Name: GFP - 굴지 표현 라이브 내피 세포 굴지의 Cytoskeleton 연구 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: 배우세요 GFP-actin 이미징을 이용한 생체 내피 세포의 액틴 세포골격 동적 변화 관찰 방법입니다. 이 기술은 다양한 자극에 대한 세포골격 역학을 실시간으로 평가하여 내피 투과성 메커니즘에 대한 통찰을 제공합니다.

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GFP - β - 굴지 플라스미드는 넉넉한 박사 웨인 오어 병리의 LSUHSC - S 부서에 의해 제공되었고, 박사 베키 Worthylake, 약리학의 LSUHSC - NO학과 실험실에서 증폭되었다. 이 작품은 국립 보건원 (P20 RR - 018766)와 미국 심장 협회 (05835386N)에서 부여에 의해 지원되었다.

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</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

라이브 내피 세포에 GFP - 굴지의 영상은 염증성 자극에 대한 응답으로 굴지의 cytoskeleton의 역학에 대한 자세한 분석을 수 있습니다. 이 방법은 또한 전단 응력 11과 같은 물리적 세력에 대응 cytoskeleton의 리모델링을 보여주는 이전 연구 결과에 기초하여 유용할 수 있습니다. 또한,이 방법은 마이 그 레이션, 유사 분열, 세포 분기점 및 junctional 성숙의 형성, 그리고 장벽 기능의 유지 보수 등 다양한 내피 세포 활동에 굴지 cytoskeletal 역학의 공헌에 대한 자세한 평가를하실 수 있습니다. 표시된 데이터의 내피 굴지의 cytoskeleton의 동작은 트롬빈 치료 전후에 볼 수 있습니다. 모든 내피 세포의 가장자리를 따라 로컬 lamellipodia은 성형과 nonconfluent과 합류 모두 세포 monolayers에 시간이 지남에 따라 regressing 관찰되었다. 트롬빈과 치료는 간단히 lamellipodia 양식을 중단ation과 매상. 트롬빈은 트롬빈이 내피 세포의 12-14 굴지 스트레스 섬유 형성 및 증가 구심 긴장 개발을 일으키는 이전 리포트와 계약에, 세포가 약간 계약에 발생했습니다. 그러나, 이와 같은 라이브 세포 이미징 연구에서 스트레스 섬유의 출처는 현재 확인할 수 있습니다. HUVEC에서 스트레스 섬유의 대부분은 세포 주변에서 발생한 및 세포 8, 9를 마이 그 레이션에 가로 아크 섬유를 닮은. 고정 세포를 사용하여 이상이 방법의 또 다른 장점은 스트레스 섬유의 수를 실험 그룹간에 선택 바이어스를 제거, 트롬빈​​ 치료 전후 각 세포에 계량 수있다는 것입니다. 이 프로토콜을 통해 우리는 셀 가장자리와 굴지의 스트레스 섬유의 역동적인 움직임을 평가합니다. photobleaching 후 내피 세포와 같은 형광 복구와 같은 고급 기술에 굴지의 모노머의 역학을 이해 (FRAP) 또는 형광는 마이크로을 작은 반점하기복사 (FSM)는 16 일 15 적용할 수 있습니다. 또한, 때문에 microvascular 내피 세포는 microvascular 장벽 기능의 더 나은 모델을 효과적으로 논리적인 미래 방향을 나타냅니다 microvascular 내피 세포에 GFP - 굴지 표현 transfection 프로토콜의 최적화를 대표하는 수도 있습니다. 요약, GFP - 굴지 표현 라이브 내피 세포의 이미징은 내피 세포 굴지의 cytoskeleton은 자극에 다양한 종류의에 응답하는 방법을 결정하는 강력한 도구를 나타냅니다. 단단히 합류 내피 monolayers를 사용하는 연구는 굴지 풍부한 lamellipodia와 내피 장벽 기능에 가로 아크 스트레스 섬유와 같은 역동적인 구조의 역할을 결정하는 데 도움이됩니다. 또한, GFP - 굴지 또는 기타 subcellular 구조의 시각화 수 있도록 다른 융합 단백질을 표현하는 내피 세포의 라이브 세포 이미징은 신호 및 구조 메커니즘을 이해하는 데 필요한 자세한 spatiotemporal 정보를 제공합니다 것이 Determine 장벽의 무결성.

<table border="1"><tbody><tr><td colspan="4"> 1. 닮은 5 배 증권 </td></tr><tr><td> 화학 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 양 </td></tr><tr><td> 나트륨 염화물 </td><td> EMD </td><td> SX0420 - 3 </td><td> 35g </td></tr><tr><td> 염화칼륨 </td><td> JT 베이커 </td><td> 3040 </td><td> 1.75 g </td></tr><tr><td> 염화칼슘 </td><td> 시그마 </td><td> C - 3881 </td><td> 1.47 g </td></tr><tr><td> 마그네슘 황산 </td><td> 시그마 </td><td> M - 9397 </td><td> 1.44 g </td></tr><tr><td> 무균 필터링 물 </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 1 L에 지참 </td></tr><tr><td colspan="4"> 4 autoclaved 병 및 상점으로 살균 필터 ° C </td></tr><tr><td colspan="4"></td></tr><tr><td colspan="4"> 2. 맙스 버퍼 </td></tr><tr><td> 화학 </td><td>회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 양 </td></tr><tr><td> 맙스 </td><td> 시그마 </td><td> M3183 </td><td> 125.6 g </td></tr><tr><td> 무균 필터링 물 </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 1 L에 지참 </td></tr><tr><td colspan="4"> 4 autoclaved 병 및 상점으로 살균 필터 ° C </td></tr><tr><td colspan="4"></td></tr><tr><td colspan="4"> 3. 알부민 생리 식염수 (APSS) </td></tr><tr><td> 화학 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 양 </td></tr><tr><td> 닮은 주식 (5 배) </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 200 ML </td></tr><tr><td> 맙스 버퍼 </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 5 ML </td></tr><tr><td> 인산 나트륨 </td><td> 시그마 </td><td> S - 9638 </td><td> 0.168 g </td></tr><tr><td> 나트륨 Pyruvate &lt;/ TD&gt; <td> 시그마 </td><td> P5280 </td><td> 0.22 g </td></tr><tr><td> EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) 나트륨 소금 </td><td> 시그마 </td><td> ED2SS </td><td> 0.0074 g </td></tr><tr><td> 포도당 </td><td> 시그마 </td><td> G7528 </td><td> 0.901 g </td></tr><tr><td> 알부민, 소의 </td><td> USB </td><td> 10,856 </td><td> 10g </td></tr><tr><td> 무균 필터링 물 </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 1 L에 지참 </td></tr><tr><td colspan="4"> 37 7.4로 산도를 조절 ° C, 4 autoclaved 병 및 저장에 다음 살균 필터 ° C. </td></tr><tr><td colspan="4"></td></tr><tr><td colspan="4"> 4. 0.9 %의 염분 </td></tr><tr><td> 화학 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 양 </td></tr><tr><td> 나트륨 염화물 </td><td> EMD </td><td> SX0420 - 3 </td><td> 9g </td></tr><tr><td> 무균 필터링 물 </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 1 L에 지참 </td></tr><tr><td colspan="4"> 4 autoclaved 병 및 상점으로 살균 필터 ° C </td></tr><tr><td colspan="4"></td></tr><tr><td colspan="4"> 5. 1.5 % 다행 솔루션 </td></tr><tr><td> 돼지의 피부에서 젤라틴 </td><td> 시그마 </td><td> G2500 </td><td> 15g </td></tr><tr><td> 0.9 %의 염분 </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 1 L에 지참 </td></tr><tr><td colspan="4"> 37에 대한 해결책을 따뜻하게 ° C 충분히 젤라틴 디졸브 수 있습니다. 동안 4 autoclaved 병 및 저장에 여전히 따뜻하고, 살균 필터 ° C </td></tr></tbody></table>

gfp - 굴지 표현 라이브 내피 세포 굴지의 cytoskeleton 연구

Study of the Actin Cytoskeleton in Live Endothelial Cells Expressing GFP-Actin

microvascular 내피는 유체와 solutes에 선택적으로 투과 장벽으로 중요한 역할을합니다. 내피 세포 사이의 접착제 분기점은 내피의 투과성을 조절하고, 많은 연구가 junctional 무결성 1-5 결정하기 위해 굴지의 cytoskeleton의 중요한 기여를 표명했습니다. 피질 굴지 벨트는 안정적인 분기점 1, 2, 4, 5의 유지에 중요한 것으로 생각됩니다. 반대로, 굴지의 스트레스 섬유 분기점 2-5 약화 내피 세포 내에서 구심력 장력을 생성하는 생각입니다. 대부분이 이론은 내피 세포가 내피 투과성을 증가하는 것으로 알려져 염증 중재자로 치료 후 세포를 고정하고 현미경 관찰을위한 F - 굴지 분류하는 연구를 기반으로하고 있습니다. 에서 수정된 세포의 이미지만을 스냅샷을 제공하기 때문에 그러나 이러한 연구는 굴지의 cytoskeleton의 역할이 매우 제한된 이해를 제공합니다굴지의 구조 5 역학에 대한 정보와 시간. 라이브 세포 이미징은 내피 장벽 무결성을 결정하는 메커니즘의 연구에 굴지의 cytoskeleton의 동적 특성의 결합을 허용합니다. 이 방법의 가장 큰 장점은 내피 세포에서 굴지의 구조에 대한 다양한 염증성 자극의 영향이 고정 표본을 관찰하는 경우에 발생할 수있는 잠재적인 편견을 제거하기 전에 살아있는 세포의 동일한 세트에서 치료 후 평가 될 수있다는 것이다. 인간 제대 정맥 내피 세포 (HUVEC)는 플라스미드 GFP - β - 굴지로 transfected 유리 coverslips에 합류하기 위해 성장하고 있습니다. 합류 HUVEC에서 GFP - 굴지의 시간 저속 이미지는 내피 장벽 무결성 시간 종속적인 변화를 이끌어내는 염증 중재자의 추가 전후 캡처됩니다. 이러한 연구는 endothelia에 기여하는 굴지의 cytoskeleton의 변화 유체 순서의 시각적 관찰을 활성화내 장벽 파괴 및 복원. 우리의 결과는 지속적으로 내피 세포의 지방, 굴지 풍부한 lamellipodia 형성과 매출을 보여줍니다. 굴지의 스트레스 섬유의 형성과 움직임도 볼 수 있습니다. 염증성 자극 치료 전후 지역 lamellipodia의 형성과 매상의 주파수 분석은 kymograph 분석하여 문서화 수 있습니다. 이러한 연구는 내피 장벽의 무결성의 유지를위한 중요한 이전에 정체 불명의 분자 메커니즘을 발견하는 데 사용할 수있는 내피 세포에있는 굴지의 cytoskeleton의 동적 특성에 대한 중요한 정보를 제공합니다.

GFP - 굴지 표현 라이브 내피 세포의 미세 영상은 cytoskeletal 구조에서 동적 변화 특성화 수 있습니다. 고정 표본을 사용하는 기술과는 달리,이 방법은 전에 동일한 세포에있는 굴지의 cytoskeleton의 시간적 변화에 대한 자세한 평가, 동안 다양한 물리적, 약리, 또는 염증성 자극 후를 제공합니다.

GFP - 굴지 표현 라이브 내피 세포 굴지의 Cytoskeleton 연구

미세혈관 내피는 액체와 용질에 대해 선택적 투과성 장벽으로서 중요한 역할을 합니다. 내피 세포 사이의 접착 연접은...

본 절차의 목적은 살아있는 혈관 내피 세포의 액틴 세포골격에서 나타나는 역동적인 변화를 관찰하는 것입니다. 먼저 인간 제대정맥 내피 세포에 A GFP beta actin 플라스미드를 transfection하고, 커버슬립 위에서 세포가 confluence 상태가 될 때까지 배양합니다. 그다음, 가열 스테이지와 알부민 생리적 염류 용액 주입 장치가 갖춰진 살아있는 세포 이미징 챔버에 커버슬립을 배치합니다.마지막 단계는 약물 처리 전후의 타임랩스 이미지 캡처를 통해 선택된 세포 영역의 데이터를 획득하는 것입니다. Image J와 같은 이미징 소프트웨어를 이용한 Chime 그래프 분석을 통해 돌출부의 거리, 시간, 속도와 같은 국소적 lamely podia 돌출 및 시간에 따른 액틴 섬유의 움직임에 대한 통찰을 얻을 수 있습니다. 면역형광 이미징과 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은, 살아있는 세포 이미징을 통해 내피 세포 투과성을 결정하는 메커니즘 연구에 액틴 및 세포골격의 역동적인 특성을 통합할 수 있다는 점입니다.고정 염색된 세포는 특정 시점의 스냅샷을 나타내며, 염증 매개체 처리 전후의 작용 및 세포골격 역학에 대한 정보 제공량이 적습니다. 생물학적 안전 작업대 내에서, 커버 슬립을 70% ethanol로 2분간 멸균한 후 공기 중에서 건조시킵니다. 각 커버 슬립을 10 centimeter 배양 플레이트에 배치하고, 커버 슬립의 가장자리에 닿지 않도록 중앙에 따뜻한 젤라틴 용액 300 microliters를 첨가합니다. 5분 후, 액체를 흡입하여 제거합니다.이제 0.25% trypsin EDTA를 사용하여 confluent하게 배양된 인간 제대정맥 내피세포(human umbilical vein endothelial cells, VE)를 수확합니다. 세포 수를 측정하고 원심분리를 통해 세포를 회수합니다. VE nuclear effector kit를 이용한 transfection 반응을 위해 상층액(supernatant media)을 가능한 한 많이 흡입하여 제거합니다.세포 펠릿을 기본 핵 이펙터 용액(basic nuclear effector solution)에 재현탁하고 0.2~2 µg의 GFP beta actin 벡터 플라스미드를 첨가합니다. 세포 현탁액 100 µL를 핵 이펙터 qve로 옮깁니다. 덮개가 덮인 vete를 몇 번 톡톡 쳐서 Q vet 바닥과 트랜스펙션 샘플 사이에 기포가 없는지 확인합니다.Q VET를 nuclear effector two 장치에 넣고, nuclear effector 키트의 트랜스퍼 피펫을 사용하여 500 µL의 가온된 EGM two MV 배지를 qve에 첨가한 후 프로그램 A 0 3 4를 실행합니다. 그 다음 혼합물을 마이크로 원심분리 튜브로 다시 옮겨 15분 동안 배양합니다. 형질전환된 VE 현탁액을 부드럽게 한 번 섞어준 뒤, 가장자리에 닿지 않도록 주의하며 300 µL의 현탁액을 젤라틴 코팅된 커버슬립 위에 분주합니다.그런 다음 1~4시간 동안 배양합니다. 형질전환된 세포가 커버슬립에 부착되었는지 확인합니다. 이후 플레이트에 E GM two MV 배지 10 milliliters를 첨가하고, GFP 발현이 일어날 때까지 계속 배양합니다.먼저, 알부민 생리식염수 용액 배지 또는 PSS를 중력 유동 시스템에 넣고 인라인 히터에 연결합니다. 이제 유량 조절기를 조정하여 약 40 milliliters per hour의 유량을 맞춥니다. 그다음 면봉으로 스톱콕을 닫아 흐름을 중단시킵니다.다이아몬드 배스(diamond bath) 하단 바깥쪽 가장자리에 진공 그리스를 바릅니다. 이제 인큐베이터에서 형질전환된 배양물을 꺼냅니다. 핀셋을 사용하여 커버슬립을 조심스럽게 들어 올립니다.그 다음 Kim wipe를 사용하여 바닥 슬라이드에 남은 과잉 EGM two MV 배지를 흡수시키고, 세포의 면이 위를 향하도록 배치합니다. 커버슬립 위에 다이아몬드 배스(diamond bath)를 덮어 챔버를 형성합니다. 챔버를 신속하게 스테이지 히터에 넣습니다.챔버 위의 클램프를 조이고 플레이트에서 EGM two MV 배지 약 1 mL를 챔버로 피펫팅합니다. 이제 챔버 왼쪽의 홀더에 진공 호스를 연결하고, 인라인 히터의 A PSS 라인을 챔버 오른쪽의 채널에 연결합니다. 그런 다음 진공을 켜고 A PSS 라인을 열어 형질전환된 세포 위로 배스가 관류되도록 합니다.또한 인라인 히터를 37 °C로 켭니다. 다음으로 가열 스테이지용 서미스터 프로브를 배스 가장자리에 넣고 스테이지 히터를 37 °C로 켭니다. 남아있는 EGM two MV 배지와 염분 축적물을 제거하기 위해, 70% ethanol에 적신 Kim wipe로 커버 슬립 하단을 조심스럽게 닦아낸 후 마른 Kim wipe로 닦습니다. 형질전환된 HU 세포를 30분 동안 평형화합니다.코스를 고정합니다. 연구를 위해 선택된 배양 세포 영역에 초점을 맞춥니다. 세포 내 GFP Act in 신호 강도에 따라 카메라 노출 시간을 0.5초에서 2초 사이로 설정합니다.또한 실험의 간격 및 지속 시간을 설정하십시오. 이제 실내 조명을 끈 상태에서 설정을 평가하기 위해 단일 이미지를 캡처하십시오. 필요한 이미지들이 생성되는지 모니터링하며 타임랩스 시리즈를 캡처하십시오.일반적인 프로토콜에서는 테스트 약물을 추가하기 전 20~30분 동안 기저 이미지를 획득하고, 이후 0.5~4시간 동안 추가 이미지를 획득합니다. 마지막으로, 동반 텍스트에 상세히 설명된 바와 같이, CH 그래프 분석을 통해 lamelly podia의 돌출 거리, 지속성 및 속도를 평가합니다. 일반적인 실험에서 GFP actin은 형질전환된 VE의 50% 이상에서 무작위 방식으로 발현됩니다.1분 간격으로 획득한 이 이미지들은 세포질 전체뿐만 아니라 필라멘트 구조 및 세포 가장자리를 따라 돌출된 국소적인 멜리포디아(meli podia) 내의 GFP actin을 포착했습니다. 세포 돌출부의 거리 지속성과 속도는 타임랩스 이미지 세트를 통해 정량화됩니다. chm 그래프 분석을 사용하여, 먼저 세포 가장자리에 대략적으로 수직인 단일 픽셀 선을 긋습니다.이 영역은 타임랩스 세트의 각 이미지에서 추출되어 시간에 따른 해당 영역의 몽타주 또는 카임(chime) 그래프를 생성하는 데 사용됩니다. 여기 카임 그래프의 왼쪽에서 오른쪽 관점에서 볼 때, 돌출부는 세포 가장자리의 상향 이동으로 표시됩니다. 이러한 돌출부 중 하나의 가장자리에 선을 겹치면, 해당 선과 관련된 픽셀 데이터를 수집하여 돌출부 역학을 정량화할 수 있습니다. 카임 그래프에 나타난 돌출부의 총 개수를 통해 돌출 빈도를 추정할 수 있습니다.본 분석은 세포 주변부에서 형성되어 세포 중심 방향으로 이동하다가 결국 분해되는 스트레스 섬유의 움직임을 묘사합니다. kymograph 상에서 스트레스 섬유는 세포질 영역의 연속적인 선으로 나타나며, 종종 세포 중심을 향해 오른쪽 아래로 이동하는 모습을 보입니다. 원래의 kymograph에서 섬유를 식별하기 어려운 경우, 언샤프 마스크(unsharp mask) 필터로 이미지를 선명하게 하며, 스트레스 섬유 위에 그은 선은 measure 기능을 이용한 픽셀 데이터 수집을 용이하게 합니다. 대안적으로, 식별된 스트레스 섬유의 시작점부터 끝점까지 선을 그어 섬유가 관찰된 기간 동안의 평균 픽셀 데이터를 산출합니다.본 프레젠테이션에서는 Image J와 같은 소프트웨어를 이용한 그래프 분석을 통해 타임랩스 이미지 세트의 데이터를 분석하는 방법을 시연하였습니다. 이 영상을 시청한 후, 여러분은 형질전환된 내피세포의 라이브 셀 이미징을 사용하여 염증 매개체에 반응하는 액틴 세포골격 역학을 연구하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

study-actin-cytoskeleton-live-endothelial-cells-expressing-gfp

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

의 선택, microinjection, 그리고 영상은 형광을 통해 F - 굴지 찬란 - 라벨 (FSM) 현미경을 작은 반점을 찍다.

형광등을 통해 F - 굴지 역학 라이브 셀 이미징은 현미경을 스페클 (FSM)

이 프로토콜은 zebrafish 배아를 생활에서 개별 뉴런 또는 신경 능선 세포의 이미징을 설명합니다. 이 방법은 형광 공촛점 시간 경과 현미경을 사용하여 셀룰러 행동과 굴지의 현지화을 검사하는 데 사용됩니다.

세포 운동성 및 Zebrafish 태아의 개별 뉴런과 신경 크레스트 세포의 굴지의 Cytoskeleton의 라이브 영상

본 논문은 문화에 살고있는 세포의 기계적 자극에 대한 통합 원자의 운영 독자 강제 광학 이미징 현미경을 지시하는 것을 목표로하고있다. 단계별 프로토콜이 제공됩니다. 기계적 자극에 살고 세포 응답을 보여주는 대표적인 데이터 집합이 제공됩니다.

기계 자극에 라이브 세포 응답 통합 광학과 원자 힘 현미경에 의해 연구

의 연결을 성장 원뿔의 가시 끝이 시각화하고 F - 굴지 수치 방법을 설명합니다. 유리 coverslips에 culturing의 뉴런 후, 세포는 사포닌 함유 솔루션 permeabilized 있습니다. 그런 다음, rhodamine - 굴지 포함된 사포닌 버퍼와 짧은 부화는 무료 굴지 가시 종료에 형광 굴지 통합되어 있습니다.

Permeabilized의 연결을 성장 콘스에서 Rhodamine - 굴지와 F - 굴지 이던가 엔드 레이블

이러한 세포 마이 그 레이션으로 세포 프로세스 전통적으로 2 차원, 딱딱한 플라스틱 표면에 연구하고 있습니다. 이 보고서는 직접 단백질 지방화를 시각화하고보다 생리학 관련, 3 차원 매트릭스에서 마이 그 레이션 세포의 단백질 역학을 분석하는 기술을 설명합니다.

3 차원 매트릭스에서 찬란 태그가 추가된 단백질을 표현 마이 그 레이션 전지의 라이브 세포 이미징

세포 이식, 세포골격 라벨링 및 기능 손실/이득 접근법을 결합한 이 프로토콜은 생체 내 세포 이동에서 후보 유전자의 기능을 분석하기 위해 이동하는 제브라피시 전향 prechordal plate를 사용하는 방법을 설명합니다.

분석<em&gt; 생체</em&gt; 셀 마이그레이션 Zebrafish의 배아에서 세포 이식 및 시간 경과 이미징을 사용하여

초기 endosome 함수 F 말라 합에 따라 달라 집니다. 여기, 우리가 설명 체 외에 현미경 기반 분석 결과 nucleation와 테스트 튜브에서 초기 endosomal 막에 F 걸의 중 합을 재구성 하는 따라서 반응의 복잡 한 시리즈가 생화학 및 유전 의무가 렌더링 조작입니다.

생체 외에서 F-말라 초기 Endosomes에의 합

어떻게 마이크로 및 photomanipulation 기술이 FRAP photoactivation 활성화 운동 매개 변수 결정 및 마이그레이션 내 단백질의 spatiotemporal 역학 셀 설명 합니다. 실험 정보 subcellular 역학과 운동 성 레 귤 레이 터 또는 기본 말라 골격의 회전율을 포함합니다.

Micromanipulation 기법 전체적 역동성의 분석 및 Cytoskeletal 레 귤 레이 터의

우리는 설치류와 인간 과목의 뇌 조직에서 전 생체 생물학적 샘플에서 actin 필라멘트의 정량화를위한 간단하고 시간 효율적이고 높은 처리량 형광 분광 기반 분석법을보고합니다.

설치류 및 인간의 뇌 조직에서 액틴 중합 상태를 평가하기위한 시간 효율적인 형광 분광 법 분석 기반 분석

이 프로토콜은 확산 세포의 가장자리에서 돌출부의 동적 매개 변수 (돌출부, 수축, 주름)를 측정하는 것을 목표로합니다.

라이브 셀 현미경을 사용하여 확산 중 셀 에지 돌출 역학 측정

우리는 형광 현미경과 함께 간단한 액틴 필라멘트 미세 유체 분석을위한 프로토콜을 제시하여 개별 액틴 필라멘트를 실시간으로 정확하게 모니터링하면서 순차적으로 다른 단백질 용액에 노출 할 수 있습니다.

미세 유체 공학 및 형광 현미경을 사용하여 단일 액틴 필라멘트 및 번들의 조립 역학 연구

배우세요 GFP-actin 이미징을 이용한 생체 내피 세포의 액틴 세포골격 동적 변화 관찰 방법입니다. 이 기술은 다양한 자극에 대한 세포골격 역학을 실시간으로 평가하여 내피 투과성 메커니즘에 대한 통찰을 제공합니다.

GFP - 굴지 표현 라이브 내피 세포 굴지의 Cytoskeleton 연구

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