October 1st, 2007
배아의 접근의 용이성은 여자 퀘일 chimeras 및 초점 염료 라벨 등 여러 방법을 사용하여 세포의 운명을지도하기 위해 실험에 사용할 수 있습니다. 이 문서에서 우리는 긴 생존 시간에 최적화된있는 하나의 계란 준비 방법을 보여줍니다.
Kramer Lab에 오신 것을 환영합니다. 저는 캘리포니아 대학교 어바인 캠퍼스(University of California Irvine)의 신경생물학 및 행동학과의 매트 콘(Matt Korn)입니다. 오늘은 구슬 배치, 염료 주입 또는 난자 탐색을 포함한 다양한 조작을 위해 닭고기 달걀을 준비하는 방법을 보여 드리겠습니다.
더 이상 고민하지 않고 시작하겠습니다. 자, 이제 달걀을 청소해 보겠습니다. 그 이유는 인큐베이터에 넣을 수 있는 많은 것들이 있기 때문입니다.
우리는 이것을 테이프로 밀봉할 것입니다. 우리는 난자를 채취하기 위해 창문이 어디를 돌아다니고 우리가 난자를 꺼내고 싶을 때쯤 배아가 죽을 확률을 높이는 것을 원하지 않습니다. 인큐베이터에서 보셨다면 알은 큰 면이 위를 향하도록 앉아 있습니다.
그래서 우리가 할 일은 달걀을 가져다가 옆으로 돌리는 것입니다. 그러면 두 가지 일이 발생합니다. 첫째, 우리의 창문이 바로 여기에 있을 것이고, 둘째, 배아가 위로 떠올라야 모든 유형의 조작을 할 수 있습니다.
그래서 저는 인큐베이터에 있던 선반에서 판지 계란 홀더까지 몇 가지를 여기에 제시할 것입니다. 이것은 실제로 계란이 배달될 때 상자에 들어 있는 조각입니다. 그래서 오늘은 달걀을 담기 위해 사용할 것입니다.
이제 준비는 당신에게 달려 있습니다. 나는 언제든지 모든 알에 접근할 수 있고 그들 중 누구도 서로 닿지 않기 때문에 이런 식으로 하는 것을 좋아합니다. 내가 헐거워진 것을 발견하고 균열이 있어 떨어뜨릴 경우를 대비하여 그들은 모두 서로 약간의 공간을 가지고 있습니다.
그래서 저는 계속해서 여기에 거즈를 가지고 이와 같은 멋진 스택을 꺼내 둘로 나눌 것입니다. 나는 여기에 70%의 알코올을 마실 것이고 바닥이 축축해지는 것을 느낄 수 있을 때까지 그것을 채울 것입니다. 그리고 그것은 제가 이 전체 스택을 사용하여 모든 계란을 면봉으로 닦을 것이기 때문입니다.
그래서 저는 위에서 몇 개만 떼어내고, 계속해서 정말로 위에서 할 것이지만 실제로는 여기에서 거의 전체 달걀을 둘러볼 것입니다. 그리고 이 작업이 끝나면 알코올이 꽤 빨리 마르고 나서 테이프를 붙일 수 있습니다. 테이프는 잘 붙고 세트를 마칠 때쯤이면 일반적으로 첫 번째 테이프가 건조되고 계란 준비의 다음 단계로 진행할 수 있습니다.
다시 휴지통에 넣으면 다음 단계로 넘어갈 준비가 된 것입니다. 자, 이제 모든 달걀에 알코올을 닦았으니 달걀의 큰 면, 즉 달걀의 바닥에 배수구를 만들 수 있습니다. 그리고 이것은 우리가 들어가서 알부민을 추출할 수 있게 해줄 것인데, 왜냐하면 우리가 알부민을 추출하지 않으면 배아가 제대로 앉지 않기 때문입니다.
우리는 어떠한 조작도 할 수 없습니다. 그래서 이것은 제가 칼날을 가지고 이 플라스틱 테이프를 가져가는 것과 관련이 있습니다. 약간의 탄력성이 있어 훌륭합니다.
우리가 원하는 것보다 조금 더 큰 구멍 위로 확장할 수 있을 뿐만 아니라 실제로 알 전체를 덮을 때 이것을 늘려야 합니다. 따라서 창문이 있을 영역은 완전히 덮여 있습니다. 그래서 저는 계속해서 이렇게 조각을 잘라낸 다음 약 밀리미터 스트립을 만들 것입니다.
그런 다음 이것으로 약 밀리미터 평방 조각의 테이프를 만들 수 있습니다. 그런 다음 이것에서 날짜 바로 위에 놓을 것입니다. 그냥 거기에 놓으면 볼 수 있습니다.
아주 잘 붙고 있습니다. 그런 다음 이미 만든 스트립으로 돌아와서 다른 밀리미터 테이프를 잘라낼 수 있습니다. 그리고 다시, 실제로 달걀의 맨 위인 숫자의 왼쪽에 놓으십시오.
이제 옆으로 돌렸으니 오른쪽에 있습니다. 그리고 여기에 한 가지 더 있습니다. 이제 장갑을 끼면 이 테이프가 장갑에 달라붙고 손을 씻었기 때문에 장갑을 끼지 않습니다.
나는 현재로서는 활성을 오염시키는 다른 것에 대해 정말로 걱정하지 않습니다. 그래서 저는 뾰족한 끝이 있는 가위를 가져갈 것입니다. 테이프를 놓은 중앙으로 가서 약간 깨질 때까지 시계 반대 방향으로 시계 방향으로 돌릴 것입니다.
그리고 거기에 작은 구멍이 있는 것을 볼 수 있습니다. 이제 구멍이 너무 클 필요가 없는데, 일단 이 주사기를 넣으면 구멍이 충분히 커지기 때문입니다. 하지만 이것은 우리가 바늘로 바로 들어가 달걀을 깨뜨리려고 하지 않도록 하기 위함인데, 왜냐하면 종종 그것은 달걀의 한 면이 완전히 부서지는 것으로 이어질 것이기 때문입니다.
그러면 우리는 더 이상 달걀을 사용할 수 없습니다. 자, 이제 달걀을 물기를 뺄 차례입니다. 측면에 멋진 작은 구멍이 있고 이 10밀리리터 주사기와 상당히 큰 게이지 바늘을 사용하여 알부민을 추출할 것입니다.
이제 저는 3-4밀리리터, 확실히 3 밀리리터 이상, 4 또는 5 밀리리터를 넘지 않습니다. 이렇게 하면 지금 맨 위에 있는 배아가 껍질에서 약간 떨어질 수 있습니다. 그러면 우리는 조작을 할 수 있을 것입니다.
그래서 45도 각도로 들어가면 노른자 아래에 있습니다. 그런 다음 오른쪽으로 약간 돌려서 그 아래로 살금살금 들어가면 바늘 끝이 달걀 바닥에 닿는 것을 느낄 수 있습니다. 그리고 저는 계속해서 3-4개 정도를 추출할 것이고 그것은 꽤 멋지게 나옵니다.
나는계속해서 그 알부민을 여기 내 허리 양동이에 넣고 이제 다른 난자를 계속할 수 있습니다. 자, 이제 계속하겠습니다. 그리고 여기에서 배수를 위해 만든 구멍이 제가 원하는 것보다 약간 크지만 괜찮은 것으로 판명된 것을 볼 수 있습니다.
내가 걱정하고 싶은 것은 바늘을 찔러 넣을 때 더 이상 바늘이 깨지지 않는다는 것입니다. 그래서 저는 그렇게 할 것입니다. 좋아, 그래서 나는 이미 계란에 약간의 균열이 있음을 볼 수 있습니다.
이제 작은 균열은 괜찮지만 난자의 다른 평면으로 확장될 때 걱정해야 합니다. 그리고 이 경우에는 그렇습니다. 구멍에서 볼 수 있습니다.
그것은 거의 정상까지 확장됩니다. 그리고 사실, 이것은 우리의 창문이 놓일 곳입니다. 그래서 불행히도 이 달걀에 대해, 우리는 이 달걀을 버려야 할 것입니다.
그리고 그것을 버리는 것에 대해 특별한 것은 없습니다. 특정 프로토콜이나 다른 것을 작성할 필요가 없습니다. 그냥 가서 쓰레기 통에 넣으려고 합니다.
우리는 이 검은 쓰레기통을 사용하여 동물 배설물로 지정하지만 그 외에는 이미 처리되었습니다. 다음 달걀로 넘어갈 수 있습니다. 자, 이제 모든 계란을 배수했으므로 배수구를 덮을 수 있습니다.
이것이 중요한 이유는 인큐베이터 내부를 들여다보지 않으면 알부민에 남아 있는 모든 것이 엄청나게 증발할 수 있기 때문입니다. 그리고 마른 달걀은 죽은 달걀입니다. 그래서 우리는 계속해서 거의 같은 크기의 테이프를 가져 와서 구멍 위에 놓으면 이 구멍에 다시 들어가는 것에 대해 걱정할 필요가 없습니다.
어떤 경우에는 난자에서 더 많은 알부민을 배출하기로 결정한 경우 난자가 열리면 이 구멍이 약간 밀폐된 영역 역할을 하여 바늘을 꽂을 수 있으며 많은 알부민을 잃지 않을 수 있습니다. 그래, 그렇지? 자, 이제 우리는 계속해서 멋진 크기의 테이프 조각으로 계란을 덮을 것입니다.
저는 이것을 풍선에 작은 핀을 꽂기 전에 풍선 위에 테이프를 붙이는 것에 비유합니다. 멋진 점은 풍선이 터지지 않는다는 것이며 이 경우 계란 위에 작은 테이프가 붙어 있습니다. 달걀은 여러 곳에서 깨지지 않고 창문을 밀봉한 다음 창문을 닫을 수 있는데, 테이프를 사용했기 때문에 창문이 닫히면 멋진 작은 밀봉이 만들어지고 증발에 대해 걱정할 필요가 없습니다.
보시다시피 테이프의 크기는 제가 지금까지 자른 것 중 가장 클 것 같지만, 그렇다고 해도 테이프를 조금만 늘리고 잡아당기고 약간의 장력을 가해 달걀 위에 올려놓을 것입니다. 그리고 저는 여기 뒤쪽으로 돌아와서 달걀 위에 아주 조심스럽게 펴서 창문이 있을 곳에 주름이 생기지 않도록 할 것입니다. 그리고 테이프를 약간 재설정할 수 있습니다.
그것은, 당신이 걱정해야 할 정도로 많이 달라붙는 것이 아닙니다. 한 번 막히면 멈춘다. 보시다시피 이 일반적인 영역은 제가 계속해서 창문을 자를 곳입니다.
자, 이제 모든 달걀에 테이프를 붙였으니 위에 있는 창문을 자를 수 있습니다. 이것은 가장 어려운 부분일 수 있으며 종종 대부분의 난자를 잃게 되는 곳입니다. 그래서 저는 알코올이 묻은 거즈로 가위를 잘 닦은 다음 말리기만 하면 됩니다.
알코올은 그 자체로 거의 건조되지만 알코올이 계란으로 바로 들어가는 것을 원하지 않습니다. 그래서 저는 테이프가 있는 곳의 중앙으로 가서 다시 시계반대 방향으로 약간 깨지는 소리가 들릴 때까지 시계 반대 방향으로 움직입니다. 그리고 나는 내 칼날이 들어갔다는 것을 알았다.
그런 다음 가위를 밖으로 옮겨서 달걀 표면에 거의 평평하게 닿도록 하고 싶습니다. 그런 다음 가위 전체를 넣을 수 있을 때까지 작게 잘라냅니다. 그리고 일단 반원을 돌고 나서 창문이 필요하기 때문에 원을 완성하고 싶지 않지만 그냥 가서 달걀을 열 수 있습니다.
그리고 지금 당장은 제가 예상했던 나이 정도인 것 같고, 혈관이 많지는 않지만, 배아가 주로 앉아 있는 곳 주변에 약간의 피가 있고, 혈액이 이제 시작되어 심장 박동이 사라졌습니다. 그래서 저는 그것을 닫을 것입니다, 그냥 그렇게 위에 놓아두었다가 다시 돌아와서 창문을 닫을 것입니다. 그리고 다시, 그저, 표면에 평평하게 놓고 반대 방향으로 뒤로 물러납니다.
자, 여기 거품이 몇 개 있는데 배아가 옆으로 치우쳐 있는 것으로 나타났습니다. 이제 우리가 지금 당장 할 수 있는 두 가지 일이 있습니다. 달걀이 많고 모든 달걀을 사용하는 것에 대해 걱정하지 않는다면 이것을 버릴 수 있습니다.
또는 우리가 할 수 있는 것은 창문을 닫고 배아가 우리가 다시 원하는 꼭대기까지 떠오르도록 설정하는 것입니다. 그리고 우리가 조작을 통해 그것에 도달할 때쯤이면 우리가 원하는 위치에 있을 수 있습니다. 그렇지 않은 경우 그 때 버릴 수 있습니다.
제가 여기서 한 것은 비스듬히 설정하는 것입니다. 약간의 알부민 유출이 있겠지만, 이는 배아가 원래 있어야 할 곳으로 돌아가는 데 도움이 될 것입니다. 자, 이제 우리는 이 모든 창문을 가지고 있으니, 우리는 창문이 닫혀 있는지 확인하고 조작을 하기 전에 창문을 닫
아야 합니다.그런 다음 난자를 다시 밀봉할 수 있습니다. 그러나 창문이 열려 있으면 때때로 멍에가 빠져나갈 수 있습니다. 한 방에서 다른 방으로 걸어갈 때 달걀이 조금만 기울어진다는 것을 알고 있다면 전체가 떨어지는 것을 원하지 않을 것입니다.
그래서 제가 하는 일은 또 다른 밀리미터 길이, 죄송합니다만, 밀리미터 너비, 아마도 3, 2, 3밀리미터 정도의 플라스틱 테이프 조각을 자르는 것입니다. 그리고 저는 그것을 중간에 두는 것을 좋아합니다. 그리고 내가 달걀 앞에서 그것을 당길 수 있다면, 그것은 그것을 단단하게 만듭니다.
그리고 창문이 어디에 맞는지, 다른 테이프가 어디에 있었는지, 창문을 자른 위치를 볼 수 있으며, 이번에는 창문을 잘 밀봉할 수 있습니다. 제 말은, 우리는 1분 안에 몇 가지 조작을 할 것이기 때문에 완전히 밀폐될 필요는 없습니다. 이것이 바로 난자를 준비하고 창문을 여는 방법입니다.
그러니 당신의 실험에 행운을 빕니다.
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이 기사는 신경생물학 실험에서 다양한 조작을 위해 닭 알을 준비하는 방법을 제시합니다. 이 기술은 긴 생존 시간을 위해 최적화되어 세포 운명 매핑 연구를 용이하게 합니다.
This method enables reliable access to chicken embryos for developmental studies, supporting target validation in neurobiology research. By optimizing survival times through a simple windowing technique, it reduces experimental variability and improves data consistency for mechanistic studies. The approach facilitates early-stage hypothesis testing in a disease-relevant system, enhancing predictive confidence in target engagement and pathway modulation.
The method fits within the early discovery continuum, supporting hypothesis generation and mechanistic exploration before lead identification. It enables reproducible preparation of embryos for downstream applications in screening and validation workflows.