Name: Immunohistochemistry : 벡터 연구소에서 Vectastain ABC 키트를 사용하여 파라핀 섹션 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 21 min 38 s
Description: 학습하세요 파라핀 섹션 면역조직화학염색법을 Vectastain ABC 키트로. 탈파라핀, 항원회수, 과산화효소 차단, 항체 반응 등 단계별 프로토콜을 통해 신경과학 및 조직학 연구에서 정확한 단백질 검출을 수행하는 방법을 익히세요.

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파라핀 섹션의 염색법 <ol><li> Dewax 각 5 분 배 크실렌 (피셔 X3 S -4)로 슬라이드 (사용에 따라 매월 변경 크실렌, 크실렌은 독성입니다.) 피셔 심판 08-812 - 1A 및 랙에서 20 슬라이드에 요리와 커버를 사용하여 이러한 요리를 맞게했다. 접시 당 200 ML 액체. </li><li> (모든 이주 경사도를 변경) 다음과 같이 알코올 기울기를 통해 하이드 레이트 : <ul><li> 2 분 각각에 대해 100 %의 에탄올 (피셔 # A406 - 20)의 2 배 </li><li> 2 분 각 95 % 에탄올에 2 배 </li><li> 2 분 70 %의 에탄올에 1X </li><li> 1X 2 분 50 % 에탄올에 </li><li> 1X 2 분 30 %의 에탄올에 </li><li> 2 분 1X ddH 2 O </li></ul></li><li> 5 분 DPBS의 소크 (DPBS = Dulbecco의 수정 인산이 칼슘 2 살린 버퍼 +와 MG 2 +). </li></ol> 항원 복구 : <ol><li> 전자렌지에 미리 열을 나 - 구연 산염 완충액 (10 MM, 산도 6.5). </li><li> 전자 레인지에서 15 분 슬라이드를 요리. 슬라이드 이렇게 모든 분을 확인하고 필요한 경우 나이 - 구연 산염 추가 건조하지 않습니다. </li><li> 실온에서 냉각하자. </li><li> 1% 20 분 대한 DPBS에서 H 2 O 2 (30 % 주식의 1.5 ML 시그마 50 ML의 DPBS에서 H - 1009).과 내생 퍼옥시데이즈 활동 블럭 </li><li> DPBS 3 X 5 분에서 만끽해보세요. </li><li> 4 ° DPBS에서 C + 5% 소 혈청 알부민 (BSA) + 0.1 % 나 Azide + 5% 혈청에서 하룻밤 잠복기가 아닌 특정 사이트를 차단합니다. 참고 : 혈청 중 선택이 얼룩에 사용되는 항체가 만들어진하는 종류에 따라 달라집니다. 보조 AB가 (비오틴에 복합)되었다있는 수종의 혈청과 차단합니다. 이 사용할 수없는 경우, 기본 AB가되었다하는 것과 다른 종 혈청 사용합니다. </li><li> 아비딘 / 비오틴 차단 키트 (벡터 실험실 카탈로그 # SP - 2001)와 비오틴 사이트를 차단 : <ul><li> 15 분 아비딘 D와 부화. DPBS로 간단히 씻어. </li><li> 15 분 대한 비오틴 솔루션과 부화. </li></ul></li><li> DPBS에 상온에서 2 시간, + 2% BSA + 0.1 % NaAzide + 혈청 2% (단계를 차단과 같은)에 대한 기본 AB에 품어. </li><li> PBS 3 X 5 분에서 만끽해보세요. </li><li> DPBS에서 실온 + 2% BSA + 0.1 % 나 Azide + 혈청 2퍼센트 (차단 단계에 사용되는 동일). 1 시간 동안 비오틴과 복합 보조 AB와 부화 </li><li> 이것을 사용하기 전에 최소한 30 분 개발할 수 있기 때문에 동시에 ABC 시약을 준비! (자료 참조) </li><li> 50 ML 원뿔 관에 준비합니다. 15 ML의 DPBS에서 (없음 묘약, 아니 azide) 시약 3 방울을 추가, 믹스 및 시약의 B와 믹스 3 방울을 추가합니다. 병 쥐어 않도록, 오히려 자신의 양식에 방울 기다립니다. 벡터 실험실에서 ABC 키트 Vectastain PK - 6100. </li><li> DPBS 3 X 5 분에서 만끽해보세요. </li><li> 실온에서 30-45 분 ABC 시약과 부화. </li><li> DPBS 3 X 5 분에서 만끽해보세요. </li><li> (자료 참조) 사용하기 전에 즉시 유리관 5 ML ddH 2 O에서 (벡터 실험실 #은 SK - 4100) DAB 퍼옥시데이즈 기판 준비 <ul><li> 버퍼 주식 솔루션 2 방울, 혼합 </li><li> DAB 4 방울, 혼합 (약간 갈색이 될해야합니다) </li><li> 2 방울 H 2 O 2, 믹스 </li></ul></li><li> 슬라이드 위에 DAB 기판을 드롭과 갈색 얼룩 살펴보십시오. </li><li> 얼음 파고 슬라이드 + 반응을 중지 수돗물. </li><li> 5 분 차가운 수돗물에 따라 헹굼. </li><li> Hematoxylin (20 초, 피셔 CS401 - D)와 Counterstain과 물이 빠져나가 올때까지 수돗물에 씻어. </li><li> 알코올 기울기는 100 % 에탄올 (2 분 각)으로 30 % 에탄올로 최대 시작을 통해 탈수. </li><li> 크실렌 3 X 5 분에서 만끽해보세요. </li><li> Permount와 마운트 (피셔 # SP15 - 100) : 슬라이드에있는 섹션 위의 일부를 넣고 기포없이 coverslip으로 섹션에 천천히 누르십시오. ~ 24 시간이 소요되는, 완전히 건조까지 coverslip를 이동하지 마십시오. </li></ol>

<table><tbody><tr><td>자일렌</td><td>Fisher Scientific</td><td>X3S-4</td><td>사용 빈도에 따라 매월 자일렌을 교체하십시오. 자일렌은 독성 물질입니다.</td></tr><tr><td>100% 에탄올</td><td>Fisher Scientific</td><td>A406-20</td><td>EtOH 구배를 만드는 데 사용하십시오.</td></tr><tr><td>DPBS (Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline)</td><td></td><td></td><td>Dulbecco&amp;rsquo;Ca2+ 및 Mg2+가 함유된 수정 인산염 완충 식염수</td></tr><tr><td>시트르산나트륨 완충액</td><td></td><td></td><td>10 mM, pH 6.5</td></tr><tr><td>H2O2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H-1009</td><td>30% 스톡 용액 =&amp;gt; DPBS에서 1%로 희석하십시오.</td></tr><tr><td>블로킹 용액</td><td></td><td></td><td>DPBS + 5% 소 혈청 알부민(BSA) + 0.1% Na Azide + 5% 혈청. </td></tr><tr><td>소혈청알부민(BSA)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>아지드화나트륨</td><td></td><td></td><td>아지화나트륨</td></tr><tr><td>아비딘/비오틴 블로킹 키트</td><td>Vector Laboratories</td><td>SP-2001</td><td></td></tr><tr><td>항체 완충액</td><td></td><td></td><td>DPBS + 2% BSA + 0.1% Na Azide + 2% 혈청 (블로킹 단계에 사용된 것과 동일함)</td></tr><tr><td>ABC kit Vectastain PK-6100</td><td>Vector Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DAB peroxidase 기질</td><td>Vector Laboratories</td><td>SK-4100</td><td></td></tr><tr><td>초순수</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>헤마토실린</td><td>Fisher Scientific</td><td>CS401-D</td><td>대조염색</td></tr><tr><td>봉입제</td><td>Fisher Scientific</td><td>SP15-100</td><td></td></tr><tr><td>슬라이드 및 커버글라스</td><td></td><td></td><td>유리</td></tr></tbody></table>

immunohistochemistry : 벡터 연구소에서 vectastain abc 키트를 사용하여 파라핀 섹션

Immunohistochemistry: Paraffin Sections Using the Vectastain ABC Kit from Vector Labs

Immunohistochemistry (IHC)는 집중 / 특정 항체를 사용하여 마운트된 조직 섹션에서 단백질 표현을 시각화하기 위해 활용 가치 기법입니다. 직접 및 간접 방법 : 두 가지 방법이 있습니다. 본 실험에서는, 우리는 간접 IHC의 얼룩의 사용을 설명합니다. 간접 IHC의 얼룩은 매우 구체적인 기본 및 비오틴 - 복합 이차 항체를 활용합니다. 차 항체는 이차 항체가 아닌 구체적인 배경에 대한 얼룩 빼기 및 기본 항체에 단지를 형성하여 신호를 증폭하는 동안 몰래, 특정 에피토프에 바인딩하여 관심 단백질을 식별하는 이용하고 있습니다. 슬라이드는 어느 냉동 섹션에서 생성된, 또는 파라핀 임베디드 섹션은 유리 슬라이드에 장착할 수 있습니다. 이 프로토콜에서는, 우리는 내생 퍼옥시데이즈 활동이 아닌 특정 바인딩 사이트 알코올 기울기를 사용하여 dewaxing, 수화, 열 유도 항원 검색 및 차단하여 파라핀 - 임베디드 섹션의 준비에 대해 설명합니다. 일부 섹션은 다음 T 세포 마커 CD8 특정 항체 물들일하고 다른 사람은 티로신 hydroxylase에 대한 스테인드하는 동안. 슬라이드는 이후 비오틴에 복합 적절한 보조 항체로 처리되며, 다음과 같은 기판 Diaminiobenzidine (DAB)로 아비딘 - 복합 양고추냉이 퍼옥시데이즈 (HRP)를 활용하여 개발하였습니다. 개발 다음, 슬라이드가 대비를위한 counterstained 있으며, permount와 coverslips 이하 탑재. 충분한 건조 후 다음 슬라이드 다음 이미지에 대한 준비가되어 있습니다.

Immunohistochemistry : 벡터 연구소에서 Vectastain ABC 키트를 사용하여 파라핀 섹션

면역조직화학(Immunohistochemistry, IHC)은 특정 ...을 사용하여 고정된 조직 절편 내 단백질 발현의 위치를 파악하거나 시각화하는 데 활용되는 가치 있는 기술입니다.

안녕하세요, 저는 UC 어바인 생리학 및 생물물리학과 Chandy 연구실의 대학원생 Victor Chi입니다. 오늘은 Vector Laboratories의 A b, C 키트를 사용하여 파라핀 매립 절편을 염색하는 방법을 시연하겠습니다. 이 과정에는 파라핀 매립 절편의 탈파라핀 및 함수 처리, 항원 마스킹 해제를 위한 열 유도 항원 회수, 퍼옥시다아제 및 비특이적 단백질 결합 차단, CD four 및 tyrosine hydroxylase와 2차 항체 반응, 그리고 슬라이드 발색 및 마운팅 단계가 포함됩니다.이제 시작하겠습니다. 슬라이드가 파라핀으로 포매되어 있으므로, 첫 번째 단계는 슬라이드의 탈파라핀 과정을 거치는 것입니다. 이 작업은 보통 흄 후드 내에서 3개의 자일렌 병을 사용하여 각 5분씩 총 3회 세척함으로써 수행됩니다.그 다음 슬라이드를 100% 에탄올에 넣습니다. 슬라이드 위의 왁스가 제거된 것을 확인할 수 있으나, 자일렌이 장갑의 고무 성분을 녹일 수 있으므로 장갑을 낀 채로 슬라이드를 취급하지 않도록 주의하십시오. 이후 100% 에탄올에 담긴 슬라이드를 다시 실험실로 옮겨 수화 단계(hydration gradient)를 진행합니다.이제 슬라이드에 적용할 수화 구배(hydration gradient)에 대해 설명하겠습니다. 먼저 100% 에탄올 용액 두 곳을 순차적으로 거칩니다. 그 다음, 슬라이드를 95% 에탄올로 구성된 두 개의 용액조로 옮깁니다.그런 다음 슬라이드를 70% ethanol 수조로 옮기고, 이어서 50% ethanol 수조로 옮깁니다. 그 후 슬라이드를 30% ethanol로 옮기고, 2분 뒤에 2차 증류수가 담긴 수조로 옮깁니다. 2차 증류수 처리가 끝나면 슬라이드를 PBS에 담가 둡니다.이제 캐리지를 사용하여 슬라이드를 한 조에서 다음 조로 옮기는 방법을 보여드리겠습니다. 먼저 캐리지 홀더를 사용하여 슬라이드를 꺼낸 다음, 다음 조로 너무 많은 액체가 넘어가지 않도록 여분의 액체를 가볍게 긁어 제거합니다. 그 후, 슬라이드를 담그고 다음 농도 구배 변경 시점까지 2분 동안 기다립니다.조직을 고정할 때 항원이 차폐되어 항체가 결합하지 못하는 경우가 매우 많습니다. 따라서 지금부터 소듐 시트레이트를 이용한 열 유도 항원 회복 방법을 보여드리겠습니다. 이제 전자레인지 앞에서 면역조직화학법으로 검출하려는 CD8 항원의 차폐를 해제해 보겠습니다.이제 용액을 넣고 15분 동안 전자레인지에 돌리겠습니다. 슬라이드가 마르지 않도록 슬라이드와 함께 시트르산 나트륨을 15분 동안 끓입니다. 끓어 넘칠 때마다 시트르산 나트륨을 다시 채워 슬라이드가 계속 수분 상태를 유지하도록 관찰하겠습니다.슬라이드를 시트르산 나트륨 용액에 넣기 전에, 이미 45초 동안 용액을 예열해 두었습니다. 그런 다음 슬라이드를 시트르산 나트륨 용액에 넣고 15분 동안 가열합니다. 슬라이드가 들어있는 상태에서 보통 가열 시작 후 약 2분에서 2분 30초 정도가 지나면 용액이 끓어 넘치기 시작합니다.그 시점에서 작업을 멈추고, 소모된 시트르산 나트륨을 새 시트르산 나트륨으로 교체합니다. 시트르산 나트륨을 15분 동안 가열한 후, 슬라이드와 용액을 꺼내어 냉각시켜야 합니다. 이를 위한 가장 좋은 방법은 슬라이드 홀더의 뚜껑을 닫고 과잉 액체를 따라낸 다음, 용기 내부의 용액이 실온까지 식을 때까지 찬물 흐름에 노출시키는 것입니다.이 과정은 보통 약 10분에서 15분 정도 소요됩니다. 싱크대에서 슬라이드를 꺼낸 후, 조직 내의 내인성 peroxidase 활성을 차단해야 합니다. 이를 위해 30% 과산화수소를 사용하여 1% 과산화수소 용액을 준비하겠습니다.여기서 슬라이드를 과산화수소 용액으로 직접 옮깁니다. 이제 슬라이드를 과산화수소에 20분 동안 반응시킵니다. 20분이 경과한 후, 내인성 과산화효소를 차단했으므로, PBS 세척액을 사용하여 슬라이드에서 과산화수소를 씻어내겠습니다.이제 슬라이드를 캐리지로 옮기고, 5분씩 3회 세척하겠습니다. 조직이 손상될 수 있으므로, 다른 슬라이드와 접촉하지 않도록 슬라이드를 서로 등지게 배치했습니다. 슬라이드를 조심스럽게 밀어서 조직이 유리에 닿을 가능성이 없도록 배열하겠습니다.이제 슬라이드를 PBS로 옮깁니다. PBS로 슬라이드를 세척한 후, 5% BSA, 5% goat serum 및 0.1% sodium azide 용액을 사용하여 단백질의 비특이적 결합을 막기 위해 슬라이드를 블로킹하겠습니다. 만약 goat 항체를 사용하고 계신다면 goat serum을 다른 종의 serum으로 변경하시기 바랍니다.이제 슬라이드를 슬라이드 홀더에 넣고 용액을 채우겠습니다. 보통은 슬라이드의 부피로 인해 조직이 충분히 잠길 수 있도록 절반 정도만 채웁니다. 슬라이드를 용기에 넣을 때 주의할 점은 조직이 용기 벽면에 닿지 않도록 하는 것입니다.마지막 슬라이드의 경우, 조직이 용기에 닿지 않도록 안쪽으로 회전시켜 줍니다. 이제 슬라이드를 하룻밤 동안 블로킹했으므로, PBS에서 5분씩 세 번 세척하여 과잉 블로킹 용액을 씻어내겠습니다. 이 단계에서, 항체 사용량을 최소화하기 위해 액체 블로커를 사용하여 조직 주변에 원을 그려줍니다.항체 보존이 중요하지 않은 경우에는 블로킹 단계를 수행했던 것과 동일한 케이싱에서 슬라이드를 계속 배양할 수 있습니다. 이제부터는 액체 블로커를 사용하여 조직 주변에 어떻게 선을 긋는지 보여드리겠습니다. 우선 조직에 닿지 않도록 주의하면서 과잉 액체를 제거합니다.이제 모서리 주변을 닦아내어 과잉 액체를 제거하십시오. 이때 조직을 건드리지 않도록 매우 주의해야 합니다. 액체 블로킹 핀을 잡고 살며시 눌러 흐름을 유도한 다음, 펜으로 조직의 둘레를 그리십시오.액체 블로커를 약 15초 동안 건조시키십시오. 이제 1차 항체를 추가할 차례입니다. 피펫을 사용하여 조직 전체가 1차 항체로 덮이도록 처리한 후, 습도가 조절되는 보관함으로 옮기십시오.따라서 Kimwipe를 사용합니다. 1차 항체와 함께 배양하는 동안 슬라이드가 마르는 것을 방지하기 위해 이 상자 안에 di water를 적셔 둡니다. 1차 항체를 1시간 동안 배양했으므로, 이제 슬라이드를 꺼내 PBS로 과잉 항체를 씻어내겠습니다.따라서 다시 한번 액체를 배출시킨 후 PBS 세척액에 넣으십시오. 그리고 다시 5분씩 3회 세척합니다. 5분씩 3회 세척을 마친 후, 1차 항체를 추가했던 것과 동일한 방식으로 조직에 2차 항체를 추가하겠습니다.조직이 충분히 잠길 정도의 부피로 2차 항체(여기서는 goat anti rabbit 사용)를 첨가한 후, 슬라이드를 다시 습도 조절 챔버로 옮깁니다. ABC 방법을 사용할 때 필수적인 비오틴화된 goat anti rabbit 2차 항체를 사용하고 있습니다. 따라서 슬라이드를 습도 조절 챔버로 옮겨 1시간 동안 배양합니다.2차 항체를 반응시키는 동안 ABC 시약을 준비해야 합니다. 여기서는 Vector Laboratories의 Vector Stain 키트에 포함된 ABC 시약을 사용합니다. 시약 A'를 꺼내어 15 mL의 PBS에 세 방울을 떨어뜨리십시오. 이때 방울의 양과 크기가 정확하게 측정되어야 하므로 튜브를 세게 짜지 않도록 주의하십시오.2차 항체 반응을 약 1시간 동안 진행한 후, 슬라이드를 꺼내어 1차 항체 때와 마찬가지로 PBS로 다시 세척합니다. 5분씩 총 3회 세척한 다음, 30~45분 전에 미리 준비해 둔 ABC 시약이 담긴 용기에 슬라이드를 옮깁니다. 여기에 ABC 시약을 추가하여 슬라이드가 충분히 잠기게 한 뒤, 30~45분 동안 추가로 반응시킵니다.슬라이드를 ABC 용액에 약 3~5분 동안 담가둔 후, 과잉의 ABC 용액을 씻어내야 합니다. 슬라이드를 꺼내어 PBS 용액에 넣으십시오. 이러한 세척 과정을 PBS에서 5분씩 총 3회 반복합니다.슬라이드를 세척하는 동안, Vector Laboratories의 DAB peroxidase substrate를 준비합니다. pH 7.5 buffer를 취하여 두 방울 첨가합니다. pH 7.5 buffer 다음으로, DAB substrate react reagent를 취하여 두 방울 첨가합니다.다시 한번 강조하지만, 방울 크기가 매우 중요하므로 병을 짜지 말고 방울이 자연스럽게 떨어지게 하십시오. pH 7.5 완충액을 위해 두 방울을 넣습니다. 그런 다음 DAB 기질 시약 4방울을 똑같이 떨어뜨려 추가합니다.마지막으로 과산화수소 기질 시약 두 방울을 추가합니다. 이것이 DAB 기질 시약 혼합물의 모습입니다. 이제 슬라이드에 추가할 준비가 되었습니다. 슬라이드를 꺼내 PBS가 자연스럽게 흘러내리도록 하십시오.시간이 지남에 따라 DAB 시약의 색이 점점 더 갈색으로 변합니다. 이때 슬라이드에 시약을 첨가해야 합니다. 조직을 충분히 덮을 수 있는 양을 취해 조직 샘플 위에 직접 첨가하십시오.적절한 부피를 취해 조직 샘플 위에 직접 가하고, 시간이 지남에 따라 조직 샘플이 갈색으로 변하도록 용액을 반응시킵니다. DAB 용액을 첨가한 후, 이 뇌 절편에서 조직이 여기와 여기에 갈색으로 변하는 것을 확인할 수 있습니다. 갈색으로 염색된 DAB는 중뇌 도파민성 뉴런이 포함된 영역을 나타냅니다.슬라이드를 2분에서 10분 정도 현상한 후, 반응을 중단시키기 위해 슬라이드를 얼음물에 넣어야 합니다. 용액이 충분히 빠지도록 한 뒤, 슬라이드를 얼음물에 직접 넣으십시오. 슬라이드를 얼음물에 담근 후, 염색조를 싱크대로 옮겨 약 5분 동안 찬물을 흘려보내 염색조에서 모든 DAB 용액이 완전히 배출되도록 하십시오.따라서 싱크대에 넣을 때, 물줄기가 조직에 직접 닿지 않도록 주의하고, 대신 모서리 부분에 닿게 하여 물이 자연스럽게 넘쳐흐르도록 함으로써 물의 흐름으로 인해 조직이 손상되지 않도록 하십시오. 세척 후 슬라이드를 꺼냈다면, 이제 대조 염색을 수행해야 합니다. 대조 염색이 필요한 이유는 무엇일까요?우선, 조직의 구조를 확인하고 싶을 때 사용할 수 있습니다. 또 다른 이유는 모든 세포를 시각화하기 위함입니다. 따라서 본 실험의 목적을 위해, 핵을 염색하는 hematoxylin으로 대조 염색을 진행하겠습니다.슬라이드를 꺼내어 과잉 액체를 제거한 다음, Hemat Hematin 용액에 한 번 담급니다. 한 번 담갔다 꺼낸 후 즉시 물에 넣으십시오. 수돗물에 슬라이드를 넣은 후, 이전에 얼음 냉수욕에서 했던 것과 마찬가지로 슬라이드에 물을 흘려보내십시오.따라서 헤마톡실린 세척의 경우, 병 안의 물이 맑아질 때까지 흐르는 물에 두십시오. 대조 염색된 슬라이드를 물에서 꺼낸 후, 슬라이드를 다시 탈수해야 합니다. 그러므로 에탄올 농도 구배를 역순으로 다시 통과시켜야 합니다.따라서 탈이온수로 1회, 30% ethanol로 1회, 50% ethanol로 1회, 70% ethanol로 1회, 95% ethanol로 2회, 그리고 100% ethanol로 2회 세척하며, 각 단계는 2분씩 진행합니다. 슬라이드를 꺼내어 여분의 액체를 닦아낸 후 30% ethanol에 바로 넣고 2분 동안 둡니다. 마지막 100% ethanol 세척이 끝나면 슬라이드를 다시 xylene에 넣습니다.슬라이드를 다시 꺼내어 여분의 액체를 닦아내고, 첫 번째 자일렌에 5분 동안 담급니다. 이렇게 하여 5분씩 세 번의 연속적인 자일렌 세척 과정을 거칩니다. 이제 슬라이드를 마운팅할 준비가 되었습니다.제가 보통 하는 방식은 슬라이드가 준비되기 1분 전에 파스퇴르 피펫으로 영구 봉입액을 취해 두고, 슬라이드가 나올 때까지 약 1분 정도 기다리는 것입니다. 자일렌으로 마지막 세척을 마친 후, 장갑이 자일렌에 잠기거나 젖지 않도록 주의하며 조직이 어느 쪽에 있는지 확인하고 핀셋으로 슬라이드를 꺼냅니다. 조직이 닿지 않도록 주의하며 킴와이프로 여분의 자일렌을 가볍게 닦아내는데, 모서리와 가장자리만 조심스럽게 닦아 대부분의 자일렌이 증발하도록 합니다. 슬라이드 하나가 마르기 전까지 아마 두 장 정도의 슬라이드를 작업할 수 있을 것입니다.한 슬라이드의 건조가 완료되면 다른 슬라이드가 작업 준비가 될 것입니다. 슬라이드가 완전히 마르기 전에 작업을 진행해야 합니다. Perimount를 사용하여 조직 옆에 얇은 선을 그리되, 조직에 닿지 않도록 주의하십시오.커버슬립을 덮으면서 페리마운트(perimount)를 도포합니다. 45도 각도로 적용하여 자연스럽게 내려앉게 합니다. 그 다음, 페리마운트가 모든 조직을 덮을 수 있도록 커버슬립을 밀어줍니다.그다음 그것을 내려놓고 중앙을 부드럽게 눌러 모든 과잉 기포를 제거합니다. 두 번째 조직을 처리하는 동안 건조시키십시오. 사실 슬라이드를 관찰할 때는, Permount가 하룻밤 동안 건조될 때까지 기다린 후 슬라이드를 확인해야 합니다.그렇지 않으면 현미경 조명 아래에서 영구 봉입제가 기포를 형성하여 샘플을 망칠 수 있습니다. 여기 화학 물질과 tyrosine hydroxylase에 대한 토끼 폴리클로날 항체로 염색한 뇌 절편의 모습이 있습니다. 다시 한번 말씀드리자면, 갈색 DAB 염색은 중뇌 도파민성 뉴런의 위치를 나타냅니다.헤마틴 대조 염색을 통해 이 조직의 모든 핵이 파란색으로 염색되었습니다. 지금까지 Vector Laboratories의 ABC 키트를 사용하여 파라핀 매립 섹션을 염색하는 방법을 보여드렸습니다. 이제 염색하려는 조직의 종류와 사용하는 항체에 따라 조건을 조정하시기 바랍니다.그럼 여러분의 실험에 행운을 빕니다.

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생체 내 면역형광 국소화(IVIL) 방법은 생체내 종양 표적화 및 ex vivo 면역염색의 조합을 사용하여 살아있는 유기체에서 종양학적 목적을 위해 항체 및 항체 접합체의 생체 분포를 검사하는데 사용될 수 있다. 방법.

암 연구에서 치료 및 진단 항체 바이오 유통 평가를 위한 생체내 면역형광 국소화

이 실험 프로토콜은 주로 단일 채널 항체 배양 조건을 최적화하고 항체 및 채널의 설정을 조정하여 임상 기원 폐암 조직의 자가형광 및 채널 누화 문제를 해결함으로써 다중 면역조직화학(IHC) 염색 방법을 설명하고 최적화합니다.

파라핀 포매된 폐암 조직을 위한 다중 면역조직화학 염색

이 원고는 최적화된 헤파린 기반 친화성 크로마토그래피 방법을 사용하여 아데노 관련 바이러스 벡터의 생성 및 정제를 위한 자세한 프로토콜을 설명합니다. 간단하고 확장 가능하며 비용 효율적인 접근 방식을 제시하여 초원심분리가 필요하지 않습니다. 생성된 벡터는 높은 순도와 생물학적 활성을 나타내며 전임상 연구에서 그 가치를 입증합니다.

단일 단계 및 반자동 Heparin Affinity Chromatography Protocol을 통한 Adeno-associated viral vectors 분리

학습하세요 파라핀 섹션 면역조직화학염색법을 Vectastain ABC 키트로. 탈파라핀, 항원회수, 과산화효소 차단, 항체 반응 등 단계별 프로토콜을 통해 신경과학 및 조직학 연구에서 정확한 단백질 검출을 수행하는 방법을 익히세요.

Immunohistochemistry : 벡터 연구소에서 Vectastain ABC 키트를 사용하여 파라핀 섹션

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