미세유체 소자를 이용한 자성 나노입자 기반 면역분석법

시약 분배용 입구, 유체 흐름을 위한 상호 연결된 채널 및 유체 퍼지용 배출구로 구성된 현미경 스테이지에 부착된 미세유체 장치를 가져 가십시오.

주 채널에는 갇힌 응집된 철 미세 입자가 있는 중앙 엇갈린 제한이 포함되어 있습니다.

채널은 비특이적 항체 결합을 방지하기 위해 차단 용액과 함께 배양됩니다.

세척 완충액을 흐르게 하여 과도한 차단 용액을 제거합니다.

정의된 유속으로 면역복합체 현탁액을 도입합니다. 면역복합체는 1차 항체에 결합된 항원으로 코팅된 자성 나노입자로 구성되며, 1차 항체는 과산화효소 접합 2차 항체에 추가로 결합됩니다.

외부 자기장을 적용하여 응집된 미립자를 자화하고 면역복합체를 포착하기 위한 자기 트랩으로 변환합니다.

과산화효소에 의해 형광 생성물로 전환되고 트랩을 통해 흐르는 형광 기질을 도입합니다.

현미경을 사용하여 트랩 전후의 형광을 비교하여 면역복합체의 포획을 확인합니다.

주사기를 사용하여 채널에 증류수를 채웁니다. 장치를 초음파 수조에 10분 동안 담그십시오. 그런 다음 장치 채널 내부의 물을 비우고 주사기를 사용하여 5% BSA 용액을 도입합니다.

직경 7.5마이크로미터의 철 미립자를 5% BSA에 현탁액으로 준비합니다. 칩과 미립자 현탁액을 실온에서 최소 1시간 동안 차단 용액과 함께 배양합니다. 그런 다음 측면 채널 배출 호스를 통해 주사기 바늘로 미세 입자를 칩에 삽입합니다.

칩을 수직으로 놓습니다. 그런 다음 미립자가 5마이크로미터 제한에서 목표가 되고 압축되도록 칩을 90도 두 단계로 회전합니다. 아크릴 장치의 모든 호스를 열로 밀봉하십시오. 몇 밀리미터만 남을 때까지 흡입 호스를 자릅니다.

디스펜싱 바늘에 세척 완충액을 채우고 절단된 호스에 삽입합니다. 용액이 떨어지도록 한 다음 바늘을 장치에 연결합니다. 측면 채널에서 배출 호스를 자른 다음 주사기 펌프에 연결합니다. 그런 다음 메인 채널 배출 호스에 대해 동일한 절차를 반복한 다음 칩을 자석에 부착합니다.

면역 검출을 위해 세척 완충액을 시간당 50마이크로리터로 10분 동안 흐르게 유지합니다. 마이크로피펫을 사용하여 분배 바늘에서 남은 세척 완충액을 제거하고 50마이크로리터의 나노입자 현탁액을 추가합니다. 나노입자 현탁액을 시간당 100마이크로리터의 유속으로 7분 동안 흐르게 합니다. 그런 다음 유속을 시간당 50마이크로리터로 변경하고 15분 더 흐름을 계속합니다.

분배 바늘을 교체하고 동일한 속도로 10분 동안 세척 완충액을 흐릅니다. 마이크로피펫을 사용하여 분배 바늘에서 남은 세척 완충액을 제거하고 100마이크로리터의 형광 기질을 추가합니다. 기판 입력, 형광 측정 및 세척 단계에 대한 유량 및 시간 매개변수를 조정합니다.

시간당 6마이크로리터로 50분 동안 형광 기질의 입력 흐름을 활성화합니다. 기질 흐름이 멈추기 15초 전에 현미경의 형광을 켭니다. 기판이 1,000밀리초의 노출 시간으로 멈추기 10초 전에 현미경 카메라의 소프트웨어로 이미지 캡처를 시작합니다.

기판 세척이 중지된 직후 원하는 유량 매개변수의 시작 버튼을 클릭합니다. 초당 1프레임으로 6분 동안 이미징을 수행합니다. 선택한 측정 흐름이 중지된 직후 세척 흐름의 시작 버튼을 클릭합니다.