Name: CD4 + HIV에 대한 일회용 Microfluidic 칩을 사용하여 T - 림프구 캡처 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T13:03:52.000+00:00
Duration: 12 min 44 s
Description: 학습하세요 PDMS 기반 일회용 마이크로플루이딩 칩을 사용하여 환자 혈액에서 CD4 양성 T 헬퍼 림프구를 정량화하고 포착하는 방법을. 이 기술은 자원이 제한된 환경에서 HIV 진단을 위한 면역학 연구에 활용됩니다.

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<ol><li> 안티 CD4 + biotinlayted 표면 microfluidic 채널을 준비합니다. </li><li> 주사기 펌프와 microfluidic 채널에 5 ML / 분 샘플 혈액의 10 ML을 주사. </li><li> PBS로 20 분 20 ML / 분 혈액을 밖으로 플러시. </li><li> 15 분 5ul/min에 희석 외과 lysing 솔루션 (PBS로 재고 솔루션에서 10 % 희석) 주사. </li><li> 15 분 알을 품다. </li><li> 5 ML / 20 분 분 주요 인 경우에는 3 번 CD + 항체 솔루션 (PBS로 재고 솔루션에서 10 % 희석) 주사. </li><li> 2 시간 동안 부화. </li><li> 5 ML / 15 분 분 PBS와 채널을 플러시. </li><li> 동시에 20 분 5 ML / 분 20 % AF488 CD4 + 항체, 0.2 % DAPI 주식 솔루션,와 10 %의 보조 인 경우에는 3 번 CD + 항체를 주사. </li><li> 20 분 품어. </li><li> 5 ML / 15 분 분 PBS와 채널을 플러시. </li><li> 형광 현미경으로 세포를 개수 : <ol><li> 화이트 (광학) - 흑백 : 셀 및 먼지 </li><li> UV (DAPI) - 블루 : 세포에만 </li><li> 블루 (CD4 +) - 초록색 : T - 림프구와 단핵구 </li><li> 그린 (인 경우에는 3 번 CD +) - 빨간색 : T - 림프구 전용 </li></ol></li></ol>

<table><tbody><tr><td>PDMS 마이크로채널</td><td></td><td></td><td></td><td>SU-8 몰드로 제작됨</td></tr><tr><td>혈액</td><td></td><td></td><td></td><td>정상인 피험자로부터 기증받은 혈액. Mass General Hospital, 10 X 고밀도 WBC 또는 Brigham and Women&amp;rsquo;s Hospital.</td></tr><tr><td>PBS</td><td>완충액</td><td>Invitrogen</td><td>14190</td><td>1x Dulbecco&amp;rsquo;s Phosphated Buffered Saline.</td></tr><tr><td>FACS 용해액</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>349202</td><td>원액을 PBS로 10%까지 희석함.</td></tr><tr><td>Anti-CD4+ 비오틴화 항체</td><td></td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>IM0704</td><td>Anti-CD4+ 비오틴화 항체로 표면 처리함. 0.2mg 원액과 1ml 탈이온수를 혼합한 후, 원액을 PBS/BSA로 10%까지 희석함.</td></tr><tr><td>goat anti-hCD3delta</td><td>pAB</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>sc-1128</td><td>원액을 PBS로 10%까지 희석함</td></tr><tr><td>rabbit anti-goat IgG PE</td><td></td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>sc-3755</td><td>anti-CD3 항체용 2차 항체, 원액을 PBS로 10%까지 희석함</td></tr><tr><td>anti-human CD4+</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>557695</td><td>Alexa Fluor 488 표지, 원액을 PBS로 20%까지 희석함.</td></tr><tr><td>DAPI</td><td></td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td>4&amp;rsquo;,6-dianidino-2-phenylindole, dihydrochloride 용액, 원액을 PBS로 0.2%까지 희석함.</td></tr></tbody></table>

cd4 + hiv에 대한 일회용 microfluidic 칩을 사용하여 t - 림프구 캡처

CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV

CD4 + HIV에 대한 일회용 Microfluidic 칩을 사용하여 T - 림프구 캡처

안녕하세요, 저는 하버드 MIT 보건과학 및 기술부(Division of Health Sciences and Technology)의 TI Mercy 교수님 연구팀에서 연구원으로 재직 중인 Richard Lin입니다. 제가 진행하고 있는 프로젝트는 자원이 제한된 환경에서 환자의 혈액 내 CD4 양성 및 C3 양성 T 림프구를 정량화하고 포획하는 것입니다.제 바로 앞에 있는 것은 PDMS(Polymethylsiloxane)로 구성된 마이크로 유체 장치입니다. 이 장치의 채널 높이는 50 µm이며, 장치 내 총 부피는 10 µL입니다. 따라서 이는 T 헬퍼 림프구를 포집하는 데 사용할 매우 정밀한 장치입니다.기본적으로 HIV 환자를 위한 진단 벤치마크입니다. 마이크로 유체 장치의 표면은 이미 단백질로 준비되었으며, 시린지에는 CD4 양성 항체가 들어 있습니다. 현재는 pH 7.4의 PBS 생물학적 완충액만 있는 상태이며, 이제 이를 채널로 흘려보내 과잉의 CD4 양성 항체를 씻어내겠습니다.이 단계에서는 단순히 잔여물을 씻어내려는 것이며 유속이 크게 중요하지 않으므로, 유속을 조절할 필요가 없습니다. 이곳이 장치의 입구가 될 것이며, 제 왼쪽이자 여러분의 오른쪽 방향이 출구가 될 것입니다. 이제 과량의 항체 용액을 씻어내겠습니다. 출구 쪽을 보시면 유체가 흘러나오는 것을 알 수 있는데, 매우 적은 양이지만 자세히 보시면 튜빙을 통해 채널에서 유체가 배출되는 것을 확인하실 수 있습니다.이제 과잉 항체 용액을 씻어냈으므로, 혈액을 주입할 준비를 할 수 있습니다. 먼저 입구에서 튜브를 분리하겠습니다. 이제 인혈(human blood), 전혈(whole blood)이 담긴 새 주사기를 준비하겠습니다.따라서 이는 환자 샘플이 아니라, 미세유체 장치에 혈액을 주입하기 위해 준비하는 동안 사용하는 건강한 피험자의 샘플입니다. 이제 주사기를 주사기 펌프에 장착하겠습니다. 전원을 켜면 주사기의 유속을 확인할 수 있으며, 유속은 5 µL/min으로 설정했습니다.이제 혈액 주입을 위한 준비를 하겠습니다. 시린지 펌프를 수직으로 배치할 것인데, 이는 혈구 세포가 침전되는 성질이 있어 세포가 채널 안으로 흘러 들어가게 하기 위함입니다. 따라서 세포가 튜빙 바로 근처인 바닥 쪽으로 침전되도록 하는 것이 좋습니다.이제 모든 설정이 완료되었습니다. 제 장치의 부피는 10 µL당 10 µL입니다. 그리고 채널 벽으로 흘려보내고자 하는 부피 또한 1

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

Microfluidic 장치를 사용하여 셀 캡처

이 시각 실험 라이브 공촛점 이미징 실험에 대한 HIV의 형광 분자 클론을 활용을위한 가이드입니다.

HIV와 라이브 공촛점 현미경의 형광 클론을 사용하여 HIV의 머릿속 휴대 전화 전송

우리는 태트 - 응답성 LTR 이외에, 가지고 lentiviral 벡터를 개발, HIV - 1 태트 및 레브 종속적인 방식으로 기자의 유전자 발현을 조절 할 수 레브 - 반응 요소 (RRE). 벡터는 GFP의 표현을 통해 살아있는 세포에서 HIV 복제의 구체적인 검색을 허용합니다.

그린 형광 단백질을 표현 레브 종속 Lentiviral 벡터를 사용하여 HIV - 1 양성 세포의 특정 마킹

통합 마이크로 열가소성 칩은 분자 진단으로 사용하기 위해 개발되었습니다. 이 칩은 핵산 추출, 역 transcriptase 및 PCR을 수행합니다. 제조 및 칩을 실행하기위한 방법은 설명되어 있습니다.

마이크로 유체 칩 제작 및 인플루엔자을 감지하는 방법

이 문서에서 우리는 단일 세포 분석을위한 마이크로 유체 칩을 제시한다. 그것은 수있는 세포 내 단백질, 효소, 조효소, 형광 분석이나 면역에 의해 두 번째 메신저의 정량화.

단일 세포의 다목적 화학 분석을위한 미세 유체 칩

이 프로토콜은 HIV 감염에 대한 줄기 세포 기반 엔지니어링 면역을 가진 인간화 된 골수/간/흉선 마우스 모델을 구성하는 방법을 설명합니다.

인간화 된 마우스 모델에 HIV 감염에 대 한 줄기 세포를 기반으로 설계된 내성

설명한 quantitate 96 유전자의 표현 하는 방법론 이며 단일 셀 전 비보, 차동의 식별을 위해 허용 하 여 18 표면 단백질 유전자와 감염 되지 않은 세포에 상대적으로 바이러스에 감염 된 세포에 있는 단백질을 표현. 우리는 접근 연구 SIV에 감염 된 CD4+ T 적용 붉은 털 원숭이에서 분리 하는 세포.

단일 셀 정량 mRNA와 유인원 면역 결핍 바이러스에 감염 된 CD4에 표면 단백질 표정+ T 세포 격리에서 붉은 털 원숭이

여기에 제시된 것은 형광 이미징 접근법, D NA, RNA및 protein (MICDDRP)의 궁극적 인 형광 C ell 기반dtection을위한 프로토콜이며, 이는 바이러스 단백질 및 다양한 유형 및 가닥의 핵산의 동시 형광 단일 세포 시각화가 가능한 방법입니다. 이 접근법은 다양한 범위의 시스템에 적용될 수 있습니다.

바이러스 핵산 및 단백질을 시각화하고 HIV, HTLV, HBV, HCV, 지카 바이러스 및 인플루엔자 감염을 모니터링하기 위한 단일 세포 다중화 형광 이미징

여기서, 우리는 나노 유체 장치에 있는 급성 사건 및 생산적인 HIV-1 감염을 위해 단 하나 세포가 감시되는 프로토콜을 제시합니다. 이미징 데이터는 바이러스 호스트 수용체 상호 작용 및 신호 경로 역학을 정의합니다. 이것은 나노 유체 고처리량 종방향 단세포 배양 및 이미징을 위한 첫번째 방법이다 운동및 분자 상호 작용을 연구하기 위하여.

다중 매개 변수 광유체 플랫폼을 사용하여 칼슘 유입 및 HIV-1 감염의 단세포 특성화

임상 미세유체 칩은 임상 환자 혈액 샘플 전처리를 단순화하고 순환 종양 세포(CTC)를 칩에 면역 형광으로 염색하여 단일 CTC를 신속하게 검출하고 식별할 수 있는 중요한 생물 의학 분석 기술입니다.

다용도 순환 종양 세포의 분리를 위한 임상 미세유체 칩 플랫폼

순환 종양 세포(CTC)는 암 진행 및 전이 연구에 매우 중요합니다. 이 기사에서는 CTC 농축 및 단일 CTC 시퀀싱을 위한 고처리량 통합 프로토콜을 제시하여 포획 효율성과 CTC 순도를 개선하는 동시에 오염 및 시퀀싱 비용을 줄여 정밀 종양학 연구 및 임상 응용을 발전시킵니다.

미세유체공학 기반 고처리량 순환 종양 세포 분류 및 단일 세포 시퀀싱 기술

학습하세요 PDMS 기반 일회용 마이크로플루이딩 칩을 사용하여 환자 혈액에서 CD4 양성 T 헬퍼 림프구를 정량화하고 포착하는 방법을. 이 기술은 자원이 제한된 환경에서 HIV 진단을 위한 면역학 연구에 활용됩니다.

CD4 + HIV에 대한 일회용 Microfluidic 칩을 사용하여 T - 림프구 캡처

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