Name: 쥐 장간막의 Angiogenesis 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 30 s
Description: 배우세요 쥐 장간막 창을 이용한 혈관신생 분석 방법으로, 정량적 미세혈관 측정과 약물 효과 평가가 가능합니다. 이 기술은 암 전이 연구에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

연구의 대부분에 대한 재정 지원은 스웨덴의 의학 연구 협의회 (부여 5942)에 의해 제공되었다.

1. 동물 <ol><li> 이러한 쥐, 마우스, 그리고 기니 돼지와 같은 작은 설치류 동물은, 동물 모델로 사용되었습니다. 불행히도, 성인 마우스 (많은 마우스 변종이 평가되었습니다)는 신뢰할 수 쥐를 이용하여 연구를하게하는 그들의 mesenteric 창 내에서 잠재력 - 부모 microvessels만이 매우 낮은 숫자 (angiogenesis의 발원지 수있는)이 부족하거나 필요한 경우가 많다. 따라서 분석은 주로 쥐를 위해 개발되었습니다. </li><li> 개종에서 인도 다음과 같은 최소한 7 일 동안의 표준 환경을 acclimatized하는 쥐는, 일반적으로 물, 알약을 무료로 이용할 수있는 12 시간 어둠 / 빛이주기에 따라 표준 새장에 쌍 안에 보관되어있다. 각 동물이 표시됩니다. 다양한 브리 더스에서 얻은, 우리는 주로 젊은 성인 쥐 (세 5-6주 미만 쥐의 기본 microvessels의 숫자는 낮은 경향이 일반적으로 7-10 다양한 변종이 세 주지만, 일반적으로 남성 스프 라그 - 돌리 쥐)을 사용합니다. 이전 실험과 실험을하는 동안에 기간에서 동물은 매초마다 일 무게, 항상 희생 당일에 있습니다. 동물 동시에 IP 취급하는 경우 (angiogenesis의 유도를 위해, 아래 참조)과 SC 또는 IV 또는 PO, 그들은 매일 무게입니다. 이것은 실험의 시작 동등 체중의 실험 및 통제 집단의 설립을 가능하게하고, 실험 과정 중에 신체 - 체중 증가에 대한 치료의 영향의 모니터링을 허용합니다. 성인 남성이 쥐가 생리학적으로 견고하게 성장 이후 (변형의 종류에 따라 주당 약 40~60그램을 확보), 무게 이득 지체는 민감한 대체 웰빙 체계 독성의 마커, 거식증, 그리고 번창하고 실패합니다. </li></ol> 우리는 높은 수준 동물 보호 시설에서 업무와 상당한 노력이 동물에 의해 경험 스트레스의 수준을 최소화하기 위해 만들어집니다. 현재 윤리 지침은 워크맨 P. 외 설립들을 수 있습니다. (암 연구에 동물의 복지 및 사용에 대한 지침. 브랜치 도서관. J. 암 102, 1555년에서 1577년까지, 2010). 고튼버그 대학의 동물 윤리위원회는이 연구를 승인했습니다. 2. 프로 - angiogenic Intraperitoneal 치료 <ol><li> 테스트하는 후보 프로 angiogenic 요인이 해소 및 환자의 주입에 사용되는 내독소없는 호수에 희석된다 (도 매우 낮은 수준, 내독소는 프로 angiogenic입니다.) 모든 솔루션은, 주사 당일, 멸균 필터링 (Millipore 0.22 - μm의 여과)에 갓 만든 중성 PH (7.1-7.3)를 확인하고, 실온에서 사용됩니다. 테스트 에이전트 낮거나 매우 낮은 농도로 주입됩니다. 예를 들어, 쥐의 rVEGF 164 (564-RV/CF, R &amp; D 시스템 유럽, 회사, 옥슨, 영국) 지배 VEGF - A 쥐에 이소형이다, 냉동, 내독소없는 호수에서 96 pmole / ML로 희석합니다 그리고 해동 5 ML의 볼륨은 쥐를에 IP 주입니다. 우리는 IP 사출을위한 0.8 - mm 바늘 (녹색 바늘, 21G)과 5 - ML 주사기를 사용합니다. 월요일 아침 (주 0)부터 금요일 오전 (주 4) 4.5 일, 즉. 매일 두 번 주어진이 치료, 주변 일 21 peaking, mesenteric 테스트 조직에 강력한 돋아 angiogenesis 응답을 유도. 솔루션 IP를 관리하면 전체 볼륨이 복막 캐비티 (아니라 창자, 방광이나 다른 장기로)로 전달됩니다 보장합니다. 5 ML의 급속한 주입은 액체 제트의 복강에 복벽 통과되었다는 운영자에 의해 촉각 확인하실 수 있습니다. 다음, 이전의 IP 프로 angiogenic 치료 또는 동시에, 선택의 테스트 에이전트 systemically 시행하실 수 있습니다. </li></ol> 3. Angiogenesis - modulating 에이전트의 체계적 Administation <ol><li> IP 치료 강한 프로 - angiogenic 반응을 초래할 수있는 테스트 조직에서 마스트 세포를 활성화하여 염증이나 가능성의 유도를 통해 지속 angiogenic 반응에 영향을 미칠 수 있으므로 IP 경로 이외의 경로는 사용할 수 있습니다. 구두 관리 또는 단일 사출 SC 또는 IV 게다가, 우리는 종종 두 개 또는 몇 주 최대 일정한 속도로 솔루션을 제공합니다 (하나 이상의, 볼륨 변화와 시간을 양수 포함) 삼투 minipumps를 사용하여 SC 관리를 사용합니다. </li><li> 시험 요원의 지속적인 피하 주입 삼투 minipumps의 필링 및 주입 Alzet 삼투 펌프, 마운틴 뷰, CA, 보통 5 일, 즉, IP VEGF 처리, 삼투 minipumps (예를 들어, 모델 2ML2, 14-15일에 대한 5.0 μl / h의 일정한 펌핑 속도의 끝 이후에 하루에 미국)은 테스트 에이전트 또는 해당 차량과 무균 조건 하에서 채워지게된다. 37 무균 0.9 % (W / V) NaCl 하룻밤에 저장 후 ° C, 펌프 (들) 수술 (척추 colu의 측면에 실려 SC 이식 아르isoflurane 가스 (Isoba 수의사 사용 anesthetized되었습니다 쥐의 scapulae의 지역에서 MN); 밀폐 투명 챔버에서 초기 셔링 - 플로 동물 건강, 머크 &amp; 주식 회사, 주식 회사, 화이트 하우스 스테이션, 뉴저지, 미국)와 후 마스크를 통해 (그것이 재사용되기 전에 다음과 같은 동물에 의한 스트레스를 최소화하기 위해, 의회는 공기와 플러시됩니다.) 펌프 주입을 위해 만든 피부 절개는 즉시 사후 주입 실크 스레드를 사용하여 봉합합니다. 동물 실험 기간 동안 생리학 체중이 증가하고 테스트 에이전트가 일정한 속도로 관리되기 때문에, 체중의 kg 당 시험 약물에 대해 선택한 실제 복용량은 주입 기간의 시작 부분에 평균 복용량보다되며 낮은 주입 기간의 끝에 평균 복용량보다. 여기에 설명된 연속 주입은, metronomic 치료의 확장된 형태로 볼 수 있습니다. </li></ol> 4. 실험 종료 <ol><li> 한 번에 한 동물은 급속하게 동물을 죽이고, CO 2 가스와 플러시하는 투명한 밀폐 챔버에 배치됩니다. 챔버 다시 사용되기 전에 공기와 플러시됩니다. </li></ol> 5. 수확 조직 샘플 <ol><li> DVD에 표시된 바와 같이, 복벽가 열립니다와 작은 창자 장간막이 ileo - cecal 밸브 (소장과 대장의 교차점)에 도달 가장 말초 부분을 포함하여 식별됩니다. 가장 distally있는 &quot;창&quot;의 네 (또는 이상) 번호와 객관적인 표준 치료 Superfrost 플러스 - 슬라이드 (DAKO 덴마크 A / S, Glostrup, 덴마크)에 전염됩니다. 이러한 자료가 아닌 구체적으로 물들일 수 있으므로이 microvessels의 후속 immunohistochemical 시각화를 무효화하지 않습니다하지만 그것은, 가능하면 혈액, 굿 내용이나 체액이 묻어있는 샘플을 오염, 방지하는 것이 중요합니다. </li><li> 연결된 작은 굿 세그먼트와 각 mesenteric 윈도우 표본은 슬라이드에 전파하고 20 분 실온에서 건조합니다. 그대로 막의 장간막의 표본은 오랜 시간 동안 -20 ° C에서 저장하는 동안 다음, 창자 그루터기는 차단됩니다. 이것은 DVD에 표시됩니다. </li></ol> 이것은 조직과 특허 vasculature가 전송된 빛을 intravital 현미경과 수확하기 전에 시각 수 언급해야합니다. 6. Microvessels의 Immunohistochemical 스테 이닝을위한 프로토콜 <ol><li> 주 영 표본은 1 시간 60 ° C에서 캐비닛에 건조 상온, -20 ° C에서 해동하도록 허용하고, 밤새 실온에서 보관됩니다. </li><li> 1 일 얼룩 병 속에 슬라이드 홀더 (매초마다 트랙) 얼룩에 슬라이드를 삽입하고 실온에서 10 분 TBS (산도 7.8)로 두 번 씻는다. 솔루션은 폐기하고 다음 솔루션으로 교체하고, 그래서 다음과 같은 모든 단계에 있습니다. </li><li> 트립신 처리 트립신 용액 (25 ° C 20 분)로 얼룩 슬라이드 홀더 항구됩니다 얼룩 용기를 채우십시오. 솔루션을 삭제하고 2.5 %의 자당 솔루션 (각 시간을 10 분 동안 실내 온도)와 두 번 품어. 솔루션을 삭제하고 아쿠아 dest 안에는 시간 (몇 분 각 실온)의 몇 린스. </li><li> 블로킹 0.5 % 메탄올에서 H 2 O 2 (30 분 실내 온도)와 얼룩 슬라이드 홀더 항구됩니다 얼룩 용기를 채우십시오. 솔루션을 삭제하고 아쿠아 이명 령 (몇 분 동안 실내 온도)와 헹굼. 솔루션을 삭제하고 TBS (산도 7.4) (각 시간 팔분을위한 실내 온도)와 두 번 헹굼. </li><li> 잠복 모든 incubations 실온에서 humidified 챔버에 있습니다. 아래의 솔루션을 각각의 약 150 μl은 슬라이드마다 사용됩니다. 슬라이드는 humidified 챔버에 배치되며 솔루션은 표본 (비 막의 부분은 솔루션이 적용 될 필요가 없습니다)에 pipetted 있습니다. 이후 솔루션이 추가되기 전에 다음과 같이 각각에 대해 신중하게 솔루션을 모두 지워. <ol><li> 일반 (차단) 혈청 (호스) (ABC 키트) 3 부화는 노란색 솔루션 / 20 분 10 ML 희석 버퍼를 방울. </li><li> 쥐의 혈관 내피 세포를 라벨 차 항체 ARU0181와 부화. 항체는 희석 버퍼 (Biosource) (100 μl 희석 40 배 [냉동] 플러스 900 μl 희석 버퍼)와 부화와 1:600​​ 희석는 4 박 이루어진다 ° C. </li></ol></li><li> 날 2 슬라이드가 humidified 챔버에서 제거됩니다, 기본 항체가 삭제되고 슬라이드는 얼룩 용기에 빠져들와 TBS와 함께 두 번 씻어서있는 얼룩 슬라이드 홀더에 배치됩니다팔분에 대한 (산도 7.8). <ol><li> biotinylated 항체와 배양 (ABC 키트) 슬라이드는 humidified 챔버에 수평으로 배치 및 파랑 솔루션 / 30 분 10 ML 희석 버퍼 1 방울과 함께 incubated 있습니다. 솔루션을 삭제하고 얼룩 용기에 빠져들 얼룩 슬라이드 홀더에 슬라이드를 삽입 8 분 TBS (산도 7.4)로 두 번 헹굼. </li><li> ABC 시약과 인큐베이션 슬라이드 다시 humidified 챔버에 수평으로 배치됩니다 다음과 같은 솔루션은 표본의 막의 부분에 pipetted 위치 : 오렌지 용액 2 방울 플러스 30 분 브라운 솔루션 / 10 ML TBS (산도 7.4) 2 방울. 삼십분 사용하기 전에 신중하게 믹스! 솔루션을 삭제하고 얼룩 용기에 슬라이드 홀더에 슬라이드를 삽입 8 분 TBS (산도 7.4)로 두 번 헹굼. </li></ol></li><li> DAB로 얼룩 (0.05 %) 이 단계는 통풍이 화학 후드에서 수행되어야합니다! 슬라이드를 삽입하고 3,3 - diaminobenzidine (DAB, 시그마 - 알드리치) 추가 피펫을 사용하여 솔루션 : TBS에서 0.1 %의 DAB 솔루션 (산도 7.4) [냉동] 10 μl H 2 O의 혼합물로 1시 1분를 희석합니다 2 7.5 ML TBS (산도 7.4). 이 솔루션은 단지 사용 (미세 사진을 가리 수있는 입자를 제거하기 위해)하기 전에 무균 - 필터링합니다. 팔분에 대한 표본 얼룩. 솔루션을 삭제하고 얼룩 용기에 빠져들 얼룩 슬라이드 홀더에 슬라이드를 놓으십시오. 몇 분 동안 아쿠아 dest 안에는 다음 수돗물을 실행하고 아래 린스. </li><li> 탈수 슬라이드는 얼룩 슬라이드 홀더에 보관됩니다. 폐기로 씻어 아쿠아 이명 령 / 에탄올을 포함하고있는 얼룩 병 충진 : 각 솔루션에 이분과 함께, 아쿠아 이명 령, 70 % 알코올, 95 % 알코올, 절대 알코올. </li></ol> 7. 혈관 내피 세포의 스테 이닝 Immunohistochemical 후 이미징 및 각 Mesenteric 창 표본에서 Microvascular 네트워크를 평가 으로 영화에 나타난 microvessels는 미세 손상 조직의 현장에서 시각입니다. <ol><li> 첫째, 우리는 흰 종이에 연필 14에서 34 (와일드 Leica M 3Z)에 배율 범위 전체 창 지역뿐만 아니라, mesenteric 창 당 전체 vascularized 지역 (VA)을 그림 현미경을 사용합니다. VA는 전체 면적의 백분율로 쉽게 컴퓨터 또는 비 전산 planimetry (또는 단순히 전체 윈도우의 이미지 및 모든 vascularized 부품의 이미지를 밖으로 절단 및 가중치에 의해)을 사용하여 측정됩니다. </li><li> 를 사용하여 쉽게 확인할 수 있습니다 또 다른 그림 현미경, 개별 microvessel의 프로필, 무작위로 선택된 분야 내에서 80 배율에서 하얀 종이 위에 검은 잉크로 그려져있다. 이것은 기본적 microvascular 밀도의 측정이다 microvascular 길이의 후속 컴퓨터 morphometric 평가 (MVL)에 대한 출발점이 될 것입니다. </li><li> 선택, microvascular 패턴 형성에 관련된 변수뿐만 아니라 개인 microvascular 콩나물 (제 SP와 르. SP, 각각)의 microvascular 콩나물과 길이의 숫자의 평가에 대한 것과 같은이 결정하실 수 있습니다. 묘사된 검은 선박 구조와 흰 배경 대부분의 상용 morphometric 컴퓨터 프로그램의 이미지에 대한 자세한 분석을 용이 사이 최적의 명암. </li><li> 대부분의 경우, 주요 변수가 함께 곱한 때 총 microvascular 길이 (TMVL)를 생성 VA과 MVL입니다. </li></ol> 8. 통계 분석 우리는 일반적으로 unpaired (2 꼬리) 관찰 분석하는 표준이 아닌 파라메 트릭 만 - 휘트니 U - 테스트를 사용합니다. 동물 당 4 개의 mesenteric Windows의 의미는 mesenteric 윈도우의 각 변수의 데이터 포인트 독립으로 사용됩니다. 통계적 중요성에 대한 기준은 P가 ≤ 0.05입니다.

<ol><li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+models+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">In vivo models of angiogenesis.</a> J. Cell. Mol. Med. 10, 588-612 (2006).</li>
<li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+testing+with+angiogenesis+models%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin.+Drug.+Discov%22%5BJournal%5D)">Drug testing with angiogenesis models.</a> Expert Opin. Drug. Discov. 3, 533-549 (2008).</li>
<li>Norrby, K., Jakobsson, A., Sorbo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mast-cell-mediated+angiogenesis%3A+a+novel+experimental+model+using+the+rat+mesentery%5BTitle%5D)+AND+%22Virchows+Arch.+B+Cell.+Pathol.+Incl.+Mol.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Mast-cell-mediated angiogenesis: a novel experimental model using the rat mesentery.</a> Virchows Arch. B Cell. Pathol. Incl. Mol. Pathol. 52, 195-206 (1986).</li>
<li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mast+cells+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22APMIS%22%5BJournal%5D)">Mast cells and angiogenesis.</a> APMIS. 110, 355-371 (2002).</li>
<li>Albertsson, P., Lennernas, B., Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+meteronomic+chemotherapy%3A+modulation+of+angiogenesis+mediated+by+VEGF-A%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Oncol%22%5BJournal%5D)">On meteronomic chemotherapy: modulation of angiogenesis mediated by VEGF-A.</a> Acta Oncol. 45, 144-155 (2006).</li>
<li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+apo-lactoferrin+enhances+angiogenesis+mediated+by+vascular+endothelial+growth+factor+A+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vasc.+Res%22%5BJournal%5D)">Human apo-lactoferrin enhances angiogenesis mediated by vascular endothelial growth factor A in vivo.</a> J. Vasc. Res. 41, 293-304 (2004).</li>
<li>Norrby, K., Mattsby-Baltzer, I., Innocenti, M., &amp, T. uneberg, S, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orally+administered+bovine+lactoferrin+systemically+inhibits+VEGF%28165%29-mediated+angiogenesis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Orally administered bovine lactoferrin systemically inhibits VEGF(165)-mediated angiogenesis in the rat.</a> Int. J. Cancer. 91, 236-240 (2001).</li>
<li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-molecular-weight+heparins+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22APMIS%22%5BJournal%5D)">Low-molecular-weight heparins and angiogenesis.</a> APMIS. 114, 79-102 (2006).</li>
<li>Norrby, K., Nordenhem, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dalteparin%2C+a+low-molecular-weight+heparin%2C+promotes+angiogenesis+mediated+by+heparin-binding+VEGF-A+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22APMIS%22%5BJournal%5D)">Dalteparin, a low-molecular-weight heparin, promotes angiogenesis mediated by heparin-binding VEGF-A in vivo.</a> APMIS. 118, 949-957 (2010).</li>
<li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basic+fibroblast+growth+factor+and+de+novo+mammalian+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc.+Res.%22%5BJournal%5D)">Basic fibroblast growth factor and de novo mammalian angiogenesis.</a> Microvasc. Res.. 48, 96-113 (1994).</li>
<li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+endothelial+growth+factor+and+de+novo+mammalian+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc.+Res%22%5BJournal%5D)">Vascular endothelial growth factor and de novo mammalian angiogenesis.</a> Microvasc. Res. 51, 153-163 (1996).</li>
<li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvascular+density+in+terms+of+number+and+length+of+microvessel+segments+per+unit+tissue+volume+in+mammalian+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc.+Res%22%5BJournal%5D)">Microvascular density in terms of number and length of microvessel segments per unit tissue volume in mammalian angiogenesis.</a> Microvasc. Res. 55, 43-53 (1998).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

분석은 1986 3 도입되었으며 연속 더욱 개발하고 우리 연구실 7,10-12에서 세련되었습니다. 으로 검토 서류 (초대) 1, 2에서 논의, 분석, 특히 같은 성인 테스트 조직과 같은 중요한 기능에 관해서는 생체내의 angiogenesis 분석의 다른 포유 동물과 잘 비교 기본적으로 vascularized하고 physiologic angiogenesis 부족, 최소한의 외상있는 경우입니다 조직에 쏜, 진정으로 양적 변수는 측정, 투약 - 반응과 분자 - 활동 연구에 관한 소리가 통계 분석을 허용하는, 돋아 angiogenesis는 정상 조직과 종양에 predominating되는 발생 및 독성 데이터는 쉽게 견고하게 성장 쥐에 축적 아르 생리학 성인 인치 이 생쥐에 대한 거의 적합 것을하고, 그것이 real-time/serial 관찰을 허용하지 않는, 불리한 기능은 개별 microvessel 세그먼트와 microvessel 콩나물의 수와 길이를 평가 특히 분석은 비교적 시간이 많이 걸리는있다는 사실을 포함할 수 생쥐 많은 mesenteric Windows가 잠재적인 부모 microvessels 부족 이후 새로운 모세 혈관이 발생한 수있는. 실시간 관찰은, 그러나 동물로 1 anesthetized 논의 중에 exteriorized지만 그대로 mesenteric Windows가 현미경 단계에 걸쳐 splayed 아르 intravital 현미경으로 활성화되어 있습니다. angiogenesis 연구에 큰 진보는 그러한 유용하지만, 궁극적으로 제한 도구 각막 micropocket, 병아리, chorioallantoic 막, 그리고 SC Matrigel 플러그 assays, 같은 모델을 사용하여 과거 수십 년간에 달성되었습니다. 안티 angiogenic 및 프로 angiogenic 요법의 미래 임상 응용 프로그램은 설치와 같은 현재의 보고서에서 설명한 것과 같이 더 민감하고 생물학 관련, 정말 양적 사전 임상 모델의 유효성 검사를 할거에요.

버퍼 및 시약 0.5 M 트리스 - HCL (산도 7.8) 주식 솔루션 트리스 (히드록시 메틸) aminomethan는 (60.57 g) ~ 900 ML 아쿠아 dest 안에는 해산되고 25% HCL (집중)의 ~ 45 ML은 아쿠아 이명 령과 1리터로 희석하여 다음 산도 7.8를 달성에 추가됩니다. 트리스 버퍼 호수 (TBS, 산도 7.8) 주식 솔루션의 200 ML은 18g NaCl 아쿠아 이명 령과 2리터로 희석하여 다음 주식 솔루션을 사용하여 7.8으로 산도의 조정과 함께 ~ 1800 ML 아쿠아 dest 안에 녹아 추가됩니다. TBS (산도 7.4) 주식 솔루션의 200 ML은 아쿠아 이명 령과 2리터로 희석하여 다음 주식 솔루션을 사용하여 7.4으로 산도의 조정과 함께 ~ 1800 ML 아쿠아 dest 안에 용해에 녹아 18g NaCl 추가됩니다. 트립신 용액 (0.05 % 트립신, 0.1 % CaCl 2) 200 ML TBS (산도 7.8)에 0.1 g 트립신과 0.2 g CaCl 2를 포함합니다. 자당 솔루션 2.5 % 200 ML TBS (산도 7.8)에 5g의 자당을 포함합니다. TBS의 1 % 나트륨 azide (산도 7.4)의 주식 솔루션 TBS (산도 7.4) 100 ML에 1g 나 - azide를 포함합니다. 0.1 % BSA, 0.01 % 나 - azide : 버퍼를 Diluting (Vectastain ABC 키트에 항체를 희석하는 데 사용됩니다.) TBS (산도 7.4) 100 ML에 희석, 0.1 g 소 혈청 알부민 (BSA), 1 % 나 - azide 1 ML을 포함합니다. ABC 키트 Vectastain PK 4002, ABC 퍼옥시데이즈 마우스 IgG 정상 말 혈청, 차단 혈청, 노란색 솔루션 : 3 drops/10 ML 희석 버퍼. Biotinylated 항체, 안티 - 마우스 IgG, 푸른 솔루션 : 1 drop/10 ML 희석 버퍼. ABC - 시약 : 오렌지 용액 2 방울 플러스 갈색 솔루션이 drops/10 ML TBS (산도 7.4). 이십분 사용하기 전에이 솔루션을 믹스! 마우스 (단클론) 안티 쥐 내피 (Biosource 국제, 카말리오, CA, 미국) <table border="1"><tbody><tr><td> 카탈로그 # </td><td> ARU0181 </td></tr><tr><td> 클론 # </td><td> MRC OX - 43 </td></tr></tbody></table> 이 항체는 두뇌에 그를 제외하고, 쥐의 모든 혈관 내피 세포에 대한 감독입니다. Vectastain 퍼옥시데이즈 아비딘 비오틴 콤플렉스 (ABC) 키트 키트는 일차 항체, biotinylated 이차 항체, 아비딘 - biotinylated 효소 복합 (ABC), 그리고 효소 기판이 포함되어 있습니다. 참조 <a href="http://www.vectorlabs.com/">www.vectorlabs.com</a> 또는 <a href="http://www.immunkemi.se/">www.immunkemi.se를</a> 프로토콜. 소 혈청 알부민 (BSA) (시그마 - 알드리치, 카탈로그 # A - 4503). DAB = 3,3 &#39;- Diaminobenzidine Isopac (시그마 - 알드리치, 카탈로그 # D 9015). 보빈 췌장 (시그마 - 알드리치, 카탈로그 # T 4665)에서 트립신. Vectastain 퍼옥시데이즈 ABC - 키트, 마우스 IgG (Immunkemi F &amp; D AB, Jarfalla, 스웨덴)

쥐 장간막의 angiogenesis 분석

Rat Mesentery Angiogenesis Assay

성인 쥐 장간막 창 angiogenesis 분석은 생물학적으로 적합하고 매우 잘 생체내에 angiogenesis를 돋아의 연구에 적합, 인간 종양이 아닌 종양 조직에서 angiogenesis의 지배 형태로 초대 검토에서 논의 [검토 서류를 참조] 서류 1,2. 프로 angiogenic 요인의 intraperitoneal (IP) 주입에 의해 막의 mesenteric 부품에 유도 Angiogenesis은 피하 (SC), 정맥 주사 (IV) 또는 구두 (PO) 선택 수정 에이전트와 치료에 의해 변조된 수 있습니다. 장간막의 각 막의 부분은 그것을 윈도우와 같은 외관을주는 반투명 및 지방 조직에 의해 누명을 것입니다. 분석은 다음과 유리한 특징이 있습니다 (I) 시험 조직 띄엄띄엄이라도 기본적으로 vascularized이며, 매우 얇은이기 때문에, microvessel 네트워크는 전체 네트워크가 현장에서 미세 평가 수있는, 거의 2 차원이며 ( II) 성인 쥐에서 테스트 조직은 대부분의 정상 성인 포유 동물 조직을 특징 짓는 중요한 physiologic angiogenesis를 부족, 기본 vascularization의 정도는, 그러나, 같은 1 논의 나이 상관이며 외상에서 비롯된 angiogenesis의 (3) 무시할 수준 높은 감도를 보장하며, angiogenesis - modulating 시험 약물이 systemically 실시하고 응답이 모든 신진 대사, 세포, 그리고 치료에 의해 유도된 분자 변경의 네트워크 효과를 반영 관찰 그대로 (4) 분석은 임상 상황을 복제, (V) 분석은이를 복용 효과와 분자 구조 - 활동 관계의 강력한 통계 분석 기능을 활성화뿐만 아니라 돋아 모세관의로, microvascular 공간 확장, 밀도 및 네트워크 패턴 형성의 목적, 양적, 편견 변수의 평가를 허용하며, (VI 성인 쥐가 견고하게 성장 등) 분석은 physiologic 바디 - 체중 증가의 감소 속도 측면에서 높은 감도와 함께 치료의 독성이나 유해한 효과를 보여줍니다. 마스트 세포 - 매개 angiogenesis는 먼저 분석 3,4을 사용하여 시연했다. 모델은 복용량 - 효과 관계와 포함하여 systemically 화학적 또는 기능 관리 밀접한 관련이 약물과 단백질의 측정 효과에 대한 차별의 높은 수준을 보여줍니다 : (I) 낮은 복용량, metronomically 다양한 마약 관련 효과를 얻을 표준 chemotherapeutics을 관리 (즉, angiogenesis - 진압, 중성 또는 angiogenesis - 자극 활동 5), (2) 억제 VEGF - A - 중재 angiogenesis 6 자극 천연 철분 불포화 인간 락토페린, 자연 철 - 불포화 소 락토페린, VEGF - A - 중재 angiogenesis 7, 그리고 (iii) 여러 가지 방법 8,9에 의해 만들어진 낮은 분자 - 중량 헤파린의 분수. 또한, 분석은 높은 동시 또는 순차적 방식으로 systemically 관리되는 에이전트의 angiogenesis에 결합 효과의 연구에 적합합니다. 그가 우리 연구실을 방문하여 설명하는 방법론을 목격 때이 비디오를 만드는 아이디어는 후반 박사 유다 Folkman에서 유래. 리뷰 논문 (초대) 토론과 분석을 평가 angiogenesis의 생체내 모델에 Norrby, K.. J. 셀. 몰. 메드. 10, 588-612 (2006). Norrby, angiogenesis 모델 K. 약물 테스트. 전문가 Opin. 약물. Discov. 3, 533-549 (2008).

physiologic angiogenesis 그 부족 일반 성인 vascularized 포유류의 조직은 학습하는 데 사용됩니다 수술 개입에 노출되지 않았습니다 (I) 개시 및 시험 요원의 intraperitoneal 관리 다음 angiogenesis의 개발, 그리고 체계적인 관리 아래와 angiogenesis의 (2) 수정 테스트 에이전트를 선택했습니다.

쥐 장간막의 Angiogenesis 분석

성체 쥐 장간막 창 혈관신생 분석법은 생물학적으로 적절하며, ...에서의 발아 혈관신생 연구에 매우 적합합니다.

스웨덴 구텐부르크에 위치한 GaN 대학 병원의 병리과에 오신 것을 환영합니다. 저는 Klaus Norby 박사이며, 지금부터 보실 방법은 저희 연구실에서 개발되었습니다. 저산소증, 고형암 또는 기타 혈관 형성 질환과 관련하여 발생하는 임상적으로 유의미한 혈관 형성은 거의 전적으로 천연 혈관이 분포된 조직에서 일어납니다. 성체 소형 설치류의 경우, 소장을 체벽 후면에 연결하는 장간막에 다수의 얇은 막성 부위가 존재합니다. 쥐의 경우, 이러한 장간막 창(mesenteric windows)이 약 40~50개 정도 있습니다. 이들은 육안으로 보기에 거의 투명하여 창과 같으며, 성체 수컷 쥐의 경우 각 창은 지방 조직으로 둘러싸여 있습니다.장간막 창(mesenteric windows)은 본래 혈관이 분포되어 있으며 측정 가능한 생리적 혈관 신생이 일어나지 않습니다. 따라서 이곳은 성체의 본래 혈관이 분포된 포유류 조직에서 데 노보(de novo) 혈관 신생을 연구할 수 있는 기회를 제공합니다. 즉, 모든 정상 조직과 마찬가지로 시험 조직 내에서 내인성으로 작용하는 혈관 신생 억제 인자들을 극복하고, 아무것도 없는 상태에서 완전한 혈관 신생 반응이 시작되는 과정을 연구할 수 있습니다. 다만, 생쥐의 많은 창 부위에는 모세혈관 역할을 할 수 있는 본래의 미세혈관이 결핍되어 있어, 안타깝게도 자연 상태의 생쥐 모델에서는 분석 결과의 예측 가능성이 떨어집니다.성체 쥐의 장간막 창(mesenteric windows)에는 보통 주변부에 상대적으로 적은 수의 미세 혈관이 포함되어 있습니다. 이러한 장간막 창의 천연 두께는 5~10 µm에 불과합니다. 이를 통해 손상되지 않은 조직을 슬라이드 위에 펼쳐 현미경으로 관찰할 수 있으며, 결과적으로 각 창 내의 모든 혈관을 관찰할 수 있고 혈관을 본질적으로 2차원적인 확장 형태로 나타낼 수 있게 합니다.이 방법은 혈관 미세혈관의 공간적 확장, 밀도, 패턴 형성 및 크기에 대한 정량적 측정을 수행할 수 있는 독보적인 기회를 제공합니다. 피하 부위는 혈관 신생 연구에 널리 이용되지만, 내피 세포의 이질성과 조직 특이적 성질로 인해 혈관 신생 및 피하 조직, 그리고 피하에서 성장하는 종양의 혈관 신생 조절 결과가 폐, 간, 뼈, 뇌와 같은 내장 기관의 혈관 신생 및 전이 조절을 예측하지 못할 수 있습니다. 내장 전이가 대개 암의 치명률을 결정짓는 최종 원인이 된다는 점에서 이는 주목할 만한 점입니다.장간막창(mesenteric window)이 내장기관이라는 점이 이 점에서 유리할 것입니다. 본 프로젝트의 목적은 신생 혈관 형성(de novo angiogenesis)의 양상을 정량적으로 연구하는 것입니다. 따라서 우리는 공인된 혈관 형성 촉진 인자 또는 테스트 물질을 복강 내로 주입합니다.일반적으로 마취하지 않은 성체 랫드에 한 번에 5 mL를 주입합니다. 이 정도 부피의 액체는 주입된 유체에 전체 장간막을 빠르게 노출시킵니다. 부피가 너무 적지 않다면 복강 내로 주입되는 모든 용액은 테스트 조직의 모든 세포에 영향을 미칩니다. 특히 매우 얇은 장간막 창을 덮고 있는 중피 세포층은 용질에 대한 투과성이 매우 높습니다. 수술 과정이 포함되지 않으므로 장간막 창에서 연구할 혈관 신생이 상처 치유로 유도된 혈관 신생에 의해 영향을 받지 않으며, 따라서 혈관 신생 치료는 복강 내 주사 형태로 이루어집니다.실용적인 이유로, VEGF 1 65, 1 64 및 basic FGF와 같은 특정 단백질의 혈관 형성 효과를 연구할 때의 표준 방식에 따라 월요일 아침부터 금요일 아침까지 5일 동안 하루 두 번 주사하는 처치 프로토콜을 사용합니다. 일반적으로 Pharmacia 수액 솔루션을 용매로 사용합니다. 처치 횟수가 많아 보일 수 있으나, VEGF 및 basic FGF와 같은 강력한 혈관 형성 촉진 인자를 단일 용량 또는 소수의 간격을 둔 용량으로 생리적 수준에서 투여했을 때는 통계적으로 유의미한 혈관 형성을 유도하는 것이 항상 가능한 것은 아님이 입증되었습니다. 이는 조직 내에 강력한 내인성 혈관 형성 억제제들이 작용하고 있다는 점을 고려해야 하기 때문입니다.혈관 신생 조절 치료법의 투여는 임상 치료 상황을 모방합니다. 하나 이상의 혈관 신생 조절 인자를 전신적, 피하, 정맥 내 또는 경구로 투여할 수 있습니다. 예를 들어 다음과 같습니다.이는 모분자뿐만 아니라 그 대사산물의 효과까지 연구할 수 있다는 점에서 임상 치료 상황을 모사합니다. 이 시스템을 통해 전신 투여된 혈관 신생 조절제의 독성 효과를 어느 정도 제어할 수 있습니다. 성체 쥐는 생리적으로 성장하며 2~3주간의 실험 기간 동안 체중이 약 40%까지 증가할 수 있으므로, 동물의 체중을 측정함으로써 치료가 체중 증가를 어느 정도 늦추었는지 파악할 수 있으며, 이는 독성 효과의 지표로 간주될 수 있습니다.이를 통해 혈관 신생 조절 시험에서 피해야 할 물질인 독성 용량을 확인할 수 있습니다. 독성 효과가 개입된 경우 특정 항혈관 신생 효과 관점에서 결과를 해석하는 것이 불가능할 수 있으므로 이는 중요한 이점이 됩니다. 성체 쥐(rats)는 성체 생쥐(mice)보다 훨씬 빠르게 성장하므로, 독성 물질이 체중 증가에 미치는 영향은 생쥐보다 쥐에서 일반적인 독성 효과를 나타내는 더 민감한 지표가 되어야 합니다.이제 장간막 윈도우 표본을 제작하는 방법을 보여드리겠습니다. 이 동물들은 CO2를 사용하여 안락사시켰습니다. 장간막 윈도우는 장간막의 원위부부터 시작하여 3x1인치 크기의 일반 플러스 슬라이드 위에 펼쳐 놓습니다.회장맹장판에서 시작하여 역행 방향으로 이동하며 장간막 창(mesenteric window)에서 육안으로 혈관 신생을 관찰할 수 없는지 확인합니다. 장간막의 가장 원위부에서 채취한 4개의 창을 사용합니다. 슬라이드 위의 표본을 실온에서 20분 동안 건조합니다.장 절단부를 잘라냅니다. 그 후 시료를 -20 °C의 냉동고에 보관합니다. 이렇게 하면 시료의 품질 저하 없이 수개월, 심지어 수년 동안 보관할 수 있습니다.염색은 쥐 내피세포에 대한 단클론 항체를 사용하여 수행합니다. 표본을 공기 중에 건조시키고, 커버글라스를 덮어 마운팅하지 마십시오. 개별 장간막 창의 혈관 발생 빈도 정량화는 총 광학 배율 14배에서 34배 사이의 도식 현미경을 이용한 컴퓨터 보조 형태계측 현미경법으로 수행합니다. 장간막 창 전체를 시각화합니다.시료가 시야를 최대한 많이 덮을 수 있도록 배율을 일정 단계씩 조정하여 선택합니다. 창과 주변 지방 조직 사이의 경계가 뚜렷하므로 창의 전체 영역을 쉽게 묘사할 수 있습니다. 그런 다음 세심하게 정의된 기준에 따라 모든 혈관화된 부분을 그립니다.고배율 확대 시 직경이 약 2.5에서 3.0 µm로 확인된 아주 작은 신생 혈관조차 명확하게 식별할 수 있습니다. 쥐 적혈구의 평균 직경이 6.3 µm 이상이라는 사실은 이 혈관들이 얼마나 작은지를 잘 보여줍니다. 전체 창 영역에서 혈관이 형성된 모든 부분의 면적이 차지하는 비율(%)은 상대적 혈관 형성 면적 va로 정의됩니다.이는 사실상 혈관의 공간적 확장을 측정하는 것으로, 혈관은 본질적으로 2차원적 확장을 가지므로 예를 들어 컴퓨터 보조 텔레메트리를 사용하여 VA를 쉽게 측정할 수 있습니다. 다음 단계에서는 각 윈도우의 혈관 형성 부위 중 중심부 3곳 내의 미세혈관 밀도와 패턴 형성을 기록합니다. 이 부위들은 80배 광학 배율에서 무작위로 체계적으로 선택됩니다.각 혈관은 도면 현미경을 사용하여 하나의 선으로 시각화합니다. 각 시야의 이미지는 디지털 이미지와 이미지 분석기로 전송되며, 이후 디지털 이미지 내의 모든 혈관은 두께가 1픽셀로 축소됩니다. 그런 다음 기기가 혈관을 나타내는 픽셀 수를 측정하며, 이는 시야 내 전체 픽셀 수에 대한 비율로 표시됩니다.이 백분율 수치인 미세혈관 길이(MVL)는 혈관화된 면적의 단위당 미세혈관 길이를 나타내며, 이는 미세혈관 밀도의 복합 측정값입니다. 동물당 4개 윈도우의 VA 평균값에 해당 처리군의 평균 MVL을 곱하여 동물당 총 미세혈관 길이인 TMVL을 계산합니다. 또한, 저희는 이미지 분석을 이용해 미세혈관의 밀도와 구성에 대한 세밀한 정량적 분석 기법을 개발하였습니다.측정 항목에는 두 연속적인 미세혈관 분지점 사이의 실제 거리, 즉 개별 미세혈관 분절의 길이(LEMS), 단위 조직 부피당 미세혈관 및 분절의 수(NOMS), 그리고 단위 조직 부피당 미세혈관 분지점의 수(NOBP)가 포함됩니다. 미세혈관의 굴곡도(MVT)는 두 연속적인 분지점 사이의 최단 거리와 실제 거리의 차이로 구하며, 미세혈관의 교차 발생 정도를 나타내는 교차 지수(INIS)와 상호 연결된 루프 형성 정도를 측정합니다. 루프 형성 지수(INLF) 또한 미세혈관 네트워크의 주변부에서 유사한 기술을 사용하여 정확하게 측정할 수 있습니다.우리는 동일한 처리 그룹 내의 동물 간, 그리고 심지어 한 마리의 동물 내에서도 장간막 창(mesenteric windows) 사이에 상당한 차이가 있을 수 있으므로, 이를 고려하여 실험을 설계함으로써 싹의 길이, LESP, 단위 조직 부피당 싹의 수(NOSP)를 포함한 싹의 해당 변수들을 정량화할 수 있습니다. 우리는 다음과 같은 설계가 실용적임을 확인했습니다: 관찰 기간 동안 처리 그룹당 동물 수는 8~12마리로 하며, VA 관점에서 분석되는 동물당 창의 수, 미세혈관 길이(MVL) 측면에서 분석되는 각 창당 시야의 수, 미세혈관 세그먼트의 길이(LEMS), 미세혈관 세그먼트 수(NOMS), 미세혈관 수, 분지점 수(NOBP), 미세혈관 굴곡도(MVT), 교차 지수(I), 루프 형성 지수(INF)를 측정합니다. 대조군으로는 벡터(vehicle)로 처리한 동물 3마리를 사용합니다. 장간막 창 혈관신생 분석법은 용량-반응 연구 및 혈관신생 역학 분석에 매우 적합합니다.이는 서로 다른 용량의 혈관 형성 촉진 인자를 동물 그룹에 처리하고, 혈관 형성 반응이 일어나는 동안 서로 다른 시점에서 해당 동물들을 희생시킴으로써 수행할 수 있습니다. 이를 통해 확장기, 정점 및 이후의 혈관 퇴행기를 정량적 관점에서 식별할 수 있습니다. 이러한 종류의 연구를 통해 테스트된 모든 성장 인자 사이토카인에 대한 신규 혈관 형성 반응이 속도, 효능 및 지속 기간 측면에서 구체적으로 용량 의존적이라는 것이 밝혀졌습니다.또한, 미세 혈관의 공간적 확장과 밀도 변화 측면에서 새로운 혈관의 패턴은 생리적 농도의 VEGF 또는 basic FGF에 의해 매개되는 혈관 형성보다 용량 및 시간 의존성이 훨씬 뚜렷하게 나타나는 경우가 많습니다. 비만세포 내 선택적 활성화를 통해 유도된 비만세포 매개 혈관 형성(MCMA)은 상당히 더 높은 효능과 현저하게 더 긴 지속 시간을 보입니다. 실제로, 객관적인 혈관 형성 변수를 정량화할 수 있는 능력, 시스템의 높은 생물학적 관련성 및 독성 처리를 확인할 수 있는 가능성 덕분에 이 분석법을 사용하여 비만세포 매개 혈관 형성이 처음으로 기술되었습니다.이 방법론은 구조 활성 및 용량 반응 분석에 매우 적합합니다. 쥐 MWAA는 생리적 혈관 형성이 일어나지 않으며 수술의 영향을 받지 않는 성체의 천연 혈관화된 내장 조직에서 혈관 형성을 연구할 수 있는 모델로, 이를 통해 상처 치유로 유도된 혈관 형성의 영향을 배제할 수 있습니다. 이 분석법은 진정한 정량적 분석이 가능하며, 미세혈관의 공간적 확장, 밀도 및 패턴 형성을 설명하는 생물학적으로 유의미한 다수의 객관적 변수들을 정확하게 평가합니다.이 분석법은 혈관 신생의 전신적 영향 및 조절 인자 연구, 그리고 구조-활성 및 용량-반응 연구에 매우 적합합니다. 여기에 설명된 방법론은 스웨덴 고텐버그의 Borg 대학교 Reka 대학 병원 병리학과의 Dr.Kloss Carl Norby 연구실에서 개발되었습니다. 본 프로젝트의 모든 연구는 스웨덴 의료연구위원회(Swedish Medical Research Council)의 프로젝트 번호 5 9 4 2의 지원을 받았습니다.프로젝트 시작부터 참여해주신 Gun Effer 씨와 참석하지 못한 Monica Anderson 씨, 그리고 Ann Nemar Lindgren 씨의 숙련된 기술적 지원에 깊은 감사를 표합니다.이 짧은 발표가 이 분석법의 잠재력에 대해 이해하시는 데 도움이 되었기를 바랍니다. 귀하의 실험실에서 이 분석법을 사용하시다가 기술적인 문제에 부딪히신다면 기꺼이 도와드리겠습니다. 아울러, 제안하실 사항이 있다면 언제든 말씀해 주시면 감사하겠습니다.감사합니다.

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 비디오는 immunodeficient 쥐 모델에서 인간의 함대 (IMA)를 사용하여 스텐 트를 배포 후 내막 증식증의 발전을 연구하는 모델을 보여줍니다.

인간 내유 동맥 (IMA) 이식과 Stenting : 인 Restenosis 스텐 트의 개발을 공부하는 인간 모델

이 문서에서는 쥐의 장간막에 angiogenesis을 자극하기위한 간단한 모델을 설명합니다. 모델은 아래로 단일 세포 수준까지 전체 microvascular 네트워크의 얼굴 시각화 중이다있게 조직에서 비교적 짧은 시간 코스 이상의 모세관 돋아, 혈관 영역과 혈관 밀도의 극적인 증가를 생성합니다.

쥐의 장간막의 Exteriorization : Angiogenesis에 관련된 세포 역학을 조사하기위한 모델

인간 다발성 골수종 (MM) 세포는 간엽 세포의 생존과 증식을위한 세포 외 매트릭스 성분의지지 미세 환경을 필요로한다. 우리는 종양의 성장, 침윤 및 혈관 신생에 항암제의 효과를 연구하기 위해 접목 인간 골수종 및 중간 엽 세포와 생체 내 닭 배아 모델을 설립했다.

닭에서 인간의 다발성 골수종 이종 이식 모델의 설립은 종양의 성장, 침략과 혈관 신생을 공부하기

modified Landis 기법은 미세관류 기법을 사용하여 통제 및 테스트 조건에서 정상 및 유전자 변형 쥐의 장간막에서 개별 미세혈관의 수압 전도도를 쌍으로 측정할 수 있습니다. 생리학적 조건에서 미세혈관 투과성과 경혈관 교환을 조절하는 메커니즘을 평가하는 편리한 방법을 제공합니다.

Microperfusion 기술은 쥐 장간막에서 미세 혈관 투과성의 규정을 조사하기 위해

이 원고는 통제된 환경에서 내피 세포관 형성을 사용하여 혈관 신생에 대한 주어진 화합물 또는 조건의 효과를 정량화하기 위한 튜브 형성 분석을 설명합니다.

전략적 내피 세포 관 형성의 분석 : 감소 세포 외 매트릭스 세포 외 기질과 성장 인자를 비교

혈관 형성은 생리학적으로 관련된 환경에서 조사해야 하는 다세포, 다중 시스템 상호 작용을 포함합니다. 이 연구의 목적은 혈관 형성 중 온전한 미세혈관 네트워크의 타임 랩스 비교를 수행하는 쥐 장간막 배양 모델의 능력을 입증하는 것입니다.

<em&gt; 전의 VIVO</em&gt; 방법 배양 된 쥐 장간막 미세 혈관 네트워크의 타임 랩스 영상에 대한

여기, 선물이 대동맥 반지 분석 결과의 새로운 응용 프로그램 prelabelled 중간 엽 세포는 쥐 대동맥 파생 내 피 네트워크와 공동 경작. 이 새로운 메서드 Mesenchymal Stromal 세포 (MSCs) 유도 및 내 피 네트워크와 통합의 시각화, 네트워크 속성의 정량화 및 MSC immunophenotypes 고 진 식의 평가 수 있습니다.

대동맥 반지 공동 문화 분석 결과: Mesenchymal Stromal 세포에 생체 외에서 의 신생 잠재력을 평가 하는 편리한 도구

여기에서, 중요한 뒷다리 허혈 실험 모형은 혈관 신생 치료의 효과를 평가하기 위하여 기능적, 적학 및 분자 시험의 건전지에 선행됩니다.

힌들보 리 허 혈의 뮤린 모델에서 치료 혈관 신생 평가

우리는 쥐에 있는 고분자량 (155 kDa) dextran의 정맥 주입을 사용하여 전이 (TMEM) 출입구 기능 및 암 세포 intravasation의 종양 미세 환경과 관련되었던 과도 혈관 투과성을 평가하기 위한 2개의 방법을 기술합니다. 방법은 살아있는 동물에 있는 활력 화상 진찰 및 면역 형광을 사용하여 고정된 조직 분석을 포함합니다.

세포 내 이미징 및 고정 조직 분석을 사용하여 암 세포 보급과 관련된 전이 의 종양 미세 환경 평가

여기에서, 우리는 종양 을 지탱하는 마우스로의 그들의 전송 후에 항 혈관신생 종양 관련 호중구의 치료 잠재력을 보여줍니다. 이 프로토콜은 생체외 호중구 활성을 조작하고 이후에 종양 을 개발하는 생체 내에서 그들의 기능을 평가하는 데 사용될 수 있다. 그것은 잠재적인 호중구 기지를 둔 면역 요법을 공부를 위한 적당한 모형입니다.

조작된 종양 관련 호중구를 종양 베어링 마우스로 옮겨 생체 내 혈관신생 잠재력을 연구합니다.

현재 프로토콜은 영양막 세포와 같은 세포가 세포외 기저막 매트릭스 층에 걸쳐 모세관 같은 구조로 조직되는 고전적인 체외 혈관 형성 분석에서 형성된 튜브와 같은 구조를 복구할 수 있도록 합니다. 회수된 구조는 다양한 생화학 분석을 위한 RNA 및 단백질 분리에 사용됩니다.

분화 마커 발현 분석을 위한 Angiogenesis-Tube Formation Assay에서 영양막 세포 회수

배우세요 쥐 장간막 창을 이용한 혈관신생 분석 방법으로, 정량적 미세혈관 측정과 약물 효과 평가가 가능합니다. 이 기술은 암 전이 연구에 활용됩니다.

쥐 장간막의 Angiogenesis 분석

더 많은 동영상 탐색