Name: Drosophila Pupal의 복부 Immunohistochemistry (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-10-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 29 s
Description: 배우세요 Drosophila pupae 복부 상피 조직 면역조직화학 분석 방법을 통해 성적 이형성 형태 발생과 조직 재구성을 연구하세요. 이 기술은 발달 유전학 연구에 필수적입니다.

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이 작품은 국립 과학 재단 (National Science Foundation)의 부여에 의해 지원되었다.

1. 1 일 전에 시작 : 파리의 건강한 인구는 표준 culturing 프로토콜을 사용하여 유지되어야합니다 달걀 누워 개발 제 3 instar의 애벌레가 pupariation를 시작 방황 때까지 일정한 온도에서 진행하는 허용의 3~4일 후 병 또는 튜브에서 성인을 제거하십시오. 애벌레 / pupal 전환은 prepupae (0시간 번데기 형성 - APF 이후로 간주)의 형성에 의해 표시됩니다. 고정되어 pupae들은 흰색 착색에 의한 구형 pupae에서 아직 자신의 직사각형, 둥근 모양과 앞쪽에 spiracles의 돌출부에 의해 pupariation을 시작하지 않은 애벌레 구분할 수 있습니다. 당신이 필요합니다 : <ul><li> pupae를 수집하기 위해 페인트 브러시 </li><li> culturing의 pupae에 대한 습기 챔버 : 페트리 접시는 침수 종이 타월로 줄지어 있고 pupae의 수집, 유전자형이나 섹스의 다양한 시간 포인트 표시된 필터 종이로 덮여 </li><li> 1X 인산이 pupae를 세척을위한 식염수 (PBS)를 버퍼 </li></ul> 수집, culturing 및 스테이징 pupae <ol><li> 침수 붓을를 사용하면 부드럽게 문화 병 / 유리병에서 0hr APF pupae를 제거하고 습기 챔버의 뚜껑에 배치합니다. </li><li> 화필 및 1X PBS를 사용하면 부드럽게 번데기 케이스에서 파편을 제거하는 pupae을 씻어 </li><li> 필요한 정렬 섹스 pupae 경우. pupae의 생식선 primordia는 남녀를 정렬하는 데 사용할 수 있습니다. 남성 생식선의 primordia 쉽게 약 삼분의이 본문 5 길이 아래 pupal 표피를 통해 본 반투명 디스크 측면 쌍의 수 있습니다. 여성 생식선의 primordia 작은되며 쉽게 식별하지 않습니다. </li><li> 습한 챔버에 적절하게 표시된 위치에 pupae을 놓고 일정 온도로 돌아갑니다. 적절한 발달 시점에 문화. </li></ol> 2. 주 2 : 해부, 고정 및 기본 항체 인큐베이션 전에 시작 : 당신이 필요합니다 : <ul><li> 해부의 stereomicroscope </li><li> 외과 포셉 </li><li> 11 번 블레이드로 외과 메스 </li><li> 두 아홉 잘 유리 우울증 요리 (코닝 제품 # 7220-85) <ul><li> 1X PBS 한 접시의 우물을 채우기 : 이것은 해부 pupae 청소 rinsing 요리 </li><li> 고정 버퍼와 두번째 접시의 우물을 작성 </li></ul></li><li> 항체 보육에 대한 습기 챔버. 우리는 침수 종이 타올로 늘어선 플라스틱 sealable 샌드위치 상자를 사용합니다. </li><li> 고정 버퍼 : 1X PBS, 4 % paraformaldehyde, 0.2 % deoxycholic 산성 (permeabilization에 대한) </li><li> 해부 플랫폼 : 한쪽으로 준수 양면 테이프 조각 맑은 현미경 슬라이드 </li><li> 1X PBS </li><li> p100 또는 p200 pipettor </li></ul> 해부 <ol><li> 포셉을 사용하면 부드럽게 한 번에 pupae 하나를 제거하고 테이프의 광범위한 너비를 직면하고있는 pupae의 앞쪽에 끝이 해부 플랫폼에서 그들을 놓으십시오. pupae이 지나치게 서부 유럽 표준시있다면, 먼저 그들을 종이 타월을 사용하여 건조 얼룩. </li><li> pupae 완전히 테이프 준수 전에 그들을 위치로 붓을을 사용합니다. </li><li> 공기 건조에 pupae 허용하고 테이프 (5-10 분)을 준수 </li><li> 수술 메스 양자 각 pupae을 해부하다. 이것은 가장 앞쪽에에서 pupae의 뒷부분 끝까지 하나의 신속한 상처로 수행됩니다. 정상적으로 완료하면, 상처는 앞쪽에 및 사후 모두 spiracles 쌍을 이등분합니다. 세정 빠르게 조직 proteolytic 손상을 방지하기 위해 필요한 샘플을 청소로 한 번에 10 개 이상 pupae을 해부하다. </li><li> 붓을 사용하여 테이프에서 그들을 느슨하게 각 해부 pupae에 1X PBS의 작은 금액을 전송합니다. </li></ol> 청소, 고정 및 기본 항체 인큐베이션 <ol start="6"><li> 외과 포셉 한 쌍이 anteriorly 개별 번데기의 절반을 파악하고 즉시 rinsing 요리의 잘에 젖어 함께. 해부 플랫폼은 현미경 무대에 rinsing 음식으로 대체해야합니다. 처리가 완료되고 샘플 장착을위한 준비가 될 때까지 pupae 케​​이스는 표본에 남아 있어야합니다. </li><li> 아직 붙잡는 동안 번데기의 절반 부드럽게 복부의 내부 조직을 떠나 씻어 pipettor을 사용합니다. 세척하는 동안 너무 많은 압력이 상피 세포의 손실로 이어질 수 있습니다. </li><li> 즉시 상온에서 고정 버퍼에 깨끗한 번데기의 절반을 전송 마찬가지로 남아있는 번데기의 절반을 처리합니다. 연습, 해부 20 번데기의 반쪽의 세척은 5 분도 채 안 걸릴한다로. </li><li> pupae 1 (하나) 시간 실온에서 고정 버퍼에 품어 수 있습니다. </li><li> 1X PBS에서 수정 pupae 배 오분을 씻어 </li><li> 샘플은 즉시 immunohistochemistry를 위해 처리될 수 있습니다 또는 최대 3 개월까지 셀 또는 에피토프 반응의 손실없이 -20 ° C에서 100 % 에탄올에 저장되어있을 수 있습니다. </li><li> 샘플을 저장하려면, 희석을 통해 샘플을 평형PBS의 시리즈 : 전 100 % EtOH로 전송하기 위해 각 희석에 20 분 실온에서 EtOH (3시 1분, 1시 1분, 1시 3분). </li><li> 샘플 immunohistochemistry에 대한 처리하기 전에 반대 시리즈를 통해 PBS에 다시 equilibrated해야합니다. </li><li> 차 항체를 추가하기 전에 1 (하나) 시간 1X PBS (2 % 소 혈청 알부민과 보충)에서 샘플을 차단합니다. </li><li> 4 박 이상의 1X PBS 적절한 농도로 희석 차 항체 ° 락을하지 않고도 C와 부화. </li></ol> 3. 3 일 : 보조 항체 보육, 장착 및 이미징 전에 시작 : 당신이 필요합니다 : <ul><li> 두 외과 포셉 </li><li> 마운트 미디어 (글리세롤, Vectashield [벡터 연구소] 또는 Slowfade 골드 [Invitrogen]) </li><li> 우울증 잘 현미경 슬라이드 (0.8 ㎜) </li><li> Coverslips (24 X 40mm) </li></ul> 차 항체 보육 및 장착 : <ol><li> 샘플에게 배 십분 1X PBS로 각각 씻으십시오 </li><li> 이차 항체를 추가하기 전에 1 (하나) 시간 1X PBS (2 % 소 혈청 알부민과 보충)에서 샘플을 차단합니다. </li><li> 3 (세) 시간 락을없이 어둠 속에서 실온에서 1X PBS 적절한 농도로 희석 차 항체와 부화. </li><li> 샘플에게 배 십분 1X PBS로 각각 씻으십시오 </li><li> 적절한 경우, counterstain pupae (우리는 DAPI로 핵을 얼룩 예제 [4 ', 6 diamidino - 2 - phenylindole] 10 분 동안 PBS에 희석). </li><li> 장착하기 전에 적절한 미디어에 샘플을 (30 분 최소) 평형. </li><li> 샘플 슬라이드를 준비합니다. pupae의 형태 플랫 장착을 방지합니다. 샘플은 이미지에 대한 우울증 슬라이드 (드롭 슬라이드)의 우물에 탑재하고 있습니다. 장소 잘 우울증에 장착 미디어 75 100ul. 여러 샘플은 단일 슬라이드에 장착할 수 있습니다. </li><li> 번데기의 경우는 설치하기 전에 샘플에서 제거되어야합니다. anteriorly 내부 pupal 멤브레인 파악하지 않도록하는 개인 번데기 케이스를 파악. </li><li> 포셉의 두 번째 쌍의로 부드럽게 머리에 의해 내부 pupal 멤브레인을 파악하고 pupal 케이스에서 제거합니다. </li><li> 즉시 잘 우울증에 샘플을 전송 및 추가 샘플 처리를 계속합니다. </li><li> 우울증에 잘 측면 표면이 위로 향하게와 샘플 균일 프로브 또는 포셉 위치를 사용합니다. 가끔 공기 방울은 프로브와 함께 제거할 수 있습니다. </li><li> 부드럽게 공기 방울을 소개 않도록주의하면서 시료로 coverslip을 낮출 </li></ol> 4. 대표 결과 : 샘플이 프로토콜은 성인 복부의 매출 형태를 유지를 사용하여 준비 하였다. 이미지 스택은 복부 토폴로지를 조사하기 위해 적용될 수 2 차원 이미지를 3 - D 렌더링을 생성할 것으로 예상됩니다. <img src="/files/ftp_upload/3139/3139fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. Drosophila pupae의 세그먼트 유전자 제품 날지 못하는 단백질과 Engrailed 표현 (EN - gal4 : uas - GFP)은. : 및 안티 GFP 마우스 방지 WG (아이오와 하이 브리 도마 은행 4D4)와 번데기 형성 후 26시간 (APF)에 시각되었습니다. 10X 배율은 앞쪽에 남아 있으며, 지느러미가있다. Nucleii는 DAPI로 counterstained되었습니다. 약 50 이미지 (슬라이스 사이 ΔZ는 2.5μm이다)의 스택은 예상했다.

<ol><li>Kopp, A., Duncan, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anteroposterior+patterning+in+adult+abdominal+segments+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Anteroposterior patterning in adult abdominal segments of Drosophila.</a> Dev. Biol. 242, 15-30 (2002).</li>
<li>Ninov, N., Chiarelli, D. A., Martin-Blanco, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extrinsic+and+intrinsic+mechanisms+directing+epithelial+cell+sheet+replacement+during+Drosophila+metamorphosis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Extrinsic and intrinsic mechanisms directing epithelial cell sheet replacement during Drosophila metamorphosis.</a> Development. 134, 367-379 (2007).</li>
<li>Bischoff, M., Cseresnyes, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+rearrangements%2C+cell+divisions+and+cell+death+in+a+migrating+epithelial+sheet+in+the+abdomen+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Cell rearrangements, cell divisions and cell death in a migrating epithelial sheet in the abdomen of Drosophila.</a> Development. 136, 2403-2411 (2009).</li>
<li>Matsuda, R. in Morphology and evolution of the insect abdomen. , Pergamon Press. Oxford. (1976).</li>
<li>Kerkis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Growth+of+the+Gonads+in+Drosophila+Melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The Growth of the Gonads in Drosophila Melanogaster.</a> Genetics. 16, 212-224 (1931).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

이 비디오에 제시된 기술은 발달 시간 포인트의 다양한 Drosophila pupae를 준비하는 데 사용할 수 있습니다. 32시간 24 시간의 기간 동안 APF 처리 Pupae는 APF 상피에서 세포의 손실을 가장 쉽습니다. 확장 부화 단계 동안 세제의 사용 (예 : 트리톤 X - 100과 십대 초반 - 2​​0 등) 셀 손실의 가능성을 증가하기 때문에 권장하지 않습니다. 오히려, deoxycholic 산성은 초기 고정 단계에서 세제로 사용됩니다. 모든 후속 단계는 세제없이 1X PBS에서 수행됩니다. 또한, 확장 부화 단계 중에 샘플을 출렁 이는 것은 셀 손실을 증가하고 피해야한다. 샘플은 공촛점 현미경 기술을 이용하여 몇 군데하실 수 있습니다. 그러나, Drosophila pupae과 같이 설명 처리도 공촛점 기술에 비해 이미지 품질을 항복 구조 조명 현미경 시스템을 사용하여 몇 군데하실 수 있습니다.

<ul><li> 해부의 stereomicroscope </li><li> 외과 포셉 </li><li> 11 번 블레이드로 외과 메스 </li><li> 아홉 잘 유리 우울증 요리 (코닝 제품 # 7220-85) </li><li> culturing의 pupae에 대한 습기 챔버 </li><li> 1X 인산은 버퍼링 식염수 (PBS) </li><li> # 11 외과 메스 </li><li> 양면 테이프 </li><li> 고정 버퍼 : 1X PBS, 4 % paraformaldehyde, 0.2 % deoxycholic 산성 (permeabilization에 대한) </li><li> p100 또는 p200 pipettor </li><li> 우울증 잘 현미경 슬라이드 (0.8 ㎜) </li></ul>

drosophila pupal의 복부 immunohistochemistry

Drosophila Pupal Abdomen Immunohistochemistry

Drosophila pupal의 복부는 상피 morphogenesis와 1-3 성적으로 동종 이형의 morphologies의 개발 연구를 위해 설립된 모델 시스템입니다. (25 ° C) 약 96시간에 걸쳐 pupation, 동안, imaginal 세포의 proliferating 인구는 성인 복부 세그먼트를 생성하는 애벌레 표피를 교체하십시오. 이러한 imaginal 세포는, embryogenesis 동안에 태어난 유충의 각 복부 세그먼트에서 histoblast의 둥지의 측면 쌍으로 존재합니다. histoblast의 둥지의 네 쌍은 성인 지느러미 표피 (앞쪽에 및 사후 지느러미 둥지), 복부 표피 (복부 둥지)와 각 세그먼트 (공기 구멍 둥지) 4과 관련된 spiracles을 일으키다. puparation되면 이러한 diploid 세포는 (큰 polyploid 애벌레 표피 세포 - LECs의 크기로 구별) 증식, 이주 및 LECs 교환의 틀에 박힌 절차를 시작합니다. 다양한 분자와 유전자 도구는 성인 복부의 morphogenesis에 관련된 유전자 경로의 기여를 조사하기 위해 고용 수 있습니다. 최고의 성인 phenotypes는 일반적으로 성인 복부 손톱의 아래의 절개를 분석하고 있습니다. 그러나, 근본적인 분자 과정의 조사 독특한 도전을 제시 pupal 상피의 immunohistochemical 분석을 필요로합니다. Temporally 동적 morphogenesis와 별개의 두 상피 인구 (애벌레와 imaginal)의 상호 작용은 절개와 후속 처리되는 동안 과도한 세포 손실하는 경향이 연약한 조직을 생성합니다. 우리는 해부, 고정, 장착 및 공촛점 또는 표준 형광 현미경에 적합한 일관성있는 고품질의 샘플을 생성 immunohistochemical 연구 Drosophila pupal의 abdominem의 상피의 이미지의 방법을 개발했습니다.

의 항체 염색법<em&gt; Drosophila</em&gt; pupae 성인 복부 발달 유전학의 유전자 분석을 향상시킬 수 있습니다. 우리는 무대의 해부, 고정 및 항체 염색법을위한 프로토콜을 제시<em&gt; Drosophila</em&gt; pupal 복부.

Drosophila Pupal의 복부 Immunohistochemistry

초파리(Drosophila) 번데기 복부는 상피 형태 형성 및 성적 이형성(sexually dimorphic)의 발달 연구를 위한 확립된 모델 시스템입니다...

이 절차의 전반적인 목표는 면역조직화학 염색을 위해 초파리(drosophila puy)의 복부 상피를 준비하는 것입니다. 이는 먼저 성체 초파리를 양측으로 해부하고 내부 장기를 제거하여, 증식하는 상상반(imaginal disc), 골아세포(osteoblast) 및 유충 표피 세포로 구성된 복부 상피만이 고치막(pupil membrane)에 부착된 상태로 남게 함으로써 수행됩니다.그 후 조직을 고정하고 외부 동공 케이스에서 제거한 항체와 함께 배양한 뒤, 면역형광 현미경으로 시각화하여 복부 상피의 전체적인 형태와 표적 단백질의 발현을 확인합니다. 안녕하세요, 저는 존 요더(John Yoder)입니다. 제 연구실은 앨라배마 대학교 생물과학과에 있습니다.안녕하세요, 저는 Yoda 연구실의 대학원생 we won입니다. 오늘은 초파리 번데기의 해부 방법과 초파리 번데기 복부의 면역조직화학 염색 방법을 보여드리겠습니다.이 방법은 상피 형태 형성 및 조직 재구성 과정을 조사하는 데 사용할 수 있습니다. 본 연구에서는 특히 성체 초파리 복부의 성적 이형태 발달을 조사하기 위해 이 기술을 사용합니다. 성체가 없는 25 °C 배양 병에서, 최근에 부동화되었으며 큐티클의 갈색화가 아직 시작되지 않은 pupae를 0시간 Pupa-Female(PF)로 간주하여 식별합니다. 젖은 붓을 사용하여 이 pupae들을 조심스럽게 제거하고 가습 챔버의 뚜껑 위에 놓습니다. 필요한 경우 붓과 PBS를 사용하여 pupae 케이스에서 이물질을 부드럽게 씻어냅니다.0시간째에 새우를 성별에 따라 분류하십시오. 수컷의 생식선 원기는 눈의 큐티클을 통해 쉽게 확인할 수 있습니다. 몸의 약 3분의 2 지점에서 암컷의 생식선 원기는 더 작으며 식별하기가 쉽지 않습니다.이제 가습 챔버 내의 젖은 여과지 위에 배아를 놓습니다. 덮개를 닫고 다시 항온 환경으로 옮깁니다. 동물이 관심 있는 발달 시점에 도달하면 해부를 진행합니다.PF 이후 24~32시간 동안 처리된 동공이 이후 공정 중 상피 세포 손실이 발생하기 가장 쉽다는 점에 유의하십시오. 투명 슬라이드 한쪽 면을 따라 양면테이프를 붙여 해부 준비를 합니다. 그 다음 핀셋을 사용하여 전방 구체 사이의 각 동공을 조심스럽게 잡고, 등쪽이 위를 향하도록 테이프 위에 놓습니다.작업 속도가 너무 느려지는 것을 방지하기 위해, 이러한 방식으로 최대 10개의 PPE를 나열하십시오. 5~10분 후면 PPE가 완전히 굳게 되는데, 그전에 페인트 브러시를 사용하여 간격을 균등하게 띄우고 평행하게 배치하십시오. 이 단계에서 너무 오래 건조시키면 품질이 저하될 수 있습니다.신속하게 진행하십시오. 이제 외과용 메스를 사용하여 양측의 각 번데기 A를 해부합니다. 번데기의 앞쪽 끝에서 뒤쪽 끝까지 빠르게 한 번 절개하십시오.적절하게 절개했다면, 절단면이 전방 및 후방 구형 쌍을 모두 이분하여 대칭적인 좌우 절반이 생성되며, 이를 통해 테이프로부터 번데기를 분리할 수 있습니다. 수술용 핀셋을 사용하여 각각의 해부된 번데기에 붓으로 소량의 PBS를 도포합니다. 번데기 절반의 앞쪽 끝을 잡고 해부 현미경 스테이지 위에 있는 PBS가 채워진 세척 접시에 담근 후, 번데기를 잡은 상태에서 피펫터를 사용하여 복강 내로 PBS를 펌핑함으로써 내부 조직을 조심스럽게 씻어냅니다.상피 세포가 손실될 수 있으므로 과도한 압력을 가하지 마십시오. 깨끗해진 조직을 즉시 상온의 고정 완충액 400 µL에 담가 번데기 절반 부분을 모두 세척하십시오. 숙련된 경우, 20개의 번데기 절반 부분을 해부하고 세척하는 데 5분 미만이 소요됩니다.puy를 상온의 고정 완충액에서 1시간 동안 배양한 후, 400 µL의 PBS로 5분씩 3회 세척합니다. 샘플을 보관하려면 먼저 100% methanol로 2회 세척한 다음, 100% ethanol로 옮겨 보관하십시오. 이 샘플들은 -20 °C의 100% ethanol에서 최대 3개월 동안 세포 손실이나 에피토프 반응성 저하 없이 보관할 수 있습니다.보관된 샘플을 처리하려면, 먼저 에탄올 시리즈를 통해 PBS에서 재수화해야 합니다. 실온에서 2% BSA가 포함된 PBS로 샘플을 1시간 동안 흔들지 않고 블로킹하여 면역조직화학 염색을 진행하십시오. 샘플을 흔들면 복부 상피에서 세포 손실이 크게 증가합니다.그 다음 블로킹 용액을 PBS에 적절한 농도로 희석한 1차 항체로 교체합니다. 증발을 방지하기 위해 밀폐된 습윤 챔버 내에서 4°C로 흔들지 않고 하룻밤 동안 샘플을 배양합니다. 흔들지 않고 PBS로 샘플을 3회 세척하며, 세척당 10분씩 소요합니다.그 후 2% BSA가 포함된 PBS에서 1시간 동안 흔들지 않고 샘플을 블로킹합니다. 블로킹 용액을 PBS에 희석하여 실온으로 준비한 2차 항체로 교체합니다. 그런 다음 샘플을 암소에서 3시간 동안 흔들지 않고 배양합니다.적절한 경우, 2차 항체 처리 후 PBS로 10분씩 3회 세척하십시오. 표본을 대조 염색하십시오. 예를 들어, PBS로 희석한 DPI를 사용하여 10분 동안 배양함으로써 핵을 염색할 수 있습니다. 다음으로, 마운팅 용액(mounting media)에 샘플을 넣고 최소 30분 동안 유지하십시오.시료를 고정하려면, 두 번째 핀셋으로 내부 동공막이 닿지 않게 주의하며 각 동공 케이스의 앞부분을 잡으십시오. 내부 동공막의 머리 부분을 살짝 잡습니다. 그런 다음 동공 케이스에서 시료를 조심스럽게 끌어냅니다.unca 샘플을 75~100 µL의 마운팅 배지가 들어 있는 오목 슬라이드로 옮깁니다. 하나의 슬라이드에 여러 개의 샘플을 마운트할 수 있습니다. 이제 프로브와 핀셋을 사용하여 샘플들을 오목한 부분에 균일하게 배치합니다.측면이 위를 향하도록 회전시킨 후, 프로브를 사용하여 기포를 제거합니다. 마지막으로, 이 전처리 과정에서 기포가 유입되지 않도록 커버슬립을 샘플 위에 조심스럽게 덮습니다. 구조광 조명 현미경(Structured illumination microscopy)은 공초점 기술과 비교 가능할 것입니다.이는 슬라이스 간 간격이 2.5 microns인 50장의 공초점 이미지 투영도입니다. 조직은 PF 단계의 26시간 상태이며, 염색은 wingless 단백질과 grail에 의해 유도된 GFP 및 핵의 발현 패턴을 보여줍니다. 앞쪽(anterior)은 왼쪽이며, 등쪽(dorsal) 특징들은 화면 상단에 위치합니다.이 영상은 본 절차를 통해 시료의 전체적인 형태가 어떻게 보존되는지를 보여줍니다. 이를 통해 이미지 스택의 3차원 재구성이 가능해집니다. 수십 개의 동공 조직을 숙련되게 처리하여 30분 이내에 고정 완충액에 넣을 수 있습니다.또한, 이 프로토콜을 사용하여 준비된 샘플은 인시투 하이브리드화(in situ hybridization)가 가능하므로, 유전자 발현 연구에 매우 유용한 프로토콜입니다.

drosophila-pupal-abdomen-immunohistochemistry

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 프로토콜은 해부 Drosophila의 유충에 immunohistochemistry을 수행하는 방법을 보여줍니다.

Drosophila 애벌레 NMJ Immunohistochemistry

애벌레의, Pupal 및 성인의 해부 및 Immunohistochemistry<em&gt; Drosophila</em&gt; 망막

초파리의 성체 구조는 상상 원반이라고 하는 주머니와 같은 구조에서 파생됩니다. 이러한 디스크의 분석은 조직 결정, 구획 경계 설정, 세포 증식, 세포 운명 사양 및 평면 세포 극성을 포함한 많은 발달 과정에 대한 통찰력을 제공합니다. 이 프로토콜은 광/형광 현미경 검사를 위해 가상 디스크를 준비하는 데 사용됩니다.

해부하고, 상상 디스크의 면역 염색에서 초파리

이 기술의 목표는 연구자들이 모든 연령의 Drosophila melanogaster에서 번데기 안구 디스크의 해부, 면역 염색 및 장착을 수행할 수 있도록 하는 것입니다.

해부와의 설치<em&gt; 초파리</em&gt; 번데기 아이 디스크

진딧물 배아에 대한 전체 마운트 면역 염색 프로토콜이 제시되며, 이 프로토콜에서는 배경 염색을 줄이고 조직 투과성을 증가시키기 위한 중요한 조건을 다룹니다. 이러한 조건은 진딧물의 배아 조직에서 단백질 발현을 효과적으로 검출하기 위해 특별히 개발되었습니다.

완두콩 진딧물 태아의 면역 염색을위한 중요한 조건의 확인 : 조직 투과성을 증가 및 배경 염색을 감소

정확 하 게 초파리 조직에서 성적 증명서 또는 단백질을 감지 하는 능력은 그들의 풍부 및 지역화 프로세스와 관련 된 개발을 공부 하 고 중요 합니다. 여기에 번데기 날개를 해 부하는 간단한 프로시저의 설명이 이다. 이 날개는 몇 가지 기법 (immunohistochemistry, PCR 분석 결과, 등)에서 샘플으로 사용할 수 있습니다.

번데기 날개 초파리 Immunodetections 또는 PCR 분석 실험에 적합의 해 부를 신속 하 고 효율적인 방법

Drosophila 난소 줄기 세포 틈새 시장 개발을 공부 하는 우수한 모델 시스템입니다. 애벌레와 성인 난소를 해 부 방법 출판 되었습니다 비록 번데기 난소 해 자세히 게시 되지 않은 다른 기술이 필요 합니다. 여기 우리는 해 부, 얼룩, 번데기 난소를 장착 한 프로토콜 개요.

해 부와 초파리 번데기 난소의 얼룩

이 문서는 초파리 번데기 망막 조직의 immunohistochemistry, 서쪽 분석 및 RNA 추출에 대 한 처리에 대 한 프로토콜 함께 해 부에 대 한 수술 메서드를 제공 합니다.

Immunohistochemistry, 서쪽 분석 및 RNA 격리에 대 한 초파리 번데기 망막의 해 부

본 프로토콜은 초파리 번데기 노툼의 고정 조직의 준비 및 시각화를 자세히 설명합니다. 그것은 손상되지 않았거나 상처 입은 조직에 사용할 수 있으며 조직의 원래 구조는 보존됩니다. 해부, 고정 및 염색 절차는 모두이 기사에서 설명합니다.

Drosophila Pupal Notum 해부, 고정 및 시각화

초파리는 근발생의 기본 메커니즘을 이해하는 강력한 모델입니다. 흉부 반절편 절편을 해부 및 준비하기 위한 이 프로토콜은 번데기 및 성인 단계 모두에서 간접 비행 근육의 현미경 분석을 가능하게 합니다. 이 프로토콜은 세포 형태, 단백질 국소화, 근육 구조 및 근형성의 기타 여러 측면의 공초점 이미징을 가능하게 합니다.

현미경 접근을 위한 Drosophila melanogaster 간접 비행 근육의 해부

배우세요 Drosophila pupae 복부 상피 조직 면역조직화학 분석 방법을 통해 성적 이형성 형태 발생과 조직 재구성을 연구하세요. 이 기술은 발달 유전학 연구에 필수적입니다.

Drosophila Pupal의 복부 Immunohistochemistry

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