중화 항체에 대한 인플루엔자 바이러스 탈출 변이의 생성

야생형 및 돌연변이 균주를 모두 포함하는 인플루엔자 바이러스 현탁액을 복용하십시오.

헤마글루티닌(HA)이라고 하는 바이러스 외피 당단백질은 숙주 세포 표면의 시알산에 결합하여 바이러스 침입을 매개합니다.

HA에 결합하는 중화 항체를 감소된 농도로 첨가하여 시알산 결합 부위를 차단합니다.

항체 중화를 피하는 데 도움이 되는 HA의 돌연변이를 운반하는 돌연변이 균주를 탈출 변이라고 합니다.

혼합물을 병원균이 없는 배아형 닭고기 달걀에 주입하여 바이러스를 알란토액으로 전달하고 배양합니다.

항체 중화 바이러스는 융모막 세포에 들어갈 수 없습니다. 중화되지 않은 돌연변이 바이러스는 세포에 들어가 복제하고 알란토액으로 방출됩니다.

바이러스 개체군이 포함된 알란토액을 채취합니다.

HA 특이적 항체를 감소된 농도로 도입하여 탈출 변이를 제외한 다른 균주를 중화합니다.

닭 적혈구 또는 적혈구를 도입합니다. 중화되지 않은 탈출 변이체는 세포에 결합하여 적혈구 응집을 유발하여 탈출 변이 생성을 확인합니다.

HI 활성을 갖는 중화 항체는 먼저 희석당 100마이크로리터의 부피로 PBS의 1배에 농도를 증가시켜 관심 항체의 4희석액을 제조하여 추가로 분석한다. 다음으로, 400마이크로리터 부피의 1배 PBS에 밀리리터당 100만 플라크 형성 단위의 바이러스 스톡을 준비합니다.

그런 다음 바이러스 밀리리터당 100만 플라크 형성 단위 100마이크로리터를 각 항체 희석액 100마이크로리터 또는 PBS 1배 100마이크로리터와 혼합합니다. 5% 이산화탄소와 함께 섭씨 37도 인큐베이터에서 샘플을 1시간 동안 배양합니다.

잠시 소용돌이를 일으킨 후, 각 혼합물 200마이크로리터를 병원균이 없는 특정 배아 계란에 주입합니다. 그런 다음 이산화탄소 없이 섭씨 37도에서 40-44시간 동안 계란을 부화시킵니다. 부화 후, 바이러스에 감염된 감염된 배아 난자를 섭씨 4도에서 최소 6시간 동안 두어 희생시킵니다. 다음으로, 앞서 설명한 대로 알에서 알란토액을 채취합니다.

마지막으로, 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 HI 분석을 수행하여 탈출 변이를 확인합니다.