Name: 와튼의 덕트를 통해 마우스 턱밑 침샘의 Cannulation (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: 배우세요 마우스 턱밑 침샘의 와튼 덕트를 통한 침샘 삽관술을 통해 줄기세포를 주입하는 방법을. 트리판 블루 염료를 사용하여 주입 과정을 시각화하고 침샘 재생 의학 연구에 활용할 수 있습니다.

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저자는 기술 상담을위한 박사 아나 Cotrim과 장비 Murshed 박사 Monzur에게 감사하고 있습니다. 이 작품은 부분적으로 건강 연구에 대한 캐나다의 연구소에 의해 투자되었다.

1. 절차 설명 <ol><li> Subcutaneously 혼합의 움직임을 방해에서 타액 분비물을 방지하기 위해 각각의 마우스에 1 μl / 0.5 MG / ML 황산 아트로 핀 일수화물의 g 체중을 (CAT # 11330, Fluka, 미국) 주사. </li><li> 100 MG / ML 케타민을 20 MG / ML xylazine (피닉스 과학, AR, 미국) 솔루션의 1g / μl 체중 각 마우스를 마취 주입 내부 복막 (IP) </li><li> 복부 위치에서 사용자 지정 만든 플라스틱 플랫폼에서 마우스를 장소 : 상악 incisors는 금속 와이어에 잠겨 있으며, mandibular incisors가 입을 잡고하기 위해 탄성 문자열에 매혹됩니다. </li><li> 0.58 mm 직경의 폴리에틸렌 튜브 (; 그림 2 고양이 # 427410, 백톤 디킨슨, MD, 미국) 안에 29 게이지 바늘 (CAT # 600145, 타이코 의료, MA, 미국)과 인슐린 주사기를 사용합니다. 폴리에틸렌 관은 29 게이지 바늘 끝 위에 5mm 삽입됩니다. 바늘은 와튼의 덕트에 폴리에틸렌 튜브를 이동하는 단단한 가이드로 사용됩니다. 폴리에틸렌 관은 덕트 내부 3-5mm를 삽입됩니다. 바늘이 덕트 외부 남아있는 동안에만 폴리에틸렌 관은 침샘에 덕트를 입력합니다. 바로 혀 아래에있는 와튼의 덕트를 통해 턱밑 글랜드로 필터링 0.4 % trypan 파랑 얼룩 솔루션 (CAT # 15250, Gibco, 미국)의 50ul를 주사. 주입은 주사기 피스톤에 긍정적인 압력으로 지속적으로 전달하고, 손가락은 주입의 모든 이후 내부 구두 주입의 역류를 방지하기 위해, 선 (腺)로 전달되었습니다도 피스톤에 남아 있습니다. trypan 푸른 솔루션은 기술을 입증하기위한 염료로 비디오에 사용됩니다. </li><li> fter trypan 푸른 솔루션의 주입은, 마우스 해부하기 전에 euthanized되었다. 침샘은 수술 얼마나 혼합의 실제로 선 (腺)에 남아있다 결정하기 위해 노출됩니다. </li></ol> 2. 대표 결과 : 약을 주입 후에, 마우스는 수술 후 cannulated 침샘을 폭로 해부했다. 이미지로 - 2에 표시, 와튼의 덕트의 어두운 착색은 trypan 파란색 솔루션이 성공적으로 주입다는 증거를 제공합니다. <img src="/files/ftp_upload/3074/3074fig1.jpg" alt="그림 1"> 그림 1. 마우스 턱밑의 글랜드의 Cannulation. <img src="/files/ftp_upload/3074/3074fig2.jpg" alt="그림 2"> 그림 2. 폴리에틸렌 튜브는 29 게이지 바늘 끝 주위에 쌌다입니다. 주사기 바늘은 와튼의 덕트에 폴리에틸렌 튜브를 이동하는 단단한 가이드로 사용됩니다. 폴리에틸렌 관은 덕트 내부 (cannulated) 3-5mm를 삽입됩니다. 바늘이 덕트 외부 남아있는 동안에만 폴리에틸렌 관은 침샘에 덕트를 입력합니다.

<ol><li>Fox, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acquired+salivary+dysfunction.+Drugs+and+radiation%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Acquired salivary dysfunction. Drugs and radiation.</a> Ann N Y Acad Sci. 842, 132-137 (1998).</li>
<li>Bhide, S. A., Miah, A. B., Harrington, K. J., Newbold, K. L., Nutting, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiation-induced+xerostomia%3A+pathophysiology%2C+prevention+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Oncol+%28R+Coll+Radiol%29%22%5BJournal%5D)">Radiation-induced xerostomia: pathophysiology, prevention and treatment.</a> Clin Oncol (R Coll Radiol). 21, 737-744 (2009).</li>
<li>Redman, R. S., Ball, W. D., Mezey, E., Key, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dispersed+donor+salivary+gland+cells+are+widely+distributed+in+the+recipient+gland+when+infused+up+the+ductal+tree%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech+Histochem%22%5BJournal%5D)">Dispersed donor salivary gland cells are widely distributed in the recipient gland when infused up the ductal tree.</a> Biotech Histochem. 84, 253-260 (2009).</li>
</ol>

모든 실험은 대학 동물 관리위원회의 승인 및 동물 관리에있는 캐나다 협의회의 지침에 따라되었습니다되었습니다.

이 cannulation 방법을 사용하여 어려움이 주입 솔루션의 역류를 방지하는 것입니다. trypan 블루 솔루션을 일시적으로 성공적으로 침샘으로 마이 그 레이션 경우에도, 타액 분비의 혼합을 방해하고 선 밖으로 trypan 파랑 솔루션의 역류가 발생할 수 있습니다. 예방 차원에서, 타액​​의 분비를 억제하기 위해 아트로 핀을 사용하는 외에, 폴리에틸렌 정맥은 와튼의 덕트와 혼합이 예금 후에 60 초 동안 개최 주사기의 피스톤에 유지됩니다. 이것은 주입 솔루션의 대부분이 선 안에 남아있게됩니다. 통상, 체계 응용 프로그램, 약물 / 세포 즉 정맥 주사 (IV)은 침샘에 재생을위한 임상 접근 방식으로 사용되었습니다. 정맥 주입 혼합은 약물 / 세포 중 일부만이 대상 분비로 마이 그 레이션 수 있도록, 전체 순환 시스템을 통해 여행을합니다. 이 전통적인 방법에 비해 cannulation 절차를 통해 약물 / 세포의 주입있는 로컬 응용 프로그램,, 귀밑샘 턱밑과 sublingua...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 유형 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 (옵션) </td></tr><tr><td> 아트로 핀 </td><td> 마약 </td><td> Fluka </td><td> 11,330 </td><td> 타액 분비를 억제하기 위해 </td></tr><tr><td> 케타민을 </td><td> 마약 </td><td> 피닉스 과학 </td><td></td><td> 진정 작용 </td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> 마약 </td><td> 피닉스 과학 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 폴리에틸렌 튜브 (0.58 mm 직경) </td><td> 튜브 </td><td> Intramedic PE - 10, 백톤 디킨슨 진단 시스템 </td><td> 427410 </td><td> 와튼의 덕트에 삽입하는 동안 조직 부상을 피하기 위해 바늘의 팁을 통해 삽입합니다. </td></tr><tr><td> 울트라 컴포트 인슐린 주사기 (29G 바늘로) </td><td> 주사기 </td><td> 타이코 헬스케어 </td><td> 600145 </td><td></td></tr><tr><td> 4퍼센트 trypan 파랑 </td><td> 얼룩 </td><td> Gibco </td><td> 15,250 </td><td></td></tr></tbody></table>

와튼의 덕트를 통해 마우스 턱밑 침샘의 cannulation

Cannulation of the Mouse Submandibular Salivary Gland via the Wharton's Duct

심한 침샘 hypofunction 자주 Sjögren 증후군과 암 치료를 위해 자신의 머리와 목 지역에서 치료 조사를받는 사람 환자에서 발견됩니다. 이러한 xerostomia (구강 건조), dysphagia (씹는과 삼키는 장애)와 같은 환자를 경험 현상 두 그룹 심각한 치과 카리 에스, 변경 맛, 오로 - pharyngeal 감염 (칸디다 증), mucositis, 통증과 불편함. . 침샘 하이포 - 함수의 치료를위한 재생 의학의 한 혁신적인 접근 방식은 RS 레드먼, E Mezey 외 2009 년 예측됩니다 줄기 세포가 직접 장애인의 기능을 되살리는에 강력한 방법으로 선 (腺)으로 cannulation로 입금 가능 기관. 아마도, 마이 그 레이션 외국 줄기 세포는 호스트 침샘의 일환으로 기능 선의 세포로 구분됩니다. 또한이 cannulation 기술은 임상 유전자 전송 어플 리케이션을위한 편법하고 효과적인 전달 방법입니다. 여기서 우리는 와튼의 덕트 (그림 1)를 통해 마우스를 턱밑 침샘에 cannulation 절차를 수행에 관련된 단계를 설명합니다. C3H 마우스 (찰스 리버, 몬트리올, QC, 캐나다)은 맥길 대학 동물 자원 센터에서 깨끗한 종래의 조건 하에서 보관되었습니다 본 실험을 위해 사용됩니다. 모든 실험은 대학 동물 관리위원회의 승인 및 동물 관리에있는 캐나다 협의회의 지침에 따라되었습니다되었습니다. 본 실험의 경우, trypan 파랑 솔루션은 29 게이지 바늘 폴리에틸렌 튜브 내부 쌌다과 인슐린 주사기를 사용하여 와튼의 덕트의 개통을 통해 선 (腺)으로 주입됩니다. 이후에, 마우스는 약을 성공적으로 선 (腺)으로 마이 그 레이션 것을 보여주기 위해 해부하는 것입니다.

와튼의 덕트를 통해 마우스 턱밑 침샘의 cannulation을위한 프로토콜이 설명되어 있습니다. 본 실험은 trypan 푸른 솔루션은이 기법을 효과적으로 타겟 선에 혼합을 제공하는 방법을 보여줍니다하고, 침샘의 재생을위한 잠재적인 약물 임상 / 세포 치료 등이 새로운 접근 방법의 신뢰성을 제안하는 다이로 사용됩니다.

와튼의 덕트를 통해 마우스 턱밑 침샘의 Cannulation

심각한 타액선 저하능은 쇼그렌 증후군 환자와 ... 부위에 치료적 방사선 조사를 받는 환자들에게서 빈번하게 발견됩니다.

모든 실험은 맥길 대학교 동물 관리 위원회의 승인을 받았으며, 캐나다 동물 관리 위원회의 가이드라인을 준수하였습니다. 본 실험의 목적은 워튼관(Wharton's duct)의 캐뉼라 삽입을 통해 마우스의 하악 하타액선으로 전구세포 또는 줄기세포를 전달하는 것입니다. 본 영상에서는 세포 주입을 시각화하기 위해 트리판 블루 용액을 염료로 사용하였습니다.타액선의 기능 저하는 쇼그렌 증후군과 두경부 암 치료를 위한 치료적 방사선 조사의 가장 흔한 부작용 중 하나입니다. 타액선의 기능 장애는 구강 점막 감염 및 치아 우식과 같은 치과 질환으로 이어지는 경우가 많습니다. 손상된 타액선 치료를 위한 재생 의학의 한 가지 혁신적인 접근 방식은 다음과 같습니다.줄기세포를 타액선 도관을 통한 캐뉼라 삽입으로 선 조직에 직접 주입하는 것은 손상된 선의 기능을 회복시키는 강력한 방법이 될 수 있으며, 이는 이식된 외래 줄기세포가 선 세포로 분화하여 타액선의 일부로 기능하기 때문인 것으로 추정됩니다. 본 영상에서는 워튼관(Wharton duct)을 통해 마우스 하악하타액선에 캐뉼라 삽입술을 시행하는 단계를 설명합니다. 본 실험에서는 29게이지 울트라 컴포트 바늘과 주사기를 사용하여 워튼관 개구부를 통해 트립판 블루 용액을 선 조직 내로 주입합니다.이어서, 주입액이 선 조직 내로 성공적으로 이동했는지 확인하기 위해 마우스를 해부합니다. 1단계로, 타액 분비로 인해 주입액의 이동이 방해받는 것을 방지하기 위해 0.5 mg/mL atropine sulfate monohydrate를 체중 1 g당 1 µL씩 각 마우스에 피하 주사합니다. 2단계로, 마우스를 진정시키기 위해 100 mg/mL ketamine과 20 mg/mL xylazine 혼합액을 체중 1 g당 1 µL씩 각 마우스에 복강 주사합니다.단계 3. 진정 과정 후, 마우스를 플랫폼 위에 놓습니다. 복와위 상태에서 입을 벌린 상태로 유지하기 위해 상악 절치를 금속 와이어에 고정하고 하악 절치를 탄성 끈에 겁니다.4단계에서는 ultra comfort 29 Gau 바늘과 시린지를 사용하여 여과된 0.4% Trian blue 용액을 혀 바로 아래에 위치한 Wharton 관을 통해 턱밑샘에 주입합니다. 바늘이 Wharton 관의 입구를 향하게 한 뒤, 관 내부로 진입시켜 용액을 주입합니다. 5단계입니다.캐뉼라 삽입 절차 직후, 주입액이 실제로 샘 내에 얼마나 남아 있는지 확인하기 위해 타액선을 외과적으로 노출시킵니다. 주입액을 주입한 후, 생쥐를 해부하여 캐뉼라가 삽입된 타액선을 외과적으로 노출했습니다. 이 이미지에서 볼 수 있듯이, Wharton관의 어두운 색상은 타액선 기능 저하 사례에서 trypan blue 용액이 성공적으로 주입되었음을 보여주는 강력한 증거가 됩니다.이 캐뉼라 삽입 절차를 통한 약물 및 세포의 주입과 같은 국소 투여는 귀하선, 악하선 및 설하선의 기능을 회복시키는 더 직접적이고 효과적인 방법으로 인식될 수 있습니다. 대표적인 결과에서 알 수 있듯이, 이 사례의 Trian blue 용액과 같은 주입물은 Wharton's duct를 통해 마우스 악하선에 성공적으로 전달되었습니다. 따라서, 본 캐뉼라 삽입 기술은 마우스 타액선의 재생 의학을 위한 신뢰할 수 있는 모델로 활용될 수 있습니다.향후 전망으로서, 이 절차는 임상 유전자 전달 응용을 위한 효율적인 방법이 될 수 있습니다. 본 시각적 논문이 타액선 재생 의학의 추가 연구에 관심이 있는 학생들과 연구자들에게 효과적인 도구로 활용될 수 있다면 큰 기쁨이 될 것입니다.

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이 원고의 목적은 마우스에서 이종 후두 이식을 수행하는 데 필요한 미세 수술 단계를 설명하는 것입니다. 후두 이식의 다른 동물 모델과 비교하여이 마우스 모델의 장점은 비용 효율성과 면역 학적 분석 및 데이터의 가용성입니다.

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배우세요 마우스 턱밑 침샘의 와튼 덕트를 통한 침샘 삽관술을 통해 줄기세포를 주입하는 방법을. 트리판 블루 염료를 사용하여 주입 과정을 시각화하고 침샘 재생 의학 연구에 활용할 수 있습니다.

와튼의 덕트를 통해 마우스 턱밑 침샘의 Cannulation

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