Name: StemCell 기술에서 RosetteSep 키트와 함께 인간의 피를에서 NK 세포의 농축 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 52 s
Description: 학습하세요 인간 혈액에서 NK 세포를 음성 선택법으로 분리하는 방법을. StemCell Technologies RosetteSep 키트를 사용하여 높은 순도와 생존율을 확보하고 면역학 연구에 활용할 수 있습니다.

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자세한 프로토콜은 각 로제트 Sep 절연 칵테일과 함께 포함되어 있으며 StemCell 기술 웹사이트 1 온라인입니다.

<ol><li>Procedures and instruction manuals. , 
	
 <a target="_blank" href="http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx">http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx</a> Forthcoming.</li>
</ol>

이 기술을 사용하여 격리 세포는 더 이상 다른 세포 분리 키트를 사용하여 서로 다른 인구에 분리 수 있습니다.

PBS는 2% FCS와 Histopaque 솔루션으로 보충이 절차의 시작 전에 실내 온도로 이동해야합니다.

stemcell 기술에서 rosettesep 키트와 함께 인간의 피를에서 nk 세포의 농축

Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies

자연 킬러 (NK) 세포가 본래 면역 체계에 소속하고 암 및 감염 싸우고 주요 역할을 큰 세분화된 세포 독성 lymphocytes 있지만, 또한 임신과 이식 거부 반응의 초기 단계에 연루됩니다. 이러한 세포들은 격리 수있는 주변 혈액에 존재한다. 전지는 긍정적이거나 부정적인 중 선택을 사용하여 격리 수 있습니다. 긍정적인 선택을 위해 우리는 우리 모두가 세포하지만 관심의 세포에 존재하는 표면 마커를 타겟으로하는 항체의 칵테일을 사용하는 부정적인 선택을위한 반면, 관심의 세포에 존재하는 표면 마커로 이동 항체를 사용합니다. 이 후자의 기술은이를 원치 않는 세포 활성화 또는 differenciation의 위험을 감소, 항체 무료로 관심의 세포를 떠나는 장점을 제공합니다. 이 비디오 프로토콜에서 우리는 StemCell 기술에서 RosetteSep 키트를 사용하여 부정적인 선택에 의해 인간의 혈액에서 NK 세포를 분리하는 방법을 보여줍니다. 절차는 인간의 말초 혈액을 (인간 과목을 보호하기 위해 기관 검토위원회의 승인을 프로토콜 이하)을 구하고 북한 세포에 결석 마커에 바인딩됩니다 항체의 칵테일로 혼합지만, 주변에있는 다른 모든 mononuclear 세포에있는 포함 혈액 (예, T의 lymphocytes, monocytes ...). 칵테일에있는 항체가에 적혈구를 glycophorin 이동 항체에 복합 있습니다. 모든 원치 않는 세포와 적혈구 따라서 단지에 갇혀있는 것입니다. 혈액과 항체 칵테일의 조합은 다음 희석 Histopaque 그라디언트에 overlayed하고, centrifuged입니다. NK 세포는 (&gt; 80 % 순수) Histopaque과 희석 플라즈마 사이의 인터페이스에서 수집된하실 수 있습니다. 비슷한 칵테일은 인간의 T lymphocytes와 같은 다른 세포 집단의 농축 사용할 수 있습니다.

자연 킬러 세포 lymphocytes의 작은 인구입니다. 여기 StemCell Technologies에서 키트를 사용하여 부정적인 선택에 의해 인간의 혈액에서 이러한 세포를 분리하는 방법을 보여줍니다. 얻은 세포 따라서 절차의 번호를 사용 준비가 가능한 및 항체에 의해 훼손되지 않은, 그리고.

StemCell 기술에서 RosetteSep 키트와 함께 인간의 피를에서 NK 세포의 농축

자연살해(NK) 세포는 선천 면역 체계에 속하는 크고 과립이 풍부한 세포독성 림프구로, 암에 대항하여 싸우는 데 중요한 역할을 합니다...

안녕하세요, Christine Beaton입니다. 저는 캘리포니아 대학교 어바인 캠퍼스 생리학 및 생물물리학과의 George Chen 교수 연구실에서 보조 연구원으로 근무하고 있습니다. 오늘은 StemCell Technologies의 cocktail kit를 사용하여 인간 혈액에서 자연살해 세포(natural killer cells)를 음성 선택(negative selection)하는 방법을 보여드리겠습니다.Stem Cell Technologies사의 이 키트를 사용하는 이유는 매우 높은 순도의 세포를 얻을 수 있고, 음성 선택(negative selection)을 통해 항체와 결합하지 않은 세포를 확보할 수 있기 때문입니다. 따라서 해당 세포들에서 예상치 못한 반응이 일어나는 것을 방지할 수 있습니다. Tsep 키트의 작동 방식은 혈액 내에서 분석 대상이 아닌 모든 세포에 결합하는 항체를 사용하는 것입니다.제 경우라면 T 세포, B 세포, 단핵구, 그리고 적혈구의 glycophorin A에 결합하는 항체가 있습니다. 연구진은 백혈구에 대항하는 항체 하나를 적혈구에 대항하는 항체 하나에 연결했습니다. 그렇게 되면 제거해야 할 백혈구 하나가 여러 개의 적혈구와 복합체를 형성하게 됩니다. 적혈구는 백혈구보다 밀도가 높기 때문에, 혈액과 항체가 포함된 혼합 칵테일을 밀도 구배액에 넣고 원심 분리를 하면 적혈구가 튜브 바닥으로 가라앉으면서 원치 않는 백혈구들을 함께 끌고 내려가게 됩니다. 따라서 구배액 상단에서 수집하게 되는 것은 항체에 전혀 결합되지 않은 순수하거나 거의 순수한 자연 살해 세포(natural killer cells)입니다.이제 인간 혈액 튜브에서 NK 세포를 분리해 보겠습니다. 여기 소듐 헤파린 튜브에 채취된 신선한 혈액이 있습니다. 밀도 구배 원심분리를 위해 Roset ep human NK Cell enrichment cocktail을 사용하겠습니다.실험 후반부에 1.077 밀도의 10 77 histo pack을 사용할 예정이며, 2% fetal calf serum이 첨가된 PBS 병도 준비해 두었습니다. 이 성분들은 냉장 보관하므로 사용 전 실온 상태가 되도록 합니다. 이제 혈액이 담긴 튜브 전체를 50 mil fcan 튜브에 옮기겠습니다.이 용기는 진공 용기이므로 내부가 진공 상태입니다. 내용물이 튀지 않게 열기 위해 캡의 작은 홈 위치를 확인하고, 튜브 안으로 공기가 들어갈 수 있도록 조심스럽

enrichment-nk-cells-from-human-blood-with-rosettesep-kit-from

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

여기 우리는 효율적으로 확장하고 정화 인간 NK 세포의 큰 숫자를하고 기능을 평가하는 방법을 설명합니다.

확장, 정화, 그리고 사람 말초혈 NK 세포 기능 평가

이 동영상은 세포외 플럭스 분석기를 사용하여 활성화된 인간 NK 세포의 에너지 대사를 분석하는 방법을 보여줍니다. 전자 전달 사슬 복합체의 다양한 억제제는 산소 소비율 또는 OCR을 통해 측정되는 ATP 합성에 영향을 미치며 세포 대사 및 생체 에너지학에 대한 통찰력을 제공합니다.

세포외 플럭스 분석기를 사용한 인간 NK 세포의 에너지 대사 실시간 모니터링

이 비디오는 1차 자연살해(NK) 세포의 Cas9 리보핵단백질 매개 유전자 변형 기술을 보여줍니다. CRISPR RNA(crRNA)와 trans-activating crRNA(tracrRNA)를 염기쌍으로 하여 형성된 가이드 RNA(gRNA)에 결합된 Cas9 엔도뉴클레아제로 구성된 Cas9 리보핵단백질은 전기천공법을 통해 1차 자연살해세포에 도입됩니다. 리보핵단백질은 표적 부위에서 숙주 DNA를 표적화하고 절단하여 세포 복구 기계를 통한 표적 유전자의 변형을 통해 유전자 녹아웃을 유도합니다.

CRISPR Cas9을 이용한 자연살해세포의 유전자 편집 기법

이 프로토콜의 개발, 확대, hESCs에와 유도 만능에서 파생 된 NK 세포의 생체 내 이미징에 대해 설명합니다.

개발, 확대,<em&gt; 생체 내</em&gt; 인간 배아 줄기 세포 (hESCs에)에서 인간 NK 세포의 모니터링 및 및 유도 된 pluripotent 줄기 세포 (유도 만능)

간단하고 신뢰할 수있는 방법은 상이한 NK 세포의 서브 세트 내의 탈과립, 사이토 카인 및 케모카인 생산 등의 NK 세포의 기능 세트를 분석하기 위해 여기에 설명된다.

흐름 NK 세포의 기능을 모니터링 분석을 기반 세포 계측법

이 연구의 목표는 기본 자연적인 살인자 (NK) 세포에서 성공적인 유전자 변환에 대 한 허용 하는 기술을 공식화 했다. 인간의 lentiviral 변환 dextran 중재 또는 더 높은 유전자 식 효율성에 마우스 기본 NK 세포 결과. 이 방법은 유전자 변환의 NK 세포 유전자 조작을 향상 방대 하 게 됩니다.

Dextran Murine 및 인간의 기본 NK 세포의 Lentiviral 변환 효율 향상

여기, 선물이 murine NK 세포 유전자 침묵 시키기 기계 연구 생체 외 및 생체 내에서피더 무료 차별화 시스템을 사용 하 여 대량 생산 하는 프로토콜.

소설 급지대 무료 시스템 대량 생산을 위한 생체 외에서 Murine 자연 킬러 세포의

여기, 선물이 유전자 Cas9 Ribonucleoproteins (Cas9/RNPs)를 사용 하 여 기본 또는 확장 된 인간의 자연 킬러 (NK) 세포를 수정 하는 프로토콜. 이 프로토콜을 사용 하 여 인간 NK 세포 성장 인자-b 수용 체 2를 변형 (TGFBR2) 및 hypoxanthine phosphoribosyltransferase 1 (HPRT1)에 대 한 결핍을 생성 했습니다.

Cas9 Ribonucleoproteins를 사용 하 여 노크 아웃 기본 및 확장 된 인간 NK 세포의 생성

인간 자연 킬러 세포에서 치료 항체에 의한 FcγRIIIa 구동 이벤트를 연구하기 위한 프로토콜이 여기에 설명되어 있다. 이 인공 자극 플랫폼은 결합에 관여하는 항체의 FcγRIIa 및 Fc 부분에 의해 매개되는 디그라니션, 케모킨/사이토카인 생성, 시그널링 경로 와 같은 다운스트림 이펙터 기능의 심문을 허용합니다.

치료 항체의 존재에 FcγRIIIa 참여에 의해 구동 인간 자연 킬러 세포 이벤트의 평가

본 프로토콜은 3D 및 2D 배양 조건 모두에서 인간 확장 전위 줄기 세포 (hEPSC)로부터 경미한 세포 독성을 갖는 CD3- / CD45 + CD56 + 세포를 구별하는 방법을 보여줍니다. 이를 통해 복잡한 미세 환경을 파괴하지 않고 일상적인 표현형 검증이 가능합니다.

인간 확장 잠재적 줄기 세포로부터 자연 살해 세포 생성

여기에서는 다양한 악성 종양에 대한 사멸을 개선하여 인간 iPSC 유래 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 자연 살해 세포를 분화하고 확장하는 방법을 제시합니다. 이 프로토콜은 자연살해(NK)에 최적화된 iPSC 유래 CAR-NK 세포의 분화 및 증식과 다양한 종양 세포주에 대한 항종양 활성의 측정을 보여줍니다.

인간 유도 만능 줄기 세포 유래 키메라 항원 수용체 발현 자연 살해 세포의 발전

학습하세요 인간 혈액에서 NK 세포를 음성 선택법으로 분리하는 방법을. StemCell Technologies RosetteSep 키트를 사용하여 높은 순도와 생존율을 확보하고 면역학 연구에 활용할 수 있습니다.

StemCell 기술에서 RosetteSep 키트와 함께 인간의 피를에서 NK 세포의 농축

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