Name: 포유 동물 조직의 레이저 캡처 Microdissection (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 34 s
Description: 학습하세요 포유 동물 조직의 레이저 캡처 현미경 절단 기법을 사용하여 정밀한 조직 분리 방법을 익히세요. 이 기술은 신경과학 및 조직 분석 연구에 필수적인 도구입니다.

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포유 동물 조직의 레이저 캡처 microdissection

Laser Capture Microdissection of Mammalian Tissue

또한 레이저 microdissection (LMD)로 알려진 레이저 캡처 현미경은, 사용자가 동결 또는 포르말린 - 고정, 파라핀 - 임베디드 조직 섹션에서 세포 또는 조직의 작은 숫자를 분리 수 있습니다. LMD 기술 온도 불안 정한의 상단에 하나 배치 막, 또는 아래의 조직 섹션에 의존하고 있습니다. 한 방법에 초점을 맞춘 레이저 에너지는 다음 조직 섹션에서 채취한 수있는 기본 세포로 막을 용해하는 데 사용됩니다. 한편, 레이저 에너지는 선택된 세포 모음 장치에 빠지다 수 있도록 조직의 &quot;그린&quot;경로 따라 호일을 증발. 각 기술은 몇 미크론의 최소 해상도 세포의 선택을하실 수 있습니다. DNA, RNA, 단백질 및 지질 샘플 절연 및 마이크로 해부 표본에서 분석할 수 있습니다. 이 비디오에서는, 우리는 표본을 장착하고 캡처 튜브를 설정 사용하기 위해 악기, 샘플 준비를위한 일반적인 고려 사항을 초기화, LMD의 원칙에 대한 소개를 포함하여 일곱 세그먼트에있는 Leica AS - LMD 레이저 microdissection 악기의 사용을 보여줍니다 , 현미경을 정렬 캡처 컨트롤을 조정하고, 조직 표본을 캡처. 레이저 캡쳐 마이크로 절개 몇 가지 세포 등가물과 같은 작은 순수 세포 인구의 샘플을 분리하기 위해 수사관 수 있습니다. 이것은 실험 결과를 혼란시킬 수있다 이웃 오염 물질의 무료입니다 관심 세포의 분석을 수 있습니다.

포유 동물 조직의 레이저 캡처 Microdissection

레이저 캡처 현미경(Laser capture microscopy)은 레이저 미세절단(laser microdissection, LMD)으로도 알려져 있으며, 사용자가 동결 또는 ... 상태의 샘플에서 소량의 세포나 조직을 분리할 수 있게 해줍니다.

안녕하세요, 제 이름은 Rob Edwards입니다. 저는 캘리포니아 대학교 어바인 캠퍼스의 레이저 캡처 현미경 시설 책임자입니다. 이곳에 구비된 레이저 캡처 현미경의 사용법에 대해 설명해 드리겠습니다.저희가 사용하는 기기는 약 3년 전에 구입한 Leica A-S-L-M-D입니다. 레이저 캡처 시스템에는 두 가지 서로 다른 유형이 있습니다. 그중 하나는 스폿 용접기와 비슷하며, 유리 슬라이드 위에 조직 조각을 놓고 그 위에 플라스틱 막을 덮어 조직을 감싸는 방식입니다.그 후 레이저 광원을 사용하여 막을 녹이면, 결과적으로 조직이 막에 점용접되어 고정되며, 이후 해당 막을 제거함으로써 포집된 조직을 함께 떼어낼 수 있습니다. 이제 LCM 시스템을 시작하기 위해 여러 장비를 순서대로 전원을 켭니다. 먼저 여기 있는 ASLMD 제어 박스의 전원을 켭니다.그런 다음 컴퓨터를 켭니다. 캡처할 세포를 식별하기 위해 형광 광학 장치가 필요한 시료가 있는 경우, 형광 조명을 위해 수은 램프를 켭니다. 본 시연에서는 이를 사용하지 않습니다.시료의 전후 고화질 이미지를 캡처하려면, 로직 박스와 컴퓨터의 전원을 켠 후 여기에서 스팟 카메라를 별도로 켤 수 있습니다. 다음으로 여기의 레이저 전원 제어 유닛을 켜는데, 이는 실제로 기기 하단 뒷면에 있는 키로 켭니다. 마지막으로 컴퓨터 모니터를 켭니다. 화면에는 익숙해져야 할 여러 제어 항목이 있습니다.이 프로그램들을 매우 자주 사용하게 될 것입니다. 전형적인 Microsoft Windows 기반 프로그램이므로 논의해야 할 메뉴가 여러 개 있습니다. 하지만 먼저 여기의 데스크톱 화면에 대해 말씀드리겠습니다.현미경이 실제로 보고 있는 화면을 보여주는 라이브 창이 있습니다. 여기 메뉴 바 상단에서 라이브 이미지 버튼을 확인하실 수 있으며, 토글 가능한 프리즈(freeze) 버튼도 있습니다. 이 버튼을 사용한 후 파일 메뉴를 통해 조직의 특정 부분에 대한 정지 영상을 캡처하여, 예를 들어 캡처 전과 후의 상태를 기록함으로써 분리한 조직을 문서화할 수 있습니다. 현미경은 헤마틸린 대조 염색 조직 또는 형광 염색 조직을 캡처하는지에 따라 명시야(brightfield) 또는 형광 모드로 실행할 수 있습니다.다음 두 버튼에는 현미경 스테이지 평면에 초점을 맞추는 검체 모드와, 유리 슬라이드를 이동시켜 수집 튜브 상단에 포집된 조직을 시각화할 수 있게 하는 수집 모드가 포함되어 있습니다. 이는 품질

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 비디오는 미크론 수준의 정밀도로 3D 유기형 공동 배양 모델의 레이저 해부를 설명합니다. 3D 유기형 모델에서는 섬유아세포와 같은 기질 성분이 암 상피 세포와 3차원으로 공동 배양됩니다. 3D 모델은 생리학적 조건에 가까운 조건에서 침입 및 암-기질 상호 작용을 연구할 수 있는 실험 도구 역할을 합니다.

레이저 미세해부: 3D 유기형 배양 모델에서 침입하는 대장암 세포를 분리하는 기술

미세 절제가 광범위하게 조직 내에서 DNA, RNA, 단백질의 시험을 위해 사용되어왔다. 레이저 캡처 현미경 (LCM)는 가장 일반적으로 사용되는 방법이지만 새로운 밀링 기술 mesodissection는 최근 유효하다. 우리는 mesodissected 포르말린 고정 파라핀 결핵균 육아종의 내장 조직 슬라이드에서 RNA 추출을 보여줍니다.

복구하는 새로운 미세 절제 접근<em&gt; 결핵균</em폐 육아종 임베디드 포르말린 고정 파라핀에서&gt; 특정 성적 증명서

개별 도파민 뉴런의 단리 또는 직접 또는 간접 면역과 복측 피개 영역은 레이저 미세 절제를 캡처하여 설명된다. 적외선 레이저를 이용하여 유리 슬라이드 조직으로부터 단리 및 적외선 및 자외선 레이저의 조합을 이용하여 막 slide에서 파라미터 논의된다.

레이저 캡처 이외에 Microdissection - 개별 도파민 신경 세포의 분리 및 전체 복부 피개 영역의 데모

이 프로토콜의 목표는 다운스트림 RNA 분석을 위해 이질적인 전립선 조직에서 세포 유형의 순수한 집단을 분리하는 효과적인 방법으로 레이저 캡처 미세 해부를 사용하는 것입니다.

RNA 분석을위한 인간의 전립선 상피 세포의 레이저 캡처 이외에 Microdissection

여기, 우리 다운스트림 RNA 분석에 대 한 배수 채널 (TM)를 격리 하기 위한 재현성 레이저 캡처 기정 (LCM)에 대 한 프로토콜을 설명 합니다. TM에 유전자 발현에 변화를 분석 하는 능력은 TM 관련 눈 질병의 근본적인 분자 메커니즘을 이해에 도움이 됩니다.

레이저 캡처 서 유전자 표정 분석에 대 한 마우스 눈에서 높은 순수 배수 채널의

레이저 포획 미세해부(LCM) 프로토콜은 골세포의 유전자 발현 분석을 위한 고품질 RNA의 충분한 양을 얻기 위해 개발되었다. 현재 연구는 마우스 대퇴골 섹션에 초점을 맞추고. 그러나, 여기에 보고된 LCM 프로토콜은 임의의 경조직의 세포에서 유전자 발현을 연구하는데 사용될 수 있다.

신선 냉동 마우스 뼈에서 고품질 RNA를 생성하는 레이저 캡처 미세 해부 프로토콜

이 프로토콜은 마우스 배아의 신선한 냉동 섹션에서 연골과 뼈의 분리를 위한 레이저 포획 미세 분부를 설명합니다. 연골과 뼈는 크레실 바이올렛 염색에 의해 빠르게 시각화되고 전사분석을 위한 고품질 RNA를 산출하기 위하여 정확하게 집합될 수 있습니다.

유전자 발현 분석을 위한 마우스 배아 연골 및 뼈의 레이저 포획 미세 해부

레이저 미세 해부 (LMD)는 신경교종 이질성과 침략을 중재하는 통로를 밝히기 위하여 이용될 수 있는 민감하고 높게 재현가능한 기술입니다. 여기에서, 우리는 전사성 분석에 선행된 레이저 LMD를 사용하여 신경교종 조직에서 이산 지역을 격리하기 위하여 최적화된 프로토콜을 기술합니다.

종양 내 이질성, 온코스트림 및 침략의 공간 및 분자 특성화를 위한 신경교종 소구역의 레이저 캡처 미세 분해

RNA 시퀀싱을 위해 개별 선충류 조직을 분리하기 위해 레이저 미세 해부를 사용하는 프로토콜이 기술되어 있습니다. 이 프로토콜은 종 특이적 유전자 툴킷을 필요로하지 않으므로 단일 조직 샘플 수준에서 다른 종간에 유전자 발현 프로필을 비교할 수 있습니다.

종에 구애받지 않는 단일 조직 응용 분야를 위한 레이저 미세 해부

이 프로토콜은 레이저 미세 해부를 사용하여 조직학적으로 해결된 세포 집단의 농축을 위해 염색된 얇은 조직 섹션 이미지로부터 병리학적으로 확인된 관심 영역의 인공 지능 기반 세분화를 위한 고처리량 워크플로우를 설명합니다. 이 전략에는 관심 있는 세포 집단을 나타내는 경계선을 레이저 현미경으로 직접 전송할 수 있는 새로운 알고리즘이 포함되어 있습니다.

종양 미세환경의 미세스케일 프로테오믹 분석을 위한 산업화된 인공 지능 유도 레이저 미세 해부

이 프로토콜은 레이저 캡처 미세해부를 사용하여 파라포름알데히드 고정 및 최적 절단 온도 화합물이 포함된 마우스 간 조직의 조직학적 영역에서 RNA를 분리하는 방법을 설명하며, 이를 통해 표적 하류 유전자 발현 분석을 가능하게 합니다.

RNA 분석을 위한 파라포름알데히드 고정 마우스 간 조직의 레이저 캡처 미세 해부

학습하세요 포유 동물 조직의 레이저 캡처 현미경 절단 기법을 사용하여 정밀한 조직 분리 방법을 익히세요. 이 기술은 신경과학 및 조직 분석 연구에 필수적인 도구입니다.

포유 동물 조직의 레이저 캡처 Microdissection

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