Name: 소설을 사용하여 척수 상해 후에 마우스 뒷다리 뼈 손실의 세로 평가, 생체내에 방법론 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-12-07T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 39 s
Description: 학습하세요 척수 상해 후 마우스 뒷다리 뼈 밀도 손실을 저선량 X선 영상으로 세로 평가하는 방법을. 이 기술은 골다공증 진행을 추적하고 치료 개입을 테스트하는 데 활용됩니다.

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우리는이 프로젝트에 대한 자금 제공을위한 사명 연결하고 Gillson - Longenbaugh 재단 모두 감사드립니다. 우리는 또한 그녀의 중요한 조언 박사 캐서린 암브로스 감사와 그녀의 DXA 장비를 사용하고 싶습니다. 마지막으로, 우리는 DXA의 대퇴부 뼈 분석에 그녀 제안 박사 오노 카오리, 통합 생물학 및 약리학학과를 감사하고 싶습니다.

1. 마우스 척추의 절개 모델 <ol><li> 성인, 남성, C57BL6 마우스 (약 20-25그램)는 케타민을 (200 MG / kg)과 xylazine의 조합을 사용하여 anesthetized 아르 (10 MG / kg). 모든 수술 절차 무균 조건 하에서 기관, IACUC 승인 수술 스위트에서 수행됩니다. </li><li> 일단 깊이 anesthetized, 뒷면의 모피는 전기 면도기를 사용하여 손질합니다. 면도 다시 70 %의 에탄올 다음 요오드 용액 처음에 하찮은이다. </li><li> 초기 절개하기 전에, 베인으로 다시 영역이 첫 번째 게시물 - 수술의 고통을 최소화하기 위해의 농도 (0.25 %, &lt;1ml/kg)에 국소 마취제 (Marcaine)로 가득 차 있습니다. </li><li> 작은 가위를 사용하여 작은 오프닝은 L2 주변의 피부에 이루어집니다. 이 오프닝은 T2 지역에 길이 방향 확대, 가위 같은 세트로 확장됩니다. 피부의 가장자리는 다음 불독 클램프의 사용을 통해 떨어져 개최하고 있습니다. </li><li> 마이크로 가위 그런 다음 사용됩니다흉부 레벨 8 (T8)에서 지느러미 척추 얇은 판에서 근육 조직을 취소합니다. Kuh 및 Wrathall (1998) 10에서 설명한대로 T8을 확인할 수 있습니다. 간단히, T13은 그 지느러미 spinous 과정에서 확인할 수 있습니다. # 5 뒤몽의 포셉 한 켤레를 사용하여 마지막 늑골은 palpated / 식별 및 T8 다시 계산하실 수 있습니다. 일단 삭제, 뼈 Rongeurs는 T8에서 지느러미 laminectomy을 수행하는 데 사용됩니다. </li><li> 전체 척수 절개의 병변 : 일단 척수 소독 마이크로 가위의 추가 집합이 수술 현미경 코드의 긴 축에 직각 비행기에서 척수를 끊어하는 데 사용됩니다, T8에 노출됩니다. 우리는 부드럽게 병변의 완전성을 확인하는 척수 중 기둥을 세운 # 5 뒤몽의 집게를 사용합니다. </li><li> 무균 식염수에 담가 척수 절개, 살균 gelfoam의 작은 조각 (0.9 %) 다음과 같은 것은 신중 hemostasis를 촉진하기 위해 병변 캐비티에 배치됩니다. </li><li> gelfoam의 추가 부분은 다음 노출된 스핀 위에 배치됩니다알 코드. 피부는 다음 살균, 스테인리스 수술 스테이플와 함께 닫힙니다. 과목은 다음 자신의 홈 케이지로 돌아 침구 소재의 열망을 방지하기 위해 종이 타월에 위치하고 약 12​​ 시간 동안 가열 패드로 예열하고 있습니다. 주제도 조기 복구 중에 새장 바닥에 히드로겔 팩 (ClearH2O)와 음식 알약과 함께 제공됩니다. 부상 과목들은 집에서 연습장에 음식 / 물 한 마취에서 회복에 액세스할 수 있습니다. </li><li> 모든 부상 과목 연구 기간 (40 일) Crede의 매뉴얼 방식의 수정을 사용하여 두 번 매일 수동 방광 대피를 (약 12 시간 간격으로)받을 수 있습니다. </li><li> 부상 생쥐도 수화를 유지하는 데 도움이 삼일 (0.5 CC)에 대한 염분 0.9 %의 회 intraperitoneal 주사와 함께 제공되며, 마약 buprenorphine의 회 주사 (0.05 MG / kg)은이 기간 동안 사후 수술 통증을 제어하는 오일. 동물 흔적 O를 전시하는 경우F 통증은 초기 오일 사용 기간이 지나면, 그들이 고통의 흔적 (취급 감소 이동성, hunched 성장, 신랑, 발성에 실패)까지 매일 추가 buprenorphine를 (0.05 밀리그램 / kg)를받을 것이 해결된 것입니다. </li></ol> 2. spinally - 가로 생쥐 같은 일대에 IVIS Lumina XR을 사용하여 뼈 밀도 세로 평가 <ol><li> 10 일 이후 SCI에 시작하고 40 일까지 10 일 간격으로 계속, 우리 삶에 좌우 대퇴골과 tibiae, anesthetized 과목을 (절개 SCI 및 손상되지 않은 나이에 일치하는 컨트롤) 평가. </li><li> 스캔의 날, 과목은 기관의 동식물 사육장 지역에서 캘리퍼스 IVIS Lumina XR가 설치된되는 방에 자신의 홈 케이지에 전송되었습니다. 모든 과목은 이전에 SCI의 전달에 사용되는 동일한 케타민을 / xylazine 칵테일을 사용하여 다음 anesthetized 있습니다. 이 칵테일 1로 1.5 시간 동안 마취 상태를 보장하며 scann 기간 동안 충분한ING 절차. </li><li> 조사는 Lumina XR 장치를 초기화하고 내부 카메라가 작동 온도 (-90 ° C) (~ 10 분)에 도달하실 수 있습니다. </li><li> 일단 anesthetized, 제목 (절개 또는 제어)이 부드럽게 Lumina XR 내의 동물 플랫폼에 배치됩니다. 높은 배율 렌즈는 대퇴골과 tibial 지역 (높은 배율 렌즈로 볼 수 2.4X2.4cm 분야) 모두에 초점을 수 있도록 장치에 삽입됩니다. 제목이 부적절하게보기의 분야 이외의 위치에있다면, 문을 열리고 있으며, 왼쪽 또는 오른쪽 뒷다리가 중심 때까지 (뒷다리의 적절한 배치를위한 그림 2A 참조) 다시 위치 주제. </li><li> 일단 제대로 위치, X - 레이 기능이 실행될 수 있습니다. (생활 주제, X - 레이 필터링 35 Kv 100uA) 동물에 적합한 에너지 드롭 다운 목록에서 선택하십시오 </li><li> 동물이 올바른 위치에되면, 체크인 - 마크 X - 레이에 의해 X - 레이 기능을 활성화제어판. X - 선 이미지를 수집. 전체 대퇴골과 경골이 (그림 2B 참조) 볼 수 있는지 확인합니다. RAW 이미지 데이터는 자동으로 하드 드라이브에 저장됩니다. 대표. TIFF 파일도 저장됩니다. 마우스는 다음의 홈 케이지에 반환하고 조사 관찰 아래의 복구가 허용됩니다. 과정은 다음 다음 마우스로 반복됩니다. 참고 : 생활 이미지 소프트웨어가 기본적으로 변모 X - 선 이미지를 표시합니다. 원시 X - 선 이미지를 표시하려면, 정정 / 필터링 도구 X - 레이 흡수 옆에있는 확인 표시를 제거합니다. X - 선 흡수에 대한 데이터가 수정되면, 당신은 측정 ROIs의 신호 강도를 비교하여 상대적인 뼈 밀도를 평가할 수 있습니다. 투자 수익 (ROI) 강도가 증가 조직 밀도 증가합니다. </li></ol> 3. IVIS X - 선 검사의 이미지 분석 <ol><li> 생활 이미지 아이콘을 두 번 클릭하여 소프트웨어를 엽니다. </li><li> 을 클릭하여 X - 선 이미지를로드 <st>확인을 누릅니다. 생활 이미지 브라우저는 사용자 ID, 레이블 정보 및 카메라 설정 정보와 함께 선택한 데이터를 표시합니다. 데이터를 열려면 중 하나를 다음 : 데이터 행을 두 번 누른 다음 데이터 이름을 마우스 오른쪽 단추로 클릭하고 바로 가기 메뉴에서로드를 선택하여 데이터 행을 선택하고 Load를 클릭하거나 축소판을 두 번 클릭합니다. 이미지와 도구 팔레트가 표시됩니다. 오픈 데이터는 브라우저에서 녹색으로 강조 표시됩니다. </st></li><li> 도구 팔레트에서 투자 수익 (ROI) 도구를 클릭하십시오. 투자 수익 (ROI) 도구에서 형식 드롭 다운 목록에서 선택 측정 투자 수익 (ROI). 본 실험에 사용된 3 투자 수익 (ROI)의을로드하려면, 스퀘어 (Square) 아이콘을 클릭 3 광장을로드합니다. </li><li> 통치자를 사용하여 대퇴골의 길이를 측정합니다. 전체 대퇴골 길이의 팔분의 일 일 수 제곱의 두 길이를 조정. 전체 대퇴골 길이를 1/24th하는 두 사각형의 너비를 조정합니다. 당신의 잣대와 측정 팔분의 일 대퇴골의 근위 하순부터 거리의 일, 그것이 대퇴골 내에서 중심이되도록 사각형을 ...을 놓다. 그것은 대퇴골 (그림 3)의 말초 끝에서 전체 대퇴골 길이의 1/4th 거짓말 있도록 두 번째 사각형을 ...을 놓다. 이러한 투자 수익 (ROI)의은 근위 및 말초 대퇴골 두 영역을 측정하는 데 사용할 수 있습니다. </li><li> 눈금자를 사용하여 경골의 길이를 측정합니다. 전체 tibial 길이의 팔분의 일 일 수 세 번째 사각형의 길이를 조정합니다. 폭 전체 tibial 길이의 1 / 30 일로 조정합니다. 광장을 ...을 놓다 그래서 중심와 팔분의 일 일 경골의 근위 끝 (그림 3 참조)에서 경골 거리의 전체 길이입니다. </li><li> 측정 아이콘 (연필과 통치자)를 클릭하십시오. 투자 수익 (ROI) 강도 측정은 X - 레이 이미지에 표시하고 투자 수익 (ROI) 측정 테이블이 나타납니다.이 테이블에게 T를 내보내기. csv 파일로 원하는 위치를 O. 이것은 Excel을 사용하여 테이블을 열 수 있습니다. </li><li> 저장된 이미지의 모든이 과정을 반복합니다. </li><li> 한 엑셀 시트에 모든 데이터를 통합합니다. 통계 중요성은 Microsoft Excel이나 SigmaPlot 11.0 소프트웨어 (Systat 소프트웨어)을 사용하여 학생의 T - 테스트를 통해 결정되었다. </li></ol> 4. 사후 뼈 밀도의 분석 : <ol><li> IVIS Lumina XR 이내에 최종 세로 X - 레이 검사의 인수 다음, 마우스 Beuthanasia (75 MG pentobarbital / kg)와 이후 깊이 anesthetized 있습니다. 깊은 마취가 달성되면, 생쥐는 transcardially 아이스 - 감기로 perfused 아르 인산 버퍼 염분 heparain (40 MG / 리터)로 ...에게서 피를 뽑다 수 있습니다. </li><li> 일단 exsanguinated, 소비세 양쪽 대퇴골. 이것은 밀도 측정 11에 영향을 보여왔다 위해 최대한 부드러운 조직을 제거하는 특별한주의를 기울이십시오. 물에 젖었을 거즈와 상점에있는 대퇴골, 은밀히- 20C 당신이 그들을 분석할 준비가 될 때까지. </li></ol> 5. Hologic QDR 4000 뼈 밀도계를 사용하여 DXA 분석 <ol><li> 해동의 거즈 - 절어 대퇴골과 뼈 밀도계 제품군에 전송할 수 있습니다. </li><li> 제조 업체의 프로토콜에 따라 장치를 보정하고, BMC 및 BMD 값이 허용 한도 내에서 가을되었는지 확인합니다. </li><li> 기계에 황동 콜리 메 이터를 놓습니다. 이것은 사용자가 특정 대상에 초점을 X - 레이 빔의 크기와 각도를 제한할 수 있습니다. </li><li> 잠수함 물 (왼쪽으로 condyles, 침대에 대퇴골의 병렬 사용), 그리고 레이저의 오른쪽에 위치 그것을 가득 페트리 접시에 해동 대퇴골. </li><li> 당신이 스캔하려는 대퇴골에 대한 약력을 (동물 식별 정보, 치료 등을 포함하는 설명 제목)을 입력하십시오. </li><li> 선택 메뉴에서 스캔을 입력한 다음 regionA 고해상도를 선택합니다. 귀하의 검색 매개 변수를 표시: 0.01 인치 줄 간격 및 0.00499 인치 지점 해상도, 2 X 0.7489 인치 영역을 스캔. 참고 :이 진행되는 동안 검사를 모니터링합니다. X - 선 빔 래스터는 샘플을 검사로 완전히 뼈 샘플을 커버하기 위해 챔버에 충분한 물이있다는 것을 보장하기 위해 모니터링합니다. </li><li> 분석 선택 메뉴에 따라 분석 입력합니다. 이 투자 수익 (ROI)로 전체 대퇴골을 선택하라는 메시지가 따릅니다. 보고서 페이지 계산 BMC (g) 및 BMD (gms / cm 2)와 올 것이다. </li><li> 나머지 대퇴골을 분석하려면 다음 단계를 반복합니다. </li><li> 한 엑셀 시트에 모든 데이터를 통합하고 (T - 테스트) 통계 분석을 수행합니다. </li></ol> 6. 대표 결과 : 나이브 마우스에 비해 척수 손상 후 마우스 경골과 대퇴골의 상대 뼈 밀도 손실이 위의 방법을 사용하여 감지됩니다. 뼈 밀도 감지 상당한 감소 이후있다사십일에서 최대 15 % 뼈 밀도 감소 (P &lt;0.0005, 그림 4)와 함께 십일 (12 %, P &lt;0.0005). 대퇴골의 골밀도 감소는 40 일 게시물 상해 (7 % 감소, P는 &lt;0.05, 그림 5)에서 관찰되었다. 이러한 결과는 척수 손상 후 뼈 밀도 변화의 길이 관찰하기 위해 비침습 X - 선 영상의 사용에 대한 증거를 제공합니다. 현재 무엇이 방법의 효능을 비교하기 위해, 우린 40 일 DXA 이미징을 사용하여 부상 후이 생쥐의 excised 대퇴골을 분석했다. 데이터 출력의 표현은 그림 6에서 볼 수 있습니다. 우리가에 비해 뼈 미네랄 콘텐츠의 상당한 손실이 SCI 마우스에 순진한 (12 % 감소, P &lt;0.05, 그림 7). 사실을 발견 뼈 미네랄 밀도는 크게 변화하지만, 유사한 추세 (그림 8)를 수행하지 않은 않았다. 이러한 결과는 문학에있는 것과 비슷합니다; 피카 외는 BMC에서 13.5 % 감소 (P &lt;0.001)를 관찰하지만, 더 중요한 decr 없습니다BMD (피카드 2008)에서 쉽게. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/3246/3246fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 실험 타임 라인. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/3246/3246fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2 왼쪽 뒷다리 - 사지 대표 오리 엔테이션 :.) 사진과 B) X - 선. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/3246/3246fig3.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 3"> 그림 3. 근위 대퇴골과 경골의 영역 안에 투자 수익 (ROI) 크기 및 방향. <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/3246/3246fig4.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 4"> 그림 4. 근위 경골 10, 20, 30 및 부상 후 사십일에서 SCI 후 뼈 밀도 손실 (N = 5) 연령 일치하는 naives에 비해 (n은 = 5). 오차 막대는 SEM을 대표, ** P &lt;0.005, ** P &lt;0.0005. <img alt="그림 5" src="/files/ftp_upload/3246/3246fig5.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 5"> <st sci naives sem p><img alt="그림 6" src="/files/ftp_upload/3246/3246fig6.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 6"> 그림 6. 10, 20, 30 사십일 부상 후 말초 대퇴골의 SCI 후 뼈 밀도 손실 (N = 5) 연령 일치하는 순진한 컨트롤에 비해 (n은 = 5). 오차 막대는 SEM을 대표; * P &lt;0.01-0.05; ** P &lt;0.001-0.01, ** P &lt;0.0001-0.001, **** P는 &lt;0.0001. <img alt="그림 7" src="/files/ftp_upload/3246/3246fig7.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 7"> 그림 7. BMC와 BMD 출력을 보여주는 DXA 데이터의 대표 이미지. <img alt="그림 8" src="/files/ftp_upload/3246/3246fig8.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 8"> 그림 8. SCI 마우스의 대퇴골에서 뼈 미네랄 콘텐츠의 DXA 분석 (g) 사십일 게시물 부상 (n은 = 5) 대 나이에 일치하는 naives (n은 = 5).오류 막대는 SEM을 나타내는, * P는 &lt;0.05. <img alt="그림 9" src="/files/ftp_upload/3246/3246fig9.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 9"> 그림 9. SCI 마우스의 대퇴골의 뼈 미네랄 밀도의 DXA 분석 (MG / cm 2) 40 일 이후 상해 (n은 = 5) 대 나이에 일치하는 naives (n은 = 5). 오류 막대는 SEM을 나타내는 없으며 더 큰 차이를. </st>

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</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

이 연구는 캘리퍼스 IVIS Lumina XR 이미징 시스템을 사용하여, 마우스의 단일 일대 이내, 길이 방향 각 뼈 사이 밀도 변화 (tibiae 및 대퇴골)를 평가하기위한 소설, 비침습 방법을 제공합니다. SCI는 연령과 일치, 손상되지 않은, 컨트롤 마우스에 비해 40 일 분석 기간 동안 spinally - 가로 생쥐의 단일 일대 내에서 공부 대퇴골과 tibiae 모두에서 골밀도 감소를 생산. 대퇴골에서 우리의 결과는 캘리퍼스 인 스트 루먼트 IVIS Lumina XR의 응용 프로그램이 뼈 손실에 SCI의 장기와 진보 효과를 평가하는 중요한 측정 도구로 제공할 수 제안, DXA의 사용을 통해, 사후, 확인되었다 . 이 시스템을 사용하여 조사 한 잠재적인 이점은 길이 방향 SCI에 따라 동물의 뒷다리 뼈에 병적인 변화의 개발을 수행하는 능력입니다. 오랜 기간 동안 단일 일대를 평가하는 기능을 제공합니다 일동물의 구매 및 개호와 관련된 1) 비용 : 측면에서 조사에 룽가 장점. 대신 시간 종속 변화를 평가하기 위해 특정 시간 지점에서 희생해야 할 동물의 다수를 필요로하는 연구, 이러한 병리 결과는 다양성 같은 기간 2 이상의 동일한 일대) 내에 다음 수 있습니다 이외에 컨트롤 동료와 비교는 부상 과목의 단일 일대 내에서 생성된 결과는 평가 및 연구의 범위에 걸쳐 같은 동물을위한 시간 지점 간의 비교할 수 있습니다, 다시 한 번, 모두 내부 동물 다양성뿐만 아니라 큰 필요성을 감소 실험 과목의 동료. 이 플랫폼 우리가 고해상도 X - 선 DAT를 생성할 수있는 동안 : 1) 캘리퍼스 IVIS Lumina XR은 SCI 유발성 골다공증의 개발에 관한 중요한 길이 정보를 제공하는 동안 고려되어야 한계가 없습니다SCI에 따라 생쥐의 뒷다리 뼈에, 그 유틸리티는 같은 생쥐로 작은 설치류로 제한될 수 있습니다. Lumina XR 내에서 허용되는 최대 제목 높이는 2.8 cm입니다. 그 높이 위에 아무것도 성공적으로 Lumina XR의 X - 선 구성 요소를 사용하여 몇 군데되지 않을 수 있습니다. 우리 손에, 이것은 2백~2백50g 무게 쥐 공부하는 능력을 배제하고 있습니다. 그것이 체중 범위 또는 햄스터 gerbils 같은 다른 설치류에 따라 이미지 쥐 수있을 수도 있지만, 이것은 PI에 의해 나중에 추가 테스트가 필요합니다. 2) 공동 오리 엔테이션. 그것은 탐정은 신중 이미징 세션 사이 성공적인 비교 있도록 쉽게 재현할 오리 엔테이션에서 팔다리를 마련하는 것이 중요합니다. 사지 배치의 표준화는 탐정이 표준 투자 수익 (ROI)의 저장 및 과목과 시간을 모두에 걸쳐 적용할 수를 생성하고 적용할 수 있습니다. 전반적으로, 우리는 IVIS Lumina XR 모델에있는 훌륭한 플랫폼을 제공합니다 믿고생쥐에서 SCI에 의존 골다공증의 개발. 같은 마우스 일대 내에서 길이 방향 뼈 손실을 연구하는 능력은 우리가 수 : 1) 더 탐험) 이러한 변화는 시간이 3 이상의 안정 여부를 결정) SCI, 2 이후 뼈 손실 및 demineralization의 시간적 특성을 이해의 가용성과 유전자 변형 및 NULL 마우스 라인 모두, 아마도 가장 중요한 이점이 병적인 reductionist 방식의 변화, 그리고 4 기본 분자 메커니즘)을 연구하는 능력, 하나 초기 단계에서 골다공증의 발전을 방지하기 위해 설계된 소설 개입을 테스트하기 시작 골다공증이 이미 개발되면 부상, 또는, 그러한 변경을 반대합니다. 마지막으로, Lumina XR은 뛰어난 X - 레이 이미징 가능성을 제공하는 이외에, 또한 생활 동물에 모두 발광 생물과 형광 신호를 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 하나는 쉽게 mul 봐,이 시스템 내에서 제공하는 다른 modalities을 포함 상상할 수SCI 또는 다른 질병 과정 다음 mechanistically 뼈 역학을 결정 요인 titude 골다공증 결과 그.

<table border="1"><tbody><tr><th> 시약의 이름 </th><th> 회사 </th><th> 카탈로그 번호 </th><th> 댓글 </th></tr><tr><td> Beuthanasia </td><td> 버틀러 Schein 동물 건강 </td><td> 001,848 </td><td></td></tr><tr><td> Ketathesia (케타민을 하이드로 클로라이드) </td><td> 버틀러 Schein 동물 건강 </td><td> 023,061 </td><td></td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> 버틀러 Schein 동물 건강 </td><td> 037,849 </td><td></td></tr><tr><td> Bupivicaine </td><td> 버틀러 Schein 동물 건강 </td><td> 021,801 </td><td></td></tr><tr><td> Gelfoam; 7MM </td><td> 피셔 과학 </td><td> NC0085178 </td><td> 홍보하기 중 hemostasis 외과 </td></tr><tr><td> IVIS Lumina XR </td><td> 캘리퍼스 생명 과학 </td><td> 135,400 </td><td></td></tr><tr><td> ZFOV, 2.5 cm 필드 렌즈보기 </td><td> 캘리퍼스 생명 과학 </td><td> 127,285 </td><td> 절대적으로 필요한 에높은 생성 확대 X - 선 뼈 이미지 구조 </td></tr><tr><td> QDR 뼈 밀도계 </td><td> Hologic </td><td></td><td> 모델은 더 이상 사용하지 생산 </td></tr></tbody></table>

소설을 사용하여 척수 상해 후에 마우스 뒷다리 뼈 손실의 세로 평가, 생체내에 방법론

Longitudinal Evaluation of Mouse Hind Limb Bone Loss After Spinal Cord Injury using Novel, in vivo, Methodology

척수 손상 (SCI)는 종종 골절 1보다 높은 주파수로 이어지는, 골반과 하반신의 sublesional 지역에서 골다공증 함께합니다. 이러한 골절은 종종 일반적인 감각 기능을 잃은 지역에서 발생으로 환자가 사망을 포함한 파괴 종속 pathologies의 큰 위험에 있습니다. SCI 종속 모두 뼈 미네랄 밀도의 손실 (BMD, g / cm 2)와 뼈 미네랄 함량 (BMC, g)는 기계적 쓰지 않음 2, 탈선의 연결 신호 3 호르몬 변화 4 기인되었습니다. SCI 유발성 골다공증의 설치류 모델의 사용은 매우 가치 SCI 다음과 골다공증의 개발을 기본 메커니즘에 관한 정보뿐만 아니라 5-7 새로운 테라피 (그리고 8 검토)의 생성을 위해 테스트 환경을 제공할 수 있습니다. 그들이 메커니즘 - 바에 reductionist 접근을 허용 등 SCI의 마우스 모델은 큰 관심있는NULL과 유전자 변형 생쥐를 사용하여 SED 평가. 이러한 모델은 중요한 데이터를 제공하지만, SCI 다음과 뼈 손실의 범위를 결정하는 최소한 - 침입, 안정적인 재현성과 같지는 방법에 대한 필요가 진단을 개선하기 위해, 특히 시간이 지남에 따라 실험 동물의 동일한 일대 내에 아직있다 , 치료 방법, 및 / 또는 SCI - 유발성 골다공증의 예방. 설치류 동물의 뼈 밀도를 측정하기위한 이상적인 방법은 X - 레이 방사선의 낮은 수준 (시간 이상) 순차 여러 노출을 허용합니다. 이 연구는 새로운 전체 - 동물 스캐너, 낮은 에너지 (1-3 milligray (mGy)) 높은 해상도, 높은 배율 X - 선 이미지를 제공하는 데 사용할 수있는 IVIS Lumina XR (캘리퍼스 인 스트 루먼트)의 사용을 설명합니다 SCI 다음 시간이 지남에 따라 마우스 뒷다리 뼈. 중요한 뼈 밀도 손실은 손상되지 않은, 나이에 일치하는 컨트롤에 비해 사후 척추 절개 십일에 의해 생쥐의 tibiae에서 볼되었다 (나이브) 마우스 (13 % 감소, P &lt;0.0005). 근위 대퇴골의 밀도의 손실은 40 일 게시물 상해 (7 % 감소, P &lt;0.05)까지 감지되지 동안 말초 대퇴골의 골 밀도 손실도 10 일 이후 SCI에 의해 감지되었다. 마우스 대퇴골 밀도의 SCI에 의존 손실은 골밀도 측정을위한 이중 에너지 X - 선 흡광광 도법 (DXA), 현재 &quot;황금 표준&quot;의 사용을 통해 사후 확인되었다. 우리는 IVIS Lumina XR을 사용 사십일 이후 SCI에서 마우스의 대퇴골에서 BMC의 12 % 손실을 감지합니다. 이것은 마우스 대퇴골 사후 삼십일 이후 SCI 9 DXA 분석을 사용하는 이전보고 BMC의 피카드에 의해 13.5 %의 손실 및 동료와 유리 비교합니다. 결과는 IVIS Lumina XR은 소설, SCI 다음 마우스의 뒷다리 뼈 밀도의 장기, 길이 측정을 수행하기위한 high-resolution/high-magnification 방법을 제공하는 것이 좋습니다.

성인 마우스의 대퇴골과 tibiae의 뼈 손실의 길이 시험은 순차적 낮은 선량 X - 선 검사를 사용하여 척수 상해 다음을 수행했다. 대퇴골의 골 손실은 40 일 이후 부상까지 발견되지 동안 경골 뼈 손실은 연구를 통해 발견되었다.

척수 손상(SCI)은 종종 골반 및 하지의 손상 부위 하단 영역에서 골다공증을 동반하며, 이는 더 높은...

본 절차는 척수 손상 후 마우스의 뒷다리 골밀도가 시간에 따라 감소하는 것을 검출하고 정량화하는 새로운 방법을 보여줍니다. 이는 먼저 멸균 및 ALAC 승인 조건 하에 마취된 마우스에게 척수 절단 손상을 유발함으로써 수행됩니다. 이후 회복 기간을 거쳐 동물을 다시 마취하고, 좌우 양쪽 뒷다리의 경골과 비골의 X선 영상을 획득합니다.이 과정은 부상 후 40일까지 매주 수행됩니다. 다음으로, X선 스캔 이미지 분석을 실시합니다. 마지막 단계는 적출한 뒷다리 뼈의 골밀도에 대해 사후 평가를 수행하는 것입니다.최종적으로, 결과는 척수 손상이 마우스의 뒷다리에서 골밀도의 급격하고 점진적인 손실을 어떻게 유도하는지 보여줍니다. 이 새로운 방법은 다른 영상 기법보다 낮은 선량의 x-ray를 사용하여 강력한 공간 및 시간 분해능을 제공합니다. 골다공증은 척수 손상을 겪는 이들에게 나타나는 생명을 위협하는 질환입니다.본 연구에서 제안하는 것은 척수 손상 동물 모델 연구에 적용될 수 있는 새로운 방법으로, 연구자가 장기간에 걸쳐 골다공증과 관련된 골 손실 과정을 종단적으로 추적할 수 있게 합니다. 이는 두 가지 이유로 중요합니다. 첫째, 이를 통해 골다공증의 발생 기전을 연구할 수 있는 기회를 제공하기 때문입니다.두 번째로, 이 방법은 척수 손상을 입은 환자에게서 골다공증의 발생을 예방하거나 혹은 되돌리기 위해 설계된 새로운 중재법을 테스트할 수 있는 수단을 제공합니다. 이 방법은 척수 손상 유발 골다공증에 대한 통찰을 제공할 수 있을 뿐만 아니라, 폐경 후 여성에게 발생하는 연령 관련 골손실이나 기타 외상성 골밀도 감소, 고립으로 인한 사지 불사용 등과 같은 다른 시스템에도 적용될 수 있으며, 골절이나 기타 손상 이후 회복 과정에서 상당한 골손실이 발생할 수 있습니다. 전신 동물 종단 저선량 X-선 영상을 적용함으로써 이러한 문제들을 최소화하거나 예방하기 위해 설계된 치료법 개발의 새로운 경로를 제시할 수 있습니다.Sander 절차에 따라 척수 손상 수술을 수행하며, 해당 기관의 동물 실험 윤리 위원회 가이드라인을 준수하십시오. 그 후 척수 수술 후 10일째부터 시작하여 40일까지 10일 간격으로 계속 진행합니다. 마취된 척수 절단 손상 동물과 연령이 일치하는 비손상 대조군의 좌우 대퇴골 및 경골을 ivus Lumina XR 시스템으로 스캔하여 평가하십시오. 스캔 전에는 Lumina XR 장치를 초기화하여 내부 카메라가 작동 온도인 -90 °C에 도달하도록 하십시오.마취된 동물을 Lumina xr 내부의 플랫폼 위에 놓습니다. 그런 다음 고배율 렌즈를 삽입하여 대퇴골과 경골 영역 모두에 초점을 맞춥니다. 피험체가 시야 내에 적절하게 위치해 있는지 확인합니다.필요한 경우, 도어를 열고 동물의 위치를 다시 조정하십시오. 동물의 적절한 배치 방법이 여기에 표시되어 있습니다. 적절하게 배치되면 X-선 기능을 실행할 수 있습니다.에너지 드롭다운 목록에서 동물에 적합한 항목을 선택하십시오. 그 다음 제어 패널을 엽니다. x-ray 항목에 체크하여 x-ray 기능을 활성화하고, x-ray 이미지를 획득하십시오.여기서 보는 것과 같이 대퇴골과 경골 전체가 보여야 합니다. 생체 이미징 소프트웨어는 기본적으로 보정된 X선 이미지를 표시하므로, 보정 필터링 도구 메뉴에 들어가 X선 흡수(x-ray absorption) 옆의 체크 표시를 해제하여 원본 X선 이미지가 표시되도록 하십시오. 원본 이미지 데이터는 하드 드라이브에 자동으로 저장됩니다.대표 TIFF 파일 또한 저장합니다. 이미징 후, 마우스를 원래의 케이지로 옮기고 연구자의 관찰 하에 회복하도록 합니다. 이후 다음 마우스를 대상으로 동일한 과정을 반복합니다.먼저, 나타나는 대화 상자에서 living image 아이콘을 더블 클릭하여 소프트웨어를 엽니다. 원하는 폴더를 선택하고 확인을 클릭하십시오. 찾기(browse) 버튼을 클릭하여 x-ray 이미지를 불러옵니다.라이브 이미지 브라우저에는 사용자 ID와 함께 선택된 데이터가 표시됩니다. 레이블 정보 및 카메라 설정 정보가 포함됩니다. 데이터를 열려면 데이터 행을 더블 클릭하십시오. 이미지와 도구 팔레트가 표시됩니다.브라우저에서 오픈 데이터가 파란색으로 강조 표시됩니다. 다음으로 ROI tools를 클릭하십시오. ROI tools의 도구 팔레트에서 type 드롭다운 목록을 열고 measurement ROI를 선택하십시오.본 실험에 사용되는 세 개의 ROI를 불러오려면 사각형 아이콘을 클릭하고 사각형을 불러오십시오. 자를 사용하여 대퇴골의 길이를 측정한 후, 두 사각형의 길이를 전체 대퇴골 길이의 1/8이 되도록 조정하십시오. 사각형의 너비는 전체 대퇴골 길이의 1/24이 되도록 조정하십시오.이제 자를 사용하여 근위 대퇴단(proximal femur end)에서 거리의 1/8 지점을 측정하고, 그 위치에 첫 번째 직사각형이 중심이 오도록 배치합니다. 두 번째 직사각형은 원위 대퇴단(distal femur end)으로 이동시켜 무릎의 소주 구역(trabecular region) 중앙에 위치하도록 배치합니다. 그런 다음 경골(tibia)의 길이를 측정합니다.박스의 길이를 전체 경골 길이의 1/8로 조정하십시오. 너비는 전체 경골 길이의 1/30로 조정하십시오. 마지막으로, 여기 보이는 것처럼 박스가 중앙에 위치하고 근위 경골 끝에서 전체 경골 길이의 1/8 거리만큼 떨어지도록 배치하십시오.다음으로 측정 아이콘을 클릭하면 X선 이미지에 ROI 강도 측정값이 표시되고 ROI 측정 표가 나타납니다. 이 표를 원하는 위치에 dot CSV 파일로 내보냅니다. 이렇게 하면 해당 표를 Excel에서 열 수 있습니다.분석할 모든 저장된 이미지에 대해 이 단계를 반복합니다. 마지막으로, 모든 데이터를 하나의 Excel 시트로 통합합니다. 통계적 유의성은 Microsoft Excel 또는 Sigma Plot 11.0 소프트웨어와 같은 소프트웨어를 사용한 Student's T-test로 결정하며, 원하는 경우 이 방법의 표준 프로토콜을 활용하여 이중 에너지 X선 흡수 계측법(dual energy x-ray absorb geometry)을 통한 골밀도의 사후 분석 결과와 비교할 수 있습니다.위의 방법을 통해 척수 손상 후 생쥐의 경골 및 대퇴골에서 나타나는 상대적인 골밀도 감소를 정상 대조군 생쥐와 비교하여 검출할 수 있습니다. 이 그림은 척수 손상 후 10, 20, 30, 40일째의 근위 경골에서 나타나는 골밀도 감소를 보여줍니다. 연령이 일치하는 정상 대조군과 비교했을 때, 손상 후 단 10일 만에 경골 골밀도가 12% 유의하게 감소했으며, 40일째에는 골밀도 감소가 최대 15%까지 나타났습니다.여기서는 척수 손상 후 10, 20, 30, 40일째의 근위 대퇴골 골밀도 감소를 확인할 수 있습니다. 연령이 일치하는 대조군(naives)과 비교했을 때, 손상 후 40일째에 근위 대퇴골의 골밀도가 7% 감소한 것이 관찰되었습니다. 이 그래프는 척수 손상 후 10, 20, 30, 40일째의 원위 대퇴골 골밀도 감소를 보여줍니다.연령이 일치하는 일반 대조군과 비교했을 때, 대퇴골 원위부의 골밀도 감소는 부상 후 이르면 10일째부터 관찰되었으며 실험의 나머지 기간 동안 지속되었습니다. 이 이중 에너지 X선 흡수 계측법(DXA) 기하학적 데이터의 대표 이미지는 골미네랄 함량과 골미네랄 밀도 결과값을 보여줍니다. 적출된 대퇴골은 척수 손상 40일 후에 분석되었습니다.본 프로토콜에서 제시한 방법의 효능을 현재 사용 가능한 다른 방법들과 비교하기 위해, 이 그림은 척수 손상 후 40일이 경과한 생쥐와 연령이 일치하는 대조군 생쥐의 대퇴골 내 골무기질 함량(g)에 대한 이중 에너지 X선 흡수 계측법 분석 결과를 보여줍니다. 대조군과 비교했을 때, 척수 손상 생쥐에서 골무기질 함량이 12% 유의미하게 감소한 것이 관찰되었습니다.여기서는 척수 손상 후 40일이 지난 마우스와 연령 및 성별이 일치하는 대조군 마우스의 대퇴골 내 골밀도를 mg/cm² 단위로 분석한 이중 에너지 X선 흡수 계측법(DXA) 결과가 제시되어 있습니다. 골밀도 감소는 통계적으로 유의미한 변화를 보이지 않았으나, 골함량과 유사한 경향을 따랐습니다. 숙련된 경우 이 과정은 20~30분 내에 완료할 수 있으나, 뒷다리를 적절하게 배치하는 것이 중요하다는 점을 유의하시기 바랍니다.이 영상을 시청한 후, Caliper Instruments Lumina XR 장비를 사용하여 척수 손상 후 골밀도에 대한 살아있는 동물의 종단적 평가를 수행하는 방법에 대해 파악하게 될 것입니다.

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의학

마우스 척추를 안정화하고 반복 수행하는 법으로서...

두 광자 현미경을 사용하여 마우스 척수의 생체내 이미징에

우리는 실험적인 자가면역 뇌척수염을 연구하기 위해 성체 쥐의 노출된 척수에 유리창을 이식하고 유지하는 방법을 설명합니다. 이 창은 이광자 현미경을 사용하여 살아있는 동물의 세포 내 수준에서 세포 역학을 모니터링하기 위해 척수에 대한 만성 광학 접근을 제공합니다.

실험자가 면역 뇌척수염 성인 마우스에 유리 척수 Windows를 이식

척수 손상은 심각한 이환율과 사망률이 높은 원인 외상 조건이다. 본 연구에서 우리는 구체적으로 신경 줄기 세포를 이식 하였다 마우스 척수 손상의 타박상 모델을 설명한다.

척수 손상의 실험 Contusive 모델에서 신경 줄기 세포 이식

우리는 축삭돌기 및 미엘린 손상의 역학을 실시간으로 동시에 시각화하기 위해 이광자 여기 타임 랩스 현미경을 사용하는 프로토콜을 제시합니다. 이 제안된 프로토콜은 손상 후 중심 수초화된 축삭돌기의 운명에 영향을 미치고 영구적인 임상적 장애에 기여할 수 있는 내적 및 외적 요인에 대한 연구를 가능하게 합니다.

전의 VIVO 레이저에 의한 척수 손상 모델은 실시간으로 축삭 변성의 메커니즘을 평가하기 위해

이 비디오에서는, 우리는 라이브 마우스의 등쪽 척수를 통해 만성 광학 영상 실을 주입하는 절차에 대해 설명합니다. 실, 수술, 만성 이미징 검토하고 증명한다.

종의 척추 상공 회의소를 주입하는 절차 생체 마우스 척수의 영상

이 기사에서는 신생아 마우스에서 재현 가능한 척수 압박 손상(SCI)을 생성하는 방법에 대해 설명합니다. 이 모델은 자발적인 기능 회복의 기초가 되는 적응 가소성의 메커니즘을 연구하는 데 유리한 플랫폼을 제공합니다.

신생아 마우스 척수 압축 부상 모델

Endochondral 뼈 치유 하는 동안 골절 굳은 살에 조직 개발의 평가 치료 과정을 모니터링 하는 데 필수적 이다. 여기, 우리는 자기 공명 영상 (MRI)의 사용을 보고-MRI 있도록 마우스 대 퇴 골에 대 한 호환 외부 fixator 쥐에서 뼈 재생 동안 검색.

Vivo에서 골절 뼈 쥐 마우스 대 퇴 골에 대 한 MRI-호환 Osteosynthesis 장치를 사용 하 여 치료 기간 동안 굳은 살 개발의 평가

이 프로토콜의 정형 외과 수술 후 neuroinflammation 및 행동 변화, 그리고 노화 중 조직 재생 연구 parabiosis와 결합 메커니즘을 연구 하는 데 사용 되었습니다 마우스 모델을 설명 합니다.

정형 외과 수술 후 인지 기능 장애 및 조직 재생 연구의 마우스 모델

최소 침습 기술과 간단한 실험실 장치는 실험 동물에 대한 수술 손상을 줄이고 해부학적 형태 유지를 허용하여 척수 손상 모델의 재현성을 향상시킵니다. 이 방법은 신뢰할 수있는 결과와 재현 가능한 절차가 질병 배상 메커니즘의 조사를 용이하게하기 때문에 가치가 있습니다.

최소 침습 기술을 기반으로 한 마우스 타박상 척수 손상 모델 설정

마우스워커(MW) 툴박스를 사용하여 자유롭게 걷는 쥐의 운동 패턴을 정량적으로 설명하는 실험 파이프라인이 제공되며, 초기 비디오 녹화 및 추적에서 정량화 후 분석에 이르기까지 다양합니다. 생쥐의 척수 타박상 손상 모델은 MW 시스템의 유용성을 입증하기 위해 사용됩니다.

MouseWalker를 사용하여 척수 손상 마우스 모델에서 운동 기능 장애 정량화

여기에 제시된 것은 다양한 정도의 척수 손상 타박상 모델을 정확하게 생성할 수 있는 마우스용 새로운 자동 척수 손상 타박상 장치입니다.

마우스의 Contusive Spinal Cord Injury Model을 위한 자동 임팩터

학습하세요 척수 상해 후 마우스 뒷다리 뼈 밀도 손실을 저선량 X선 영상으로 세로 평가하는 방법을. 이 기술은 골다공증 진행을 추적하고 치료 개입을 테스트하는 데 활용됩니다.

소설을 사용하여 척수 상해 후에 마우스 뒷다리 뼈 손실의 세로 평가, 생체내에 방법론

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