면역조직화학을 이용한 뇌 조직에서 비정상적인 프리온 단백질 검출

잘못 접힌 프리온 단백질 응집체를 나타내는 고정된 포유류 뇌 절편이 있는 슬라이드를 찍습니다.

프리온 응집체의 감염성을 줄이기 위해 절편을 포름산으로 처리합니다.

수화 압력 챔버 내부에서 산성 완충액으로 처리합니다. 높은 열과 산성 pH는 고정 유도 단백질 가교를 끊어 항원 에피토프를 제거합니다.

과산화수소에 담그면 내인성 과산화효소가 비활성화되어 원치 않는 배경 염색을 방지할 수 있습니다.

슬라이드를 커버 플레이트에 놓고 완충액을 추가하여 조직 수화를 유지합니다.

비특이적 항체 결합을 방지하기 위해 차단 용액을 도입합니다.

프리온 응집체에 특이적인 1차 항체를 추가합니다.

결합되지 않은 항체 분자를 제거합니다. 1차 항체에 결합하는 비오티닐화된 2차 항체를 도입합니다.

결합되지 않은 항체 분자를 제거합니다. 2차 항체의 비오틴에 결합하는 아비딘과 복합된 비오티닐화 과산화효소를 추가합니다.

과산화효소가 착색 제품으로 산화되는 발색 기질을 추가합니다.

현미경을 사용하여 염색된 응집체를 관찰합니다.

조직 절편을 실온에서 98% 포름산에 30분 동안 조심스럽게 담급니다. 절편을 수돗물로 5분 동안 헹구고 증류수로 두 번 헹굽니다. 500밀리리터의 증류수를 채운 압력 챔버에 스테인리스 스틸 염색 용기를 사용하여 10밀리몰 구연산염 완충액을 섭씨 98도에서 20분 동안 전처리합니다.

품질 관리를 위해 바구니에 접착식 오토클레이브 표시 테이프 한 부분을 놓아 온도와 압력을 모니터링합니다. 알람이 장비가 프로그램 시간과 온도에 도달했음을 나타내면 슬라이드가 있는 바구니를 담그십시오. 그런 다음 압력 챔버에서 프로그램을 시작하여 지점 2를 설정하고 이 프로그램의 초기 및 최종 압력을 기록합니다.

내인성 과산화효소의 불활성화를 위해 샘플 섹션이 들어 있는 슬라이드 바스켓을 메탄올에 3% 과산화수소 수조에 30분 동안 담급니다. 흐르는 물에 5분 동안 섹션을 헹굽니다. 배수 후 절편을 트리스 완충 식염수에 추가로 5분 동안 담급니다. 면역 검출을 위해 각 슬라이드를 Tris-완충 식염수로 미리 적신 시중에서 판매되는 커버 플레이트 홀더 위에 놓습니다.

티슈 쪽이 홀더를 향하고 슬라이드 가장자리가 홀더의 두 하단 지점과 일치하도록 하여 기포가 생기지 않도록 합니다. 엄지와 검지 사이에 슬라이드 홀더 어셈블리를 잡습니다. 한 손가락은 샘플 슬라이드 위에 놓고 다른 손가락은 홀더 하단에 놓습니다. 그런 다음 어셈블리를 시스템 갤러리에