Normothermic 심장 마비와 심폐 소생술의 : 국소 빈혈 - Reperfusion 상해의 마우스 모델

perioperative 그리고 중요한 치료 관련 급성 신장 손상에 대한 강력한 모델이 제공됩니다. 그것이 거의 임상 아키의 histologic 및 기능 변경 내용을 복제할 수 있습니다 심장 마비에 의해 유도 온 몸이 hypoperfusion을 사용합니다.

이 절차의 전반적인 목적은 이 중요하고 흔한 질병 상태에 대한 중재의 효과를 평가하기 위해 Norm Themic global Ischemia 재관류를 모델링하는 것입니다. 먼저, 마취된 기구 주입 마우스는 심정지 및 소생술 또는 CA CPR을 준비합니다. 다음으로 심장 마비가 유발됩니다.

그런 다음 마우스는 흉부 압박과 에피네프린을 사용하여 심장 마비에서 소생합니다. 궁극적으로 혈액 요소, 질소, 혈청 크레아티닌, 앨런 전이효소, 아스파르테이트에서 경미한 전이효소 및 조직학과 같은 기능적 분석을 수행하여 상당한 장기 손상을 평가할 수 있습니다. 호중구 젤라틴 관련 lipo callin과 같은 초기 바이오마커의 존재도 측정할 수 있습니다.

마지막으로, 소생술의 결과는 여기에서 평가되며, 24시간 트랜스 카디오, 관류 및 신장 적출로 입증됩니다. 심정지 및 심폐 소생술의 더 큰 동물 모델과 같은 다른 방법에 비해 이 모델의 주요 장점은 실험실 마우스가 저렴하고 어디에나 있으며 많은 형질전환 균주에서 사용할 수 있다는 것입니다. 시작하려면 마취된 쥐의 눈에 윤활유를 바르고 동물을 누운 자세로 가열 패드에 놓습니다.

그런 다음 테이프를 사용하여 동물의 사지를 고정하고 뒷구멍을 중립 위치에 놓되 흉벽을 최대한 가깝게 고정하여 흉부 압박 중에 흉벽이 완전히 나갈 수 있도록 합니다. 다음으로 직장 온도 프로브에 윤활유를 바르고 놓습니다. 22 게이지 테프론 카테터와 각진 주입기를 사용하여 기관을 삽관합니다.

튜브의 기관내 위치는 양압 또는 음압을 사용하여 확인할 수 있습니다. 양압을 사용하여 소량의 공기가 튜브 안으로 강제로 유입됩니다. 튜브가 식도에 배치된 것이 아니라 기관에 배치된 경우 가슴은 음압을 사용하여 대칭적으로 상승합니다.

소량의 액체가 기관내관에 부착된 투명한 튜브에 배치됩니다. 마우스의 자발적인 호흡 노력은 튜브 내의 유체를 이동시킵니다. 철사 고리로 기관내 카테터를 앞니에 고정하고 앞니에 약간의 장력을 유지하여 흉부 압박 중에 머리를 움직이지 않도록 합니다.

설치류 인공호흡기를 140마이크로리터, 분당 150회 호흡으로 설정하여 마우스를 기계적으로 환기시킵니다. 멸균 기술과 작동 현미경을 사용하여 경정맥에 미리 플러시된 PE 10 카테터를 놓습니다. PE 10 카테터를 시아노아크릴레이트 수술용 접착제로 피부 마개에 고정합니다.

3개의 피하 EKG 전극을 배치하는데, 하나는 각 액시 근처에, 다른 하나는 복부의 왼쪽 아래 사분면에 놓습니다. 모든 전선이 작동 표면에 고정되어 있는지 확인하십시오. 신호 교차를 최소화하고 신호 경로 내의 절연체를 최소화합니다.

연결되면 모니터에서 EKG 신호를 최적화합니다. 마우스가 표준 테마인지 확인하십시오. 실온 40마이크로리터, 염화몰 0.5몰을 정맥 주사하고 심전도의 등전 추적을 관찰합니다.

체포 타이머를 시작합니다. 그런 다음 인공 호흡기를 분리하고 마취 증기를 중단하십시오. 발열 패드 및 전자 소음을 발생시키고 심전도 모니터링을 방해할 수 있는 기타 장비를 끄십시오.

마우스 위에 절연 담요를 깔아줍니다. 심정지 중 매분 체온을 기록하십시오. 필요한 경우 난방 램프를 사용하여 코어 온도를 정상 테마 범위로 끌어 올립니다.

7분 30초 동안 심정지가 발생한 후 인공호흡기를 다시 연결하고 분당 180회까지 속도를 높입니다. 자발적 순환을 되돌리기 위해 흉부 압박을 수행하는 것은 이 모델에서 가장 까다로운 부분입니다. 마우스는 매우 작기 때문에 위치와 압력이 중요합니다.

너무 많은 압력은 폐 및 간 손상을 초래하고 생존을 감소시킵니다. 압력이 너무 적으면 자발적 순환이 회복될 확률이 줄어듭니다. 흉부는 ANA 열의 1/3에서 1/2까지 압축되어야 합니다.

압박 사이에 후방 거리와 완전한 반동이 허용되어야 합니다. 이 모델에서 생존을 달성하지 못하는 것은 거의 항상 8분에 차선의 CPR에 기인합니다. 분당 300회씩 흉부 압박을 시작합니다.

흉부 압박은 검지로 전달해야 합니다. xiphoid 돌기에서 5mm 위, 정중선 주입의 약간 왼쪽에 있습니다. 밀리리터당 15마이크로그램으로 희석된 0.5밀리리터의 에피네프린.

CPR의 처음 30초 동안 자발 순환 또는 ROSC의 복귀를 위해 EKG를 주의 깊게 관찰하고, 처음 2분 동안 빈번한 조기 심실 수축 및 EKG 축의 변화가 관찰됩니다. ROSC는 거의 항상 정상 부비동 빈맥으로 해결됩니다. 2분에서 총 소생술 시간과 에피네프린 투여량을 기록합니다.

10분 동안 1분마다 온도를 기록하십시오. R-O-S-C-E-K-G 리드를 제거할 수 있는 후 ROSC 후 일반적으로 12분에서 50분 이내에 자발적 호흡이 시작되면 경정맥 카테터를 제거하고 직접 압력을 사용하여 지혈을 얻고 자발적 호흡수가 분당 60회 이상일 때 기관을 발관합니다. 마지막으로, 마취로부터 완전한 회복을 위해 필요한 경우 시술 후 처음 2시간 동안 섭씨 37도로 설정된 온도 조절 표면의 회복 케이지에 마우스를 놓고, 케이지는 C-A-C-P-R 마취 후 24시간 후에 표준 수술 후 주거 조건으로 이동할 수 있습니다. 먼저 식염수로 트랜스 심장 관류를 수행한 다음 포르말린으로 고정 후, 신장 고정의 적절성을 확인하기 위해 개복술을 시행합니다.

적절하게 관류되고 고정된 신장은 잘 희어집니다. 심장 마비는 즉각적인 관류 상실을 유발합니다. 압력은 여기에서 평균 동맥압 또는 지도로 표시됩니다.

이러한 관류압의 손실은 음영 영역에서 심정지 기간 동안 국소 신장 피질 혈류 또는 RR CBF의 거의 완전한 정지를 초래합니다. 여기에서 볼 수 있듯이 흉부 압박 및 에피네프린을 통한 소생술은 정상으로 돌아오고 RR CBF는 소생술 후 기간 동안 꾸준히 증가합니다. 이 그림에서는 시술 후 24시간 혈액 요소 질소 또는 BUN 혈청 크레아티닌 및 세뇨관 세포 사멸 정도가 모두 ca CPR을 받은 동물에서 가짜 시술로 치료받은 동물과 비교하여 모두 현저하게 증가했음을 알 수 있습니다. Alan Transferases 또는 LT 및 aspartate에서 minoro transferase 또는 ST로 ca, CPR 마우스는 가짜 처리 동물과 비교됩니다.

여기서, 호중구 젤라틴 관련 lipo callin 또는 end gal에 대한 다클론 항체를 사용하여 수행된 웨스턴 블롯. 신장 허혈성 손상의 민감한 지표가 표시됩니다. 소변 샘플은 A, B, C, D로 표시되는 4 마리의 동물에서 C-A-C-P-R 직전과 24 시간 후에 얻었으며,이 그림은 N gal이 C-A-C-P-R 후 마우스 소변에서 대량으로 상향 조절된다는 것을 보여줍니다.

이 그림은 ca CPR 패치 후 24시간 후에 신장 조직의 단축 고구 부분의 hemat, toin 및 eoin 염색을 보여주지만, 세뇨관 마개로 인한 수질 및 코르티코 수질 세뇨관의 명확한 손상은 동일한 동물에서 동일한 부위의 fluoro jade B stain을 볼 수 있습니다. C-A-C-P-R 후 24시간이 지나면 이 그림에서 볼 수 있습니다. 이 그림에서 C-A-C-P-R을 볼 수 있습니다. 플루오로 제이드 B는 괴사 세포를 밝은 녹색으로 염색하여 고르지 못한 코르티코 수질 세뇨관 괴사를 나타냅니다. 이러한 결과는 급성 신장 손상 또는 KI가 발생한 사람의 신장 생검 소견과 실질적으로 유사하며, KI의 다른 동물 모델에서 생성된 것과는 달리, 이 절차를 시도하는 동안 EKG 신호 잡음을 최소화하고 최적의 압력으로 흉부 압박을 전달하기 위해 휴식 전에 마우스를 조심스럽게 배치하는 것을 기억하는 것이 중요합니다.