크로스 종 이식에 의한 신경 크레스트 마이 그 레이션과 차별화 분석

이 비디오에서는 수정란의 난자를 열어 융모막막(chorioallantoic membrane) 또는 분지 혈관 네트워크를 운반하는 CAM을 노출시키는 기술에 대해 설명합니다. 노출된 CAM은 난자 종양 모델링에 사용할 수 있습니다.

Egg Windowing: 수정란 달걀 껍질을 열어 융모막막 혈관 구조를 노출시키는 방법

발달 중에 닭 배아를 보고 접근하는 것은 어려울 수 있습니다. 우리는 간단하고 비용 효율적이며 교실이나 연구 환경에서 쉽게 사용할 수 있는 ex ovo 방법을 개발했습니다. 이 방법은 배아가 배아 발달의 후기 단계로 들어갈 수 있도록 합니다(HH 40).

최적화 전 비켜 개발의 고급 단계에 병아리 배아의 배양

이 프로토콜은 조영제 강화 초음파 영상 및 마이크로버블 매개 약물 전달을 연구하기 위해 생체 내 모델로 5-8일 된 닭 배아와 융모막(CAM)을 획득하고 사용하는 방법에 대한 세 가지 방법을 설명합니다.

조영제 강화 초음파 영상 및 마이크로버블 매개 약물 전달 연구를 위한 생체 내 모델로서의 닭 Ex Ovo 배아 및 융모막 막 혈관의 준비

이것은 암 전이의 억제제 또는 드라이버를 위해 검열하는 효과적인 방법입니다. 발현 라이브러리로 변환된 세포는 전이성 콜로니를 형성하기 위해 닭 초리오알란토아막 혈관에 주입됩니다. 감소 또는 증가 된 침략을 갖는 식민지는 절제, 확장, 자신의 표현형을 확인하기 위해 재주입, 마지막으로, 높은 처리량 시퀀싱을 사용하여 분석.

신속하고 정량적인 병아리 Chorioallantoic 멤브레인 모델을 사용하여 전이성 레귤레이터의 발견

닭 배아는 고전적인 발달 모델로서, 다양한 환경 오염 물질에 노출 된 후 발달 심장 독성을 평가하기 위해 실험실에서 사용됩니다. 확립된 노출 방법 및 형태학적/기능 적 평가 방법은 이 원고에 설명되어 있습니다.

발달 심장 독성 평가에 강력한 도구로 닭 배아를 사용

인큐베이션되지 않은 상업용 육계 알을 활용하여 근육 발달과 성장에 영향을 미치는 천연 및 합성 화합물, 이 경우 니코틴 아미드 리보시드의 능력을 테스트하기 위해 난소 수유 연구 시험을 수행하기 위해 강력한 방법론이 개발되었습니다.

오보에서 상업용 육계 달걀 먹이기 : 근육 발달과 성장에 영향을 미치는 정확하고 재현 가능한 방법

침지된 비드 분석은 세포 분화 및 형태형성의 조절을 연구하기 위해 임의의 발달 시점에서 시험 시약의 표적화된 전달을 포함한다. 세 가지 다른 유형의 침지 된 구슬을 준비하고 닭 배아의 교차 숫자에 이식하기위한 모든 실험 동물 모델에 적용 가능한 상세한 프로토콜이 제시됩니다.

Soaked-Bead Assay를 사용한 닭 배아 발생 동안의 세포 분화, Morphogenesis, 및 패터닝 분석

우리는 표준 청각 뇌간 반응 (ABR) 기술을 사용하여 청각 기능을위한 조숙 한 조류 모델 인 부화 닭에 적용했습니다. 이 프로토콜은 동물 준비 및 ABR 획득 기술을 자세히 설명하고 다른 조류 또는 설치류 모델로 번역 할 수있는 단계를 설명합니다.

치킨 부화의 청각 뇌간 반응 평가

병아리는 다양한 연구를 위해 비용 효율적이고 접근 가능하며 널리 이용 가능한 모델 유기체입니다. 여기에서는 조류 내이 발달 및 재생의 기초가되는 분자 메커니즘을 이해하기 위해 일련의 프로토콜이 자세히 설명되어 있습니다.

조류 내이 발달을 연구하는 Ovo 및 Ex Ovo 방법에서

배우세요 닭 계란 윈도우 기법을 신경생물학 실험에 활용하는 방법을. 배아 생존 시간을 연장하여 세포 운명 매핑 연구에 유용한 최적화된 프로토콜을 제공합니다.

발달 연구를위한 윈도우 치킨 계란

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