Recording Neuronal Field Excitatory Postsynaptic Potentials in Acute Hippocampal Slices(급성 해마 절편에서 신경 필드 흥분성 시냅스 후 전위)

마우스 해마 절편을 인공 뇌척수액 또는 aCSF로 채워진 침수 챔버에 넣습니다.

움직이지 않도록 고정 메쉬로 슬라이스를 고정하십시오.

뉴런 생존력을 유지하기 위해 산소화된 aCSF를 지속적으로 순환시킵니다.

안정적인 전압 기준을 제공하기 위해 기준 전극을 설치하십시오.

자극 및 기록 전극을 해마 CA1 피라미드층과 일직선으로 평행하게 배치합니다.

전기 펄스를 적용합니다.

이 펄스는 뉴런을 자극하여 전압 개폐 이온 채널을 열어 양이온이 유입되도록 하고 활동 전위를 유발합니다.

이러한 활동 전위는 뉴런을 따라 전파되어 흥분성 신경 전달 물질이 시냅스 틈으로 방출되도록 유도합니다.

신경 전달 물질은 시냅스 후 뉴런의 특정 수용체에 결합하여 양이온 유입을 허용하고 막 전위(흥분성 시냅스 후 전위, 즉 EPSP)의 변화를 초래합니다.

기록 전극은 기록 영역(필드 EPSP) 내의 뉴런 집단에서 EPSP를 측정합니다.

렌즈 청소 용지와 U자형 백금 와이어에 고정된 나일론 메쉬를 침수 슬라이스 챔버에 몇 분 동안 미리 담그십시오. 그런 다음 U자형 백금선을 제거합니다. 재활용을 끄고 렌즈 청소 용지 위에 한 조각을 놓습니다. 그런 다음 즉시 슬라이스 고정 메쉬를 슬라이스 위에 놓습니다.

펌프를 켜고 대물렌즈를 ACSF에 담그지 않고 슬라이스를 30분 동안 평형을 유지합니다. 그 동안 기록 전극에 ACSF를 채우고 피펫 홀더에 장착합니다.

다음으로, 테스트된 에폭시 절연 텅스텐 자극 전극을 매니퓰레이터 홀더에 놓고 기준 와이어를 슬라이스 챔버에 놓습니다. 챔버에 두 번째 기준 전극을 추가하고 기록 전극의 헤드 스테이지의 기준 소켓에 연결합니다.

앰프 제어 소프트웨어에서 제로 클램프 모드 상자를 클릭한 다음 출력 게인 목록 상자를 두 번 클릭합니다. 100의 게인을 선택합니다. High-Pass Filter Box 베셀을 두 번 클릭합니다. 3 킬로헤르츠를 선택하고 저역 통과 필터 목록 상자 AC를 두 번 클릭하여 0.1 헤르츠를 선택합니다.

녹음 소프트웨어에서 개방형 프로토콜 획득을 클릭합니다. 50-100밀리초 동안 10-20킬로헤르츠에서 일시적 자극 및 증폭된 전위의 디지털화를 허용하고 일시적 기록 시작 후 10밀리초 후에 자극 아이솔레이터를 자동으로 트리거하는 설정이 있는 프로토콜을 선택하십시오.

자극 및 기록 전극을 피라미드층과 일직선으로 평행하게 배치합니다. 그런 다음 Acquire Edit Protocol(편집 프로토콜 획득)을 클릭하고 팝업 창에서 Trigger(트리거) 탭을 선택합니다. 트리거 소스 상자를 클릭하고 스페이스바를 트리거 소스로 선택합니다. 그런 다음 OK 버튼을 클릭하고 기록 버튼을 눌러 획득을 시작합니다.

자극 아이솔레이터 소프트웨어에서 전압 제어 상자를 클릭하고 0을 입력합니다. 다운로드 버튼을 클릭합니다. 그런 다음 녹음 소프트웨어 창을 클릭하고 스페이스 바를 누릅니다. 1,000에서 8,000까지의 값을 순차적으로 입력하여 이 주기를 반복합니다. 자극 강도를 FEPSP 기울기 값과 연관시키고 FEPSP 기울기 최대값의 40%를 얻는 데 필요한 자극 강도를 결정합니다. 전압 제어 상자를 클릭하고 결정된 값을 입력합니다. 그런 다음 다운로드 버튼을 클릭합니다.

녹음 소프트웨어에서 중지 버튼을 클릭한 다음 획득 메뉴. Edit Protocol(프로토콜 편집)을 클릭하고 팝업 창에서 Trigger(트리거) 탭을 선택합니다. 그런 다음 트리거 소스 상자를 클릭하고 내부 타이머를 트리거 소스로 선택합니다. 확인 버튼을 클릭한 다음 60초마다 필드 전위의 자동 기록을 시작하는 기록 버튼을 클릭합니다. 30분에서 60분 후에 중지 버튼을 클릭합니다.

녹음 소프트웨어에서 Acquire Open Protocol을 클릭하고 기준 녹음과 동일한 프로토콜을 선택합니다. 확인 단추를 클릭한 다음 기록을 클릭합니다. 2-4시간 동안 현장 잠재적 녹음을 자동으로 계속 실행하십시오. 완료되면 중지 버튼을 눌러 녹음을 종료합니다.