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신경과학
0 조회수 • 2:07 분 • June 17th, 2025
외과적으로 절제된 종양에서 얻은 교모세포종 조직 절편으로 시작합니다.
세포 생존을 지원하기 위해 배양 배지에서 조직 절편을 유지합니다.
슬라이스 내의 종양 세포는 녹색 형광 단백질(GFP)을 발현하여 세포 이동 중에 종양 세포의 시각화를 용이
하게 합니다.조직 조각이 들어 있는 배양 플레이트를 공초점 현미경의 스테이지에 놓습니다.
배지의 온도를 유지하기 위해 스테이지 상단 인큐베이터를 배치합니다.
대물렌즈를 선택하고 현미경으로 슬라이스 배양을 시각화합니다.
현미경은 레이저 광을 사용하여 세포의 형광 단백질을 흥분시킵니다.
이제 샘플을 레이어별로 스캔하여 다양한 깊이에서 이미지를 캡처합니다.
이미지를 쌓아 셀의 상세한 3D 표현을 만듭니다.
그런 다음 정기적으로 Z-스택 이미지를 캡처하여 세포 이동과 방향을 추적하여 시간 경과에 따른 종양 세포 이동을 연구할 수 있습니다.
접시를 공초점 현미경의 37도, 5% CO2 밀봉 현미경 스테이지 상단 인큐베이터에 넣습니다. 단일 또는 다중 광자 이미징과 함께 긴 작동 거리의 10x 공기 대물렌즈를 사용하여 세포 이동의 3차원 시간 분해 이미지를 캡처합니다. 현미경으로 슬라이스를 시각화하여 슬라이스 가장자리와 조직 중심 사이에 형광 표지된 종양 세포의 적절한 밀도가 있는 적절한 필드를 찾습니다. 그런 다음 이미징 소프트웨어의 다차원 분석 모드에서 이미징할 모든 위치에 가시 형광 셀룰러 신호가 포함되도록 z-스택의 중심을 설정합니다. 그리고 각 z-스택 획득에 적절한 시간을 설정합니다.