Name: 마우스에 Intracranial 이종 이식 연구에 대한 간단한 안내 스크류 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 11 s
Description: 배우세요 마우스 두개내 이종이식 모델 수립을 위한 가이드 스크류 방법을 통해 신약 효능을 평가하는 기술입니다. 이 기법은 U 87 mg 신경교종 세포를 이용하여 종양 치료 반응을 연구하는 데 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

저자는이 모델을 개발 지원 Verlene 헨리와 린지 홈즈 감사하고 싶습니다. 이 작품은 부분적으로 제임스 S. 맥도넬 재단 (# 220,020,173)에 의해 재정 지원되었다.

1. 셀 라인 <ol><li> U87MG glioma 세포 5 % 태아 소 혈청 (FBS)와 보충 DMEM - F12 대형 조직 문화 flasks에서 양식입니다. </li><li> 세포 따뜻한 인산과 함께 두 번 flasks 닦고하여 수확 아르 식염수 (PBS)는 버퍼와 37에서 그들을 잠복기 ° 0.25 %의 트립신과 0.05 % EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산)를 포함하는 PBS의 10 ML 5 분 C. 일단 세포들은 문화 미디어와 centrifuged (4 분 300 X G) 10 ML을 포함한 50 ML 튜브에 배치되며, 해제됩니다. </li><li> 세척 후, 세포 10의 농도에 resuspended 아르 X 10 μl 50,000 세포 / 5의 접종에 대한 허용 문화 매체에 6 / ML. </li><li> 전지는 intracranial 사출까지 얼음에 보관됩니다. </li></ol> 2. 탈당 intracranial 가이드 나사 이 절차는 세포의 주입하기 전에 몇 일 진행하실 수 있습니다. 여기에서 설명한 모든 절차가 엄격한 무균 조건 하에서 실시되었습니다. <ol><li> 생쥐 (BALB / C 뉴 / 뉴 여성, 5-6주, 약 18g), 식별을 위해 번호를 무게와 케타민 (100 MG / kg)와 xylazine (5 MG의 혼합물의 intraperitoneal (IP) 주입과 anesthetised 아르 / kg). </li><li> 피부는 요오드 솔루션 닦여 있으며 작은 절개 (2~3mm)은 중간선과 interaural 라인 앞쪽에의 오른쪽을 따라 이루어집니다. 이것은 두개골의 코로나와 화살 봉합를 제공합니다. bregma는이 두 봉합의 교차점에 위치합니다. </li><li> 안내 나사 진입 점은 다음 2.5 mm 수평 및 bregma에 앞쪽에 1mm 지점에서 표시됩니다. 이 시점은 바로 꼬리가있는 핵 위 1에 위치하고 있습니다. </li><li> 1 X 1mm 깊은 구멍은 경질에 두개골을 통해 트위스트 드릴을 개최 살균 손을 뚫고있다. </li><li> 경질로 두개골 표면 아래 1.6 mm를 연장합니다 소독 안내 나사는 다음 스크류 드라이버 구멍으로 나올 수있는 두개골 (그림 1A)와 플러시까지. </li><li> 무균 탐침 또는 스크류 더미는 다음 오프닝 (그림 1B)를 닫습 가이드 나사의 중앙 구멍에 배치됩니다. </li><li> 상처가 Vetbond 조직 접착제 (N - 부틸 cyanoacrylate)와 생쥐와 함께 닫혀있다는 intraperitoneal reversine의 주입 (작은 동물) (0.1 ML / kg)과 진통제에 대한 carprofen을 (5 mg/kg/100 μl) 제공됩니다. 마우스 그런 다음 20 분 소요될 수 온난 매트 (36 ° C)에서 복구하는 허용됩니다. 그들이 완전히 의식 때까지 마우스가 자주 모니터링하고 복구 시간 동안 관찰됩니다. </li></ol> 3. Intracranial 세포 engraftment <ol><li> 무균 수갑에 채워진 해밀턴 주사기는 가이드 나사 콘센트 (그림 1B) 아래 연장하기 위해 바늘의 단지 2mm을 허용 바늘 끝에 작은 플라스틱 반지를 적용하여 준비가되어 있습니다. 최종 접종 지점 따라서 두개골 표면 아래 3.5 mm입니다. </li><li> 가이드 나사 수술 다음과 같은 4 일, 마우스는 위에서 다시 anesthetized 아르 (2.1)와 작은 절개는 탐침을 제거하는 가이드 나사를 통해 이루어집니다. </li><li> 수갑에 채워진 해밀턴 주사기 그러면 어떤 공기 방울을 만들거나 세우하지주의를 복용 잘 혼합 세포의 5 μl로 가득 차 있습니다. </li><li> 주사기는 재관류 펌프로 확보하고 바늘은 가이드 나사 (그림 1C)에 삽입됩니다. 세포는 다음 시간 30 μl의 속도로 주입됩니다. </li><li> 자동 장치 (그림 1D)는 우리가 일정한 유량 한 번에 10 동물까지 주입 수있었습니다. 세포도 수갑에 채워진 해밀턴 주사기를 사용하여 수동으로 분사가 될 수도 있고 아니면 다른 방법으로 주사기는 바늘 끝이 2mm로 안내 나사 넘어 확장할 수 있도록 3mm로 손질되어 200 μl 피펫 팁에 의해 수갑에 채워진 수 있습니다. 주입은 다음 일정한 속도로 지속적으로 수행되어야합니다. </li><li> 주입이 완료되면, 주사기는 신중하게 제거되고 탐침은 가이드 스크류로 대체됩니다. 상처가 닫히고 접착되고 생쥐 (2.7) 이전과 복구 약품을 제공하고 온난 매트에 복구하는 허용됩니다. </li></ol> 4. 치료에 도전 <ol><li> U87MG 세포 접종 후 4 일, 마우스는 무게와 무작위로 제어 및 치료 그룹으로 나누어집니다. </li><li> 치료 그룹이 AMG102 (PBS 100 μl 100 μg)의 IP 주사를 부여하는 동안 컨트롤 그룹은, PBS (100 μl)의 내부 - 복막 (IP) 주사를 주어집니다. </li><li> 주사는 14 일 동안 매초마다 6 일 주사 (그림 2)의 총 반복하고 있습니다. </li><li> 마지막 주사 후, 생쥐는 매일 모니터링 모든 둘째날 무게입니다. </li><li> 쥐가 중요한 신경 장애 (균형 장애, 마비), 탈수, 또는 이상이 10 % 체중 감소 또는 죽어가는을 표시하기 시작하면, 그들은 편안하게 euthanised되었습니다. 이러한 인도적인 엔드 포인트 일은 다음 카플란 - 마이어 생존 곡선에 기록되었다. </li></ol> 5. 치료 효율 평가 <li> GraphPad 소프트웨어, 샌디에고 캘리포니아 미국, 카플란 - 마이어 생존 곡선은 Windows 용 GraphPad 프리즘 4.03를 사용하여 생성되었습니다 <a href="http://www.graphpad.com">www.graphpad.com</a> 3. 사망 또는 euthanizations는 엔드 포인트 이벤트로 표시 1으로 득점했다. 실험의 끝에 살아 남은 동물이 아닌 이벤트로 기록과 0으로 득점했다. </li> 6. 대표 결과 : 제어 동물 세포의 초기 접종 후 신경학적인 장애와 체중 감소 23일의 흔적을 보여주하기 시작했다. 이것은 크게 35일에 AMG102 대우 그룹에서 지연되었습니다. 실제로 35 일, 77 %는 (N은 = 7 / 9) 제어 그룹의이 euthanized했다. 카플란 - 마이어 생존 곡선은 명확하게 AMG102 치료 (그림 3)에 대한 응답으로 생존에 상당한 증가를 보여줍니다. 일 70에 의해, 컨트롤 마우스의 88 % (N = 8 / 9) 37 %와 비교 euthanized했다 AMG102 취급 그룹 (N = 8분의 3). 두뇌의 Histological 분석 컨트롤 그룹에있는 모든 구 동물 개발 종양은 3 8 AMG102 취급 생쥐 (그림 4)에 비해 것으로 확인되었습니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/3157/3157fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1 : 이미지 (A)는 직접 꼬리가있는 핵 위에있는 지역에 위치 intracranial 가이드 나사를 보여줍니다. 바늘의 2mm는 가이드 초과하고 세포가 꼬리가있는 핵 내부에 3.5 mm를 주입되도록 수갑에 채워진 해밀턴 주사기 (세포와 함께 미리로드)은 다음 가이드 나사 내부에 배치됩니다. 주사기는 나중에 탐침 (B)에 의해 제거 및 교체됩니다. 자동 주입 장치 (C)는 한 번에 10 동물까지 주입 수 있습니다. 오 동시 주사 (D)는 아르 여기 표시됩니다. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/3157/3157fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2 : 연구 프로토콜의 도식. 세포 치료 일 4 일 시작과 0에 주입했다. 치료 그룹 AMG102 (100 μg/100 μl) IP의 주사를받은 반면 제어 동물은 PBS (100 μl) IP의 주사를 받았습니다. 이 주사는 10 일 동안 매초마다 주어진 일되었습니다. 6 주사의 총 주어진되었습니다. 동물은 다음 신경 및 신체 장애의 흔적을 70 일 동안 감시했다. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/3157/3157fig3.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 3"> 그림 3 : 제어 및 AMG102 취급 생쥐를 비교 카플란 - 마이어 생존 곡선. 중요한 생존은 AMG102 (P = 0.005가)와 다음과 같은 치료를 얻은 것입니다. <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/3157/3157fig4.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 4"> 그림 4 : 제어 동물에서 종양 개발 (A)와 AMG102 치료 동물 튼실한 종양 개발 (B)를 보여주는 코로나 뇌 섹션 Microphotographs. 스케일 바 1mm입니다.

<ol><li>Lal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+implantable+guide-screw+system+for+brain+tumor+studies+in+small+animals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">An implantable guide-screw system for brain tumor studies in small animals.</a> J Neurosurg. 92, 326-333 (2000).</li>
<li>Jun, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AMG+102%2C+a+fully+human+anti-hepatocyte+growth+factor%2Fscatter+factor+neutralizing+antibody%2C+enhances+the+efficacy+of+temozolomide+or+docetaxel+in+U-87+MG+cells+and+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">AMG 102, a fully human anti-hepatocyte growth factor/scatter factor neutralizing antibody, enhances the efficacy of temozolomide or docetaxel in U-87 MG cells and xenografts.</a> Clin Cancer Res. 13, 6735-6742 (2007).</li>
<li>Pillay, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+plasticity+of+oncogene+addiction%3A+implications+for+targeted+therapies+directed+to+receptor+tyrosine+kinases%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">The plasticity of oncogene addiction: implications for targeted therapies directed to receptor tyrosine kinases.</a> Neoplasia. 11, 448-458 (2009).</li>
<li>Buchanan, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiosensitization+of+glioma+cells+by+modulation+of+Met+signaling+with+the+hepatocyte+growth+factor+neutralizing+antibody.+AMG102%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Radiosensitization of glioma cells by modulation of Met signaling with the hepatocyte growth factor neutralizing antibody. AMG102.</a> J Cell Mol Med. 15, 1999-2006 (2011).</li>
<li>Wen, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+phase+II+study+evaluating+the+efficacy+and+safety+of+AMG+102+%28rilotumumab%29+in+patients+with+recurrent+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">A phase II study evaluating the efficacy and safety of AMG 102 (rilotumumab) in patients with recurrent glioblastoma.</a> Neuro Oncol. 13, 437-446 (2011).</li>
<li>Caretti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+of+Tumor+Growth+and+Post-Irradiation+Recurrence+in+a+Diffuse+Intrinsic+Pontine+Glioma+Mouse+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathol%22%5BJournal%5D)">Monitoring of Tumor Growth and Post-Irradiation Recurrence in a Diffuse Intrinsic Pontine Glioma Mouse Model.</a> Brain Pathol. 4, 441-451 (2011).</li>
<li>Jallo, G. I., Volkov, A., Wong, C., Carson, B. S., Penno, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+brainstem+tumor+model%3A+functional+and+histopathological+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Childs+Nerv.+Syst%22%5BJournal%5D)">A novel brainstem tumor model: functional and histopathological characterization.</a> Childs Nerv. Syst. 22, 1519-1525 (2006).</li>
<li>Johns, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+efficacy+of+epidermal+growth+factor+receptor-specific+antibodies+against+gliomaxenografts+is+influenced+by+receptor+levels%2C+activation+status%2C+and+heterodimerization%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">The efficacy of epidermal growth factor receptor-specific antibodies against gliomaxenografts is influenced by receptor levels, activation status, and heterodimerization.</a> Clin Cancer Res. 13, 1911-1925 (2007).</li>
<li>Scott, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+phase+I+clinical+trial+with+monoclonal+antibody+ch806+targeting+transitional+state+and+mutant+epidermal+growth+factor+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">A phase I clinical trial with monoclonal antibody ch806 targeting transitional state and mutant epidermal growth factor receptors.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 104, 4071-4076 (2007).</li>
<li>Niyazi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+options+for+recurrent+malignant+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Radiother.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Therapeutic options for recurrent malignant glioma.</a> Radiother. Oncol. 98, 1-14 (2011).</li>
</ol>

이 작품은 Amgen 주식 회사에서 연구 그랜트에 의해 지원되었다

여기에 제시 intracranial 안내 나사 방법은 intracranial xenografts의 신속하고 재현성 확립을 가능하게하고 훈련 동물 기술자의 손에,이 절차는 매우 쉽게 stereotactic 장치의 필요없이 수행됩니다. 우리의 방법은 정확하게 생체내 종양 개발에 가장 적합한 두뇌의 지역, 그리고 한 번에 최대 10 동물의 동시 접종을 허용 자동 주입 펌프를 찾으려면 가이드 나사의 사용을 결합한 제품입니다. 안내 나사 확대 절차 수행하는 5 분 미만 소요됩니다. 30 μl / 시간에 세포의 자동 주입은 5 μl 볼륨에 단 10 분 정도 걸립니다. 이것은 일정한 속도로 정확하게 먹이지을 보장하고 증가 intracranial 압력으로 인한 엑스트라 두개골 영역에 셀 퇴학의 위험을 줄일 수 있습니다. 우리는 또한 10 μl 볼륨이 절차를 수행하고 셀룰러 환류으로 인한 엑스트라 두개골 종양의 성장을 관찰하지 않았습니다. 자동 주입 펌프는 여러 동물 우리는 시간당 약 15 동물로 제한됩니다 stereotactic 절차에 비해 시간 60 동물까지 주사할 수있는 동시에 주사 수 있습니다으로서. 위치는 종양이 대량의 최종 위치를 결정하는대로이 절차에서 가장 중요한 단계는 두개골의 가이드 나사의 위치입니다. 가이드 나사가 너무 중앙에있다면, 세포는 가이드가 멀리 전달 배치하는 경우 반면 두 개의 두뇌 반구 사이의 영역으로 주입되며, 세포는 전혀 두뇌에 주입되지 않습니다. 이것은 가이드 측면 2.5 mm와 bregma 1 앞쪽에 1mm를 찾는데 가능한 한 정확하게 그러므로 필수적이다. 플라스틱 가이드 나사는 또한 MRI 나 PET와 같은 뇌 6 이미징을 필요로 그 연구에 사용할 수 있지만 본 연구에서는 우리는 철강 가이드 나사를 사용합니다. 자동 주입 펌프는 일부 그룹에 대한 금지 비용입니다하더라도, 세포는 여전히 수동으로 더 빨리 stereotactic 접근보다 주입 수 있습니다. 전체적으로이 신속, 정확하고 재현성 방법 glioma, medulloblastoma 및 뇌간의 종양 7 공부하는 데 사용할 수 있습니다. 이 절차는 예상치 못한 마취 반응 (&lt;1 %)로 인해 사망과 우리 두 실험실 사이에 500 생쥐 이상에서 수행되었습니다. 가이드 나사와 함께 뛰쳐과 세포가 프로 시저의 결과로 모든 신경 합병증을 죽게하거나 고통 않았와 이후에 주입했다 쥐. 동물은 어떤 합병증이없이 백일 지난 살아있다. 우리가 SCID 같은 머리 hairless 마우스, 단백질 손상된 마우스를 사용하여 원하는 있지만 적절한는 두개골 머리가 사이트를 지키기 위해 싸운다 및 가이드 스크류 간섭 머리카락을 방지하기 위해 수술을하기 전에 제거를 제공 그대로 것입니다. 현재 glioma 80-10의 치료를 위해 개발되고있는 몇 가지 소설 치료제가 있습니다. 최근 우리는 피하 U87MG glioma의 xenografts가 AMG102 3 처리에 의해 저해 수 보여준, 인간화 항체는 현재 glioma 5 임상 평가를 받고 HGF로 이동. 우리는 누드 생쥐의 두뇌에서 intracranial U87MG 종양을 설정하는 방법 여기서 설명하는 데 사용됩니다. 우리의 연구는 명확하게 방법의 유틸리티를 보여줍 AMG102 크게 orthotopic U87MG의 xenografts의 성장을 억제 것을 보여줍니다. 우리는 다른 치료제가 종양 성장의보다 효과적인 억제를 얻을 AMG102와 함께 사용할 수있는 어떤 결정하기 위해이 모델을 계속 사용할 것입니다.

<table border="1"><tbody><tr><th> 시약의 이름 </th><th> 회사 </th><th> 카탈로그 번호 </th><th> 댓글 (옵션) </th></tr><tr><td> DMEM/F12 </td><td> Invitrogen </td><td> 12634010 </td><td></td></tr><tr><td> FCS </td><td> Bovogen </td><td> SFBS </td><td></td></tr><tr><td> 트립신 </td><td> Invitrogen </td><td> 15050065 </td><td></td></tr><tr><td> EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) </td><td> 시그마 </td><td> E6758 </td><td></td></tr><tr><td> Balb / C 뉴 / 뉴 마우스 </td><td> ARC 퍼스 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 나사 홀더 </td><td> 플라스틱 하나 </td><td> SD - 1 </td><td></td></tr><tr><td> 드릴 홀더 </td><td> 플라스틱 하나 </td><td> DH - 1 </td><td></td></tr><tr><td> 드릴 비트 </td><td> 플라스틱 하나 </td><td> D # 60 </td><td></td></tr><tr><td> 나사 가이드 (금속) </td><td> 플라스틱 하나 </td><td> C212SG </td><td></td></tr><tr><td> 나사 더미 (스타일러스) </td><td> 플라스틱 하나 </td><td> C212SD </td><td></td></tr><tr><td> 해밀턴 주사기 (10 μl 26g 초경 바늘) </td><td> 그레이스 부문 디스커버리 과학 </td><td> 80,075 </td><td></td></tr><tr><td> PHD 2,000분의 22 주입 펌프 </td><td> 하버드 장치 </td><td> 70-2003 </td><td> 옵션 </td></tr><tr><td> Vetbond </td><td> 3M </td><td> 1469SB </td><td></td></tr><tr><td> 써모 패드 </td><td> 하버드 장치 </td><td> 340390 </td><td></td></tr></tbody></table>

마우스에 intracranial 이종 이식 연구에 대한 간단한 안내 스크류 방법

A Simple Guide Screw Method for Intracranial Xenograft Studies in Mice

immunosuppressed 마우스의 두뇌로 인간의 종양 세포의 이식하는 것은 glioblastoma (glioma)과 medulloblastoma 포함한 뇌 암 연구를 위해 설립 방법입니다. 널리 사용되는 stereotactic 접근 방식은 한 번에 하나의 동물의 주입을 허용, 노동 집중하고 고도의 전문 장비를 필요로합니다. 처음 Lal 외. 1가 개발한 가이드 스크류 방식은 성가신 stereotactic 절차를 제거하기 위해 개발되었습니다. 우리는 지금 매우 신속하고 안전 변경 안내 스크류 방식을 설명하는, 중요한 윤리적 고려 둘 중. 특히, 우리의 절차는 지금 동시에 종양 세포로 주입해야하는 10 동물있게 주입 펌프를 포함합니다. HGF / 현재 임상 평가 2-5 겪고 산란 계수로 이동 완전 인간 항체,이 절차의 유틸리티를 입증하기 위해, 우리는 다음 AMG102 취급했다 생쥐에 intracranial xenografts, 인간 U87MG glioma 세포를 설립하였습니다. AMG102의 체계적 주입 크게 intracranial U87MG의 xenografts 모든 생쥐의 생존을 연장하고 완전한 치료의 여러 결과. 이 연구는 가이드 나사 방법은 intracranial xenografts 수립을위한 저렴한 높은 재현성 방법입니다 보여줍니다. 또한, 그것은 뇌 암의 치료를위한 새로운 치료 전략을 검증을 위해 관련 생리적 모델을 제공합니다.

glioma의 치료에 새로운 치료 패러다임을 평가하기 위해, 생리 관련 모델은 필수적입니다. 우리는 stereotactic 접근 방식보다 더 빠르고 안전 intracranial 이종 이식 모델의 설립을위한 implantable 가이드 스크류 절차를 사용합니다.

마우스에 Intracranial 이종 이식 연구에 대한 간단한 안내 스크류 방법

면역결핍 마우스의 뇌에 인간 종양 세포를 이식하는 방법은 교모세포종을 포함한 뇌암 연구를 위해 확립된 방법입니다...

본 절차의 목적은 새로운 치료제의 효능을 평가하기 위해 뇌암의 두개내 이식물을 생성하는 것입니다. 이는 먼저 두개골에 가이드 나사를 고정한 다음, 해당 가이드 나사를 통해 뇌로 세포를 주입함으로써 수행됩니다. 다음 단계는 뇌에 정착된 종양 세포를 대상으로 치료적 챌린지를 시작하는 것입니다.그 후 생존 결과를 평가하여 동물의 치료 반응을 모니터링합니다. 최종적으로, 치료제는 대조군과 비교하여 치료군의 종양 성장 및 생존에 영향을 줄 수 있습니다. 이 절차는 세포 주입 며칠 전에 수행할 수 있습니다.먼저 마우스의 무게를 측정한 후, 케타민과 자일라진 혼합물을 복강 내 주사하여 마취시킵니다. 발가락 꼬집기 자극에 반응이 없으면 두피를 요오드로 소독한 다음, 정중선 오른쪽 및 전두간선(interoral line) 앞쪽에 2~3mm 크기의 절개를 실시합니다. 이 절개를 통해 두개골의 관상봉합과 시상봉합이 노출됩니다.bgma는 이 두 봉합선의 교차점에 위치합니다. 가이드 스크류 진입점을 bgma에서 외측으로 0.2-0.5 mm, 전방으로 1 mm 떨어진 지점에 표시하십시오. 이 지점은 CAU 8 핵의 바로 위에 위치합니다.이제 표시된 지점에 핸드 트위스트 드릴을 사용하여 듀라 볼트에 1 mm 깊이의 구멍을 뚫습니다. 멸균된 가이드 나사를 구멍에 넣고 두개골 표면과 수평이 될 때까지 돌립니다. 나사가 두개골 표면에 닿는 즉시 전진을 멈추어야 합니다.나사가 두개골을 파고들면 두개골에 골절이 발생할 수 있습니다. 가이드 나사는 1.6 millimeter 길이의 26 gauge 바늘을 지지합니다. 가이드 나사의 개구부를 닫으려면 더미(dummy) 또는 나사 더미를 가이드에 삽입하십시오.이제 나사를 고정합니다. 포셉으로 절개된 피부를 모아 상처 부위를 닫고, vet bond 한 방울을 피부 절개면에 도포하여 펴 바른 후, 피부가 접착될 때까지 몇 초간 유지합니다. 마지막으로, 복강 내 주사를 통해 역전제와 carprofen 진통제를 투여하고, 가온 매트 위에서 마우스가 회복되도록 합니다.회복에는 최대 20분이 소요될 수 있습니다. 예시 실험의 경우, U 87 mg glioma 세포를 5% fetal bovine serum이 첨가된 D-M-E-M-F 12가 들어있는 대형 조직 배양 플라스크에서 배양하였습니다. 본 섹션에서는 주사 당일 이 세포들을 주사용으로 준비하는 방법을 설명합니다.먼저 플라스크를 따뜻한 PBS로 두 번 세척하여 세포를 수확합니다. 그 다음 0.25% trypsin과 0.05% EDTA가 포함된 PBS 10 milliliters를 첨가하고, 세포가 떨어져 나올 때까지 또는 37 °C에서 5분 동안 세포를 배양합니다. 이후 10 milliliters의 배지에 세포를 수집합니다.세포를 혈구계수기(hemocytometer)에 놓고, 세포 계수법에 따라 현미경으로 세포 수를 측정합니다. 10 mL의 배양액, 배지와 세포가 포함된 50 mL 원뿔형 튜브를 300 ×g에서 4분 동안 원심분리합니다. 원심분리 후, 세포를 배양 배지에서 10 million cells/mL 농도로 재부유시킵니다. 이 농도에서 세포 현탁액 5 µL당 50,000개의 세포가 포함되며, 이를 각각의 두개내 주입에 사용합니다.주입용 세포 현탁액을 얼음 위에 보관하십시오. 5 µL와 같은 소량의 부피는 쉽게 증발하여 세포를 손상시킬 수 있으므로, 여기서는 단일 부피의 세포 현탁액이 필요합니다. 먼저 커프가 달린 Hamilton 시린지를 준비하십시오.바늘 팁에 작은 플라스틱 링을 부착하여 가이드 나사 배출구 아래로 바늘이 2mm만 돌출되도록 합니다. 이렇게 하면 접종 지점이 3.5mm 깊이가 됩니다. 이전에 증강술을 받은 마우스를 마취시키고 가이드 나사 위로 작은 절개를 한 뒤 스타일렛을 제거합니다.그다음, 얼음에 보관하며 잘 혼합한 세포 5 µL를 주사기에 채웁니다. 주사기 내에 기포가 생기지 않도록 주의하십시오. 기포는 색전증을 유발하거나 주입 부위에서 세포가 역류하게 만들 수 있습니다. 주사기를 퍼퓨전 펌프에 고정한 후 니들을 가이드에 삽입합니다.시간당 30 µL의 속도로 세포 주입을 시작합니다. 자동화 장치를 사용하면 일정한 유속으로 한 번에 최대 10마리의 동물에게 주입할 수 있습니다. 일정하고 안정적인 속도로 수행한다면 수동 주입 또한 가능합니다.주입이 완료되면 주사기를 조심스럽게 제거한 후, 이전과 같이 가이드 나사에 스타일렛을 다시 끼웁니다. 상처 부위를 vet bond로 폐쇄하고 진통제를 투여한 뒤 생쥐가 회복될 때까지 기다립니다. 회복에는 최대 20분이 소요될 수 있습니다.U 87 mg 세포 접종 4일 후, 마우스의 체중을 측정하고 대조군과 처리군으로 무작위 배정하였습니다. 대조군에는 100 µL의 PBS를 복강 내 투여하였으며, 처리군에는 100 µL당 100 µg의 MG 1 0 2를 복강 내 투여하였습니다. 투여는 14일 동안 이틀에 한 번씩 실시하여 총 6회 진행하였습니다.마지막 주사 후, 마우스의 상태를 매일 모니터링하고 이틀마다 체중을 측정했습니다. 동물의 종점은 균형 감각 상실이나 마비와 같은 심각한 신경학적 기능 장애의 발생, 탈수, 10% 이상의 체중 감소 또는 사망으로 정의했습니다. 종점 도달 일수는 Kaplan-Meier 생존 곡선으로 기록되었습니다.사망 또는 호출이 종료점으로 표시된 경우 이벤트로 간주하여 1점으로 기록하였습니다. 실험 종료 시까지 생존한 동물은 비이벤트로 기록하고 대조군으로서 0점으로 기록하였습니다. 세포를 최초 접종한 지 23일 후에 동물들에게서 신경계 장애 및 체중 감소 징후가 나타나기 시작했습니다.이는 A MG 1 0 2 처리군에서 유의하게 지연되었습니다. 35일째까지 대조군 동물 9마리 중 7마리가 안락사되었습니다. 78일째까지 대조군 동물 9마리 중 8마리가 안락사된 반면, 8:00 AM g 1 0 2 처리군 동물은 8마리 중 3마리만 안락사되었습니다.뇌의 조직학적 분석 결과, 대조군의 동물 9마리 모두에서 종양이 발생한 반면, 오전 8:00에 g 1 0 2 처리를 받은 마우스는 3마리에서만 종양이 발생한 것이 확인되었습니다.

a-simple-guide-screw-method-for-intracranial-xenograft-studies-in-mice

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

루시페라제 - 수정된 인간의 뇌 종양의 xenografts은 종양 성장과 bioluminescence 이미징을 사용하여 치료에 대한 응답의 후속 모니터링과 athymic 생쥐에 intracranially 설정할 수 있습니다. 생존 분석과 함께, bioluminescence 모니터링 뇌 종양 치료를위한 고려되는 요법의 사전 임상 시험을위한 필수적인 연구 도구입니다.

Bioluminescence 이미징을 사용하여 종양 성장과 치료에 반응 이후 분석 Intracranial 뇌종양의 Xenografts 구축

우리는 누드 마우스 및 이후 일련의 뇌에 인간 glioblastoma multiforme의 세포의 정확한, stereotactic 주입을위한 통합 방법을...

Stereotactic Intracranial 주입 및<em&gt; 생체에</emGlioblastoma의 Multiforme의 마우스 모델 시스템에서 종양 Xenografts의&gt; 발광 생물 이미징

출처: Liou, C. et al. 자유롭게 움직이는 마우스에서 장 유래 미생물 대사 산물의 뇌실내 전달. J. Vis. 경험. (2022).이 비디오는 뇌 매개 행동에 미치는 영향을 연구하기 위해 자유롭게 움직이는 마우스에 단쇄 지방산(SCFA)을 두개내 주사하는 방법을 보여줍니다. 인젝터 캐뉼라를 마우스 뇌에 이식된 가이드 캐뉼라에 삽입합니다. 회복 후 마우스는 새로운 새장에 적응합니다. 그런 다음 SCFA를 투여하고 운동 행동을 기록합니다.

마우스 모델에서 장 유래 미생물 대사산물의 두개내 주사

소설 고해상도<em&gt; 생체 내</em종양의 성장과 치료학에 두개 내 구조물의 동적 응답을 공부하기&gt; 이미징 기술

악성 글리오마스는 뚜렷한 임상 및 분자 특징을 가진 고도로 침입된 신경교 신생물의 이질적인 그룹을 구성합니다. 1 차 성 치열 교정 이종이식은 전임상 동물 모델에서 악성 신경종 아류형의 조직 병리학 및 분자 특징을 재구성합니다.

1차 성우 성안 성액 제노이식은 침투 성장을 재구성하고 탈수소 효소 I 돌연변이를 이소염시분해합니다.

플록스, 조건부 발암성 대립유전자로 조작되고 바이러스 Cre 매개 재조합을 통해 형질전환된 마우스에서 채취한 표현형 야생형 성상세포와 신경 줄기세포는 syngeneic, immune-competent littermate의 뇌에 형질전환된 세포의 orthotopic 주입에 의해 in vitro 및 in vivo에서 성상세포종 발병기전을 모델링하는 데 사용할 수 있습니다.

모델링 성상 세포종 병인 체외와 생체 대뇌 피질의 성상이나 조건, 유전자 조작 쥐에서 신경 줄기 세포를 사용하여

뇌는 잘 시험관이나 자궁외 분석으로 표시되지 않은 자질을 가진 유일한 사이트입니다. 위치 재현성과 성장 특성 정위 마우스 모델을 확실 정위 고정기구 및 저압 주사기 펌프를 사용하여 두개 내 주사로 생성 될 수있다.

만들기 해부학 적으로 정확하고 인간의 두뇌 종양의 재현 두개 내 이종 이식

줄기 세포는 내재 된 종양 향성으로 인해 뇌종양 치료제로서 유망한 치료제입니다. 비 침습적 비강 내 줄기 세포 전달은 혈액 뇌 장벽을 우회하여 임상 번역의 가능성을 보여줍니다. 이 기사는 신경 교종 마우스 모델에서 비강 줄기 세포 전달의 기본 원리를 요약합니다.

마우스 모델에서 아교 모세포종에 치료 용 줄기 세포 비강 전달

중추신경계(CNS) 종양은 소아 암 관련 사망의 주요 원인이며, 임상 시험에서 환자를 대상으로 하는 국소 면역 기반 요법이 점점 더 많이 테스트되고 있습니다. 이 프로토콜은 CNS 종양을 표적으로 하는 면역요법 주입의 전임상 평가를 위해 마우스에서 국소 캐뉼라 이식 방법을 설명합니다.

마우스에서 연속 국소 키메라 항원 수용체(CAR) T 세포 주입을 위한 두개내 캐뉼라 이식

정형소 소아 뇌종양 모델의 개발에는 암세포를 정밀하게 이식하기 위해 입체 장치를 사용하는 세심한 정밀도가 필요합니다. 여기에 제시된 방법론은 뇌종양 세포를 준비하고, 두개내 주사를 수행하고, 뇌종양 생착을 평가하기 위한 수술 후 모니터링 시스템을 구현하는 것과 관련된 단계를 간략하게 설명합니다.

Stereotaxic Device를 이용한 뇌종양에 대한 Orthotopic Patient-derived Xenograft Models 구축

이 프로토콜의 목표는 연구자들에게 두개내 이식에 대한 고재현 기술을 제공하는 것입니다.

쥐에서 교모세포종 환자 유래 이종이식 세포주의 입체정위 두개내 이식

배우세요 마우스 두개내 이종이식 모델 수립을 위한 가이드 스크류 방법을 통해 신약 효능을 평가하는 기술입니다. 이 기법은 U 87 mg 신경교종 세포를 이용하여 종양 치료 반응을 연구하는 데 활용됩니다.

마우스에 Intracranial 이종 이식 연구에 대한 간단한 안내 스크류 방법

더 많은 동영상 탐색